Получение мутаций или генная инженерия, ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка, использование их хозяев: ...векторы или экспрессионные системы, специально предусмотренные для прокариотических хозяев, кроме E.coli, например Lactobacillus, Micromonospora – C12N 15/74

Изобретение относится к области молекулярной биологии и биохимии. Предложена полинуклеиновая кислота, кодирующая слитый белок для обеспечения секреции фермента, расщепляющего клеточную стенку, в микроорганизме класса Clostridia, а также соответствующий рекомбинантный микроорганизм и способ продуцирования и секреции указанного белка. Изобретение может быть использовано для целлюлолитических процедур в промышленности. 3 н. и 10 з.п. ф-лы, 5 ил., 5 пр.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Вектор экспрессии содержит: (a) ориджин репликации OriP, полученный из вируса Эпштейна-Барр (EBV), где ориджин репликации содержит: 1) элемент симметрии второго порядка (DS); и 2) участок дупликации (FR), который содержит участок связывания EBNA; (b) ориджин репликации SV40; (c) участок инсерции для вставки представляющего интерес гена; (d) промотор EF-1б, функционально связанный с участком инсерции; (e) сигнал поли-A; (f) бактериальный ориджин репликации; (g) селектируемый маркер; и необязательно содержащий (h) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую константную область тяжелой или легкой цепи антитела, функционально связанную с участком инсерции. Причем ориджин репликации OriP связан с действующим извне фактором инициации репликации EBNA 1, который не кодируется вектором экспрессии. Использование вектора экспрессии в выделенной клетке-хозяине, наборе и способе получения рекомбинантного белка обеспечивает получение обильной экспрессии белка. 4 н. и 22 з.п. ф-лы, 25 ил., 3 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к рекомбинантной нуклеиновой кислоте, экспрессирующей один или несколько представляющих интерес полипептидов, вектору экспрессии и бактерии, которые содержат данную рекомбинантную нуклеиновую кислоту, и их применению, а также к фармацевтической композиции для доставки одного или нескольких представляющих интерес полипептидов человеку или животному. Рекомбинантная нуклеиновая кислота содержит природный промотор гена HU-подобного ДНК-связывающего белка (PhIIA) вида Lactococcus с последовательностью SEQ ID NO:28, или его гомологичный или функциональный вариант, который по меньшей мере на 95% идентичен промотору с последовательностью SEQ ID NO:28, функционально связанный с одной или несколькими открытыми рамками считывания, гетерологичными для промотора PhIIA, где промотор PhIIA расположен выше одной или нескольких открытых рамок считывания. Вектор экспрессии содержит вышеуказанную рекомбинантную нуклеиновую кислоту, предпочтительно, указанный вектор получают из pT1NX. Бактерия содержит вышеуказанную рекомбинантную нуклеиновую кислоту или вышеуказанный вектор. Предложенное изобретение позволяет повысить уровень экспрессии представляющих интерес генов полипептидов и таким образом получить достаточное количество экспрессированных белков. 11 н. и 8 з.п.ф-лы, 26 ил., 12 табл., 9 пр.

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к биофармацевтики, и может быть использована для приготовления вакцин. Для этого вакцина содержит: нативные везикулы наружной мембраны (NOMV), полученные по меньшей мере из двух штаммов менингококков, которые были генетически модифицированы для широкого спектра защиты, где нативные везикулы наружной мембраны включают различные наборы антигенов, где различные наборы антигенов содержат один или несколько белков РоrА, один или несколько LOS и один или несколько консервативных белков наружной мембраны; где генетически модифицированные штаммы были модифицированы для повышения безопасности путем инактивации генов lpxL1, synX и lgtA и где по меньшей мере один генетически модифицированный штамм экспрессирует по меньшей мере два различных подтипа белков или подтипа эпитопов РоrА. Также предложен способ стимуляции иммунного ответа на менингококковую инфекцию, включающий в себя введение вакцинной композиции по настоящему изобретению. Группа изобретений обеспечивает защитный иммунитет против менингококковой инфекции, предпочтительно инфекции, вызываемой менингококками подтипа В. 4 н. и 45 з.п. ф-лы, 11 пр., 21 ил., 10 табл.

Изобретение раскрывает очищенный и/или рекомбинантный антигенный полипептид, обладающий токсинной активностью, выделенный из Clostridium perfringens, с установленной аминокислотной последовательностью. В изобретении раскрыт выделенный или рекомбинантный полинуклеотид, кодирующий указанный полипептид, вектор экспрессии и клетка-хозяин, экспрессирующая полипептид. Изобретение раскрывает способ получения полипептида, антитело, специфически связывающееся с полипептидом, иммуногенные композиции и вакцины, содержащие данный полипептид или полинуклеотид, обеспечивая специфический иммунный ответ к полипептиду. Раскрыты способ индуцирования иммунного ответа, способ определения, подвергался ли субъект воздействию патогена (варианты), способ скрининга агониста или антагониста, модулирующего активность полипептида, способ вакцинации животных, например, кур, для индуцирования активного иммунитета, а также пассивного иммунитета у потомства самок птиц, которое становится менее чувствительным к клостридиальным заболеваниям. Раскрыто трансгенное растение, содержащее экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид по изобретению, предназначенное для кормления животных. Полипептид используют в составе корма и/или напитка для предупреждения заболевания, вызванного бактериями, экспрессирующими полипептид по изобретению. 22 н. и 18 з.п. ф-лы, 8 ил., 6 табл., 11 пр.

Настоящее изобретение относится к области биохимии, в частности к способам трансляции белка, и может быть использовано в различных тест-системах, предназначенных для детектирования соединений полипептидной природы. Предложена ортогональная пара, включающая тРНК (О-тРНК) и аминоацил-тРНК синтетазу (О-РС), в которой О-тРНК является супрессорной тРНК, распознающей амбер-кодон, а О-РС представляет собой мутантную форму тирозил-тРНК синтетазы Methanococcus janaschii, предпочтительно аминоацилирующую указанную тРНК неприродной аминокислотой L-(7-гидроксикумарин-4-ил)-этилглицином. Описана система трансляции, обеспечивающая введение в любое выбранное положение интересующего белка, синтезируемого в этой системе, неприродной аминокислоты L-(7-гидроксикумарин-4-ил)-этилглицина, которая включает ортогональную пару по изобретению, названную неприродную аминокислоту и нуклеиновую кислоту, которая кодирует представляющий интерес белок и содержит в выбранном положении селекторный кодон, распознаваемый О-тРНК. 6 н. и 14 з.п. ф-лы, 9 ил., 5 пр.

Изобретение относится к области биомолекулярной фармакологии, биотехнологии и генетической инженерии и касается рекомбинантного гибридного полипептида и способа его получения. Предложенный гибридный полипептид представляет собой полипептид 1, к которому ковалентно присоединен полипептид 2, где полипептид 1 представляет собой последовательность эндостатина человека с 135 по 184 аминокислотный остаток, причем в положении 173 произведена замена Цис на Ала сравнительно с нативной последовательностью эндостатина, а полипептид 2 представляет собой последовательность плазминогена человека с 82 по 341 или с 463 по 511 аминокислотный остаток. Так же предложен способ получения гибридного полипептида с использованием продуцента Е. coli, включающий методы его выделения и очистки. Представленный полипептид способен ингибировать пролиферацию эндотелиальных клеток человека in vitro и может быть использован при изготовлении нетоксичных препаратов для ингибирования ангиогенеза. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 4 ил., 6 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу замены последовательности ДНК-мишени посредством гомологичной рекомбинации в Clostridium acetobutylicum, способу замены двух или более генов-мишеней посредством гомологичной рекомбинации в одной и той же клетке С.acetobutylicum, трансформированной клетке Clostridium acetobutylicum, трансформирующему вектору. Способ включает трансформацию клетки Clostridium acetobutylicum вектором, содержащим: ориджин репликации, позволяющий осуществлять его репликацию в С.acetobutylicum; замещающую кассету, содержащую первый маркерный ген, окруженный двумя последовательностями, гомологичными выбранным участкам около последовательности ДНК-мишени, позволяющими осуществлять рекомбинацию данной кассеты; второй маркерный ген, представляющий собой upp встречно-селектируемый маркер. Осуществляют селекцию клеток с интегрированной в их геном указанной кассетой, которые экспрессируют первый маркерный ген. Проводят селекцию клеток с элиминированным указанным вектором, которые не экспрессируют второй маркерный ген. Предложенное изобретение позволяет получать трансформированную клетку Clostridium acetobutylicum, которая является генетически стабильной и безмаркерной. 4 н. и 27 з.п. ф-лы, 6 ил., 4 табл., 4 пр.

Сконструированы полиэпитопные белки, состоящие из двух или более фрагментов белков вируса ящура, в частности серотипа О/Тайвань/99, соединенных линкерными аминокислотными последовательностями. Вакцинный полиэпитопный белок может быть охарактеризован общей формулой VP4(X1-X2)-GRL-VP1(X3-X4)-GRL-VP1(X5-X6)GRL-2C(X7-X8)-GRL-3D(X9-X10)-GRL-3D(X11-X12), где GRL - глицинбогатый линкер, Xn-Xm - целые числа, отражающие номера аминокислотных остатков соответствующего белка вируса ящура, VP4, VP1, 2С, 3D - названия белков ящура. В изобретении раскрыты нуклеотидная последовательность (НП), кодирующая пептиды, входящие в полиэпитопный белок, рекомбинантная плазмида, обеспечивающая синтез гибридного полиэпитопного белка в клетках прокариот (E.coli) и эукариот (растения), состав сольвента для вакцины против вируса ящура на основе полиэпитопного белка. Полиэпитопный белок обладает высокой иммуногенностью и может рассматриваться в качестве кандидата на рекомбинантную вакцину против ящура для сельскохозяйственных животных. 4 н. и 11 з.п. ф-лы, 7 ил., 2 табл., 6 пр.

Изобретение относится к микроорганизму-носителю нуклеотидных последовательностей, кодирующих антигены и белковые токсины, включающему первый компонент, представленный по меньшей мере одной нуклеотидной последовательностью, кодирующей по меньшей мере один полный или неполный антиген по меньшей мере одного белка дикого типа или мутантного белка, второй компонент, представленный по меньшей мере одной нуклеотидной последовательностью, кодирующей по меньшей мере один белковый токсин и/или по меньшей мере одну субъединицу белкового токсина, третий компонент, состоящий по меньшей мере из одного первого подкомпонента, представленного по меньшей мере одной нуклеотидной последовательностью, кодирующей по меньшей мере одну систему транспорта, которая облегчает экспрессию продуктов экспрессии первого и второго компонентов на наружной поверхности микроорганизма и/или облегчает секрецию продуктов экспрессии первого и второго компонентов, и/или кодирующей по меньшей мере одну сигнальную последовательность, которая облегчает секрецию продуктов экспрессии первого и второго компонентов, и/или, необязательно, из второго подкомпонента, представленного по меньшей мере одной нуклеотидной последовательностью, кодирующей по меньшей мере один белок для лизиса микроорганизма в цитозоле клеток млекопитающих и для внутриклеточного высвобождения плазмид или векторов экспрессии, которые содержатся в лизированном микроорганизме, и четвертый компонент, представленный по меньшей мере одной нуклеотидной последовательностью для по меньшей мере одной последовательности активации для экспрессии по меньшей мере одного из первого, второго и третьего компонентов, где указанная последовательность активации может быть активирована в микроорганизме и/или является специфической для клетки ткани, специфической для опухолевой клетки, макрофаг-специфической, дендрит-специфической, лимфоцит-специфической, функция-специфической или неспецифической в отношении клетки, причем любой первый, второй, третий или четвертый компоненты, представленные в микрорганизме более одного раза, являются независимо друг от друга идентичными или отличающимися, при этом первый и второй компонент отличны друг от друга. Кроме того, описаны лекарственное средство для стимулирования иммунного ответа и фармацевтическая композиция на основе указанного микроорганизма, способы получения указанного микроорганизма, соответствующие экспрессионная плазмида и вектор экспрессии для получения указанного микроорганизма. Изобретение позволяет получать новые противоопухолевые вакцины, которые индуцируют сильный системный клеточный ответ иммунной системы, что повышает эффективность противоопухолевой терапии. 9 н. и 12 з.п. ф-лы, 18 ил., 8 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к производству н-бутанола путем ферментации углеводосодержащего сырья рекомбинантными бактериями. Сконструированы рекомбинантные плазмидные ДНК: pBCS, содержащая гены биосинтеза бутанола crt, bcd, etfB, etfA и hbd из C.acetobutylicum и pTHL-BCS, содержащая помимо ранее перечисленных ген thi из C.acetobutylicum. Плазмиды способны реплицироваться как в грамотрицательных (Е.соli), так и в грамположительных (L.brevis) бактериях. Получены рекомбинантные штаммы-продуценты н-бутанола на основе бактерий Lactobacillus brevis: штамм Lactobacillus brevis ВКПМ В-10044, содержащий плазмиду pBCS; штамм Lactobacillus brevis ВКПМ В-10043, содержащий плазмиду pTHL-BCS, способные синтезировать бутанол и устойчивые к его концентрации 2,0-2,8 мас.% в жидкой среде. Разработан способ микробиологического синтеза бутанола на основе рекомбинантных бактерий L.brevis, совмещающих способность синтезировать бутанол с устойчивостью к его концентрациям в жидкой среде не менее 2,0 мас.%, позволяющий получать бутанол при использовании в качестве источника углерода в средах для культивирования как глюкозы, так и ксилозы. Изобретение позволяет повысить эффективность синтеза. 5 н.п. ф-лы, 2 табл., 2 ил.

Способ получения циклопропилконденсированных ингибиторов дипептидилпептидазы IV предусматривает использование ВОС-защищенного амина структурной формулы (3), полученного путем восстановительного аминирования кислоты формулы (1) обработкой указанной кислоты формиатом аммония, никотинамидадениндинуклеотидом, дитиотреитолом и частично очищенным концентратом ферментов фенилаланиндегидрогеназы и формиатдегидрогеназы (PDH/FDH) и без вьделения - обработкой полученного амина формулы (2) дитретбутил-дикарбонатом с получением ВОС-защищенного амина. 6 н.и 7 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в биомедицинской промышленности. Предложены экспрессионные векторы для получения IL-21 в клетках Е.coli. Кодирующая IL-21 нуклеотидная последовательность, включенная в состав новых векторов, содержит модификации, которые направлены на оптимизацию кодонов и вторичной структуры мРНК для трансляции в Е.coli. В результате трансформации предложенными векторными конструкциями получены штаммы Е.coli, пригодные для применения в промышленном масштабе. Разработаны способы крупномасштабного производства IL-21, использующие названные штаммы, которые позволяют получать более 1 г/л рекомбинантного цитокина. 8 н. и 6 з.п. ф-лы, 1 ил., 12 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для сохранения пищевых продуктов. Бактериоцин сакацин G представляет собой полипептид, выделенный из lactobacillus sakei 2512, депонированный в Национальной коллекции клеточных культур под N I-2479, и способен подавлять рост и размножение листерий. Сакацин G имеет определенную аминокислотную последовательность, представленную в описании. Описана нуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид сакацин G. Описан также вектор, включающий нуклеотидную последовательность, для клонирования и/или экспрессии полипептида, например, в трансформированных клетках, выбранных из Lactococcus, Lactobacillus и др. Разработан способ получения рекомбинантного полипептида. Бактериоцин сакацин G или штамм 2512 используют в составе бактерицидной композиции, обладающей способностью подавлять рост Гр+ патогенных бактерий, в частности, Listeria monocytogenes. Изобретение обеспечивает промышленное применение бактериоцина против патогенной или нежелательной флоры при изготовлении продуктов питания. 6 н. и 7 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм V. cholerae О139 получен методом индуцированного мутагенеза с последующим введением рекомбинантной плазмиды pIEMЗ (Km^rTc^r) с клонированным геном В-субъединицы холерного токсина (ctxB). Штамм негемолитичен, не содержит основных генов вирулентности и авирулентен для лабораторных животных, обладает высоким и стабильным уровнем продукции В-субъединицы холерного токсина (продуцирует в среду выращивания 2,5-3 мкг/мл В-субъединицы ХТ) и протективных антигенов возбудителя холеры О139 серогруппы - О139 антигена и полисахаридной капсулы, обеспечивающих формирование антибактериального и антитоксического иммунитета при холере.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генной инженерии, и может быть использовано для модулирования действия лиганда FAS-R или TNF на клетки. Полипептид, способный связываться с MORT-1 и воздействовать на внутриклеточный процесс передачи сигнала, инициируемый связыванием FAS лиганда с его рецептором или связыванием TNF с р55-TNF-R, получают путем культивирования клеток, трансформированных вектором, содержащим ДНК, кодирующую полипептид. Модуляцию действия лиганда FAS-R или TNF на клетки или модуляцию индуцируемого MORT-1 действия осуществляют с помощью полипептида, связывающегося с MORT-1, или нуклеотидной последовательности, кодирующей его. Фармацевтическая композиция для модулирования действия лиганда FAS-R или TNF на клетки содержит полипептид, связывающийся с MORT-1. Изобретение позволяет разрабатывать средства для обработки опухолевых или ВИЧ-инфицированных клеток. 13 н. и 42 з.п. ф-лы, 37 ил., 4 табл.