Ферменты, например лигазы (6.), проферменты, композиции их, способы получения, активирования, ингибирования, разделения или очистки ферментов: ...урокиназа – C12N 9/72
Раздел C ХИМИЯ; МЕТАЛЛУРГИЯ
C12 Биохимия; пиво; алкогольные напитки; вино; уксус; микробиология; энзимология; получение мутаций; генная инженерия
C12N Микроорганизмы или ферменты; их композиции; размножение, консервирование или сохранение микроорганизмов; мутации или генная инженерия; питательные среды
C12N 9/00 Ферменты, например лигазы (6.); проферменты; композиции их; способы получения, активирования, ингибирования, разделения или очистки ферментов
C12N 9/72 ...урокиназа
Патенты в данной категории
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ АКТИВНЫХ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ
Изобретение относится к медицинской промышленности и касается способа получения рекомбинантного дц-уАП (двухцепочечного фермента урокиназы). Сущность изобретения включает способ культивирования подвергнутых генетическим манипуляциям клеток, CHO-Messi, стабильно трансфицированных кДНК препроурокиназы в среде для культивирования, содержащей алкановые кислоты или их производные при температуре в интервале от 30 до 37°С, разделения полученного дц-уАП на низкомолекулярную и высокомолекулярную формы. Изобретение также включает рекомбинантный дц-уАП, а также дц-уАП ВММ и дц-уАП НММ на разных стадиях получения. Преимущество изобретения заключается в разработке способа получения рекомбинантных форм зрелого двухцепочечного белка дц-уАП, а также его низкомолекулярной и высокомолекулярной форм. 10 н. и 9 з.п. ф-лы, 4 табл., 3 ил. |
2259212 патент выдан: опубликован: 27.08.2005 |
|
| МОДИФИЦИРОВАННЫЙ АКТИВАТОР ПЛАЗМИНОГЕНА УРОКИНАЗНОГО ТИПА, ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ ДНК, РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА, ШТАММ-ПРОДУЦЕНТ, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОДИФИЦИРОВАННОГО АКТИВАТОРА ПЛАЗМИНОГЕНА УРОКИНАЗНОГО ТИПА И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ОБЛАДАЮЩАЯ ТРОМБОЛИТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ
Изобретение относится к области генетической и белковой инженерии и может быть использовано в медицине. Предложена модифицированная форма активатора плазминогена урокиназного типа (мАПУТ), аминокислотная последовательность которой отличается от последовательности природного АПУТ заменой последовательности ArgArgHisArgGlyGlySer в составе ингибиторной петли последовательностью ArgHisHisAlaGlyGlySer, а также заменой 24 N-концевых аминокислот чужеродной последовательностью из 16 аминокислотных остатков. Сконструирована рекомбинантная плазмида (pUABC 34), включающая фрагмент ДНК, который кодирует новый мАПУТ. В результате трансформации клеток E.coli К-12 JM109 плазмидой pUАВС 34 получен рекомбинантный штамм E.coli ВКПМ-8145, являющийся продуцентом модифицированной формы АПУТ. При полном сохранении биологической активности, присущей природному активатору, продуцируемый рекомбинантным штаммом полипептид характеризуется пониженной чувствительностью к действию ингибитора PAI-1 и отсутствием ряда побочных эффектов, что обеспечивает эффективное применение нового мАПУТ в составе фармацевтических композиций с тромболитическим действием. 6 с.п. ф-лы, 6 ил.
|
2247777 патент выдан: опубликован: 10.03.2005 |
|
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ АКТИВНЫХ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается способа получения зрелого рекомбинантного белка дц-уАП. Способ заключается в культивировании линии эукариотических клеток, генетически трансформированных клонированной последовательностью кДНК предшественника, и включает в себя инкубацию указанной линии клеток в среде для культивирования клеток, в которую были добавлены алкановые кислоты, их производные или их соли, в течение периода времени, по меньшей мере, равного 24 часам. Способ делает возможной секрецию рекомбинантных белков в среду культивирования в их физиологически активной (зрелой) форме. Преимущество изобретения заключается в разработке способа, позволяющего получение активного фермента дц- уАП. 6 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 табл. | 2227745 патент выдан: опубликован: 27.04.2004 |
|
РЕКОМБИНАНТНЫЙ АКТИВАТОР  1 ПЛАЗМИНОГЕНА СЛЮНЫ desmondus rotundus (rDSPA1), СПОСОБ ЕГО ОЧИСТКИ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ЕГО ОСНОВЕ
Изобретение предназначено для использования в медицине. Способ очистки rDSРА  1 из биологической среды включает: (а) нанесение биологической среды при рН 5 на катионообменную смолу; (b) промывание катионообменной смолы с рН 5 100 мМ NaOAc и 50 мМ натрийфосфата с рН 7,5; (с) элюцию связанного rDSРА 1 с катионообменной смолы буфером, содержащим 50 мМ натрийфосфата и 500 мМ натрийхлорида, с рН 7,5; (d) нанесение элюента со стадии (с), содержащего rDSРА 1, при рН 4 на гидрофобно-взаимодействующую смолу; (е) промывание гидрофобно-взаимодействующей смолы 20 мМ НСl, а затем 20 мМ НСl, содержащей 19% этанола; (f) элюцию связанного rDSРА 1 с гидрофобно-взаимодействующей смолы буфером, содержащим 29% этанола и 20 мМ НСl, с рН 2,5; (g) нанесение элюента со стадии (f), содержащего rDSРА 1, при рН 2,5 на смолу для аффинной хроматографии; (h) промывание смолы для аффинной хроматографии 20 мМ НСl; (i) элюцию связанного rDSРА 1 со смолы для аффинной хроматографии буфером, содержащим 200 мМ глицина, с рН между 4 и 5 с получением по существу чистого rDSРА 1 в водном растворе. Рекомбинантный rDSРА 1 получают способом очистки, указанным выше. Фармацевтическая композиция для терапии артериальных и венозных тромбозов содержит эффективное количество rDSPA 1, полученного способом очистки, указанным выше. Изобретение позволяет выделить и очистить rDSPA 1 в промышленном масштабе со степенью чистоты, пригодной для приготовления фармацевтических препаратов. 3 c. и 3 з.п. ф-лы.
|
2223315 патент выдан: опубликован: 10.02.2004 |
|
| БИФУНКЦИОНАЛЬНЫЙ ВАРИАНТ УРОКИНАЗЫ, ПЛАЗМИДА, СОДЕРЖАЩАЯ СИНТЕТИЧЕСКИЙ СТРУКТУРНЫЙ ГЕН, КОДИРУЮЩИЙ БИФУНКЦИОНАЛЬНУЮ УРОКИНАЗУ, ПЛАЗМИДА (ВАРИАНТЫ), СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЛАЗМИДЫ, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИФУНКЦИОНАЛЬНОГО ВАРИАНТА УРОКИНАЗЫ, ТРОМБОЛИТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО Охарактеризован бифункциональный вариант урокиназы, а также способ его получения. Бифункциональный вариант урокиназы может быть использован в качестве тромболитического средства. 8 c. и 6 з.п.ф-лы, 19 ил., 5 табл. | 2143490 патент выдан: опубликован: 27.12.1999 |
|
| РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК P UA BC22, КОДИРУЮЩАЯ МОДИФИЦИРОВАННЫЙ АКТИВАТОР ПЛАЗМИНОГЕНА УРОКИНАЗНОГО ТИПА, НЕТРАНСЛИРУЕМЫЙ ДНК-ЭЛЕМЕНТ - ИСКУССТВЕННАЯ МЕЖГЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ МГП14 И ШТАММ БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI - ПРОДУЦЕНТ МОДИФИЦИРОВАННОГО АКТИВАТОРА ПЛАЗМИНОГЕНА УРОКИНАЗНОГО ТИПА Изобретение относится к генной инженерии, а именно к технологии получения высокопродуктивных штаммов Eserichia coli - продуцентов рекомбинантных белков человека, используемых в современной медицине в качестве тромболитических агентов. Новая рекомбинантная плазмидная ДНК рUABC22, кодирующая модифицированный активатор плазминогена урокиназного типа (мАПУТ) имеет размер 4,5 т.п.н. и содержит: XmnI - BamHI - фрагмент ДНК плазмиды рUАВС22 размером 2,99 т. п. н.; BamHI - KpnI - фрагмент ДНК размером 0,177 т.п.н., содержащий участок кодирующей области гена мАПУТ, соответствующий 12 С-концевым аминокислотам мАПУТ, и нетранслируемый элемент - искусственную межгенную последовательность МГП14; Kpn I - SacI - фрагмент ДНК размером 0,57 т.п. н. , содержащий ген тРНК Аrg; SасI - XmnI - фрагмент ДНК вектора рUС19 размером 0,79 т. п. н.; участок инициации репликации и промоторно-операторную область lас-оперона; генетические маркеры; ген устойчивости к ампициллину. Нетранслируемые ДНК-элементы - искусственная межгенная последовательность МГП14 и ген тРНК Аrg повышают общую стабильность системы экспрессии мАПУТ в клетках Escherichia coli и усиливают ее транслирующую активность в отношении эукариотических генов. Новый штамм ВКПМ В-7666 дает 3,0 г клеточной биомассы на 1 л культуральной среды и производит мАПУТ преимущественно в проферментной форме (мол.м. 43 кДа) в количестве 200000 - 250000 ед. на 1 г биомассы. 3 с.п. ф-лы, 4 ил. | 2140453 патент выдан: опубликован: 27.10.1999 |
|
| НЕГЛИКОЗИЛИРОВАННЫЙ ПОЛИПЕПТИД СО СВОЙСТВАМИ ПРОУРОКИНАЗЫ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ, РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ ПОЛИПЕПТИДА И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ Изобретение относится к биотехнологии и позволяет получить полипептиды, используемые в качестве плазминогенных активаторов, имеющие высокую удельную амидолитическую и фибринолитическую активность. При получении полипептида со свойствами проурокиназы проводят трансформацию штамма E.coli рекомбинантной плазмидой, включающей фрагмент ДНК, кодирующий целевой продукт. Отбирают трансформанты. Культивируют их в оптимальных для накопления рекомбинантного полипептида условиях. Отделяют и проводят реактивацию экспрессированного продукта. При получении плазмиды для экспрессии полипептида в клетках энтеробактерий объединяют оперон с регулируемым промотором последовательности связывания с рибосомой Шайн-Дальгарно, инициирующий кодон, фрагмент ДНК, кодирующий целевой полипептид, один или два терминатора, располагаемых за указанным фрагментом. Для объединения используют плазмиду pBR 322, из которой удалены nic / bom область и/или часть резистентного к тетрациклину гена. В последнюю между сайтами E coRI и Hind III вводят сайт множественного клонирования, предназначенный для встраивания терминатора транскрипции, фрагмента ДНК, кодирующего целевой полипептид и синтетического Tr p - промотора. Получают полипептиды общей формулы Met - Ser - x1 - x2 - rscu РА 143-411. rscu РА 143-411 представляет область последовательности аминокислот 143 (Glu-411 (LeuOH) из scu PA 54к. x1 означает одну из аминокислот Asn, Pro или Ser, а x2 представляет собой простую связь или Glu, или Pro - Glu, или Pro - Pro - Glu, или Glu - Leu - His - Leu - Leu - Gln - Val - Pro - Ser. 4 с. и 7 з.п. ф-лы, 20 ил. | 2108387 патент выдан: опубликован: 10.04.1998 |
|
| РЕКОМБИНАНТНЫЙ ТКАНЕВОЙ АКТИВАТОР ПЛАЗМИНОГЕНА И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ Изобретение относится к получению тканевого активатора плазминогена (усовершенствованный АПТ), имеющего пролонгированный биологический полупериод существования, повышенную устойчивость к воздействию тепла и кислот и эффективный в качестве ингибитора воспаления вокруг сайта, где образован тромб. Для его получения проводят культивирование хозяйских клеток, трансформированных рекомбинантной ДНК, содержащей конкретную последовательность ДНК, кодирующую аналог tpА. 2 с.п.ф-лы, 3 табл. 29 ил. | 2107727 патент выдан: опубликован: 27.03.1998 |
|
| СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ УРОКИНАЗЫ К НАГРЕВАНИЮ Использование: в биотехнологии и энзимологии, для инактивации вирусов, присутствующих в препарате. Сущность изобретения: 1000 ЕД препарата урокиназы растворяют в 7,5-10 мл 1,0-5%-ного раствора динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты, к полученному раствору добавляют 0,05-0,1 г гиалуроновой кислоты и нагревают при 75-85oС в течение 4-6 ч. Полученный раствор фермента полностью сохраняет исходную активность и не содержит активных форм вирусов. 1 ил., 1 табл. | 2061043 патент выдан: опубликован: 27.05.1996 |
|