Получение мутаций или генная инженерия, ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка, использование их хозяев: ...ДНК последовательности, кодирующие белки при слиянии – C12N 15/62

Изобретение относится к области молекулярной биологии и генетической инженерии. Предложен способ селекции эукариотической клетки-хозяина, экспрессирующей желаемый уровень интересующего полипептида, включающий трансфекцию клеток гетерологичной нуклеиновой кислотой, содержащей по меньшей мере одну кассету, содержащую по меньшей мере первый полинуклеотид, кодирующий интересующий полипептид, стоп-кодон, расположенный по направлению экспрессии относительно первого полинуклеотида, второй полинуклеотид, расположенный по направлению экспрессии относительно стоп-кодона, кодирующий иммуноглобулиновый трансмембранный якорный домен, культивирование клеток-хозяев для экспрессии интересующего полипептида так, чтобы по меньшей мере часть рассматриваемого полипептида экспрессировалась в виде слитого полипептида, содержащего иммуноглобулиновый трансмембранный якорный домен, причем такой слитый полипептид экспонируется на поверхности указанной клетки-хозяине, селекцию клетки по наличию или количеству слитого полипептида, экспонируемого на клеточной поверхности. Изобретение может быть использовано в биотехнологии для селекции высокопродуктивных клеточных линий. 6 н. и 9 з.п. ф-лы, 8 табл., 11 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к модифицированному фактору Виллебранда (VWF), и может быть использовано в медицине. Рекомбинантным путем получают модифицированный VWF, слитый в С-концевой части своего первичного продукта трансляции с N-концевой частью альбумина посредством линкера SSGGSGGSGGSGGSGGSGGSGGSGGSGGSGS. Полученный модифицированный VWF используют в составе фармацевтической композиции для лечения или профилактики нарушения свертываемости крови. Изобретение позволяет получить модифицированный VWF, который сохраняет способность к N-концевой димеризации и С-концевой мультимеризации, имея при этом удлиненный полупериод функционального существования в плазме крови по сравнению с полупериодом функционального существования VWF. 8 н. и 9 з.п. ф-лы, 5 ил., 4 табл., 11 пр.

Изобретения относятся к области биотехнологии и касаются слитого белка для специфического ингибирования свертывания крови, экспрессионной плазмидной ДНК, кодирующей такой слитый белок, бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, трансформированной такой ДНК, и способу получения слитого белка. Представленный слитый белок включает тиоредоксин I E.coli и инфестин-4 и характеризуется последовательностью SEQ ID NO:2. Плазмидная ДНК содержит последовательность SEQ ID NO:1, кодирующую представленный слитый белок, находящуюся под контролем промотора, функционирующего в бактериальной клетке. Способ получения упомянутого слитого белка включает культивирование упомянутых бактерий в питательной среде, разрушение бактериальных клеток и очистку указанного слитого белка с использованием металлохелатной хроматографии и анионообменной хроматографии. Охарактеризованные решения позволяют получить белок, обеспечивающий указанную специфичность, с последующим его использованием в блокировании контактной активации свертывания крови за счет ингибирования XIIa фактора и отсутствии ингибирования Ха фактора. 4 н.п. ф-лы, 10 ил., 7 пр.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к искусственным белкам-иммуногенам, имеющим свойства антигенов меланомы. Заявлен искусственный ген, кодирующий полиэпитопный белок-иммуноген MEL-TCI-A0201, содержащий множественные цитотоксические рестриктированные HLA-A*0201 и Т-хелперные эпитопы антигенов меланомы NY-ESO-1, MART1, MAGE-A1, MAGE-A3, MAGE-A11, MAGE-C1, имеющий последовательность длиной 1535 п.н., представленную на Фиг. 3. Также заявлены рекомбинантная плазмидная ДНК, содержащая указанный искусственный ген, и белок-иммуноген MEL-TCI-A0201 со свойствами антигенов меланомы. Изобретение позволяет повысить иммуногенность искусственного полиэпитопного Т-клеточного иммуногена, индуцирующего более высокий уровень ответа цитотоксических Т-лимфоцитов. 3 н.п. ф-лы, 11 ил., 3 табл., 2 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генно-инженерному получению белков человека, и может быть использовано для получения эпидермального фактора роста человека (чЭФР) в клетках бактерий в виде гибридного белка с глутатион-3-трансферазой. Конструируют рекомбинантную ДНК, кодирующую гибридный белок GST-hEGF, который состоит из аминокислотной последовательности глутатион-S-трансферазы и аминокислотной последовательности эпидермального фактора роста человека, разделенных сайтом расщепления энтерокиназой, и характеризующуюся нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:1. На основе KpnI/XhoI-фрагмента вектора рЕТ41 и указанной рекомбинантной ДНК создают рекомбинантную плазмиду рАS007 для экспрессии гибридного белка GST-hEGF в клетках E.coli. Изобретение позволяет достичь высоких уровней экспрессии GST-hEGF в клетках E.coli. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл., 5 пр.

Группа изобретений относится к биотехнологии, генной и белковой инженерии, конкретно к рекомбинантной плазмидной ДНК pG1-Rm7, обеспечивающей в клетках Escherichia coli синтез гибридного белка G1-Rm7, способного связывать фактор некроза опухолей и обладающего биолюминесцентной активностью люциферазы Renilla muelleri, где указанная плазмидная ДНК включает нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1, и может быть использована в медицине. Изобретения также относятся к белку pG1-Rm7 с молекулярной массой 65,4 кДа, состоящему из одноцепочечного антитела против фактора некроза опухолей, пептида GGSGGS и модифицированной люциферазы Renalla muelleri и характеризующемся SEQ ID NO: 2. Изобретения позволяют получить высокочувствительный репортер для выявления фактора некроза опухолей методом биолюминесцентного анализа. 2 н.п. ф-лы, 4 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к созданию мутеинов рецептора фактора роста фибробластов (FGFR), и может быть использовано в медицине. Полипептид мутеина кислотной зоны внеклеточного домена (ECD) рецептора FGFR4 представляет собой химеру кислотной зоны FGFR4 ECD или вариант длинного кислотного бокса FGFR4 и имеет большее количество кислотных остатков в линкерной зоне D1-D2, чем FGFR4 ECD дикого типа. Мутеин может содержать точечную мутацию, которая ингибирует гликозилирование. Мутеин используют для лечения заболевания, ассоциированного с одним или несколькими лигандами семейства FGFR, например пролиферативных заболеваний, в том числе различных видов рака, нарушений ангиогенеза и дегенерации желтого пятна. Изобретение позволяет получить мутеин кислотной зоны FGFR4 ECD, имеющий сниженную способность связываться с тканями, путем увеличения количества кислых аминокислотных остатков внутри линкерной зоны D1-D2. 8 н. и 24 з.п. ф-лы, 22 ил., 11 табл., 18 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к агонистам рецептора РТН, и может быть использовано в медицине. Конструируют полипептид формулы PTH(1-X)/PTHrP(Y-36), где X обозначает целое число между 11 и 18 и Y=X+1, где PTH(1-X) представляет аминокислоты с 1 по X последовательности PTH человека (SEQ ID NO:5) и PTHrP(Y-36) представляет аминокислоты с Y по 36 последовательности PTHrP человека (SEQ ID NO:6). При этом полипептид содержит одну или более из следующих мутаций в последовательности PTH(1-X): Ala в положении 1, Ala или Aib в положении 3, Gln в положении 10, Arg или гомоаргинин в положении 11, Ala в положении 12 и Trp в положении 14. Полученный полипептид используют для репарации перелома, лечения гипопаратиреоидизма, гиперфосфатемии, опухолевого кальциноза, остеопороза, остеомаляции, артрита, тромбоцитопении, а также для повышения мобилизации стволовых клеток у субъекта. Изобретение позволяет получить полипептид, обладающий пролонгированной активностью в отношении рецептора PTH. 7 н. и 11 з.п. ф-лы, 37 ил., 8 табл., 11 пр.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу синтеза целевого белка с пониженным ксилозилированием, пониженным фукозилированием или их комбинацией. Способ включает в себя введение в растение, часть растения или растительную клетку нуклеотидной последовательности на 80-100 % идентичной нуклеотидной последовательности, определенной в SEQ ID NO: 17, и кодирующей составной белок, содержащий цитоплазматический концевой сегмент, трансмембранный домен, стволовую область (CTS домен) N-ацетилглюкозаминилтрансферазы (GNT1), слитую с каталитическим доменом бета-1,4-галактозилтрансферазы (GalT), причем указанная первая нуклеотидная последовательность функционально связана с первой регуляторной областью, являющейся активной в растении; и второй нуклеотидной последовательностью для кодирования целевого белка, причем указанная вторая нуклеотидная последовательность функционально связана со второй регуляторной областью, являющейся активной в растении, а также транзиентную коэкспрессию первой и второй нуклеотидных последовательностей с синтезом целевого белка, содержащего гликаны, с пониженным ксилозилированием, пониженным фукозилированием или их комбинацией при сравнении с таким же целевым белком, полученным из дикого растения. Раскрыты нуклеиновая кислота, кодирующая белок, модифицирующий гликозилирование целевого белка, составной белок для модификации гликозилирования целевого белка, нуклеиновая кислота, его кодирующая, а также растение, растительная клетка и семя, содержащие указанную нуклеиновую кислоту или указанный составной белок. Изобретение позволяет эффективно получать целевой белок с пониженным ксилозилированием, пониженным фукозилированием или их комбинацией. 7 н. и 13 з.п. ф-лы, 7 ил., 9 пр.

Представленные изобретения относятся к области биомедицины и касаются полинуклеотидной последовательности, кодирующей сконструированный белок пертактин (Prn), вектора, включающего такую последовательность, и композиций, содержащих белок или вектор. Охарактеризованная полинуклеотидная последовательность кодирует 300 первых аминокислот, ближайших к N-концу данного типа природного, зрелого Prn (PrnX300), и аминокислотную последовательность, включающую 620 последних аминокислот, ближайших к С-концу данного типа природного, зрелого Prn (PrnY620), с получением сконструированного пертактина PrnX300-PrnY620 из рода Bordetella. Сконструированные молекулы Prn включают в своей структуре полиморфизмы из различных штаммов B. pertussis и вызывают иммунные ответы с повышенной защитной способностью и опсонофагоцитирующей активностью, превышающими соответствующие показатели предшествующих вакцин. Получаемый по представленному изобретению белок может применяться в медицине и ветеринарии в качестве компонента противобактериальных вакцин против Bordetella pertusis. 5 н. и 7 з.п.ф-лы, 3 ил., 3 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается химерного белка, нуклеиновой кислоты, кодирующей такой белок, кассеты экспрессии и эукариотической клетки-хозяина. Представленный химерный белок с SEQ ID NO:02 является флуоресцентным биосенсором, сконструирован на основе белка НуРеr и мутанта РН-домена тирозинкиназы Btk. Представленные изобретения позволяют проводить одновременный мониторинг продукции пероксида водорода и фосфатидилинозитол-3,4,5-трифосфат в живой клетке. 4 н.п. ф-лы, 4 ил., 3 пр.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Культивируют микроорганизм-продуцент в подходящей питательной среде с последующим выделением и очисткой целевого белка. При этом в качестве продуцента используют дрожжи Saccharomyces cerevisiae, трансформированные вектором экспрессии, который содержит область инициации репликации эндогенной 2-мкм плазмиды дрожжей Saccharomyces cerevisiae, а также промотор GAL1 дрожжей, контролирующий экспрессию гена, включающего последовательность ДНК SEQ ID NO:1, кодирующую слитый белок, составными частями которого являются аминокислотные последовательности белка E7-PISP70 и белка убиквитина дрожжей Saccharomyces cerevisiae, занимающего в составе слитого белка N-концевое положение, заканчивающегося сайтом процессинга, отделяющим его от последовательности белка E7-HSP70 и распознаваемым природными убиквитин-специфичными протеиназами дрожжей. Штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae ВКПМ Y-3853 - продуцент белка E7-HSP70 - получают путем трансформации вектором экспрессии pPDX3U-E7-HSP70 штамма дрожжей Saccharomyces cerevisiae D702. Группа изобретений обеспечивает высокий уровень биосинтеза и выход очищенного белка E7-HSP70, получение водорастворимого корректно процессированного белка E7-HSP70, принципиальное отсутствие в препаратах белка E7-HSP70 токсичного и пирогенного ЛПС бактерий. 2 н.п. ф-лы, 4 ил., 12 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Представлен слитый пептид для нейтрализации или разрушения фосфорорганических соединений, содержащий сигнальный пептид ТАТ3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 5, представленной в описании, функционально связанный с последовательностью органофосфатгидролазы SEQ ID NO: 18, классифицируемую как белок ЕС 3.1.8. Описаны выделенный полинуклеотид, кодирующий указанный слитый белок; вектор, содержащий указанный полинуклеотид; и прокариотическая клетка-хозяин, содержащая указанный вектор и экспрессирующая указанный слитый белок. Предложен способ получения фермента, разрушающего фосфорорганические соединения, включающий экспрессию указанного полинуклеотида в прокариотической клетке-хозяине, и продукцию указанного фермента. Изобретение позволяет повысить экспрессию органофосфатгидролазы в клетке-хозяине. 5 н. и 8 з.п. ф-лы, 1 табл., 9 ил., 2 пр.

Настоящее изобретение относится к области микробиологии и касается слитого белка, способного индуцировать защитный иммунитет против стрептококка группы В, а также вакцины, содержащей такой белок. Описанный слитый белок содержит по меньшей мере две аминокислотные последовательности. Первая аминокислотная последовательность, имеющая 90%-ную идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 2, слита со второй аминокислотной последовательностью, имеющей по меньшей мере 90%-ную идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 4. Представленное изобретение позволяет обеспечить иммунитет против различных клинически важных штаммов стрептококков группы В (Streptococcus agalactiae). 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 5 ил., 8 пр.

Изобретения относятся к области биотехнологии и касаются гипоаллергенных слитых белков. Представленный гипоаллергенный белок состоит из одной гипоаллергенной молекулы, происходящей из аллергена, слитой со вторым неаллергенным белком, происходящим из патогена, или его фрагментом, причем гипоаллергенная молекула, происходящая из аллергена, проявляет на 50% уменьшенную способность связывания IgE, на 30% уменьшенную Т-клеточную реактивность по сравнению с аллергеном дикого типа. Также представлены молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая такой слитый белок, вектор экспрессии, клетка-хозяин, экспрессирующая такой белок, и вакцинная композиция, содержащая такой белок. Представленное изобретение позволяет получать лекарственные или профилактические средства против аллергии и заболеваний, вызываемых патогенами, без использования токсичных адъювантов и без проявления побочного действия. 6 н. и 8 з.п. ф-лы, 23 ил., 17 табл., 27 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению рецептора фактора некроза опухоли, и может быть использовано в медицине. Генно-инженерным путем получают мутант TNFRp75, связывающийся с фактором некроза опухоли и лимфотоксином, по существу состоящий из N-концевых 257 аминокислотных остатков TNFRp75, в котором N-концевой остаток Glu92 замещен Asn, His, Ser или Ala и в котором необязательно N-концевой остаток Тгр89 замещен Туг или Phe. На основе полученного мутанта конструируют слитый белок с дополнительным аминокислотным фрагментом, выбранным из константой области человеческого иммуноглобулина и одной из пяти функциональных областей альбумина, который находится на С-конце растворимого мутанта TNFRp75. Полученный мутант TNFRp75 и слитый белок используют в составе фармацевтической композиции для лечения заболеваний, ассоциированных со сверхэкспрессией TNF , которые включают ревматоидный артрит, псориаз, склеродермию, синдром Шегрена, анкилозирующий спондилит, красную волчанку, дерматомиозит и синдром, сходный с системной красной волчанкой. Изобретение позволяет получить растворимый мутант TNFRp75, способный с высокой степенью аффинности связываться с фактором некроза опухоли и лимфотоксином. 8 н. и 1 з.п. ф-лы, 12 ил., 10 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению иммуногенов из Neisseria meningitides, и может быть использовано в медицине. Предложен белок, на 80% и более идентичный аминокислотной последовательности SEQ ID NO:19, а также иммуногенная композиция с указанным белком. Изобретение позволяет примененять указанный белок для эффективной профилактики или лечения бактериального менингита. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 5 ил., 28 табл.

Настоящее изобретение относится к области генетической инженерии и может быть использовано в медицине для индукции или усиления иммунного ответа организма. Предложен полинуклеотид, кодирующий слитый белок теломеразной обратной транскриптазы (TERT), в котором неактивный вариант полипептида TERT объединен со значительной частью субъединицы В термолабильного энтеротоксина (LTB). Показано, что слитый белок по изобретению вызывает у млекопитающего иммунный ответ, который в предпочтительных вариантах осуществления является более сильным, чем иммунный ответ, вызываемый изолированной TERT дикого типа. Настоящее изобретение раскрывает получение слитого белка с вариантом hTERT и необходимые для этого генетические конструкции, в частности аденовирусные векторы и плазмиды, а также клетки-хозяева, обеспечивающие экспрессию полинуклеотида, кодирующего слитый белок по изобретению. 5 н. и 2 з.п. ф-лы, 25 ил., 14 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, генетической инженерии и фармацевтической промышленности. Предложены две рекомбинантные плазмидные ДНК pFastBac1-G2R-dSECRET и pQE-60-TNFR-CrmB-Ind-67, кодирующие ФНО-связывающий домен белка CrmB. Указанная рекомбинантная плазмидная ДНК pQE-60-TNFR-CrmB-Ind-67 предназначена для трансформации в клетках штамма E.coli SG13009[pRep4] - продуцента ФНО-связывающего домена белка CrmB ВНО. Предложенная группа изобретений предназначена для приготовления лекарственных средств, используемых в терапии тяжелых заболеваний человека, вызванных гиперпродукцией фактора некроза опухолей (ФНО), и может быть использована в медицине. 3 н.п. ф-лы, 3 ил., 12 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения рекомбинантного гамма-интерферона человека (ЧГИФ). Сконструирована плазмидная ДНК pGD-14, определяющая экспрессию в клетках бактерии Escherichia coli гибридной генно-инженерной конструкции, состоящей из N-концевой последовательности декстрансвязывающего домена бетакокков (ДСД) и гена ЧГИФ, объединенных в одной рамке считывания через аспартат-пролиновый (сп) кислотолабильный спейсер. Изобретение обеспечивает стабильную экспрессию гена ДСД(сп)ЧГИФ на уровне 20% от тотального белка трансформированной клетки Escherichia coli. 3 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению слитых с альбумином полипептидов фактора VII (FVII) и фактора VIIa (FVIIa), и может быть использовано в медицине. Рекомбинантным путем получают полипептид, представляющий собой полипептид FVII или FVIIa, слитый с альбумином через глицин-сериновый пептидный линкер особой конструкции, отделяющий часть, относящуюся к FVII или FVIIa, от альбуминовой части, при этом полипептид FVII или FVIIa расположен на N-конце слитого белка. Слитый полипептид или векторную конструкцию, содержащую кодирующую его нуклеиновую кислоту, используют в качестве лекарственного средства для лечения или предотвращения нарушений свертываемости крови. Изобретение позволяет получить белок с биологической активностью FVII или FVIIa и увеличенным функциональным временем полужизни в плазме in vivo по сравнению с неслитыми FVII или FVIIa. 8 н. и 4 з.п. ф-лы, 4 ил., 6 табл., 6 пр.

Изобретение относится к области биомолекулярной фармакологии, биотехнологии и генетической инженерии и касается рекомбинантного гибридного полипептида и способа его получения. Предложенный гибридный полипептид представляет собой полипептид 1, к которому ковалентно присоединен полипептид 2, где полипептид 1 представляет собой последовательность эндостатина человека с 135 по 184 аминокислотный остаток, причем в положении 173 произведена замена Цис на Ала сравнительно с нативной последовательностью эндостатина, а полипептид 2 представляет собой последовательность плазминогена человека с 82 по 341 или с 463 по 511 аминокислотный остаток. Так же предложен способ получения гибридного полипептида с использованием продуцента Е. coli, включающий методы его выделения и очистки. Представленный полипептид способен ингибировать пролиферацию эндотелиальных клеток человека in vitro и может быть использован при изготовлении нетоксичных препаратов для ингибирования ангиогенеза. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 4 ил., 6 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу получения рФНО-lg в культуре клеток для крупномасштабного производства и его вариантам. Способ включает обеспечение культуры клеток, содержащей клетки млекопитающего, которые содержат ген, кодирующий рФНО-lg, экспрессия которого происходит в условиях культуры клеток. Используют среду, содержащую глютамин и обладающую необходимыми свойствами. Проводят поддержание указанной культуры в фазе начального роста при первом наборе условий культивирования в течение первого периода времени. Осуществляют изменение по меньшей мере одного из условий культивирования с получением второго набора условий культивирования, причем указанное условие культивирования на указанном этапе изменения по меньшей мере одного из условий культивирования выбрано из группы, состоящей из: (i) температуры; (ii) рН; (iii) осмоляльности; (iv) уровня химического активатора и их комбинаций. Проводят поддержание указанной культуры при указанном втором наборе условий в течение второго периода времени с тем, чтобы в указанной культуре произошло накопление рФНО-lg. Предложенное изобретение позволяет осуществлять крупномасштабное производство рФНО-lg в культуре клеток. 5 н. и 43 з.п. ф-лы, 76 ил., 27 табл., 17 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается целлюлазных слитых белков. Представленные слитые белки содержат аминокислотную последовательность эндоглюканазного ядра, имеющую, по крайней мере, 95%-ную идентичность с SEQ ID NO:2, слитую с аминокислотной последовательностью, содержащей линкер и целлюлозосвязывающий домен (CBD), имеющую, по крайней мере 95%-ную идентичность с SEQ ID NO:15. Такие слитые белки могут быть получены с помощью рекомбинантной технологии при использовании подходящих полинуклеотидов, экспрессирующих векторов и клеток-хозяев. Представленное изобретение обеспечивает целлюлазу, обладающую низкой активностью в отношении восстановления окраски, и может быть использовано для обработки целлюлозного материала, например, текстильного материала и для биологической абразивной обработки денима. Кроме того, представленные слитые белки и ферментные препараты на их основе могут использоваться для приготовления детергентных композиций или для улучшения качества кормов для животных. 12 н. и 14 з.п. ф-лы, 8 ил., 10 табл., 10 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению стимуляторов пути передачи сигнала через IL-15Rбета/гамма, и может быть использовано в медицине. Соединение содержит IL-15, опосредованно связанный ковалентными связями с полипептидом, содержащим домен sushi внеклеточной области субъединицы альфа IL-15R. Изобретение позволяет индуцировать и стимулировать активацию и пролиферацию I L-15Rбета/гамма-положительных клеток, таких как NK-и/или Т-клетки, и эффективно лечить состояния и заболевания, при которых желательно повышение активности IL-15. 9 н. и 35 з.п. ф-лы, 42 ил., 4 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, генной инженерии и вирусологии. Раскрыты субстанции, представляющие собой носитель с расщепленным ядром, которые содержат в виде отдельных полипептидов coreN-и соrеС-доменов ядерного белка вируса гепатита В и по меньшей мере одну чужеродную молекулу, к которой требуется вызвать иммунный ответ. Согласно изобретению чужеродную молекулу, прежде всего гетерологичную чужеродную аминокислотную последовательность, сливают либо с С-концом coreN-домена, либо с N-концом соrеС-домена, и ядерный белок обладает способностью образовывать капсидоподобные частицы. Также описаны соответствующий способ получения и диагностическое и лекарственное средство. Изобретение может быть использовано в медицине. 4 н. 12 з.п. ф-лы, 9 ил., 15 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения рекомбинантных белков паутины паука-кругопряда в клетках дрожжей, слитых белков, содержащих последовательности рекомбинантных белков паутины паука-кругопряда, рекомбинантных ДНК, кодирующих слитые белки, клеток-хозяев дрожжей и векторов экспрессии, используемых для осуществления способа, а также штаммов - продуцентов рекомбинантных белков паутины паука-кругопряда. Способ включает конструирование вектора экспрессии, содержащего последовательность ДНК, кодирующую рекомбинантный белок паутины паука-кругопряда, слитую с последовательностью, кодирующую убиквитин или убиквитин-подобный белок SUMO дрожжей Saccharomyces cerevisiae, которая занимает в составе слитого белка N-концевое положение по отношению к рекомбинантному белку паутины, трансформацию клеток дрожжей полученным вектором экспрессии и экспрессию в трансформированных клетках белка паутины паука-кругопряда. Представленный способ позволяет увеличить продукцию рекомбинантного белка паутины при накоплении последнего в клетках дрожжей в водонерастворимой фракции в виде белка, не содержащего гибридный компонент. 7 н. и 17 з.п. ф-лы, 6 ил., 12 пр.

Данное изобретение относится к области генной инженерии и может быть использовано при получении белков методом рекомбинантных ДНК. Предложена система модулирования экспрессии индуцибельного гена на основе ядерного рецептора, которая включает две кассеты экспрессии, где первая кассета содержит полинуклеотид, кодирующий первый полипептид, который состоит из а) ДНК-связывающего домена, представленного доменом рецептора экдизона (EcR), GAL4 или LexA, и б) лигандсвязывающего домена (LBD) EcR, содержащего, по меньшей мере, мутацию в положении, соответствующем положению 132 в последовательности экдизонового рецептора Chotistoneura fumiferana (CfEcR), которая обеспечивает повышение чувствительности системы к диацилгидразиновым лигандам, а вторая кассета экспрессии содержит полинуклеотид, кодирующий второй полипептид, который состоит из а) домена трансактивации, представленного доменом трансактивации EcR, VP16, кислотного активатора В42 или р65, и б) второго LBD, который является доменом ядерного рецептора, способным димеризоваться с первым мутантным LBD, предпочтительно лигандсвязывающего домена ретиноидного Х-рецептора. Применение настоящего изобретения обеспечивает возможность регулирования экспрессии рекомбинантных белков неприродными синтетическими лигандами и, соответственно, получение целевых продуктов в любых типах животных и растительных клеток-хозяев. 4 н. и 8 з.п. ф-лы, 14 табл., 10 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению белков паука, и может быть использовано в медицине. Рекомбинантным путем получают спидроиновый белок главной ампулярной железы, который состоит из 150-420 аминокислотных остатков и описывается формулой REP-CT, где REP - это фрагмент белка из 80-300 аминокислотных остатков, выбранный из L(AG)nL, L(AG)nAL, L(GA)nL или L(GA)nGL, где n - целое число от 4 до 8. Каждый индивидуальный сегмент А состоит из 8-18 аминокислотных остатков, где от 0 до 3 аминокислотных остатков не являются Ala, а остальные - представляют собой Ala. Каждый отдельный сегмент G состоит из 12-30 аминокислотных остатков, где по меньшей мере 40% аминокислотных остатков являются Gly. Каждый индивидуальный сегмент L является линкерной аминокислотной последовательностью из 0-20 аминокислотных остатков. СТ - это фрагмент от 70 до 120 аминокислотных остатков С-концевого фрагмента спидроинового белка главной ампулярной железы. Изобретение позволяет получить спидроиновый белок главной ампулярной железы, способный к полимеризации, а также на его основе получить слитый белок, способный к управляемой полимеризации. 9 н. и 6 з.п. ф-лы, 1 табл., 9 ил., 13 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению эритропоэтина, слитого с Fc-фрагментом человеческого IgG, и может быть использовано в медицине. Рекомбинантным путем получают слитый белок, содержащий природную молекулу человеческого эритропоэтина с остатком цистеина вблизи ее С-конца и фрагмент Fc человеческого IgG, содержащий шарнирную область, причем N-конец указанного Fc-фрагмента присоединен к указанному С-концу указанной молекулы эритропоэтина и при этом указанный Fc-фрагмент является природным, за исключением мутации, состоящей в замещении остатка цистеина в указанной шарнирной области, расположенного ближе всего к указанной эритропоэтиновой молекуле, нецистеиновым остатком, в результате чего первый цистеиновый остаток указанной шарнирной области, расположенный ближе всего к указанному N-концу, отделен по меньшей мере 12 или 17 аминокислотами от указанного остатка цистеина указанной молекулы эритропоэтина. Полученный пептид используют для стимуляции эритропоэза у млекопитающего. Изобретение позволяет получить слитый белок, обладающий активностью эритропоэтина, имеющий продленное время полужизни in vivo по сравнению с нативным человеческим эритропоэтином. 12 н. и 31 з.п. ф-лы, 20 ил.