Ферменты, например лигазы (6.), проферменты, композиции их, способы получения, активирования, ингибирования, разделения или очистки ферментов: ..действующие на гликозилсодержащие соединения (3.2) – C12N 9/24

Изобретение относится к области биотехнологии. Представлен очищенный препарат рекомбинантного фермента N-ацетилгалактозамин-6-сульфатаза (GALNS) человека, где указанный фермент включает аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 95% идентичную аминокислотам 27-522 SEQ ID NO:4, пригодный для лечения субъекта, страдающего лизосомальной болезнью накопления, которая ассоциирована с GALNS, где: (a) указанный препарат фермента GALNS имеет чистоту, по меньшей мере, приблизительно 95% при определении окрашиванием кумасси синим при SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях; и (b) остаток цистеина в положении 79, по меньшей мере, приблизительно в 50% молекул фермента GALNS в указанном препарате фермента GALNS преобразован в C -формилглицин (FGly); где указанный фермент GALNS является гликозилированным N-связанным гликозилированием по остаткам аспарагина в положениях 204 и 423, где, по меньшей мере, приблизительно 50% олигоманнозных цепей, присоединенных к остатку аспарагина в положении 204, являются бис-фосфорилированными. Предложен способ лечения субъекта, страдающего мукополисахаридозом типа IVa (MPS IVa), синдромом Моркио A или множественной сульфатазной недостаточностью (MSD), включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества указанного очищенного препарата рекомбинантного GALNS человека. Изобретение позволяет получить фармацевтический препарат рекомбинантной высокофосфорилированной GALNS человека, имеющий высокий уровень молекул с преобразованным в C -формилглицин остатком цистеина в положении 79, в силу чего он высоко поглощается через рецептор манноза-6-фосфата (MPR) и имеет высокую активность. 2 н. и 27 з.п. ф-лы, 13 ил., 15 табл., 11 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Описана альфа-D-галактозидаза, обладающая измененной региоспецифичностью по отношению к 1,4-связи и содержащая мутацию либо Pro402Asp, либо Phe328Ala в соответствующем положении аминокислотной последовательности исходного фермента дикого типа, выделенного из штамма Thermotoga maritima MSB8. Предложен способ получения указанной альфа-D-галактозидазы, заключающийся в том, что осуществляют выбор позиций для сайт-направленного мутагенеза аминокислотной последовательности фермента дикого типа следующим образом: а) проводят пространственное наложение активных центров ферментов, обладающих высокой гомологией их аминокислотных последовательностей и сходством трехмерных структур, и кристаллическая структура которых содержит остаток D-галактозы, на основании проведенного наложения структур устанавливают возможное расположение D-галактозы в активном центре -галактозидазы из Thermotoga maritima MSB8, б) уточняют методами молекулярной динамики возможное расположение D-галактозы в активном центре -галактозидазы, определяют общие аминокислотные остатки ферментативного центра, образующие водородные связи с D-галактозой, и выявляют возможные положения D-галактозы относительно пары каталитических аминокислотных остатков фермента, в) проводят in silico мутации -галактозидазы дикого типа, при этом отбирают позиции аминокислотных остатков для сайт-направленного мутагенеза, после выбора позиций один из отобранных на этапе в) аминокислотных остатков замещают другим аминокислотным остатком, а именно либо Pro402Asp, либо Phe328Ala. Изобретение позволяет получить региоспецифичные по отношению к 1,4-связи альфа-D-галактозидазы. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к биохимии и представляет собой различные варианты модифицированной ксиланазы Семейства 11. В одном из вариантов модифицированная ксиланаза Семейства 11 содержит цистеиновые остатки в положениях 99 и 118 с образованием внутримолекулярной дисульфидной связи, причем указанная внутримолекулярная дисульфидная связь образована замещением аминокислоты в положениях 99 и 118 цистеином, причем указанные положения определяют с помощью выравнивания последовательности указанной модифицированной ксиланазы Семейства 11 с аминокислотной последовательностью ксиланазы II из Trichoderma reesei SEQ ID NO: 16, представленной в описании. Другие варианты включают аминокислотные замены в положениях 99 и 118 на Cys с образованием дисульфидной связи и 40 на Arg, Cys, Phe, Tyr, His или основную аминокислоту, в положениях 10, 58, 105, 144 и 161 на основную аминокислоту в любом из положений, 27 и 29 на гидрофобную аминокислоту в любом из положений, 75 и 125 на неполярную аминокислоту в любом из положений, 11 и 129 на кислую аминокислоту в любом из положений, 131 на Asn, 52 на Cys. Еще одним вариантом настоящего изобретения является модифицированная ксиланаза Семейства 11, содержащая замену на гистидин в положении 40, причем указанное положение определяют с помощью выравнивания аминокислотных последовательностей указанной модифицированной ксиланазы и ксиланазы II Trichoderma reesei с последовательностью SEQ ID NO: 16. Изобретение позволяет получить клиланазу с повышенной термофильностью, алкалофильностью, термостойкостью. 9 н. и 8 з.п. ф-лы, 22 табл., 17 ил., 16 пр.

Изобретение относится к области биохимии и представляет собой способы разрушения целлюлозы и композиции, содержащие фермент, разрушающий целлюлозу, и усиливающий его белок. Предложен способ деградации или модификации целлюлозы, включающий обработку целлюлозного материала целлюлолитическими белками в присутствии белка с аминокислотной последовательностью, приведенной в описании, имеющего целлюлолитическую усиливающую активность. Также описан способ получения продукта ферментации, включающий следующие стадии: осахаривание целлюлолитического материала целлюлозами в присутствии указанного белка; ферментирование осахаренного материала и извлечение продукта ферментации из ферментации. Кроме того, описана моющая детергентная композиция, содержащая целлюлозу, белок, усиливающий целлюлолитическую активность, и поверхностно-активное вещество. Изобретение позволяет усилить активность целлюлаз за счет присутствия указанного белка в смеси. 3 н. и 19 з.п. ф-лы, 5 ил.

Настоящее изобретение относится к модифицированной ксиланазе 11-го Семейства. Предложенная ксиланаза содержит последовательность функционального консенсусного сайта гликозилирования. Неограничивающие примеры вводимых сайтов гликозилирования включают замену аминокислоты в положении (34, 131, 180, 182), или в их комбинации, на аспарагин. Указанное положение аминокислоты в ксиланазе 11-го Семейства определяют выравниванием последовательности, представляющей интерес ксиланазы с аминокислотной последовательностью ксиланазы II Trichoderma reesei. Введенный консенсусный сайт гликозилирования обеспечивает повышенную эффективность экспрессии модифицированной ксиланазы по сравнению с эффективностью экспрессии не модифицированной ксиланазы при использовании аналогичных штаммов-хозяев и условий выращивания. 7 н. и 11 з.п. ф-лы, 7 ил., 4 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно микробиологической промышленности. Получен новый штамм гриба-продуцента пектолитических ферментов Aspergillus foetidus 379-K (ВКПМ F-962). Использование данного штамма Aspergillus foetidus 379-K позволяет получить комплекс пектолитических ферментов с высоким уровнем активности эндополигалактуроназы, -глюканаз, ксиланаз, целлюлаз, маннаназ и хитиназ. Штамм получен многоступенчатой селекцией из штамма Aspergillus foetidus 37 (ЦМПМ-Р-270) с использованием мутагенеза. Штамм хранится в лиофильно высушенном состоянии и на скошенном сусло-агаре. 2 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается варианта ДНК, связанного с гиполактазией взрослого типа. Сущность изобретения включает молекулу нуклеиновой кислоты, содержащей 5'-концевую часть гена кишечной лактазы-флоризингидролазы (LPH), принимающего участие в или служащего индикатором гиполактазии взрослого типа, при этом указанная молекула нуклеиновой кислоты выбрана из группы, состоящей из: (а) молекулы нуклеиновой кислоты, имеющей последовательность SEQ ID NO:1 или включающей ее, причем последовательность SEQ ID NO:1 и (b) молекулы нуклеиновой кислоты, имеющей последовательность SEQ ID NO:2 или включающей ее, (с) молекулы нуклеиновой кислоты, состоящей, по меньшей мере, из 20 нуклеотидов, комплементарная цепь которой гибридизуется в строгих условиях с молекулой нуклеиновой кислоты по пункту (а) или (b), причем указанный полинуклеотид/ молекула нуклеиновой кислоты содержит остаток цитозина в положении, соответствующем положению -13910 в 5'-направлении от гена LPH; и (d) молекулы нуклеиновой кислоты, состоящей, по меньшей мере, из 20 нуклеотидов, комплементарная цепь которой гибридизуется в строгих условиях с молекулой нуклеиновой кислоты по пункту (а) или (b), причем указанный полинуклеотид/ молекула нуклеиновой кислоты содержит остаток гуанина в положении, соответствующем положению -22018 в 5'-направлении от гена LPH. Настоящее изобретение также касается способов тестирования на наличие или предрасположенность к гиполактазии взрослого типа, которые основываются на анализе SNP, содержащегося в вышеуказанной молекуле нуклеиновой кислоты. 16 н. и 49 з.п. ф-лы, 8 табл., 9 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения фермента, предпочтительно целлюлазы или ксиланазы, расщепляющих целлюлозу или ксиланы соответственно, путем культивирования штамма гриба Penicillium verruculosum. При этом указанный штамм получают трансформацией клетки гриба Penicillium verruculosum генетической конструкцией, содержащей целевую кодирующую последовательность фермента, функционально связанную с регуляторными элементами гена целлобиогидролазы I Penicillium verruculosum, которые представляют собой промотор и терминатор гена целлобиогидролазы I, a сигнальный пептид при этом зависит от того, каков целевой фермент. Изобретение позволяет получать ферменты с высокой степенью эффективности. 3 н. и 3 з.п. ф-лы, 1 табл., 6 ил.

Штамм актиномицета Streptomyces lucensis ВКПМ Ac-1743 выделен из штамма Streptomyces lucensis Arcamone et al. 1957 BKM Ac-1737 путем проведения ступенчатого отбора. Штамм характеризуется высокими ингибиторными активностями в отношении гликозидаз различного происхождения. Общая ингибиторная активность в отношении панкреатической свиной -амилазы составляет 2000-3700 ИЕ/см³, -амилазы Bacillus subtilis - 220-400 ИЕ/см³, -амилазы солода - 40-70 ИЕ/см³, комплекса ферментов - -амилаза, глюкоамилаза, мальтаза, декстриназа Aspergillus niger - 1000-1300 ИЕ/см³, глюкоамилазы Aspergillus awamori - 1000-1500 ИЕ/см³.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм актиномицета Streptomyces violaceus ВКПМ Ас-1734 - продуцент ингибитора гликозидаз может быть использован в качестве продуцента ингибитора гликозидаз в микробиологическом производстве ингибитора гликозидаз для пищевой, химико-фармацевтической промышленности, биотехнологии и биохимии. Изобретение позволяет повысить выход ингибитора гликозидаз.

ШТАММ МИЦЕЛИАЛЬНОГО ГРИБА Aspergillus foetidus BKM F 3890D - ПРОДУЦЕНТ КИСЛОЙ ПРОТЕАЗЫ И КОМПЛЕКСА КАРБОГИДРАЗ, СОДЕРЖАЩЕГО ПЕКТИНАЗУ (ПОЛИГАЛАКТУРОНАЗУ), КСИЛАНАЗУ, -ГЛЮКАНАЗУ, АРАБИНАЗУ, ГАЛАКТАНАЗУ, КСИЛОГЛЮКАНАЗУ, САХАРАЗУ, -L-АРАБИНОФУРАНОЗИДАЗУ, -ГЛЮКОЗИДАЗУ И АМИЛАЗУ

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм мицелиального гриба Aspergillus foetidus BKM F 3890 D - продуцент кислой протеазы и комплекса карбогидраз, содержащего пектиназу (полигалактуроназу), ксиланазу, -глюканазу, арабиназу, галактаназу, ксилоглюканазу, сахаразу, -L-арабинофуранозидазу, - глюкозидазу и амилазу. Может быть использован в пищевой, спиртовой промышленности, в пивоварении и в качестве кормовых добавок. Изобретение позволяет увеличить выход кислой протеазы и комплекса карбогидраз.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой бета-глюканазу, получаемую из гриба Talaromyces emersonii, или композицию, обладающую активностью бета-глюканазы. Данный фермент или композиция используются при обработке растительного материала для разрушения или модификации целлюлозы, а также входят в состав пищевых продуктов и кормов для животных. Заявленное изобретение позволяет расширить ассортимент ферментов, обладающих бета-глюканазной активностью. 9 н. и 8 з.п. ф-лы, 15 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генетической инженерии. Штамм гриба Penicillium canescens ВКПМ F-912 является продуцентом секретируемой эндо-(1-4)-бета-ксиланазы с удаленными генами эндоглюканаз. Данный штамм за 120-144 часов ферментации на средах со свекловичным жомом позволяет накапливать до 800 единиц активности секретируемой эндо-(1-4)-бета-ксиланазы и не более 0.13 единиц целлюлазной активности в 1 мл культуральной жидкости. 2 ил., 1 табл.

Изобретение относится к пищевой промышленности и биотехнологии и представляет собой полипептид, обладающий ксиланазной активностью, который может разлагать целлюлозные экстракты и растительные материалы. В другом аспекте изобретение представляет собой полинуклеотид, кодирующий указанный полипептид, а также композицию, содержащую полипептид с активностью ксиланазы. Данный полипептид используют для обработки растительного или ксилансодержащего материала при приготовлении хлеба и корма для животных. Причем полипептид обладает как арабиноксиланазной, так и ксилозидазной активностью. Изобретение позволяет расширить ассортимент ксиланаз, используемых в промышленном производстве. 9 н. и 14 з.п. ф-лы, 12 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой фермент гликозилгидролазу (варианты), продуцируемый гифомицетами, в частности Chrysosporium lucknowense, а также нуклеиновокислотный конструкт для экспрессии гликозилгидролазы. Заявленное изобретение позволяет получать гликозилгидролазу культивированием гриба Chrysosporium в оптимальных условиях, обеспечивающих экспрессию и выделение фермента с высокой степенью эффективности. 15 н. и 4 з.п. ф-лы, 2 ил., 4 табл.

Изобретение относится к пищевой промышленности, в частности к способам получения пектина из отходов плодово-ягодного сырья. Пектин получают путем приготовления гидролизующего агента при культивировании дрожжей Zygofabospora marxiana BKM Y-848 на питательной среде, содержащей молочную сыворотку, дрожжевой автолизат, минеральные соли Ридера. Проводят отделение жидкой фазы от твердой центрифугированием с получением агента в виде бесклеточной культуральной жидкости. Проводят смешивание гидролизующего агента с предварительно промытыми и высушенными отходами плодов и ягод и экстрагируют 96% этанолом. Полученный осадок смешивают с водой 1:4 и вносят гидролизующий агент в количестве 0,03-0,04% на 1 г сухих выжимок с последующей ферментацией и разделением жидкой и твердой фракций. Проводят упаривание и высушивание жидкой фракции. Способ позволяет улучшить качество сотового продукта, увеличить выход и упростить процесс. 1 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к области генной инженерии и биотехнологии и может быть использовано в медико-биологической и фармацевтической промышленности. Из клеток штамма р. Alteromonas, продуцирующего фермент, который расщепляет полисахарид, включающий сульфатированную фукозу, выделен ген, кодирующий указанный фермент. Установлено наличие двух открытых рамок считывания (ORF-1 и ORF-2) и определены их последовательности. Путем экспрессии этих последовательностей в E.coli получены активные рекомбинантные формы фермента, способного эффективно гидролизовать полисахарид, содержащий сульфатированную фукозу, который не расщепляется под действием фукоиданазы, продуцируемой Flavobacterium sp. SA-0082 (FERM ВР-5402). Применение изобретения обеспечивает возможность получения больших количеств качественного сырья для фармацевтических препаратов. 5 с. и 1 з.п.ф-лы, 5 ил., 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, может быть применено в кормоприготовлении для обработки зерновой части рационов. Мультиэнзимная добавка содержит, мас.%: ферментный препарат МЭК-СХ-2 - 30-40, ферментный препарат протосубтилина ГЗх - 0-5, ферментный препарат целловиридина ГЗх - 0-10, солод ячменный - 55-65, солод ржаной - 0-65. Ферментацию измельченного зерна, отрубей или зерносмеси проводят при жидкостном коэффициенте 1:2 и температуре +60°С в течение 3 ч. Норма ввода мультиэнзимных добавок - 0,1% от воздушно-сухого вещества зернофуража. Применение МЭД позволяет довести содержание ржи в зерносмеси до 50% и повысить сумму сахаров в готовом корме до 300 г/кг и более при одновременном сохранении низкой вязкости корма. Скармливание обработанных зерносмесей способствует повышению продуктивности животных при общем снижении затрат кормов. 3 з.п.ф-лы, 5 табл.