Получение соединений, содержащих сахаридные радикалы: .получаемые действием гликозилтрансферазы, например альфа-,бета- или гамма- циклодекстринов – C12P 19/18

Изобретение относится к области микробиологии и молекулярной биологии. Предложен способ крупномасштабного синтеза in vivo сиалилированных олигосахаридов и микроорганизм, содержащий гетерологичные гены, кодирующие GlcNAc-синтетазу, синтазу сиаловой кислоты, GlcNAc-6-фосфат-2-эпимеразу и сиалилтрансферазу, при этом эндогенные гены, кодирующие альдолазу сиаловой кислоты (NanA) и ManNac-киназу (NanK) были делегированы или инактивированы. Изобретение может быть использовано в технологиях промышленного синтеза сиалилгалактозы. 4 н. и 50 з.п. ф-лы, 4 табл., 20 ил., 17 пр.

Изобретение относится к области биохимического синтеза. Способ включает биосинтез пента-N-ацетилхитопентаозы in vivo из предшественника N-ацетилглюкозамина в культуре бактерий Escherichia coli DH5a высокой плотности, с помощью экспрессируемого в клетках этих бактерий рекомбинантного фермента N-ацетилглюкозаминилтрансферазы Mesorhizobium loti 1803. Причем для осуществления биосинтеза in vivo проводят выделение, клонирование и экспрессию в Escherichia coli DH5a гена NodC Mesorhizobium loti 1803, кодирующего N-ацетилглюкозаминилтрансферазу, амплифицикацию гена NodC осуществляют с помощью специфичных праймеров и Pfu-полимеразы, в качестве матрицы для амплификации гена NodC используют ДНК, выделенную из штамма Mesorhizobium loti 1803, депонированного в коллекции ВНИИСХМ, в результате получают продукт амплификации размером 1300 п.о., амплифицированный ген NodC Mesorhizobium loti 1803 (NodC) клонируют в векторе pUC19 по сайтам BamH EcoR1 с сохранением рамки считывания, таким образом, получают плазмиду pUC19-NodC и используют ее для экспрессии гена NodC в бактериях Escherichia coli DH5 , экспрессию N-ацетилглюкозаминилтрансферазы (NodC) осуществляют в штамме Escherichia coli DH5 после индукции изопропил- -D-тиогалактозидом, при культивировании бактерий Escherichia coli DH5 , несущих плазмиду pUC19-NodC со встроенным геном NodC Mesorhizobium loti 1803, в присутствии предшественника N-ацетилглюкозамина синтезируют пента-N-ацетилхитопентаозу, количество синтезированной пента-N-ацетилхитопентаозы с помощью фермента N-ацетилглюкозаминилтрансферазы Mesorhizobium loti 1803 составляет около 0,1-0,5 грамма на литр бактериальной культуры, с помощью метода масс-спектрометрии осуществляют анализ синтезированного вещества, который подтверждает, что синтезированное вещество является пента-N-ацетилхитопентаозой. 5 ил., 2 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и пищевой промышленности и касается способа ферментативного гидролиза зернистого крахмала в растворимый гидролизат крахмала при температуре ниже, чем начальная температура желатинизации указанного зернистого крахмала. Способ предусматривает одновременное воздействие первого фермента, который является членом семейства 13 гликозидгидролазы, имеет альфа-1,4-глюкозидную гидролитическую активность и включает углеводсвязанный модуль семейства 20, и, по меньшей мере, одного второго фермента, который является бета-амилазой или глюкоамилазой. Изобретение позволяет проводить гидролиз крахмала с высокой степенью эффективности. 34 з.п. ф-лы, 24 табл.

Изобретение относится к генной инженерии и может быть использовано для получения линейных -1,4 глюканов в растениях. Растение трансформируют ДНК, кодирующей протеин, обладающий ферментативной активностью амилосахаразы. Взаимодействие полученного из растения протеина с раствором, содержащим сахарозу обеспечивает конверсию сахарозы в -1,4 глюканы и/или фруктозу. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 2 ил.