Получение мутаций или генная инженерия, ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка, использование их хозяев: ......активаторы плазминогена, например урокиназа, ТПА – C12N 15/58

Изобретение относится к области биохимии и биотехнологии. Представлена протеаза, обладающая усовершенствованной молокосвертывающей активностью, содержащая аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 80% идентичую SEQ ID NO: 3, где указанная протеаза имеет, по меньшей мере, одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из: (а) замены глутамина, соответствующего глутамину в положении 265 в SEQ ID NO:3, на кислую аминокислоту; и (b) замены глутамина, соответствующего глутамину в положении 266 в SEQ ID NO:3, на кислую аминокислоту. Описаны ДНК, кодирующая указанную протеазу; экспрессионный вектор, содержащий указанную ДНК; и клетка, трансформированная указанным вектором, предназначенная для экспрессии указанной протеазы. Предложен способ получения протеазы, обладающей усовершенствованной молокосвертывающей активностью, включающий культивирование указанной трансформированной клетки в культуральной среде и выделение протеазы из культуральной среды. Изобретение позволяет получить протеазу с улучшенной молокосвертывающей активностью. 5 н. и 11 з.п. ф-лы, 2 ил., 4 табл.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии. Раскрыты синтетические олигонуклеотидные праймеры и зонды для выявления геномов 1-го, 4-го и 16-го серотипов вируса блютанга. Также описан способ выявления геномов 1-го, 4-го и 16-го серотипов вируса блютанга с использованием таких синтетических олигонуклеотидных праймеров и зондов. Способ позволяет проводить определение серотипа вируса блютанга с помощью ПЦР с этапом обратной транскрипции в режиме реального времени, а также повысить специфичность и чувствительность, сократить время проведения работы по определению серотина вируса блютанга в образцах исследуемого биологического материала. 4 н.п. ф-лы, 4 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается рекомбинантной плазмидной ДНК, содержащаей последовательность гена зрелой стафилокиназы Staphylococcus aureus с заменами кодонов К74, Е75 и R77 на триплеты, кодирующие Ala, штамма Escherichia coli MZ09 и способа получения рекомбинантного белка, содержащего последовательность гена зрелой стафилокиназы с заменами кодонов К74, Е75 и R77 на триплеты, кодирующие Ala. Сущность изобретения включает рекомбинантную плазмидную ДНК, кодирующую последовательность гена зрелого белка стафилокиназы из Staphylococcus aureus с заменами кодонов К74, Е75 и R77 на триплеты, кодирующие Ala, имеющая нуклеотидную последовательность, приведенную на фиг.1. Изобретение также включает штамм Esherichia coli MZ09, продуцент рекомбинантной стафилокиназы, с последовательностью, приведенной на фиг.1, а также способ ее получения. Преимущество изобретения заключается в получении белка стафилокиназы, обладающего высокой фибринолитической активностью, с выходом рекомбинантного белка до 20% от общего количества. 3 н.п. ф-лы, 2 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в медицине. Предложены новые производные стафилокиназы, которые представляют собой продукты экспрессии в гетерогенной системе мутантных генов, полученных путем локального ПЦР-мутагенеза гена фермента дикого типа, и отличаются от соответствующей природной формы стафилокиназы одной или большим числом аминокислотных замен в области между 104 и 113 аминокислотными остатками, приводящих к образованию в названной области последовательности RGD или KGD. Полученные рекомбинантные производные стафилокиназы (RGD/KGD-Sak), а также усеченные с NH₂-конца на 1-16 аминокислот варианты этих производных совмещают свойства тромболитического и антикоагулирующего агента и характеризуются пониженными, по сравнению с ферментом дикого типа, способностью к полимеризации и иммуногенностью, что обеспечивает возможность их успешного применения в составе фармкомпозиций и в способах лечения или предупреждения тромбоза. 7 н. и 18 з.п.ф-лы, 3 ил., 3 табл.

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается способа получения рекомбинантного дц-уАП (двухцепочечного фермента урокиназы). Сущность изобретения включает способ культивирования подвергнутых генетическим манипуляциям клеток, CHO-Messi, стабильно трансфицированных кДНК препроурокиназы в среде для культивирования, содержащей алкановые кислоты или их производные при температуре в интервале от 30 до 37°С, разделения полученного дц-уАП на низкомолекулярную и высокомолекулярную формы. Изобретение также включает рекомбинантный дц-уАП, а также дц-уАП ВММ и дц-уАП НММ на разных стадиях получения. Преимущество изобретения заключается в разработке способа получения рекомбинантных форм зрелого двухцепочечного белка дц-уАП, а также его низкомолекулярной и высокомолекулярной форм. 10 н. и 9 з.п. ф-лы, 4 табл., 3 ил.

Изобретение относится к области генетической и белковой инженерии и может быть использовано в медицине. Предложена модифицированная форма активатора плазминогена урокиназного типа (мАПУТ), аминокислотная последовательность которой отличается от последовательности природного АПУТ заменой последовательности ArgArgHisArgGlyGlySer в составе ингибиторной петли последовательностью ArgHisHisAlaGlyGlySer, а также заменой 24 N-концевых аминокислот чужеродной последовательностью из 16 аминокислотных остатков. Сконструирована рекомбинантная плазмида (pUABC 34), включающая фрагмент ДНК, который кодирует новый мАПУТ. В результате трансформации клеток E.coli К-12 JM109 плазмидой pUАВС 34 получен рекомбинантный штамм E.coli ВКПМ-8145, являющийся продуцентом модифицированной формы АПУТ. При полном сохранении биологической активности, присущей природному активатору, продуцируемый рекомбинантным штаммом полипептид характеризуется пониженной чувствительностью к действию ингибитора PAI-1 и отсутствием ряда побочных эффектов, что обеспечивает эффективное применение нового мАПУТ в составе фармацевтических композиций с тромболитическим действием. 6 с.п. ф-лы, 6 ил.