Ферменты, например лигазы (6.), проферменты, композиции их, способы получения, активирования, ингибирования, разделения или очистки ферментов: ....расщепление триглицерида, например с помощью липазы – C12N 9/20

Группа изобретений относится к биотехнологии и пищевой промышленности. Предложен способ получения биокатализатора для переэтерификации жиров. Проводят аминирование гранулированного силикагеля или диоксида кремния дисперсностью 0,3-1,0 мм аминопропилтриэтоксисиланом. Затем полученный аминированный носитель обрабатывают водным раствором глутарового альдегида или глиоксаля концентрацией 2,0 мас.% или 5,0 мас.% в течение 2 ч. Иммобилизуют на обработанном носителе путем рециркуляции через него раствора термостабильной липазы бактерий Geobacillus lituanicus в фосфатном буфере при температуре 0ºC или 4ºC при pH 6,5 в течение 12 ч. Затем промывают полученный биокатализатор водным раствором трис(гидроксиметил)аминометана гидрохлорида. Также предложен биокатализатор для переэтерификации жиров, полученный указанным способом. Достигаемый технический результат заключается в упрощении технологии способа и в получении биокатализатора, обладающего высокой каталитической активностью и высокой механической прочностью. 2 н.п. ф-лы, 4 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложены варианты способа получения сложных метиловых эфиров жирных кислот (биодизеля) в микроводной системе, не содержащей растворителей. Осуществляют поэтапное добавление метанола к триглицеридам в присутствии препарата липаз и обеспечивают протекание реакции в подходящих условиях до тех пор, пока триглицериды не превратятся в сложные метиловые эфиры жирных кислот. Препарат липаз содержит по меньшей мере две липазы, по отдельности или вместе иммобилизованные на пористом гидрофобном носителе, где одна из липаз обладает повышенной аффинностью к неполным глицеридам, другая является позиционно специфичной к положению sn-1,3, a необязательная третья липаза обладает высокой селективностью в отношении положения sn-2 глицерина. Носитель выбирают из группы, включающей пористые гидрофобные носители на основе алифатических или ароматических полимеров. Также предложен способ получения смеси липаз, иммобилизованных на указанном носителе. Смесь содержит липазу из Candida antarctica В и по меньшей мере одну липазу, полученную из Pseudomonas sp., Alcaligenes sp., Burkholderia sp. и Thermomyces lanuginosa. Препараты липаз обладают высокой устойчивостью в отношении гидрофильных субстратов, демонстрируют синергизм между иммобилизованными липазами и позволяют достичь высокой степени превращения за короткий промежуток времени. 7 н. и 11 з.п. ф-лы, 4 ил., 5 табл., 12 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к рекомбинантной плазмидной ДНК, кодирующей ферментативно-активную часть полипептида липазы, белка пищеварительного тракта пчелиной огневки длиной в 504 аминокислотных остатков. Рекомбинантная плазмидная ДНК содержит BamHI/HindIII - фрагмента ДНК плазмиды pQE30; BamHI/HindIII - фрагмента гена Yp2 Galleria mellonella, кодирующего ферментативно-активную часть полипептида липазы, белка пищеварительного тракта пчелиной огневки; в качестве генетического маркера ген bla в-лактамазы; нуклеотидную последовательность, кодирующую полигистидиновый тракт в рамке считывания гена Yp2. Изобретение может быть использовано для создания препарата-деструктора загрязнений, содержащих твердые алканы. 4 ил., 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой штамм бактерий Bacillus licheniformis ВКПМ В-11302 - продуцент термостабильной липазы. При ферментации полученного штамма в 3 л лабораторном ферментере активность фермента в культуральной жидкости достигает уровня 500 ЕД/мл. Изобретение позволяет получать термостабильную липазу с высокой степенью эффективности. 3 ил., 5 пр.

Культуральную жидкость, полученную после выращивания смеси штаммов Lactobacillus acidophilus NKI, 100_аш , К₃Ш₂₄, замораживают, удаляют слой жира, обезжиренную часть размораживают и отделяют клетки центрифугированием. Полученный супернатант стерилизуют мембранной вакуумной фильтрацией, концентрируют мембранной ультрафильтрацией в процессе центрифугирования, обрабатывают концентрат супернатанта с компонентами более 30 кDа пятикратным избытком ледяного ацетона. Полученный осадок разводят 20 мМ NaCl в соотношении 2:1 по объему и смешивают с 10% твин-80 до конечной концентрации твина 1%. Очистку и выделение целевого продукта проводят методом горизонтального изоэлектрофореза в пластине 5% полиакриламидного геля с 7-8 М мочевиной и 5% сахарозой в градиенте рН 4-8 при температуре 8-12°С в течение 8 ч. При выделении целевого продукта после электрофореза гелевые ленты нарезают по изоточкам, замораживают при температуре (-20°С) в течение 2 ч, размораживают и диспергируют, отделяют центрифугированием твердые частицы, концентрируют центрифугированием при 5500 об/мин в течение 60 мин при комнатной температуре, удаляют низкомолекулярные примеси и смешивают концентрат с фосфатным буфером в 100-кратном объеме. Гелевые ленты нарезают по изоточкам р1 (4.0-4.3) при выделении кислых лектинов и рI (7.6-8.0) при выделении щелочных пектинов. Это обеспечивает получение лектинов, обладающих противокандидной активностью. 4 з.п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к области биохимии. Предварительно готовят водную смесь с содержанием фосфолипида в количестве 2 до 50 мас.% и поверхностно-активного вещества в количестве от 0,1 до 25 мас.%. Смешивают водную смесь фосфолипида и поверхностно-активного вещества с серином в количестве от 50 до 80 мас.%. К реакционной смеси добавляют фосфолипазу D из моркови в количестве от 5 до 25 мас.%. Проводят реакцию взаимодействия фосфолипида с серином в присутствии воды, ионов металлов и фосфолипазы D и, по меньшей мере, одного поверхностно-активного вещества при температуре 21-25°С и при рН в интервале от 7 до 10. Из реакционной смеси выделяют фосфатидилсерин путем фильтрования. Изобретение позволяет получить фосфатидилсерин в количестве 20-25%. 11 з.п. ф-лы, 3 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Описаны липолитический полипептид и способ его получения, включающий: 1) отбор родительской липазы с аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 80% идентичной последовательности SEQ ID NO:1, представленной в описании; 2) отбор, по меньшей мере, одного аминокислотного остатка в последовательности; 3) изменение аминокислотной последовательности, где изменение включает одно или более из следующего: N74Q, P143S, A281S, P38S, N292Q, L1QGPL, L1QL, I285E, L147F, L147N, N292C, L140E, P143L, A146T, P280V, A283K, A284N, T103G+A148P, W104H+A148P, N74Q+A281S, V190A, L199P, T256K, T42N, R242A, V215I, T164V, L163F+T164V, D265P, P303K, R168D, A25G, V315I, T244P, K13Q, L277I, Y91S+A92S+N96S+N97*+L99V или D223G; 4) получение измененного полипептида с измененной аминокислотной последовательностью; 5) определение специфической активности липолитического фермента; и 6) отбор измененного полипептида, обладающего более высокой специфической активностью липолитического фермента, чем родительский полипептид. Также представлены способы проведения реакций, катализируемых описанной липазой, которые включают приведение реактантов во взаимодействие с указанным полипептидом, где реакцией является: гидролиз эфира карбоновой кислоты, синтез эфира карбоновой кислоты, алкоголиз эфира карбоновой кислоты или ацидолиз эфира карбоновой кислоты. Изобретение позволяет получить липазу, обладающую более высокой специфической активностью по сравнению с родительской. 4 н. и 5 з.п. ф-лы, 5 табл., 1 ил., 8 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Проводят реакцию переэтерификации между одним или несколькими а) соединениями, выбранными из группы, содержащей насыщенные С 16-22 жирные кислоты с прямой цепью и их сложные эфиры с низшими спиртами, и b) триглицеридом, содержащим олеоильную группу и/или линолеоильную группу 2-положения. Смешивают растительное масло и триглицерид (этилстеарат). Добавляют в качестве фермента гранулированную порошкообразную липазу, выделенную из Rhizopus oryzae и/или Rhizopus delemar, и порошок сои с содержанием жира от 5 до 25 мас.%. Проводят реакцию при перемешивании в течении 7 ч при температуре 40°С. Полученный раствор фильтруют для удаления гранулированной порошкообразной липазы после переэтерификации. Полученный продукт подвергают дистилляции, фракционированию и очистке. Изобретение позволяет улучшить эффективность и селективность реакции переэтерификации по показателю отношения ХОХ/(ХХО+ОХХ) полученного продукта до 99/1 и получить твердое масло, обладающее хорошими кристаллическими свойствами, используемое в качестве равноценного заменителя масла какао и модификатора твердости шоколада. 9 з.п. ф-лы, 13 табл., 9 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ восстановления переэтерификационной активности липазы, полученной из Thermomyces sp. и иммобилизованной на носителе, или липазной порошковой смеси, которая содержит вспомогательный фильтрующий материал и липазу, полученную из Thermomyces sp. и иммобилизованную на носителе. При этом липазную порошковую смесь измельчают до среднего размера частиц от 1 мкм до 300 мкм. Способ осуществляют путем промывания указанной липазы или липазной порошковой смеси триацилглицерином. Также предложен способ переэтерификации. Проводят реакцию переэтерификации с использованием вышеуказанной липазы или липазной порошковой смеси. Затем осуществляют отделение липазы или липазной порошковой смеси от реакционной системы и ее промывание триацилглицерином для восстановления переэтерификационной активности. Затем снова проводят реакции переэтерификации с использованием восстановленной липазы или липазной порошковой смеси. Способ позволяет эффективно восстанавливать сниженную переэтерификационную активность липазы или липазной порошковой смеси и повторно использовать их в реакции переэтерификации. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области микробиологии и биотехнологии. Получен рекомбинантный штамм дрожжей Yarrowia lipolytica ВКПМ Y-3323 - продуцент фермента липазы. Штамм сконструирован из штамма W29 посредством инактивации гена URA3 с последующей трансформацией полученного трансформанта интегративной плазмидой pZ-lox-ura3d4-hp4d-LIP2. Штамм способен синтезировать липазу с активностью до 9000 ЕД/мл культуральной жидкости. Изобретение может быть использовано в пищевой промышленности, бытовой химии и косметике. 3 ил., 5 пр.

Изобретение относится к масложировой промышленности. Способ переэтерификации масла, содержащего одну или более из лимонной и/или фосфорной кислоты в качестве агентов, образующих хелаты с металлами, включающий стадии приведения масла в контакт с основанием и взаимодействия указанного масла с липазой. При этом ферментная композиция содержит липазу с внедренным основанием. Изобретение позволяет повысить производительность ферментной композиции и/или повысить средний выход продукта ферментной композиции за один проход в единицу времени. 3 н. и 19 з.п. ф-лы, 2 ил., 4 табл.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к созданию средства для уменьшения поглощения жира из пищи, содержащего пектин или его соли, ингибитор желудочно-кишечной липазы, вспомогательные компоненты. Средство используют для того, чтобы вылечить или предотвратить синдром анальной утечки масла, встречающийся после назначения ингибитора желудочно-кишечной липазы типа орлистата, с последующим применением для лечения ожирения и гиперлипемии. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 4 ил., 8 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен порошковый состав, обладающий липазной активностью. Состав содержит фильтрующий вспомогательный материал(ы) и продукт, полученный тонким измельчением липазы, происходящей из Thermomyces sp., иммобилизированной на кремниевом носителе(ях), до среднего диаметра частиц 1 мкм или более до менее чем 300 мкм. Предложены также способы для переэтерификации жиров и масел и для этерификации с использованием полученного липазного порошкового состава. Порошковый состав по данному изобретению обладает улучшенной липазной активностью. 3 н. и 7 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к культивированию продуцента липазы. Способ предусматривает подготовку питательной среды, содержащей рыбную муку, подсолнечное масло, кукурузный экстракт, гидрофосфат аммония и воду в заданном соотношении. Подготовленную питательную среду инокулируют водно-споровой суспензией продуцента липазы, в качестве которого используют Rhizopus oryzae BKM F-1403 и культивируют при аэрации и температуре 30-32°С в течение 48 ч. После чего в культуральную среду вносят тритон Х-305 в заданном количестве и снова культивируют еще 24 ч. По окончании культивирования мицелий и взвешанные частицы отделяют фильтрованием. Изобретение позволяет повысить активность липазы.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медицинской, пищевой и сельскохозяйственной отраслях промышленности. Пищевую карбоксиметилцеллюлозу растворяют в буферном растворе или подщелоченной дистиллированной воде с рН 9,5-10 и добавляют к фильтрату полученного раствора панкреатической липазы или микробной липазы из культуры Aspergillus niger, или их смеси с активностью не ниже 100 ед./г в виде порошка в присутствии 1-1,5%-ного раствора поверхностно-активного вещества при интенсивном перемешивании со скоростью 4500-5000 об/мин. Образовавшуюся эмульсию охлаждают до 5-10°С, уменьшают рН реакционной смеси до 3,0-3,5 и оставляют на сутки в холодильнике. Выпавшие частицы отделяют из раствора и неоднократно добавляют к оставшимся частицам ацетатный буфер с рН 4-4,5 при перемешивании, затем выпавшие частицы, содержащие липазу, отделяют и высушивают. Это позволяет уменьшить размер частиц иммобилизованной липазы, что способствует увеличению скорости ферментативного процесса.

Изобретение относится биотехнологии, а именно к сшитым сшивающим агентом кристаллам липазы, способным к переходу из нерастворимой в растворимую форму и к высвобождению растворимой липазы в результате изменения рН окружающей указанный кристалл среды. В соответствии с одним из вариантов изобретения сшитые кристаллы липазы способны к высвобождению активности липазы с контролируемой скоростью от 0,1% до 100% кристаллического материала в день. Сшитые кристаллы липазы получают способом, включающим взаимодействие кристаллов липазы со сшивающим агентом в условиях, достаточных для инициирования сшивки кристаллов. Предложено также средство доставки липазы, включающее сшитый кристалл липазы и состоящее из микрочастиц, где сшитые кристаллы липазы имеют наибольшее измерение от около 0,01 до около 500 мкм. При этом сшитые кристаллические формы липазы обеспечивают содержание от примерно 50% до примерно 90% липазы по весу. Предложена композиция с контролируемой скоростью высвобождения активности липазы, включающая сшитый кристалл липазы и приемлемый носитель или адъювант. При этом сшитые кристаллы липазы в композиции практически нерастворимы в условиях хранения и способны высвобождать свою липазную активность in vivo с контролируемой скоростью. 6 н. и 24 з.п. ф-лы, 9 ил., 36 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к новым грибковым липолитическим ферментам, имеющим более высокую активность, направленную на полярные липиды, по сравнению с активностью, направленной на триглицериды. Настоящее изобретение также относится к последовательностям нуклеиновых кислот, кодирующим указанные грибковые липолитические ферменты. Настоящее изобретение также относится пищевому продукту и к способу получения пищевого продукта, который включает в себя добавление грибкового липолитического фермента по настоящему изобретению к одному или нескольким ингредиентам приготовляемого продукта. Настоящее изобретения также включает в себя способ получения лизофосфолипида и способ получения лизогликолипида, где применяется грибковый липолитический фермент по настоящему изобретению. Использование грибковых липолитических ферментов по настоящему изобретению позволит получить пищевые продукты, включая хлебобулочные изделия, с улучшенным качеством. 11 н. и 11 з.п. ф-лы, 43 ил., 31 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в пищевой промышленности, а также в производстве детергентных материалов. Клонирован ген новой фосфолипазы (FvPLA2) из Fusarium venenatum, принадлежащей к группе грибных и бактериальных фосфолипаз XIII PLA2. Определена нуклеотидная последовательность, кодирующая FvPLA2 и ее активную форму, путем экспрессии которой в гетерологичной системе получен рекомбинантный продукт, обладающий фосфолипазной активностью. Проведено исследование физико-химических свойств и показателей каталитической активности новой фосфолипазы, в соответствии с результатами которого предложено использование FvPLA2 в хлебопечении, производстве растительного масла, изготовлении сыра, а также в составе детергентных композиций. 8 н.п. ф-лы, 7 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в пищевой промышленности, в очистке сточных вод. Штамм бактерий Serratia marcescens KM ИБ УНЦ РАН ИБ 2-2 - продуцент липазы. Изобретение позволяет повысить выход липазы. 1 табл.

(56) (продолжение):

CLASS="b560m"marcescens lipase production for enantioselective hydrolysis of 3-phenylglycidic acid ester, Ind Microbiol. Biotechnolol., 2004, Dec; 31(11):525-530. Abdou AM., Purfication and partial characterization of psychrotrophic serratia marcescens lipase., J. Daily, Sci., 2003., Jan; 86(1):127-132.

Изобретение относится к биотехнологии. Для иммобилизации липазы в качестве полиэлектролита используют полистиролсульфонат натрия. Иммобилизацию липазы проводят при массовом соотношении липаза:полистиролсульфонат натрия 1:1-100 и при рН 7,6-8,2, температуре 18-24°С в течение 10-20 минут. Ферментативная активность иммобилизованной липазы увеличена до 26 раз в сравнении с известной липазой (прототипом).

Изобретение относится к области микробиологии и биотехнологии и может быть использовано в пищевой промышленности, бытовой химии, косметике. Штамм выделен из образца сточных вод из аэротенка биологических очистных сооружений и поддерживается в коллекции микроорганизмов Института биологии Уфимского научного центра РАН под номером ИБ 3-1. Штамм образует при росте на питательной среде, содержащей соевую муку, дрожжевой экстракт и минеральные компоненты, липазу в количестве 1750 мкМ олеиновой кислоты/мг биомассы, что превосходит по уровню секретирования липазы известные штаммы. 1 табл.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для очистки животноводческих отходов и сточных вод. Способ предусматривает иммобилизацию липазы в полидиаллилдиметиламмоний хлориде при массовом соотношении липаза:полидиаллилдиметиламмоний хлорид 1:1-100 и при рН 7,6-8,2, температуре 18-24°С в течение 10-20 минут. Способ позволяет получить целевой продукт с повышенной ферментативной активностью.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для очистки животноводческих отходов и сточных вод. Способ предусматривает иммобилизацию липазы в смеси полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия, взятых в массовых соотношениях 1:0,3-1,0. Иммобилизацию липазы проводят при массовом соотношении липаза: смесь полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия 1:50-200 и при рН 9,0-11,0, температуре 18-24°С в течение 10-20 минут. Способ позволяет получить целевой продукт с повышенной ферментативной активностью.

Изобретение относится к стереоселективному способу получения дигидроксиэфиров и их производных. Разработан способ получения соединения формулы

Изобретение относится к биотехнологии, касается сшитых кристаллов протеина, которые отличаются способностью переходить из нерастворимой и стабильной формы в растворимую и активную форму при изменении среды, окружающей указанные кристаллы. Указанное изменение выбирают из группы, состоящей из: изменения температуры, изменения величины рН, изменения химического состава, перехода из концентрата в разбавленную форму, изменения окислительно-восстановительного потенциала раствора, изменения падающей радиации, изменения концентрации переходного металла, изменения концентрации фтора, изменения концентрации свободных радикалов, изменения концентрации металлических хелатирующих агентов, изменения силы сдвига, действующей на кристаллы, или их сочетаний. В соответствии с одним из вариантов изобретения такие сшитые кристаллы протеина способны выделять свою протеиновую активность с контролируемой скоростью. Способы получения таких сшитых кристаллов протеина включают выбор условий, необходимых для инициирования сшивки кристаллов протеина, а именно факторов, выбираемых из группы, включающей: степень сшивки указанного кристалла протеина, длительность времени экспонирования указанного кристалла протеина сшивающему агенту, аминокислотные остатки, участвующие в сшивке, факта, является ли сшивающий агент гомобифункциональным или гетеробифункциональным, скорость добавления сшивающего агента к указанному кристаллу протеина, природа сшивающего агента, длина цепи сшивающего агента, площадь поверхности указанного кристалла протеина, размер указанного кристалла протеина, форма указанного кристалла протеина и их сочетаний. Средство доставки протеина включает кристаллы сшитого протеина и средство его доставки, выбранное из детергентных ферментов, косметических протеинов, фармацевтических протеинов для сельского хозяйства, протеинов для вакцин и для очистки от загрязнений. 5 н. и 133 з.п. ф-лы, 9 ил., 36 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения варианта фермента путем создания модификаций в аминокислотной последовательности в определенной области липолитического фермента. Данное изобретение включает также варианты липолитического фермента с модифицированной аминокислотной последовательностью и с модифицированной специфичностью к субстрату. Данное изобретение позволяет увеличить уровень желательной активности или снизить уровень нежелательной активности липолитического фермента. 3 с. и 41 з.п. ф-лы,1 ил., 8 табл.