Получение мутаций или генная инженерия, ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка, использование их хозяев: ......гамма-интерферон – C12N 15/23

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения рекомбинантного гамма-интерферона человека (ЧГИФ). Сконструирована плазмидная ДНК pGD-14, определяющая экспрессию в клетках бактерии Escherichia coli гибридной генно-инженерной конструкции, состоящей из N-концевой последовательности декстрансвязывающего домена бетакокков (ДСД) и гена ЧГИФ, объединенных в одной рамке считывания через аспартат-пролиновый (сп) кислотолабильный спейсер. Изобретение обеспечивает стабильную экспрессию гена ДСД(сп)ЧГИФ на уровне 20% от тотального белка трансформированной клетки Escherichia coli. 3 ил., 3 пр.

Изобретение относится к генетической инженерии и может быть использовано для получения гамма-интерферона человека. Конструируют рекомбинантную плазмидную ДНК pTrcIFdL, кодирующую полипептид с активностью гамма-интерферона человека мол. массой 3,06 Md (4,642 т.п.о.) и имеющую физическую карту, приведенную на фиг.1. С помощью плазмидной ДНК pTrcIFdL получают штамм BL21(DE3)/pTrcIFdL - продуцент полипептида с активностью гамма-интерферона человека. Изобретение позволяет получить полипептид с биологической активностью гамма-интерферона человека и повышенной термоустойчивостью, а также увеличить уровень его биосинтеза до 40% от суммарного клеточного белка. 2 н.п. ф-лы, 2 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой штамм дрожжей Pichia pastoris PS108 (pChIG) - продуцент гамма-интерферона цыпленка, трансформированный плазмидой pChIG. Такая плазмида pChIG, обеспечивающая биосинтез гамма-интерферона цыпленка, имеет размер 8,19 т.п.о. и состоит из следующих элементов:

- EcoRI-BamHI - фрагмента плазмидной ДНК бифункционального бактериально-дрожжевого вектора pPIC9 размером 7,75 т.п.о.,

- BglII-EcoRI - фрагмента размером 0,44 т.п.о., содержащего кодирующую часть гена гамма-интерферона цыпленка, за исключением области, кодирующей сигнальный пептид. Причем ген гамма-интерферона цыпленка получен способом обратной ПЦР-реакции, матрицей для которой служит РНК, полученная из мононуклеаров периферической крови курицы, индуцированных рекомбинантным интерлейкином-2 человека "Ронколейкин"®. Изобретение позволяет получать гамма-интерферон цыпленка с высокой степенью эффективности. 3 н.п. ф-лы, 2 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению рекомбинантных аналогов гамма-интерферона человека, и может быть использовано для профилактики и лечения онкологических заболеваний, новообразований и воспалительных процессов у людей в медицине. Высокоочищенный генно-инженерный аналог гамма-интерферона человека - дельтаферон с молекулярной массой 16,2 кДа - получают микробиологическим синтезом с последующей хроматографической очисткой на КМ-сефарозе - катионообменном сорбенте с высокой линейной скоростью потока и подходящим для препаративных нагрузок, при разных значениях рН. На основе дельтаферона, содержащего, по данным ПААГ-ДСН электрофореза, не менее 98% основного вещества в форме мономера и обладающего присущими гамма-интерферону антипролиферативной и противовоспалительной активностями, получают лекарственный препарат, включающий также низкомолекулярный полимерный наполнитель-стабилизатор (реополиглюкин или поливинилпирролидон) и солевую буферную систему с рН 7,0-7,1. Изобретение позволяет получить высокоактивный и стабильный препарат дельтаферона. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 1 табл., 6 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и, в частности, к генетической инженерии. Из генома вируса оспы обезьян штамма Zaire-96-1-16, методом ПЦР выделяется ген белка B9R, имеющий высокую степень гомологии с внеклеточным сегментом рецептора интерферона гамма, затем он клонируется в донорной плазмиде pFastBac, и путем сайт-специфической транспозиции конструируется рекомбинантная бакмида, которая используется для трансфекции клеток насекомых, в результате чего генерируется рекомбинантный штамм бакуловируса BvB9RZ, депонированный в НИИ ККМ под номером V-356, экспрессирующий указанный ген. Изобретение может найти применение как лекарственное средство нового поколения для борьбы с тяжелыми заболеваниями человека, связанными с гиперпродукцией интерферона гамма (IFNg). 2 н.п. ф-лы, 3 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается штамма дрожжей Pichia pastoris PS106(pHIG) - продуцент иммунного интерферона человека, рекомбинантной плазмиде, которой трансформирован этот штамм, а также к способу конструирования такой плазмиды. Посредством представленного изобретения может быть получен рекомбинантный гамма-интерферон и может быть секретирован в культуральную среду в производственных масштабах. Преимущество изобретения заключается в разработке плазмиды, способной вырабатывать рекомбинантный гамма-интерферон для крупномасштабного производства. 3 н.п. ф-лы, 2 ил.

Изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к получению новых вариантов полипептида гамма-интерферона, обладающих активностью гамма-интерферона (IFNG), и может быть использовано в медицине для лечения интерстициальных легочных заболеваний. Новые варианты полипептида включают замены S99T по сравнению с аминокислотной последовательностью huIFNG, могут быть укорочены с С-конца на 1-15 аминокислот и способны повышать использование природного сайта N-гликозилирования в положении 97. Мутантные формы гамма-интерферона, содержащие треонин в положении 99, могут включать от 1 до 10 модификаций, без потери активности полипептида. Полипептид получают путем экспрессии в клетках-хозяевах, трансформированных вектором, включающим нуклеиновую кислоту, которая кодирует мутантный IFNG. Путем ПЭГилирования получают конъюгат мутантного полипептида с ПЭГ, который обладает увеличенным временем полужизни в сыворотке и сниженной иммуногенностью. Полученный полипептид IFNG используют в способах лечения и профилактики интерстициальных легочных заболеваний в составе фармацевтической композиции. Изобретение позволяет получить мутантный гамма-интерферон с повышенным использованием сайта N-гликозилирования в положении 97 по сравнению с природной формой huIFNG. 11 н. и 31 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 табл.