Получение мутаций или генная инженерия, ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка, использование их хозяев: ....для клеток животных – C12N 15/85

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой выделенную полинуклеотидную молекулу с функцией rEVE, рекомбинантный вектор экспрессии, экспрессионный шаттл-вектор, клетку-хозяина, а также способы с использованием вышеуказанной выделенной полинуклеотидной молекулы. Данная полинуклеотидная молекула с функцией rEVE может быть использована для получения рекомбинантных белков. Данная полинуклеотидная молекула с функцией rEVE содержит рекомбинантный экспрессионный векторный элемент (rEVE), содержащий последовательность нуклеотидных оснований, выбранную из группы, состоящей из последовательности нуклеотидных оснований SEQ ID NO:1, последовательности нуклеотидных оснований SEQ ID NO:2, фрагмента, усиливающего экспрессию, последовательности SEQ ID NO:1, фрагмента, усиливающего экспрессию, последовательности SEQ ID NO:2, последовательности, комплементарной любой последовательности, указанной выше, или их сочетания. Предложенное изобретение позволяет увеличить уровень экспрессии одного или нескольких белков. 8 н. и 26 з.п. ф-лы, 10 ил., 17 табл., 9 пр.

Изобретение относится к области молекулярной генетики и клеточной биологии и касается вектора экспрессии для трансгенного введения в клетки и ткани млекопитающих. Представленный вектор сконструирован на основе векторной плазмиды pEGFP-N1, содержащий фрагмент ДНК, кодирующий промотор гена белка теплового шока hsp70 Drosophila melanogaster и регуляторную последовательность перед ним, содержащую элементы теплового шока (HSE) в различном количестве, зону полилинкера, ген зеленого флуоресцентного белка (GFP) и ген устойчивости к неомицину, при этом промотор способен активироваться под действием температуры теплового шока млекопитающих или при токсическом воздействии. Такой вектор активируется при повышении температуры до 38°С или токсическом воздействии на трансгенные клетки или ткань млекопитающих. Активность входящего в состав вектора промотора можно регулировать, то есть можно вызвать или его гиперактивность, или его слабое «подтекание» или блокировать активность данного промотора путем насыщения регуляторной области элементами HSE. Изобретение может быть использовано для получения трансгенных препаратов, где исследуемый или используемый ген будет находиться под контролем регулируемого невирусного промотора. 2 з.п. ф-лы, 20 ил., 2 пр.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к молекуле нуклеиновой кислоты, которая является циклическим или линейным вектором, пригодным для экспрессии, по меньшей мере, одного целевого полипептида в клетках млекопитающих, включающая (а) по меньшей мере, одну экспрессирующую кассету (POI) для экспрессии целевого полипептида; (б) экспрессирующую кассету (MSM), включающую ген селективного маркера млекопитающих; (в) экспрессирующую кассету (MASM), включающую амплифицированный ген селективного маркера млекопитающих; причем экспрессирующая кассета (POI) фланкирована в направлении 5 кассетой экспрессии (MASM), кассета экспрессии (MSM) локализована в направлении 3 от кассеты экспрессии (POI) и в которой кассеты экспрессии (MASM), (POI) и (MSM) расположены в той же ориентации от 5 к 3 . Также раскрыты способ получения указанной молекулы нуклеиновой кислоты вектора, клетка млекопитающего-хозяина, включающая указанную молекулу нуклеиновой кислоты вектора, способ получения клетки-хозяина, содержащей указанную молекулу нуклеиновой кислоты вектора, а также способ получения целевого полипептида, используя указанную клетку-хозяина. Изобретение позволяет эффективно получать целевой полипептид в клетках млекопитающего. 5 н. и 19 з.п. ф-лы, 2 ил., 4 табл., 13 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к промоторам, и может быть использовано в продукции гетерологичных белков клетками-хозяевами. Промотор, характеризующийся последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 04, представляет собой укороченный с 5'-конца промотор SV40. Промотор используют для экспрессии гетерологичных полипептидов, а также для отбора клеток, экспрессирующих гетерологичные полипептиды. Изобретение позволяет выявлять клетки-продуценты с ограниченной экспрессией гетерологичного полипептида за счет использования промотора с пониженной силой. 5 н. и 3 з.п. ф-лы, 11 ил., 6 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к средствам, ингибирующим ангиогенез, и может быть использовано в медицине. Способ предусматривает введение антагониста EGFL8 индивидууму с патологическим состоянием, связанным с ангиогенезом. Изобретение позволяет ингибировать рост сосудов в патологических, например, опухолевых тканях. 13 з.п. ф-лы, 4 ил., 2 пр.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и генетической инженерии и может быть использовано в медицинской генетике. Предложен способ маркирования 7-ой хромосомы человека, предусматривающий гибридизацию in situ хромосом метафазных или интерфазных клеток тестируемого образца и ДНК-зонда, представленного маркерной плазмидой альфа R1-13, которая состоит из EcoRl-EcoRl-фрагмента ДНК вектора pBR 325 размером 5966 пар нуклеотидов и EcoRl-EcoRl-фрагмента альфоидной ДНК 7-ой хромосомы человека размером 680 пар нуклеотидов. Разработаны условия тестирования, в которых используемый ДНК-зонд специфически взаимодействует с центромерным районом хромосомы 7 без перекрестной гибридизации с другими хромосомами человека, что существенно повышает эффективность идентификации данной хромосомы и обеспечивает возможность применения нового метода в медицинской диагностике.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой плазмидный вектор для переноса ДНК, содержащий последовательность, кодирующую различные фрагменты онкобелка p185^neu, способные индуцировать иммунный ответ в отношении опухолей, гиперэкспрессирующих p185^neu. Изобретение относится также к фармацевтической композиции на основе вектора для профилактики или лечения пациентов с риском развития p185^neu-позитивных опухолей или пациентов с первичными опухолями, метастазами или рецидивами p185^neu-позитивных опухолей. Изобретение позволяет повысить эффективность профилактики или лечения пациентов с риском развития p185^neu-позитивных опухолей или пациентов с первичными опухолями, метастазами или рецидивами p185^neu -позитивных опухолей. 3 н. и 7 з.п. ф-лы, 14 ил., 2 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к генной терапии, и касается нуклеотидной последовательности, кодирующей инсулиноподобный фактор роста человека, IGF-1, представленную синтетическим геном, включающим последовательность SEQ ID NO:1, рекомбинантной плазмидной ДНК, содержащей эту последовательность, эукариотической клетки, содержащей рекомбинантную плазмидную ДНК, конструкции для генной терапии и фармацевтической композиции для генной терапии, обладающей регенеративным и ранозаживляющим действием. Преимущество изобретения заключается в снижении доз инъекционных препаратов и частоты их введения. 5 н.п. ф-лы, 6 ил.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, в частности к генно-инженерному способу, обеспечивающему массовое производство мультимерного рекомбинантного маннозосвязывающего лектина (MBL) человека, и может быть использовано в биомедицинской промышленности. Предложенный способ включает а) стадию культивирования линии клеток-хозяев СНО, трансфицированной рекомбинантным вектором pMSG-MBL, содержащим последовательность кодирующей области MBL человека, и б) стадию очистки рекомбинантного белка. При этом на первой стадии предпочтительно используют новую клеточную линию СНО MBL D1-3, депонированную в Корейской коллекции типовых культур под номером КСТС 10472ВР, которую культивируют в безбелковой среде с использованием биореактора, а на второй проводят избирательную очистку высокомолекулярной формы MBL от среды культивирования, предусматривающую разделение образцов с помощью анионообменной хроматографии, нанесение их на колонку с иммоболизованным на ней MBL-связывающим белком, в частности с гликозилированным белком оболочки вируса pre-S, в присутствии ионов кальция и последующее элюирование буферным раствором с EDTA или EGTA. Высокий выход функционально активного продукта открывает возможности его применения при разработке терапевтических средств для лечения вирусной, бактериальной или грибковой инфекций. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 11 ил.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен новый полинуклеотид, полученный из нуклеотидной последовательности гена IFN -17, содержащий единичный нуклеотидный полиморфизм SNP g771c. Также предложен новый полипептид, происходящий от природного белка IFN -17 дикого типа, содержащий SNP G45R. Изобретение может быть использовано для получения эффективного терапевтического средства, обладающего противовирусной, антипролиферативной и/или иммуномодулирующей активностью. 7 н. и 6 з.п. ф-лы, 5 табл., 5 ил.

(56) (продолжение):

CLASS="b560m"BIOLOGY, LONDON, GB, 20.09.1985, v.185, №2, p.227260. HOULE J.L., SANTORO N. Analysis of human interferon-a gene promoters by multiple sequence alignment. J. OF INTERFERON AND CYTOKINE RESEARCH, 1996, 16(2), 93-8.

Изобретение относится к лекарственным средствам, содержащим генетический материал. Предложена генно-инженерная конструкция VEGF-ИБМед, представляющая собой экспрессионную векторную плазмиду, в которой клонирована вставка ДНК, кодирующая фактор роста эндотелия сосудов в трех его формах. Генно-инженерная конструкция названа VEGF-ИБМед. Изобретение обеспечивает повышение эффективности, а также безопасности за счет использования плазмидного вектора.

Изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к получению новых вариантов полипептида гамма-интерферона, обладающих активностью гамма-интерферона (IFNG), и может быть использовано в медицине для лечения интерстициальных легочных заболеваний. Новые варианты полипептида включают замены S99T по сравнению с аминокислотной последовательностью huIFNG, могут быть укорочены с С-конца на 1-15 аминокислот и способны повышать использование природного сайта N-гликозилирования в положении 97. Мутантные формы гамма-интерферона, содержащие треонин в положении 99, могут включать от 1 до 10 модификаций, без потери активности полипептида. Полипептид получают путем экспрессии в клетках-хозяевах, трансформированных вектором, включающим нуклеиновую кислоту, которая кодирует мутантный IFNG. Путем ПЭГилирования получают конъюгат мутантного полипептида с ПЭГ, который обладает увеличенным временем полужизни в сыворотке и сниженной иммуногенностью. Полученный полипептид IFNG используют в способах лечения и профилактики интерстициальных легочных заболеваний в составе фармацевтической композиции. Изобретение позволяет получить мутантный гамма-интерферон с повышенным использованием сайта N-гликозилирования в положении 97 по сравнению с природной формой huIFNG. 11 н. и 31 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 табл.

Изобретение относится к области генной и клеточной инженерии и может быть использовано в экспериментальной биологии и медицине. Предложен способ локального подавления ангиогенеза в ткани-мишени, предусматривающий введение в защищаемую область либо вектора, который содержит последовательность ДНК, кодирующую Т-кадгерин, и способен обеспечить ее экспрессию в ткани-мишени, либо клеток, совместимых с клетками ткани-мишени, которые были предварительно трансфицированы названным вектором и отобраны по уровню экспрессии Т-кадгерина. При осуществлении предлагаемого способа в модельной системе, основанной на имплантации Матригеля мышам, у опытных животных, которым были подкожно введены экспрессирующие Т-кадгерин клетки L929 (клон ТС3), через 2 недели после инъекции наблюдалось достоверное снижение массы имплантанта, содержания в имплантанте гемоглобина, а также количества капилляров и сосудов среднего размера по сравнению с контролем. Настоящее изобретение может быть положено в основу новых методов лечения патологических состояний, связанных с необходимостью подавления образования в ткани новых кровеносных сосудов. 6 з.п. ф-лы, 7 ил.

Изобретение относится к области биохимии и генной инженерии и может быть использовано в рыбоводстве. Определена нуклеотидная последовательность, кодирующая гликопротеин российского изолята ЗЛ-4. На основании данной последовательности сконструированы ДНК-плазмиды, обеспечивающие экспрессию гликопротеина российского изолята ЗЛ-4 в рыбах. ДНК-вакцина на основе указанных ДНК-плазмид обеспечивает развитие у рыб защитного иммунитета против последующего заражения изолятом ЗЛ-4 вируса весенней виремии карпа. Применение изобретения позволяет обеспечить защиту карпа российской аквакультуры от последующего заражения вирусом весенней виремии карпа. 3 н.п. ф-лы, 4 ил.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и генетической инженерии и может быть использовано в медицине. Определена часть нуклеотидной последовательности, расположенной выше кодирующей последовательности гена CARP, с активностью промотора, обеспечивающего специфическую экспрессию функционально связанного с ним гена в клетках сердца in vivo. Выявленная промоторная область соответствует последовательности гена CARP мыши от нуклеотида в положении (-2266) до нуклеотида в положении (+92). Предложены кассета и векторы для экспрессии представляющего терапевтическую ценность целевого белка в сердечной ткани, отличительной особенностью которых является содержание в них названной регуляторной последовательности, и определены возможности использования этих генетических конструкций в составе лекарственных средств. 9 н. и 10 з.п., 10 ил.

ТРАНСКРИПЦИОННАЯ РЕГУЛЯТОРНАЯ ДНК ГЕНА ХОМЯКА EF-1

Изобретение относится к генной инженерии, конкретно к очищению и выделению полинуклеотидов, регулирующих транскрипцию генов млекопитающих, и может быть использовано для регуляции экспрессии гетерологичных полинуклеотидов, получения трансгенных животных и для идентификации родственных регуляторных последовательностей ДНК. ДНК, содержащую транскрипционную регуляторную ДНК гена хомяка EF-1, выделяли путем скрининга геномной библиотеки к ДНК яичника китайского хомячка (СНО-К1). Конструируют химерный полинуклеотид, включающий выделенную регуляторную ДНК гена хомяка EF-1, оперативно связанную с генной последовательностью, кодирующей целевой белковый продукт, отличный от белка, кодируемого геном хомяка EF-1. Полученный химерный полинуклеотид используют в составе экспрессионной плазмиды для трансформирования или трансфицирования клетки-хозяина. Для увеличения транскрипции целевого гена в клетке-хозяине интегрируют ДНК, содержащую регуляторную ДНК гена хомяка EF-1, в геномную ДНК клетки-хозяина в положение, оперативно связанное с целевым геном. Изобретение обеспечивает повышение в 3-11 раз уровней экспрессии мРНК оперативно связанных гетерологичных полинуклеотидов, 14 с. и 17 з.п. ф-лы, 3 табл.

Изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к новым антителам, направленным против антигенного комплекса CD3 и может быть использовано в терапевтических целях. Антитело IgG, обладает аффинностью связывания в отношении антигенного комплекса CD3, в котором тяжелая цепь содержит каркас вариабельной области человека вместе с по меньшей мере одним CDR, выбранным среди аминокислотных последовательностей SEQ ID NO 2, 4 и 6 и их соответствующих консервативно модифицированных вариантов, а легкая цепь содержит каркас вариабельной области грызуна вместе с по меньшей мере одним CDR, выбранным среди аминокислотных последовательностей SEQ ID NO 8, 10 и 12 и их соответствующих консервативно модифицированных вариантов. Антитело получают путем культивирования прокариотической или эукариотической клетки, котрансформированной вектором, содержащим рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую легкую цепь антитела, и вектором, содержащим рекомбинантную нуклеиновую кислоту, кодирующую тяжелую цепь антитела. Антитело в эффективном количестве вводят пациенту, страдающему злокачественной опухолью или нуждающемуся в иммуносупрессии. Изобретение позволяет получить химерные антитела против CD3, способные эффективно продуцироваться эксперссионными системами про- и эукариотических клеток с повышенным выходом, 6 н. и 27 з.п. ф-лы, 5 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения слитых белков - ингибиторов ангиогенеза. Слитый белок представляет собой гомодимер, в котором область Fc иммуноглобулина гамма слита с целевым белком, включающим одну или более молекул с активностью ингибитора ангиогенеза, которая происходит от ангиостатина или эндостатина. Вариант гомодимерного слитого белка включает также второй целевой белок, содержащий одну или более молекул, имеющих активность ингибитора ангиогенеза, выбранных из ангиостатина, эндостатина, фрагмента плазминогена, обладающего активностью ангиостатина, и фрагмента коллагена XVIII, обладающего активностью эндостатина. Молекулы в составе гомодимерного слитого белка связаны с областью Fc иммуноглобулина гамма и между собой непосредственно или с помощью полипептидного мостика. Гомодимерный слитый белок получают путем трансфекции клетки млекопитающего вектором, содержащим молекулу ДНК, кодирующую целевой белок, культивирования клетки млекопитающего для продуцирования слитого белка и выделения слитого белка. Изобретение обеспечивает эффективную продукцию и секрецию ингибиторов ангиогенеза в разнообразных хозяевах – клетках млекопитающих, 6 н. и 7 з.п. ф-лы, 6 ил.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генной инженерии, и может быть использовано для модулирования действия лиганда FAS-R или TNF на клетки. Полипептид, способный связываться с MORT-1 и воздействовать на внутриклеточный процесс передачи сигнала, инициируемый связыванием FAS лиганда с его рецептором или связыванием TNF с р55-TNF-R, получают путем культивирования клеток, трансформированных вектором, содержащим ДНК, кодирующую полипептид. Модуляцию действия лиганда FAS-R или TNF на клетки или модуляцию индуцируемого MORT-1 действия осуществляют с помощью полипептида, связывающегося с MORT-1, или нуклеотидной последовательности, кодирующей его. Фармацевтическая композиция для модулирования действия лиганда FAS-R или TNF на клетки содержит полипептид, связывающийся с MORT-1. Изобретение позволяет разрабатывать средства для обработки опухолевых или ВИЧ-инфицированных клеток. 13 н. и 42 з.п. ф-лы, 37 ил., 4 табл.