Способы измерения или испытания, использующие ферменты или микроорганизмы, составы для них, способы получения подобных составов: ..эстеразу – C12Q 1/44

Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой способ определения неспецифической устойчивости патогенных микроорганизмов к антибиотикам и факта присутствия бактериальных биопленок на основании измерения каталитической активности фосфодиэстераз, расщепляющих циклический дигуанозинмонофосфат, с пороговой чувствительностью 50 пг/мл, включающий: 1) выделение фосфодиэстеразы-мишени из лизированных бактериальных клеток; 2) связывание фосфодиэстеразы биотинилированными антителами, специфичными к некаталитическим доменам фосфодиэстеразы; 3) аффинную очистку комплексов, сформированных фосфодиэстеразой-мишенью и биотинилированным антителом при помощи парамагнитных частиц, содержащих нейтравидин или его аналоги, связывающие биотин; 4) взаимодействие комплексов фосфодиэстераза/биотинилированное антитело, иммобилизованных на парамагнитных частицах, с комплексами, содержащими с-di-GMP в форме G-квадруплексов с интеркалированным красителем, сопровождающееся падением интенсивности флуоресценции по мере разрушения комплексов интеркалирующего красителя c-di-GMP; 5) измерение падения флуоресценции при гидролизе c-di-GMP и разрушении комплекса c-di-GMP с интеркалирующим красителем с последующим количественным определением активности фосфодиэстеразы на основании калибровочных кривых, построенных с использованием известных количеств рекомбинантного фермента фосфодиэстеразы, идентичного исследуемой мишени; 6) выявление повышенного уровня фосфодиэстеразной активности, обнаруживаемого тестируемыми антибиотикоустойчивыми бактериальными штаммами, способными к формированию биопленок, по сравнению с уровнем фосфодиэстеразной активности, обнаруживаемым для контрольных штаммов бактерий того же вида, не обладающих антибиотикоустойчивостью и способностью к формированию биопленок. Способ позволяет определить неспецифическую устойчивость патогенных микроорганизмов к антибиотикам и установить факт присутствия бактериальных биопленок. 4 ил., 5 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу анализа частоты взаимодействия нуклеотидной последовательности-мишени с одной или несколькими представляющими интерес нуклеотидными последовательностями. Способ предусматривает (а) получение образца поперечно сшитой ДНК и (b) расщепление поперечно сшитой ДНК первым ферментом рестрикции. Далее проводят (с) лигирование поперечно сшитых нуклеотидных последовательностей, (d) удаление поперечных сшивок; (е) расщепление нуклеотидных последовательностей вторым ферментом рестрикции (f) лигирование одной или нескольких последовательностей ДНК, имеющих известный состав нуклеотидов, с доступным сайтом(ами) расщепления вторым ферментом рестрикции, который фланкирует одну или несколько представляющих интерес нуклеотидных последовательностей. Проводят (g) амплификацию одной или нескольких представляющих интерес нуклеотидных последовательностей с использованием по меньшей мере двух олигонуклеотидных праймеров, причем каждый праймер гибридизуется с последовательностями ДНК, которые фланкируют представляющие интерес нуклеотидные последовательности. Далее осуществляют (h) гибридизацию амплифицированной последовательности(ей) с чипом; и (i) определения частоты взаимодействия между последовательностями ДНК. 9 н. и 20 з.п. ф-лы, 19 ил., 2 табл., 8 пр.

Изобретение относится к медицине и фармацевтической промышленности и касается устройства для санитарно-экологического контроля окружающей среды на наличие вредных компонентов. Устройство позволяет оценить концентрации вредных веществ с фермент-тормозящим действием: фосфорорганических соединений (ФОС), в том числе фосфорорганических пестицидов (ФОП) и фосфорорганических отравляющих веществ типа зарин, зоман, V-газы (ФОВ) в газообразной и жидкой среде. Устройство содержит прозрачный корпус с проточным каналом для прокачивания контролируемой среды с герметично закрытыми приточным и отсасывающим концами и расположенные внутри канала в направлении прокачивания: слой сорбента, концентрирующего контролируемое вещество; фермент, катализирующий реакцию гидролиза субстрата; ампульный раствор субстрат-индикаторной системы, обеспечивающей хромогенный эффект; ампульный буферный раствор для обеспечения уровня рН ферментативной реакции. 4 з.п. ф-лы, 2 табл., 2 ил.

Изобретение относится к области молекулярной биологии. Предложен способ диагностики наследственной предрасположенности к тромбофилии, включающий выделение ДНК, амплификацию участков генов МТГФР человека, V фактора свертываемости крови (FV) и протромбина (FII) путем проведения полимеразной цепной реакции с использованием трех пар специально подобранных олигонуклеотидных праймеров, обработку амплификационных фрагментов эндонуклеазой рестрикции TaqI и определение размера полученных фрагментов с помощью электрофореза. При выявлении полиморфных замен С677 Т в гене МТГФР, G1691 A в гене FV и G20210 A в гене FII диагностируют наследственную предрасположенность к тромбофилии. Изобретение может быть использовано в медицине как более легкий и точный способ диагностики предрасположенности индивидуума к тромбофилии. 1 ил., 4 табл.