способ диагностики туберкулезного синовита
Классы МПК: | G01N33/53 иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого |
Автор(ы): | Беллендир Э.Н., Шендерова Р.И., Горяшина В.И., Якунова О.А., Наконечный Г.Д. |
Патентообладатель(и): | Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии |
Приоритеты: |
подача заявки:
1992-03-31 публикация патента:
20.07.1996 |
Использование: медицина, для диагностики туберкулезного синовита. Сущность изобретения: одновременно в синовиальной жидкости и сыворотке крови определяют титр противотуберкулезных антител в реакции РНГА с фосфатидным антигеном и реакции РСК с туберкулиновым антигеном, выражают полученные значения в виде логарифма основания два и рассчитывают диагностический показатель по предлагаемой формуле.
Формула изобретения
Способ диагностики туберкулезного синовита, включающий исследование крови и синовиальной жидкости, отличающийся тем, что определяют титры противотуберкулезных антител в реакции непрямой гемаггютинации с фосфатидным антигеном и реакции связывания комплемента с туберкулиновым антигеном одноверменно в синовиальной жидкости и сыворотке крови, показатели титров гемагглютинации выражают в виде логарифмов основания два и производят расчет диагностического показателя по формуле:ДП = ГАlogСЖ2
![способ диагностики туберкулезного синовита, патент № 2064187](/images/patents/408/2064187/215.gif)
![способ диагностики туберкулезного синовита, патент № 2064187](/images/patents/408/2064187/215.gif)
где ДП диагностический показатель;
ГА титр гемагглютининов в РНГА-Ф, выраженный в Iog2;
КСА титр комплементсвязывающих антител в РСК-Т, выраженный в у.е. СЖ синовиальная жидкость;
СК сыворотка крови,
и при его значении, равном или большем 8, диагностируют туберкулезный синовит.
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к медицине и может быть использовано в диагностике туберкулеза. Известен способ диагностики костно-суставного туберкулеза, включающий иммунологические исследования на фоне пробы Коха и одновременное определение противотуберкулезных антител (ПТАТ) в сыворотке крови (СК) и синовиальной жидкости (СЖ), причем туберкулезный артрит диагностируют в случае повышения титра ПТАТ в СЖ более чем в два раза (1). Этот способ сложен и недостаточно точен, т.к. по данным самих авторов частота реакции на туберкулин в случаях пробы Коха не превышает 55%Цель изобретения повышение точности и упрощение способа диагностики туберкулезного синовита. Поставленная цель достигается тем, что у больного с подозрением на туберкулезный синовит проводят одновременно поиск противотуберкулезных антител (ПТАТ) в синовиальной жидкости (СЖ) и сыворотке крови (СК) с применением двух реакций реакции непрямой гемагглютинации с фосфатидным антигеном (РНГА-Ф) и реакции связывания комплемента с туберкулином (РСК-Т), причем по формуле определяют диагностический показатель (ДП), позволяющий подтвердить или отвергнуть туберкулезную этиологию заболевания. Принципиальным отличием способа является: 1) выявление ПТАТ параллельно в СЖ и СК с помощью комплекса из 2-х серологических реакций без подкожного введения туберкулина и дополнительных сложных иммунологических исследований; 2) поиск ПТАТ с помощью 2-х туберкулезных антигенов туберкулина и фосфатида микобактерий, повышающий точность реакции; 3) применение разработанного авторами диагностического показателя (ДП), суммирующего и конкретизирующего результаты иммунологических тестов. Для сравнительной оценки предлагаемого способа и способа-прототипа обследованы 2 группы больных с достоверно установленными диагнозами: 1 гр. - больные с туберкулезным синовитом 27 больных, 2 гр. больные с неспецифическим синовитом 17 больных. Все 44 больных обследованы указанными двумя способами. Установлено, что специфичность предлагаемого теста очень высока (100% ), ложноположительных результатов у больных неспецифическим синовитом не было получено ни разу. Чувствительность способа достигает 93,1% Ложно-отрицательные результаты получены в 3 случаях из 27 Специфичность способа-прототипа равна 94,12 и 82,35% т.е. является несколько менее высокой. Чувствительность же способа-прототипа резко уступает заявляемому. Она равна 25,93 и 77,78% в зависимости от применения туберкулина или фосфатидного антигена. Ложно-отрицательные результаты получены в 20 и в 6 случаях из 27 соответственно.Необходимо отметить, что в оригинальном способе-прототипе авторы пользовались в качестве антигена только туберкулином, а фосфатидный антиген не применяли. Способ осуществляют следующим образом. У больного натощак из локтевой вены берут 5 мл крови, а затем путем пункции сустава набирают 2 мл СЖ. Кровь выдерживают в термостате при температуре плюс 37
![способ диагностики туберкулезного синовита, патент № 2064187](/images/patents/408/2064017/177.gif)
На следующий день из пробирки с кровью отсаcывают СК в сухую стерильную пробирку и помещают в морозильную камеру при минус 10- 20oС на 1 неделю. СЖ центрифугируют в течение 10 мин при 1500 об/мин, надосадочную жидкость переносят в сухую стерильную пробирку и замораживают подобно СК. Через неделю СК и СЖ размораживают при комнатной температуре и используют для определения ПТАТ. Антифосфатидные гемагглютинины (ГА) определяют с помощью РНГА-Ф согласно "Наставлению по применению диагностикума туберкулезного эритроцитарного антигенного сухого", изложенному в листовке-вкладыше в коробке с коммерческим препаратом. Комплементсвязывающие антитела (КСА) определяют в РСК-Т с помощью метода Худомела, используя собственную модификацию, а именно:
а) в СК: в пробирку наливают 0,1 мл цельной СК и 0,1 мл туберкулина в рабочем разведении; пробирку помещают в водяную баню при +37oС вместе с контролем-пробиркой, содержащей 0,1 мл СК и 0,1 мл физиологического раствора; во время инкубации в течение 1 ч. пробирку встряхивают через каждые 15 мин; по окончании инкубации и в опытную, и в контрольную пробы добавляют по 5 мл гемолитической системы (смесь равных объемов эритроцитов барана и гемолитический сыворотки к ним), содержимое пробирок тщательно перемешивают и помещают на 15 мин в водяную баню при +37oС. Для остановки реакции пробы на 5-7 мин помещают в морозильную камеру бытового холодильника, после чего встряхивают, центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин; надосадочную жидкость отсасывают в чистые пробирки. Учет реакции производят путем колориметрировация надосадочной жидкости опытной и контрольной проб. Разность в величинах экстинкции контрольной и опытной проб, умноженная на 100, означает уровень КСА в условных единицах (У.Е.). б) в СЖ: в пробирку наливают 0,13 мл СЖ с добавленным в нее комплементом морcкой свинки и 0,1 мл рабочего раствора туберкулина; пробирку помещают в водяную баню при +37oС вместе с контролем пробиркой, содержащей 0,13 мл СЖ с комплементом морской свинки и 0,1 мл физиологического раствора. Все дальнейшие процедуры в точности соответствуют описанным в методике обнаружения КСА в СК (см. а). Математическая обработка полученных показателей заключается в следующем. Титры ПТАТ в РНГА-Ф выражают в значениях логарифмов основания 2 (log2). Вычисляют произведение выраженных указанным способом титров ГА на титры КСА, выраженные в у.е. раздельно в СК и СЖ. Из произведения, полученного для СЖ, вычитают произведение, полученное для СК. Найденная разность и является диагностическим показателем (ДП). Получение ДП выражается формулой:
![способ диагностики туберкулезного синовита, патент № 2064187](/images/patents/408/2064187/2064187t.gif)
Опытным путем установлено, что пограничным значением ДП является уровень, равный 8. При ДП=8 и выше ставят диагноз туберкулезного синовита, если ДП ниже 8, то туберкулезная этиология заболевания отвергается
Пример N 1. Больная Р-а, 39 пет, поступила с подозрением на туберкулезный синовит правого коленного сустава. Давность заболевания 5 лет, лечение без эффекта. Клинико-рентгенологические и лабораторные данные: воспаление в области правого коленного сустава с выраженной припухлостью, болезненностью, без выявленных деструктивных изменений при наличии небольшого остеопороза костей сустава, пунктат СЕ стерилен. При исследовании СК установлено, что титр ПТАТ в РНГА-Ф 1:16, следовательно ГАloСКg2=4; титр ПТАТ в РСК-Т равен 0, следовательно KCAe&СКt&. При исследовании СЖ установлено, что титр ПТАТ в РНГА-Ф 1:512, следовательно
![способ диагностики туберкулезного синовита, патент № 2064187](/images/patents/408/2064187/2064187-2t.gif)
![способ диагностики туберкулезного синовита, патент № 2064187](/images/patents/408/2064187/2064187-3t.gif)
![способ диагностики туберкулезного синовита, патент № 2064187](/images/patents/408/2064187/2064187-4t.gif)
ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ
Бараш Л. И. Морозкина Н.С. Шпаковская Н.С. Иммунологические показатели крови и синовиальной жидкости до и после подкожного введения туберкулина у больных костно-суставным туберкулезом. //Пробл. туб. 1990. 8. С.5 7.
Класс G01N33/53 иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого