способ получения тетрагидробенз (c,d)индоловых агонистов серотонина

Формула изобретения

Способ получения тетрагидробенз (c, d)индоловых производных общей формулы



где R₁ - водород или C₁ - C₄-алкил;

R₂ - C₁ - C₄-алкил;

R₃ - C₁ - C₄-алкокси или -N R₅ R₆, где R₅ и R₆ - C₁ - C₄-алкил, R₅ может быть водородом,

отличающийся тем, что соединение общей формулы



где А - группа R₃ - C = O, где R₃ имеет указанные значения, или А - калий или триизопропилсилильная группа,

подвергают действию деблокирующего агента для замены остатка А на водород.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к способам получения тетрагидробенз(с, d) индоловых производных общей формулы I где R₁ - водород илои С₁ - С₄-алкил,

R₂ - С₁-С₄-алкил.

R₃ - С₁-С₄-алкокси или - NR₅R₆, где R₅ и R₆ - С₁-С₄-алкил, R₅может быть водородом, полезным при лечении состояний, требующих стимуляции серотониновой функции организма, которые включают депрессию, тревогу, алкоголизм, тучность, курение, сексуальную дисфункцию и старческое слабоумие.

Известны 6-замещенные-4-диалкиламино-1,3,4,5, -тетрагидробенз(с, d) индолов, известные как основные агонисты серотонина (1). Эти соединения полезны при лечении депрессии, алкоголизма, ожирения и старческого слабоумия. Известен метод лечения тревожных состояний с использованием 4-замещенных 1,3,4,5-тетрагидробенз (с, d) индол-6-карбоксамидных производных (2).

Цель изобретения - получение новых производных тетрагидробенз(с, d) индола, обладающих широким спектром фармакологической активности.

П р и м е р 1. ()-4-(ди-н-пропил)-1,3,4,5-тетрагидробенз(с. d) индол-6-карбоновая кислота метиловый эфир

А. Получение ()-1-метоксикарбонил-4-(ди-н-пропиламино)-1, . 3,4,5-тетрагидробенз(с, d) индол-6-карбоновой кислоты метилового эфира.

Раствор 0,335 н (1 ммоль) 4-(ди-н-пропиламино)-6-бром-1,3,4,5-тетрагидробенз(с, d) индола в 5 мл диэтилового эфира прибавляют к суспензии 0,19 г (1,2 ммоль) гидрида калия в массе дисперсии минерального масла в 25 мл диэтилового эфира при 0^оС. Реакционную смесь перемешивают при 0^оС 1 ч и охлаждают приблизительно до -78^оС при помощи ацетоновой бани с сухим льдом. 1,5 М раствор трет-бутиллития (1,5 мл 2,55 ммоль), охлажденный примерно до -78^оС, прибавляют к реакционной смеси через трубку. Полученной смеси дают нагреться примерно до -40^оС и перемешивают при этой температуре 2 ч. Мутную смесь охлаждают до -78^оС и быстро прибавляют раствор 0,34 г (4 ммоль) метилцианоформиата в 1 мл диэтилового эфира. Смеси дают нагреться примерно до 0^оС и затем гасят ее ледяной водой. Смесь экстрагируют диэтиловым эфиром. Эфирный экстракт экстрагируют 1 М фосфорной кислотой. Водный раствор обрабатывают избытком насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и экстрагируют хлористым метиленом. Органический экстракт сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Полученный остаток хроматографируют на 5 г силикагеля, элюируя вначале этилацетат: толуол 1 : 9 об. и затем этилацетат : толуол 1 : 1 об. Фракции, содержащие основной компонент. объединяют и упаривают растворитель, получая 261 мг ()-1-метоксикарбо- нил -4-(ди-н-пропиламино)-1,3,4,5-тетрагидробенз(с, d) индол-6-карбоновой кислоты, метилового эфира.

В. Раствор 261 мг (0,64 ммоль) ()-1-метоксикарбонил-4-(ди-н-пропиламино)- 1,3,4,5-тетрагидробенз(с, d) индол-6-карбоновой кислоты метилового эфира в 10 мл метанола прибавляют к раствору 2,0 г карбоната калия в 10 мл воды и 20 мл метанола. Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре примерно 1 ч и тонкослойная хроматография показывает, что остаются только следы исходного вещества. Реакционную смесь разбавляют насыщенным водным раствором поваренной соли и несколько раз экстрагируют хлористым метиленом. Органические экстракты объединяют, промывают водным раствором хлористого натрия и сушат над безводным сульфатом натрия. Органическую фазу досуха упаривают в вакууме, получая кристаллический остаток, который после перекристаллизации из толуол/гексана дает 154 мг метилового эфира ()-4-(ди-н-пропиламино)-1,3,4,5-тетрагидробенз(с, d) индол-6-карбоновой кислоты, т. пл. 132-132,5^оС.

Вычислено, % : С 72,58; Н 8,34; N 8,91.

С₁₉Н₂₆N₂О₂.

Найдено, % : С 72,83; Н 8.39; N 8,88.

ЯМR (300 МГц CDCl₃) 0,91 (триплет, 6Н), 1,49 (секстет, 4Н). , 2,58 (секстет, 4Н), 2,78 (триплет, 1Н) 3,00 (квартет, 1Н), 3,03 (триплет, 1Н), 3,23 (мультиплет, 1Н) 3,81 (квартет, 1Н). 3,91 (синглет, 3Н), 6,88 (синглет, 1Н), 7,14 (дублет, 1Н), 7,84 (дублет, 1Н), 8.02 (синглет, 1Н).

П р и м е р 2. ()-4-(ди-н-пропиламино)-1,3,4,5-тетрагидробенз(с, d) индол-6-карбоновая кислота этиловый эфир.

А. Получение (+)-1-этоксикарбонил-4-(ди-н-пропиламино)-1,3,4,5-тетрагидро- бенз(с, d) индол-6-карбоновой кислоты этилового эфира.

Раствор 0,335 мг (1 ммоль) 4-(ди-н-пропиламино)-6-бром-1,3,4,5-тетрагидробенз (с, d) индола в 5 мл диэтилового эфира прибавляют к 0,19 г (1,2 ммоль) суспензии гидрида калия в массу дисперсии минерального масла в 25 мл диэтилового эфира при 0^оС. Реакционную смесь перемешивают при 0^оС 1 ч и охлаждают примерно до -78^оС при помощи ацетоновой бани с сухим льдом. Раствор 1,7 м трет-бутиллития (1,5 мл 2,55 мл), охлажденный до -78^оС, прибавляют к реакционной смеси через трубочку. Полученной смеси дают нагреться до примерно -40^оС и выдерживают 2 ч. Полученную мутную смесь охлаждают до примерно -78^оС. К этой смеси прибавляют раствор 0,4 г (4 ммоль) этилцианформиата в 1 мл диэтилового эфира. Реакционной смеси дают нагреться примерно до 0^оС и гасят ее ледяной водой. Смесь промывают диэтиловым эфиром и эфирный экстракт экстрагируют 1 М фосфорной кислотой. Водные растворы объединяют и обрабатывают водным раствором бикарбоната натрия и затем экстрагируют хлористым метиленом. Экстракт сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают в вакууме, получая 0,44 г остатка. Остаток хроматографируют на 5 г силикагеля, элюент этилацетат: толуол 1: 9 об. Фракции, содержащие основной компонент, объединяют и упаривают растворитель, получая 164 мг желаемого соединения этилового эфира ()-1-этоксикарбонил-4-(ди-н-пропиламино)-1,3,4,5-тетрагидро- бенз(с, d) индол-6-карбоновой кислоты.

В, Раствор 164 мг (0,41 ммоль) ()-1-этоксикарбонил-4-(ди-н-пропиламино)-1,3,4,5-тетрагидробенз(с, d) индол-6-карбоновой кислоты этилового эфира в 10 мл метанола медленно добавляют к раствору 2,0 г карбоната калия в 10 мл воды и 20 мл метанола. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре примерно 1 ч и разбавляют водным раствором хлорида натрия. Экстрагируют хлористым метиленом. Органические экстракты соединяют, сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают в вакууме, получая 149 мг остатка. Остаток перекристаллизовывают из толуол/гексана и получают 165 мг ()-4-(ди-н-пропиламино-1,3,4,5-тетрагидробенз(с, d) индол-6-карбоновой кислоты этилового эфира.

Т. пл. 116,5 - 117^оС.

Вычислено, % : С 73,14; Н 8,59; N 8,53.

С₂₀Н₂₈N₂О₂.

Найдено, % : С 72,86; Н 8,77; N 8,54.

ЯМR (300 МГц CDCl₃) 9,91 (триплет, 6Н), 1,42 (триплет, 3Н), 1,49 (секстет, 4Н), 2.58 (триплет, 4Н), 2,78 (триплет, 1Н), 3,00 (квартет, 1Н) 3.03 (триплет, 1Н), 3,23 (мультиплет, 1Н), 3,83 (квартет, 1Н), 4,36 (мультиплет, 2Н), 6,88 (синглет, 1Н), 7,14 (дублет, 1Н), 7,84 (дублет, 1Н), 8,04 (синглет, 1Н).

П р и м е р 3. ()-(ди-метиламино)-1,3,4,5-тетрагидробенз(с, d) индол-6-карбоксальдегид.

К суспензии 0,9 г (3,96 ммоль) ()-4-(ди-метиламино)-6-циано-1,3,4,5-тетрагидро- бенз(с, d) индола в 10 мл бензола при перемешивании при комнатной температуре в атмосфере азота прибавляют 8,1 мл (8,1 ммоль) 1 М диизобутилалюминийгидрида в толуоле по каплям. Реакционную смесь перемешивают при 50^оС 6 ч. Смесь охлаждают до комнатной температуры и прибавляют раствор 1,0 мл метанола в 4,5 мл толуола для растворения образовавшегося осадка. Затем прибавляют 1 мл воды в 4,5 мл метанола и полученную смесь приливают к 0,5 М соляной кислоте и встряхивают. Водный слой и экстракцию 0,5 М соляной кислоты, отделившейся органической фазы, соединяют и подщелачивают 2 М гидроксидом натрия. Водную фазу экстрагируют хлористым метиленом, органическую фазу промывают насыщенным раствором хлористого натрия, сушат безводным сульфатом натрия и упаривают в вакууме, получая масло. Это масло хроматографируют, используя в качестве элюента этилацетат: метанол 19: 1. Фракции, содержащие основной компонент, соединяют и упаривают растворитель, получая 0,5 г названного соединения, после чего его кристаллизуют из этилацетат/толуола.

Т. пл. 163^оС.

Вычислено, % : С 73,66; Н 7,06, N 12.27.

С₁₄Н₁₆N₂О.

Найдено, % : С 73,50; Н 7,02. N 12,17.

ЯМR (300 МГц CDCl₃) 2,48 (синглет, 6Н), 2,86 (квартет, 1Н), 3,08 (мультиплет, 2Н), 3,19 (мультиплет, 1Н), 3,86 (широкий дублет, 1Н), 6,95 (синглет, 1Н), 7,25 (дублет, 1Н), 7,66 (дублет, 1Н), 8,31 (синглет, 1Н), 10,28 (синглет, 1Н).

П р и м е р 4. ()-4-(ди-н-пропиламино)-1,3,4,5-тетрагидробенз(с, d) индол-6-карбоксальдегид.

В 100 мл трехгорлую круглодонную колбу в атмосфере азота помещают 0,176 г (1,1 ммоль) 25% гидрида калия в минеральном масле, которое отмыто гептаном. В колбу заливают 40 мл диэтилового эфира и охлаждают эту смесь примерно до 0^oС. К смеси добавляют раствор 0,335 г (1 ммоль) ()-4-(ди-н-пропиламино)-6-бром-1,3,4,5-тетра- гидробенз(с, d) индола в 10 мл диэтилового эфира примерно за 5 мин. Смесь перемешивают 1 ч при 0^оС и 3 ч при комнатной температуре. Смесь охлаждают примерно до -78^оС при помощи ацетоновой бани с сухим льдом и добавляют по каплям за 10 мин 1,47 мл 1,7 М трет-бутиллития. Смесь нагревают примерно до -50^оС за 2 ч. Смесь еще раз охлаждают примерно до -78^оС и добавляют 0,193 мл сухого ДМФА в 10 мл диэтилового эфира. Смесь перемешивают при -78^оС 30 мин, нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. К смеси добавляют 50 мл воды и 25 мл диэтилового эфира. Смесь дважды промывают порциями воды по 50 мл. Органический слой сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и упаривают в вакууме, получая 0,17 г бурого масла. Это масло хроматографируют на силикагеле, используя в качестве элюента этилацетат: толуол: триэтиламин 42: 42: 16 об. Фракции, содержащие основной компонент, соединяют и упаривают растворитель, получая 0,19 г (+)-4-(ди-н-пропиламино)-1,3,4,5-тетрагидробенз (с, d) индол-6-карбоксальдегида в виде желтого масла.

ЯМR (300 МГц CDCl₃) 0,95, (триплет, 6Н), 1,50, (мультиплет, 4Н) 2,60, (триплет, 4Н) 3,10, (мультиплет, 4Н) 3,80, (дублет, 1Н) 7.00, (мультиплет, 3Н) 8,3, (синглет, 1Н) 10,3 (синглет, 1Н).

П р и м е р 5. ()-N-метил(-4-)ди-н-пропиламино)-1,3,4,5, -тетрагидробенз(с, d) индол-6-карбоксамид.

Раствор 0,335 г (1 ммоль) 4-(ди-н-пропиламино)-6-бром-1,3,4,5-тетрагидробенз(с, d) индола в 5 мл диэтилового эфира прибавляют к суспензии 0,20 г (1,25 ммоль) гидрида калия в массу дисперсии минерального масла в 25 мл диэтилового эфира при 0^оС. Реакционную смесь перемешивают при 0^оС 1 ч и охлаждают приблизительно до -78^оС при помощи ацетоновой бани и сухого льда. 1,54 М раствор трет-бутиллития (1,7 мл 2,62 ммоль) в пентане постепенно добавляют к реакцинной смеси. Полученной смеси дают нагреться примерно до -40^оС и перемешивают при комнатной температуре 2 ч. Смесь еще раз охлаждают до -78^оС. Используя двухконечную воронку, мутную смесь переносят в колбу, содержащую 0,25 мл (4,24 ммоль) метилизоцианата в 10 мл ТГФ, охлажденную сухим льдом. После дополнительных 20 мин перемешивания добавляют 10 мл метанола, температуре дают подняться до 25^оС. Смесь обрабатывают водой. Водный слой экстрагируют свежей порцией эфира, эфирные растворы соединяют и затем экстрагируют 1 М фосфорной кислотой. Этим водным растворам дают постоять 20 мин и затем подщелачивают их до рН 10 5 М раствором гидроксида натрия. Экстракция хлористым метиленом с последующим упариванием растворителя дает 0,34 г вязкого масла. Хроматография этого вещества на 5 г хлорисила с использованием последовательно 1: 1 этилацетат : толуола, этилацетата и 3% метанола в этилацетате дает продукт, который после кристаллизации из толуола весит 66 мг (выход 27% ), т. пл. 161,5 - 163,5^оС. Образец был перекристаллизован из толуола для элементного анализа.

Вычислено, % : С 72,81; H 8,68; N 13,41.

С₁₉Н₂₇N₃О.

Найдено, % : С 72,75; Н 8,84; N 13,20.

ЯМR (300 МГц CDCl₃) 0,90 (т, 6Н, ССН₃) 1,48 (секстет, 4Н, СН₂Ме) 2,56 (секстет, 4Н, СН₂Ет) 2,79 (т, 1Н, 3 -Н) 2,93-2,08 (мульт, 2Н, 3 -Н и 5 -Н) 3,03 (д, 3Н, NCH₃) 3,22 (мульт, 1Н, 4 -Н) 3,46 (кв, 1Н, 5 -Н) 5,82 (шир, с, 1Н1, NНМе) 6,89 (с, 1Н, 2-Н), 7,12 (д, 1Н, 8-Н) 7,33 (д, 1Н, 7-Н) 7,99 (с, 1Н, 1Н).

П р и м е р 6. ()-N, N-диэтил)-4-(ди-н-пропиламино)-1,3,4,5-тетрагидробенз(с, d) индол-6-карбоксамид.

А. Получение (+)-6-бром-1-триизопропилсилил-4-(ди-н-пропиламино)-1,3,4,5-тет- рагидробенз(с, d) индола.

К суспензии 1,25 г (7,50 ммоль) гидрида натрия 24% дисперсии в минеральном масле в 50 мл ТГФ при 0^оС прибавляют раствор 2,00 г (5,97 ммоль) 6-бром-4-(ди-н-пропиламиино)-1,3,4,5-тетрагидробенз(с, d) индола в 2 мл ТГФ. После перемешивания в течение 40 мин добавляют 1,90 мл (7,18 ммоль) триизопропилсилилтрифлата. Перемешивание продолжают еще 30 мин. Затем смесь выливают в холодный раствор NaНСО₃ и продукт экстрагируют СН₂Сl₂. Этот экстракт промывают раствором NaCl и сушат сульфатом натрия. Упаривание СН₂Сl₂ оставляет коричневое масло, которое хроматографируют на 50 г силикагеля, используют толуол, а затем 1: 3 этилацетатолуол. Силилированный продукт выделяют после колонки в виде светло-коричневого масла с количественным выходом.

В. Получение ()-(N, N-диэтил)-1-три- изопропилсилил-4-(ди-н-пропилимино)- 1,3,4,5- тетрагидробенз(с, d) индол-6-карбоксамида.

Раствор 0,30 г (0,65 ммоль) 1-силилированного соединения из примера 6А в 10 мл диэтилового эфира перемешивают при -65^оС и добавляют 0,90 г (1,39 ммоль) 1,54 М трет-бутиллития (в пентане). После перемешивания при -70^оС в течение 30 мин быстро добавляют 0,17 мл (1,34 ммоль) N, N-диэтилкарбамилхлорида. Смеси дают нагреться до 0^оС. Затем ее выливают в 50 мл холодного раствора NaHCO₃ и экстрагируют продукт диэтиловым эфиром. Экстракт промывают раствором NaCl и сушат над Na₂SO₄. Упаривание эфира дает масло, которое хроматографируют на 5 г флорисила, используя последовательно толуол, 1: 19 ЕтОАс/толуол, 1: 3 ЕтОАс/толуол. Первые фракции, содержащие продукт, слегка загрязнены, поэтому их хроматографируют еще раз на 3 г силикагеля, используя толуол, и затем 1: 9 ЕтОАс/толуол. Продукт кристаллизуется при упаривании растворителя. Выход кристаллического амида 0,22 г (71% ) т. пл. 84-87^оС.

С. Раствор 0,20 г (0,41 ммоль) амида из примера 6В в 5 мл при 0^оС обрабатывают 1 мл, 1 М тетрабутиламмонийфторидом в ТГФ. После 15 мин перемешивания раствор выливают в 15 мл воды, содержащей 0,25 г винной кислоты. Этот раствор промывают СН₂Cl₂ и промывные воды экстрагируют свежим разбавленным раствором винной кислоты. Объединенные водные растворы подщелачивают 5 н раствором NaОН и экстрагируют продукт СН₂Cl₂. После сушки экстракта сульфатом натрия растворитель упаривают и полученное масло хроматографируют на 3 г силикагеля, используя последовательно толуол, 1: 19 ЕтОАс/толуол и ЕтОАс. Продукт с колонки - это вязкое масло весом 0,13 г (88% выход).

Вычислено, % : С 74,33; Н 9,36; N 11,82.

С₂₂Н₃₃N₃О.

Найдено, % : С 74,12; Н 9,32. N 11,94.

ЯМR (300 МГц CDCl₃) 0,89 (т, 6Н, ССН₃ от Npr) 1,02 (шир. т, 3Н, ССН₃ от NЕт) 1,29 (шир. т, 3Н, ССН₃ от NЕт) 1,46 (секстет, 4Н, ССН₂Ме) 2,53 (т, 4Н, СН₂Ет) 2,79 (т, 1Н, 3 -Н) 2,89 (мульт, 1H, 3-H) 2,97 (т, 1H, 5-H) 2,99 (кв, 1H, 3-H) 3,24 (мульт, 3Н, 4 -Н и NСН₂Ме) 3,63 (мульт, 2Н, NСН₂Ме) 6,87 (с, 1Н, 2-Н) 7,02 (д, 1H, 8-Н) 7,12 (д, 1Н, 7-Н) 7,96 (с, 1Н, 1-Н).

П р и м е р 7. (2а-R, 4-S)-1-бензоил-4-(ди-н-пропиламино)-6-иод-1,2,2а, 3,4,5- гексагидробенз(с, d) индол.

50 мл раствора 1-бензоил-4-(ди-н-пропил)-амино-1,2,2 а, 3,4,5-гексагидробенз(с, d) индола (примерно 500 мг, примерно 1,4 ммоль) в ацетонитриле помещают в колбу на 100 мл. Растворитель удаляют в вакууме, получая вязкое масло. К этому маслу добавляют смесь воды, уксусной и серной кислоты (25 мл 20: 100: 3 по объему). К полученному раствору добавляют ортоперйодную кислоту (0,96 мг 0,42 ммоль) и иод (218 мг 0,89 ммоль). Реакционную смесь нагревают до 70^оС и выдерживают при этой температуре при пропускании азота 25 мин. Растворитель и избыток иода удаляют в вакууме. Остаток заливают водой (50 мл). Прибавление 15 мл 5 н, водного гидроксида натрия повышает рН примерно до 12 и вызывает выпадение осадка. Смесь охлаждают приблизительно до 0^оС, осадок фильтруют, промывая водой (3х30 мл) и сушат в вакууме, получая рыжеватокоричневый твердый продукт (619 мг). Это вещество имеет следующие характеристики, соответствующие (2а-R, 4-S)-1-бензоил-4-(ди-н-пропил)амино-6-иодо-1,2,2а, 3,4,5-гексагидробен (с, dиндолу.

ИК (СНСl₃) 3010, 2961, 2934, 2870, 1638, 1467, 1453, 1382, 1222 см^-1.

ЯМR (1Н мд CDCl₃) 7,3 - 7,7 (м0 7Н) 4.25 шир, м, 1Н) 3,65 (т, 1Н) 3,30 (м, 1Н) 3,20 (м, 1Н) 2,80 (дд, 1Н) 2,45 (м, 5Н) 2,15 (м, 1Н) 1,25-1,60 (м, 5Н) 0,90 (т, 6Н).

Масс-спектр: м/е = 448

Вычислено, % : С 59,02; Н 5,98; N 5,73.

С₂₄Н₂₉N₂O.

Найдено, % : C 58,78; Н 6,04; N 5,68.

Как отмечено выше, соединения изобретения это агонисты серотонина, полезные для стимуляции серотониновой функции у млекопитающих. Как агонисты серотонина эти соединения имитируют действие серотонина.

Оказалось, что эти соединения имеют селективное сродство к рецепоторам 5НТ1 А мозга и гораздо меньшее сродство к другим рецепторам. Благодаря их способности селективно блокировать 5НТ1А рецепторы, соединения формулы I полезны при лечении болезненных состояний, требующих стимуляции серотониновой функции, но без побочных эффектов, которые могли бы быть вызваны менее селективными соединениями. Такие состояния включают тревожность, депрессию, нарушения потребления, такие как тучность, алкоголизм, курение, а также старческое слабоумие. Для лечения перечисленных состояний необходимы фармацевтически эффективные количества соединений формулы I.

Термин "фармакологически эффективное количество" здесь означает количество соединения, которое способно стимулировать функцию серотонина. Конкретные дозы соединения вводимые согласно изобретению разумеется будут определяться конкретной обстановкой в каждом случае, включая вводимое соединение, путь введения, конкретное состояние, на которое воздействуют, а аналогичные соображения. Соединения могут вводиться множеством путей, включая оральный, ректальный, кожный, подкожный (Subcutaneous) внутривенный, внутримышечный или интранасальный. Типичная единичная профилактическая доза, однако, будет содержать примерно 0,01 мг/кг - 20 мг/кг активного соединения данного изобретения при оральном введении. Предпочтительная оральная доза составляет 0,5-10 мг/кг, идеально, примерно 1-5 мг/кг. При оральном применении данных соединений может быть необходимо более одного приема в день, например, через каждые восемь часов. Для IV введения доза будет составлять примерно 1,0-3000 мг/кг, предпочтительно 50-500 мг/кг.

Чтобы продемонстрировать свойства соединений изобретения как агонистов серотонина, были проведены несколько экспериментов.

В одном из таких экспериментов соединения примеров 1 и 3 были испытаны для определения их способности воздействовать на 5-гидроксииндолы серотонина, 5-гидроксииндолы уксусной кислоты 5Н1АА и serum (Р<0,5) кортикостерон in vivo. По этому тесту крысам wistar массой 150-200 г каждая, вводили препарат испытуемого соединения в 0,01 н НСl в различных дозах. Шестьдесят минут спустя каждая крыса была обезглавлена и измерено содержание в мозге серотонина 5Н1АА и serum кортикостерона. Результаты этого эксперимента представлены ниже в табл. 1.

Второй эксперимент был проведен для оценки соединений примера 1 по предыдущей методике, исползуя меньшие дозы. Результаты представлены в табл. 2.

Соединение примера 1 также испытывалось, чтобы определить его действие на некоторые мозговые катехоламины и метаболиты. Вновь была повторена описанная методика и определены концентрации в наномолях на грамм дофамина, 3,4-дигидроксифенилуксусной кислоты (ДОРАС), гомованилиновой кислоты (НУА) и норэпинефрина. Дофамин и норэпинефрин это - катехоламины, тогда как ДОРАС и НУА - это метаболиты дофамина. Эти результаты представлены в табл. 3.

Известно, что снижение кругооборота серотонина в мозге это еще один показатель активности агониста серотонина. Снижение кругооборота серотонина установлено при уменьшении накопления в мозге 5-гидрокситриптофана (5НТР) после ингибирования декарбоксилазы. В другом эксперименте была определена способность соединения примера 1 снижать накопление 5НТР после ингибирования декарбоксилазы в гипоталамусе крыс. Испытуемое соединение вводили крысам при помощи подкожной subcutaneous инъекции в различных дозах. Спустя 30 минут вводится инъекцией ингибитор декарбоксилазы NSD 1015 (м-гидроксибензилгидразин) доза 100 мг/кг. Спустя 30 мин после введения ингибитора крыс умерщвляли и измеряли концентрацию 5НТР в гипоталамусе. Результаты представлены в табл. 4.

Также оценивалась и длительность действия соединения примера 1. В этом эксперименте крысам вводили 0,3 мг/кг соединения в 0,1 н. НСl. Крыс умерщвляли путем обезглавливания через различные промежутки времени и измеряли концентрации серотонина и 5Н1АА. Результаты представлены в табл. 5.

Соединение примера 2 также испытывалось в экспериментах, приведенных выше для примера 1. Результаты, полученные при оценке действия соединения на 5-гидроксииндолы и serum кортикостерон, представлены в табл. 6.

Соединение примера 2 вызывает незначительные изменения концентраций дофамина и НУА при измерении в предыдущем эксперименте, однако ДОРАС повышается на 16% при высшей дозе вводимого соединения. Норэпинефрин снижается при всех трех дозах (-15-23 и -27% , соответственно от низшей дозы к высшей).

В еще одном эксперименте соединение примера 2 вводилось в дозе 0,3 мг/кг . с. в разное время до умерщвления крыс. Была измерена концентрация 5Н1АА в гипоталамусе. Эти результаты проедставлены в табл. 7.

Соединения примера 1 также испытывались для определения их способности связывать 5НТIA рецепторы и спиперон в мозге крыс. Применяемая методика была аналогична той, что описана Wong et al. I. Neural Trans. 64 251-269 (1985). Результаты представлены в табл. 8.

Оказалось также, что соединения изобретения способны лечить сексуальную дисфункцию у млекопитающих. В силу этого еще одной стороной данного изобретения является использование соединений формулы I для лечения сексуальной дисфункции у млекопитающих, страдающих такой дисфункцией и нуждающихся в лечении, включая введение данным млекопитающим соединений по изобретению. Для орального введения препарат смешивается с одним или более стандартным фармацевтическим носителем, таким как крахмал, и заключается в капсулу, каждая содержит 0,1-15 мг активного вещества. Найдено, что уровень дозировки примерно 0,01-1000 мкг (микрограмм)/кг эффективен для улучшения сексуальной функции, в частности повышения низкой потенции у мужских особей. Оральные дозировочные формы могут вводиться 3-4 раза в день, составляя дневную дозу примерно 0,3-400 мкг/кг в день.

Способность соединений данного изобретения воздействовать на сексуальное поведение самцов животных была установлена в следующих экспериментах.

В этом эксперименте использовались взрослые самцы крыс линии Sprague-Dawly. Оценка сексуального поведения проводилась с 2-недельным интервалом, начиная с 6-месячного и кончая 12-месячным возрастом. В процессе первоначального отбора для испытания соединения были выбраны самцы крыс с различным уровнем сексуального поведения. Эти уровни поведения включали самцов крыс, которые демонстрировали неспособность к эрекции (Non Maters), самцов крыс, которые были способны к эрекции, но неспособны к эйякуляции в течение периода испытаний (Non-Ejaculators) и самцов крыс, которые были способны к эйякуляции в период испытаний. До лечения раствором препарата каждый самец крысы прошел по крайней мере два последовательных "плацебо" теста со сходным сексуальным поведением. После испытания каждого соединения были проведены дополнительные тесты. Чтобы отделить изменения в поведении, вызванные действием препарата от возможных случайных изменений, был применен критерий обратимости изменений поведения. Так действительные изменения в поведении благодаря действию препарата были объективно установлены как либо не отличающиеся от первоначального контрольного поведения, либо вернувшиеся в последующем контрольном тесте с растворителем.

"Брачный" тест проводился в темное время светового цикла при красном освещении. Каждый поведенческий тест начинался с введения на арену воспринимающей самки, заканчивался либо 30 мин спустя, либо немедленно после первого постэйякуляционного подъема. Индексом брачного поведения, оценивающем самцов, способных к эйякуляции, была эйякуляционная латентность, определенная как промежуток времени от введения до эйякуляции.

Каждому самцу крысы давали раствор, содержащий либо чистый растворитель в воде, либо соединение примера 2 ()-4-(ди-н-пропиламино)-1,3,4,5-тетрагидробенз(с, d) индол-6-карбоновую кислоту этиловый эфир в том же растворителе. Растворителем служил 1 мМ (миллимолярный) раствор уксусной кислоты и 1 мМ аскорбиновая кислота. Результаты этого опыта представлены ниже в табл. 9. В табл. 9 N - это число животных, использованных для получения данных, среднее которых приведено. Подробное описание теста приведено в примечаниях к табл. 9.

Значения К₁ для соединений в соответствии с примерами 1, 2, 5, 6, а также 4-ди-н-пропиламино-1,3,4,5-тетрагидробенз(с, d) индолов, карбоксамидов и N, N-диметилкарбоксамида получали по следующей методике.

Сродство указанных соединений к центральным 5-НТIA-рецепторам определяли с помощью модифицированного метода связывания, описанного Taylor и др. (J. Pharmacol Exp. Thor 236, 118-125, 1986). Мембраны для проведения анализа готовили из самцов крыс породы Sprague-Dawly массой 150-250 г. Животных убивали путем обезглавливания, мозг быстро охлаждали и вскрывали для получения гоппокампа. Мембраны из гиппокампа готовили в тот же день или хранили замороженными при -70^оС до использования. Мембраны готовили путем гомогенизации ткани в 40 объемах охлажденного льдом трис-НСl буфера (50 мМ, рН 7,4 при 22^оС) с помощью Techmar Tissumizer (осаждение 65 в течение 15 с) и центрифугирования гомогената в течение 10 мин при 39800g. Полученный осадок снова суспендировали в том же буфере и процесс центрифугирования и суспендирования повторяли еще три раза для промывки мембраны. Между второй и третьей промывками суспендированные мембраны выдерживали в течение 10 мин при 37^оС для облегчения удаления эндогенных лигандов. Полученный в конечном счете осадок снова суспендировали в 67 мМ трис-НСl с рН 7,4 для получения суспензии с концентрацией исходной влажной ткани 2 мг на 200 мкл. До проведения анализа полученный гомогенат хранили охлажденным до -70^оС. Содержимое каждой трубки для проведения анализа на связывание составляло в конечном счете 800 мкл и состояло из трис-НСl (50 мМ), паргилина (10 МкМ), СаСl₂ (3мМ), [³Н] 8-ОН-DРАТ 1,0 нМ, соответствующего разбавления исследуемого препарата и суспензии мембраны в количестве, эквивалентном 2 мг исходной влажной ткани, с конечным рН 7,4. Трубки выдерживали в течение 10 мин при 37^оС и затем быстро фильтровали их содержимое через фильтры GF/В (предварительно обработанные 0,5% -ным раствором полиэтиленимина), после чего четыре раза промывали их 1 мл охлажденного льдом буфера. Радиоактивность, задерживаемую на фильтре, определяли с помощью жидкостной сцинтилляционной спектрометрии и определяли связывание [³H] 8-OH-DPAT с местами 5-НТIА как разность между связью [³H] 8-ОН-DPAT в присутствие и отсутствие 10 мкМ 5-НТ.

Значения IC₅₀, т. е. концентрацию, необходимую для торможения связывания на 50% , определяли из построенных по 12 точкам конкурентных кривых с помощью нелинейной регрессии (SYSTAT, Inc Ivanston IL) (Сродство соединений к 5-НТIА-рецептору выражали в виде кажущихся значений К_j по методу, описанному Cheng и Prusoff (Biochem. Pharm, 22: 3099-3108, 1973). Изученные соединения К_j Пример 1 0,28 Пример 2 0,34 Пример 5 0,29 Пример 6 12,2 6-Карбоксамид 0,67 (1) 6-N, N-Диметилкарбоксамид 10,9

Соединения изобретения не являются токсичными. (56) Патент США N 4576959, кл. 514-411, 1988.

Патент США N 4745126, кл. 514-411, 1990.