Получение мутаций или генная инженерия, ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка, использование их хозяев: ...с использованием маркеров – C12N 15/65

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу замены последовательности ДНК-мишени посредством гомологичной рекомбинации в Clostridium acetobutylicum, способу замены двух или более генов-мишеней посредством гомологичной рекомбинации в одной и той же клетке С.acetobutylicum, трансформированной клетке Clostridium acetobutylicum, трансформирующему вектору. Способ включает трансформацию клетки Clostridium acetobutylicum вектором, содержащим: ориджин репликации, позволяющий осуществлять его репликацию в С.acetobutylicum; замещающую кассету, содержащую первый маркерный ген, окруженный двумя последовательностями, гомологичными выбранным участкам около последовательности ДНК-мишени, позволяющими осуществлять рекомбинацию данной кассеты; второй маркерный ген, представляющий собой upp встречно-селектируемый маркер. Осуществляют селекцию клеток с интегрированной в их геном указанной кассетой, которые экспрессируют первый маркерный ген. Проводят селекцию клеток с элиминированным указанным вектором, которые не экспрессируют второй маркерный ген. Предложенное изобретение позволяет получать трансформированную клетку Clostridium acetobutylicum, которая является генетически стабильной и безмаркерной. 4 н. и 27 з.п. ф-лы, 6 ил., 4 табл., 4 пр.

Изобретение относится к генной инженерии и микробиологической промышленности и касается генетической конструкции для экспозиции белка на поверхности клеточной стенки Yarrowia lipolytica. Представленная конструкция содержит промотор, терминатор, сигнальную последовательность, селективный маркер, нуклеотидную последовательность, кодирующую иммобилизируемый белок, и нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы последовательностей, приведенных в списке последовательностей под номером SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:2, или SEQ ID NO:3, или SEQ ID NO:4, или SEQ ID NO:5, или SEQ ID NO:6. Представленное изобретение позволяет упростить процесс очистки продуцируемого клеткой белка и может быть использовано для микробиологического получения белков. 7 ил., 11 пр., 1 табл.

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается вектора, предназначенного для получения стабильно трансформированных штаммов грибов Rhizopus oryzae. Охарактеризованный вектор содержит селективный генетический маркер и нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:2. Представленная генетическая конструкция может быть использована для получения высокостабильных штаммов грибов рода Rhizopus с высоким уровнем продукции целевого продукта. 1 з.п. ф-лы, 6 ил., 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии. Описана дрожжевая клетка, включающая интерференционную конструкцию ДНК. Конструкция включает: ген-репортер, находящийся под контролем первого промотора; один или несколько индуцируемый(ых) промотор(ов), так называемый(ых) промотор(ов) интерференции, выбираемый(ых) и фиксированный(ых) таким образом, что его(их) активация вызывает транскрипционную интерференцию первого промотора, приводящую к поддающемуся обнаружению уменьшению экспрессии гена-репортера. При этом клетка экспрессирует: первый химерный белок (Y-AD), образованный доменом активации транскрипции (AD), слитый с белком Y, способным взаимодействовать по меньшей мере с белком-партнером X; второй химерный белок (X-DBD), образованный первым, ДНК-связывающим доменом (DBD), слитым со вторым доменом, образованным белком X, способным взаимодействовать с белком Y, причем взаимодействие двух химерных белков X-DBD и Y-AD приводит к конструкции функционального фактора транскрипции, активирующего промотор или промоторы интерференции. Преложен способ идентификации соединения, ингибирующего взаимодействие первого белка X со вторым белком Y. Изобретение позволяет осуществлять детектирование прерывания взаимодействия белок-белок, а также осуществлять идентификацию дефицитных аллелей на уровне взаимодействия белков, принимающих участие во взаимодействиях белок-белок. 5 н. и 22 з.п. ф-лы, 32 ил., 4 табл.

Изобретение относится к диагностике атипичных пневмоний с помощью молекулярно-биологических методов, а также к биотехнологии и генной инженерии. Предложены на основе идентифицированных антигенных эпитопов белков SARS-CoV ДНК-последовательности синтетических генов, кодирующих фрагменты рекомбинантного белка, содержащие антигенные детерминанты белков коронавируса SARS-CoV, представленные нуклеотидными последовательностями SEQ ID NO: 1 - SEQ ID NO: 8, а также фрагменты белка SARS-CoV вируса, кодируемые данными ДНК-последовательностями, представленные на фиг.1 аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 10 - SEQ ID NO: 17, при этом фрагменты выделены с использованием предварительно полученного слитого белка путем присоединения к его N-терминальному концу белка GST-S-трансферазы, имеющего последовательность SEQ ID NO: 9. Слитые белки обеспечивают получение диагностических препаратов и могут быть использованы при диагностике SARS-CoV вируса острого респираторного вируса. 2 н.п. ф-лы.