гранулированный ферментативный катализатор и способ его получения

Формула изобретения

1. Ферментативный катализатор в гранулированной форме, который не диспергируется в воде, содержащий внутреннее ядро с покрытием, причем покрытие содержит ферментативный материал, полимер и агент поперечного сшивания, отличающийся тем, что толщина покрытия составляет от 100 до 250 мкм и отношение размера ядра к толщине покрытия составляет от 3 до 15, средний диаметр указанного ядра составляет от около 0,1 до 5 мм.

2. Ферментативный катализатор по п.1, отличающийся тем, что является нерастворимым в воде.

3. Ферментативный катализатор по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что ядро является мезопористым или микропористым.

4. Ферментативный катализатор по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что ядро выбрано из оксида алюминия, кремнезема, цеолита, полимера, жирного вещества, стеклянных бус и пластиковых бус.

5. Ферментативный катализатор по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что ферментативный материал выбран из глюкозоизомераз, ацетилаз пенициллина, нитрилгидратаз, нитрилаз, амидаз, липаз, протеаз и эстераз.

6. Ферментативный катализатор по п.5, отличающийся тем, что ферментом является нитрилаза.

7. Ферментативный катализатор по п.1, отличающийся тем, что полимер выбран из полиазетидиновых полимеров, полиаминовых полимеров, полиамидных полимеров и изоцианатных полимеров, а агент поперечного сшивания выбран из аминов, альдегидов, кислот и изоцианатов.

8. Ферментативный катализатор по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что покрытие содержит нитрилазу, полиазетидиновый полимер и глутаральдегид.

9. Ферментативный катализатор по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что покрытие содержит от 0 до 30% воды.

10. Ферментативный катализатор по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что период его полураспада составляет по меньшей мере 30 ч, предпочтительно по меньшей мере 70 ч.

11. Ферментативный катализатор по пп.1-10, отличающийся тем, что предназначен для применения в процессах ферментативного превращения.

12. Ферментативный катализатор по п.11, отличающийся тем, что предназначен для превращения 2-гидрокси-4-метилтиобутиронитрила в 2-гидрокси-4-метилтиобутаноат аммония.

13. Ферментативный катализатор по п.12, отличающийся тем, что предназначен для гидролиза NYLON 66.

14. Способ получения гранулированного ферментативного катализатора по п.1, предусматривающий получение суспензии ферментативного материала, полимера и агента поперечного сшивания и распыление ее на ядро с образованием покрытия толщиной от 100 до 250 мкм и отношением размера ядра к толщине покрытия от 3 до 15.

15. Способ по п.14, отличающийся тем, что ферментативным материалом является ферментативно активный клеточный осадок, который промывают перед приготовлением суспензии.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к ферментативному катализатору и, в частности, к ферментативному катализатору в гранулированной форме, причем гранулы снабжены покрытием, включающим фермент.

Известны композиции, содержащие иммобилизованные клетки, обладающие ферментативной активностью, например, из Европейского патента № 0089165, в котором раскрыта композиция, где покрытие, содержащее клетки E.coli, которые фиксированы с помощью поперечносшитого полимера, находится на инертном носителе. Упомянутую композицию используют для получения L-аспарагиновой кислоты. В Европейской патентной заявке № 0297912 также раскрыт биологически активный материал, который включает частицы с покрытием, причем покрытие содержит биологический материал и поперечносшитый полимер.

Авторы изобретения обнаружили, что гранулированный ферментативный материал с покрытием, обладающий определенной толщиной покрытия относительно внутреннего ядра гранулы, на которое нанесено покрытие, демонстрирует необычные положительные преимущества по сравнению с известными ферментативными каталитическими материалами.

В соответствии с этим настоящее изобретение относится к ферментативному катализатору в гранулированной форме, который не диспергируется в воде, при этом указанный катализатор включает внутреннее ядро, снабженное покрытием, которое содержит ферментативный материал, отличающийся тем, что покрытие имеет толщину от 30 до 400 микрон, а отношение размера ядра к толщине покрытия составляет от 2 до 20.

Ферментативный катализатор настоящего изобретения обеспечивает преимущество по сравнению с известным уровнем техники в том, что толщина покрытия регулируется, а образующийся гранулированный катализатор имеет более высокую каталитическую активность.

Настоящее изобретение относится к ферментативному катализатору в гранулированной форме, далее по тексту называемому гранулированным ферментативными катализатором. Катализатор не должен диспергироваться в воде, предпочтительно он должен быть нерастворимым в воде. Это свойство обеспечивает внутреннее ядро, которое не диспергируется в воде и предпочтительно является водонерастворимым. Подходящие материалы для использования в качестве внутреннего ядра включают оксид алюминия, кремнезем, цеолиты, смолы, такие жирные материалы как стеариновая кислота, стеклянные шарики и пластиковые шарики. Предпочтительно ядро состоит из оксида алюминия.

Ядро может иметь любую целесообразную форму, например в виде правильных или неправильных сфер, овалов и т.п., хотя предпочтительной формой является правильная сфера со средним диаметром от 0,1 до 5 миллиметров, предпочтительно - от 0,4 до 2,5 миллиметров. Ядро может быть макропористым, мезопористым или микропористым. Предпочтительно, ядро не является макропористым во избежание попадания ферментативного материала внутрь пор.

Покрытие ядра имеет толщину от 30 до 400 микрон, предпочтительно - от 100 до 250 микрон. Отношение размера ядра к толщине покрытия составляет от 2 до 20, предпочтительно - от 3 до 15. В целях настоящего изобретения размер ядра определяют как максимальный внутренний диаметр, а именно как самое большое расстояние между двумя наружными точками на периферической поверхности ядра.

Покрытие гранулированного катализатора включает ферментативный материал. Ферментативным материалом могут быть ферменты, растворимые или похожие на связанные с клеткой, микроорганизмы (неповрежденные или поврежденные клетки, жизнеспособные или нежизнеспособные), антитела, коферменты или их смеси. Особенно целесообразные ферментативные материалы включают глюкозоизомеразы, ацеилазы пенициллина, нитрилгидратазы, нитрилазы, амидеазы, липазы, протеазы и эстеразы. Предпочтительным ферментативным материалом являются нитрилазы.

Помимо ферментативного материала предпочтительно, чтобы покрытие дополнительно включало полимер и агент поперечного сшивания. Присутствие указанных соединений обеспечивает погружение ферментативного материала в пространственную сетку полимера. Упомянутая сетка позволяет решить одну из основных проблем, связанных с иммобилизацией, а именно предотвратить утечку желательных ферментов из иммобилизирующего материала. Поэтому полезно создать ограничивающий барьер, непроницаемый для высокомолекулярных соединений. Подходящими полимерами являются полиазетидиновые полимеры, полиаминные полимеры, такие как полиэтиленимин, такие полиамидные полимеры как протеины, изоцианатные полимеры или их смеси. Предпочтительным полимером является полиазетидиновый полимер, поскольку он обеспечивает хорошую механическую прочность слоя покрытия. Примерами полиазетидиновых полимеров, которые могут быть использованы, являются коммерчески доступные полимеры, такие как Polycup 2002, Kymene 617 и Kymene 450 (все торговые названия фирмы Hercules Inc., USA). Подходящие агенты поперечного сшивания включают амины, такие как гексаметилендиамин, такие альдегиды как глутаральдегид или акролеин, кислоты, такие как адипиновая кислота, изоцианаты, такие как гексаметилендиизоцианат. Предпочтительным агентом поперечного сшивания является глутаральдегид. Особенно предпочтительное покрытие для целей настоящего изобретения представляет смесь нитрилаз, полиазетидинового полимера и глутаральдегида.

Что касается количества ферментативного материала, полимера и агента поперечного сшивания в покрытии каталитического материала, то количество каждого компонента в сухом покрытии в подходящем случае составляет от 50 до 80%, предпочтительно - от 40 до 60% ферментативного материала; в подходящем случае от 5 до 20%, предпочтительно - от 10 до 15% полимерного материала и в подходящем случае от 1 до 5%, предпочтительно - от 2 до 3% агента поперечного сшивания. В покрытии также могут присутствовать дополнительные компоненты, такие как полиолы, например глюкоза, сукроза, трегалоза, мальтит, сорбит и глицерин, и/или соли, например фосфат. Они могут присутствовать в количестве от 0 до 35%. Покрытие также может включать определенное количество воды. В подходящем случае вода содержится в количестве от 0 до 30%, в расчете на покрытие.

Ферментативный катализатор настоящего изобретения может быть получен любым подходящим способом иммобилизации, известным специалистам в данной области, например гель-ловушкой или адсорбцией. Европейские патентные заявки 0297912, 0206687 и 0502035 раскрывают методику, согласно которой водную смесь, содержащую ферментативный материал, наносят абсорбцией на гранулы. Затем гранулы сушат. Альтернативным способом нанесения покрытия является способ, раскрытый в Европейском патенте 089165, который предусматривает получение пасты, содержащей ферментативный материал, нанесение пасты на гранулы, а затем сушку образующихся гранул.

Авторы настоящего изобретения установили, что гранулированные ферментативные катализаторы с покрытием также могут быть получены распылением на ядро смеси материала покрытия и, таким образом, в соответствии с другим аспектом, настоящее изобретение относится к способу получения ферментативного катализатора, описанного выше в данном описании, при этом способ включает получение водной суспензии ферментативного материала, полимера и агента поперечного сшивания и распыление указанной суспензии на ядро, в результате чего на указанном ядре образуется покрытие.

Получение ферментативного катализатора с покрытием с использованием распылительной методики, обычно называемой как "распылительное нанесение покрытия", обеспечивает преимущество по сравнению с известными методами иммобилизации в том, что толщину покрытия можно регулировать с достижением желательной толщины, это является важным отличительным признаком ферментативного катализатора настоящего изобретения.

Для получения гранулированного ферментативного катализатора с покрытием с использованием распылительного метода нанесения покрытия применяют водную суспензию ферментативного материала, полимера и агента поперечного сшивания. Ферментативный материал может быть использован непосредственно или может быть очищен перед его использованием в способе настоящего изобретения. Он может быть получен центрифугированием, фильтрованием, осаждением или флокуляцией. Ферментативный материал можно промыть водой или водным раствором, содержащим такую соль как хлорид натрия, фосфат, ЭДТА или соль магния. Предпочтительным исходным материалом является ферментативно активный клеточный осадок, полученный из ферментера и прошедший фильтрование или центрифугирование бульона для выращивания. Клеточный осадок может быть использован как таковой или он может быть промыт перед использованием. Клетки можно промыть разделительным фильтрованием или повторным суспендированием и центрифугированием.

Суспензия может включать 5-25% ферментативного материала, 1-12% полимера и 0,2-4% агента поперечного сшивания, указанные количества даны в расчете на общую массу водной суспензии. Количество воды в суспензии не является критическим параметром и может быть подобрано любым специалистом в данной области для материала, используемого для распыления. Предпочтительно используют суспензию с содержанием сухого остатка от 10 до 30% в расчете по массе к объему. Суспензия также может включать небольшие количества таких материалов как полиолы, например глюкозу, сукрозу, трегалозу, мальтит, сорбит и глицерин; и соли, например хлорид натрия.

Предпочтительно, хотя и не существенно, установить рН суспензии на величине между рН 5 и 9,5, наиболее предпочтительно - между рН 7,5 и 8,5. Чтобы сделать это, может быть использован буфер. В подходящем случае буфером может быть такой фосфат как моно- или дикалий фосфат или моно- или динатрий фосфат; или карбонат. Предпочтительным буфером является фосфатный буфер. Когда в суспензии содержится буфер, то добавляют от 15 до 50% (по массе) буфера относительно массы сухого остатка ферментативного материала.

Суспензия может быть получена любым подходящим способом. Предпочтительно суспензию готовят, сначала получая суспензию ферментативного материала либо в воде, либо в буфере. Затем к суспензии ферментативного материала может быть добавлен агент поперечного сшивания. Агент поперечного сшивания может быть оставлен в контакте с ферментативным материалом в течение времени, достаточного для протекания его взаимодействия с аминными, гидроксильными или карбоксильными функциональными группами ферментативного материала перед добавлением полимера. А перед осуществлением стадии распыления к суспензии могут быть добавлены такие необязательные агенты как полиолы, буфер и хлорид натрия.

В подходящем случае суспензию получают при температуре, находящейся в интервале между 0 и 50°С, и предпочтительно - в интервале между 10 и 35°С.

Затем полученную суспензию можно хранить без дополнительных мер предосторожности в течение нескольких дней перед распылением. Температура хранения преимущественно будет находиться в интервале между 0°С и комнатной температурой.

Суспензию можно нанести на ядро с помощью устройства для распылительного нанесения покрытий предпочтительно в слое псевдоожижающего воздуха. Расход воздуха подходящим образом регулируют, чтобы обеспечить хорошее псевдоожижение твердого носителя. Температуру входящего воздуха подходящим образом регулируют в интервале между 30 и 90°С, а скорость распыления водной суспензии регулируют так, чтобы поддерживать температуру слоя в интервале между 10 и 60°С, предпочтительно - в интервале между 20 и 40°С в течение всего процесса. Образующийся слой покрытия на ядре имеет толщину между 30 и 400 микронами.

Образующийся ферментативный катализатор, полученный согласно вышеупомянутому способу, до использования можно хранить в течение нескольких месяцев в воде, буферной среде или в сухом виде.

Гранулированные ферментативные катализаторы настоящего изобретения могут быть использованы в любом подходящем ферментативном способе. В частности, ферментативный катализатор настоящего изобретения может быть использован при конверсии 2-гидрокси-4-метилтиобутиронитрила (ГМТБН) в соответствующую соль аммония, а именно 2-гидрокси-4-метилтиобутаноат аммония (ГМТБС). Катализатор также может быть использован при гидролизе олигомеров NYLON 66. Особенное преимущество катализатора настоящего изобретения заключается в том, что он имеет больший период полураспада, чем другие известные каталитические катализаторы. В частности, гранулированный ферментативный катализатор с покрытием имеет период полураспада, по меньшей мере, 30 часов, предпочтительно - по меньшей мере, 70 часов.

Настоящее изобретение поясняется с помощью следующих примеров:

В следующих примерах используют следующие сокращения:

ГМТБН - 2-гидрокси-4-метилтиобутиронитрил

ГМТБС - 2-гидрокси-4-метилтиобутаноат аммония

Пример 1

1.1. Получение ферментативного катализатора:

Конструирование штамма E.coli BIOCAT 714

Фрагмент размером 1,27 т.п.н, содержащий Р trp-промотор, сайт связывания рибосомы cII-гена фага (RBScII) и ген нитрилазы от Alcaligenes faecalis ATCC8750 (nitB), выделяли из плазмиды pRPA6BCAT6 (патентная заявка WO 98/18941) c использованием рестрикционных ферментов EcoRI и XbaI, затем клонировали в векторе pXL642 (описанном в патенте США 5629190), раскрываемом теми же рестрикционными ферментами. Образующуюся плазмиду pRPA-BCAT15 раскрывали ферментами Stul и Bsml и фрагмент размером 4,3 т.п.н. лигировали с очищенным STul-Bsml-фрагментом размером 136 п.н. из pRPA-BCAT4 (патентная заявка WO 98/18941) с получением плазмиды pRPA-BCATT19. Частичное секвенирование pRPA-BCAT19 подтвердило замещение кодона для Asp279-остатка нитролазы кодоном для Asn279-остатка. EcoRI-Xbal фрагмент размером 1,2 т.п.н. из pRPA-BCAT19, содержащий слияние P_trp ::RBScII::nitB, затем клонировали в векторе pRPA-BCAT28, раскрытом теми же ферментами, с образованием плазмиды pRPA-BCAT29 размером 6,2 т.п.н. Вектор pRPA-BCAT28 получали лигированием Sspl-Scal-фрагмента размером 3,9 т.п.н. из pXL642 (CIP заявка № 08/194588) с Smal-фрагментом размером 2,1 т.п.н. из pHP45 Tc (Fellay et al., 1987, Gene 52:147-154), чтобы заместить маркер устойчивости к ампициллину маркером устойчивости к тетрациклину. Разрушением Ndel-сайта, близкого к началу репликации плазмиды pRPA-BCAT29, путем частичного расщепления с помощью Ndel и действия полимеразы I E.coli (Klenow фрагмент) получали плазмиду pRPA-BCAT41.

Плазмиды pRPA-BСAT41 и pXL2035 (Levy-Schill et al., 1995, Gene 161: 15-20) вводили в штамм W E.coli (ATCC9637) с помощью стандартной электропорации. Полученный клон называют BIOCAT 714.

Выращивание штамма:

Штамм W E.coli, содержащий нитрилазу из A.faecalis ATCC8750 (BIOCAT 714), выращивали в 100 литровом ферментере, содержащем 80 литров среды, чей состав представлен в таблице 1.

Таблица 1
Соединение	Концентрация в среде (г/л)
К2НРО 4	8
(NH4)2SO 4	0,75
MgSO4·7H2O	2,5
Сульфат железа	0,04
СаС1 2·2H2O	0,04
Сульфат марганца	0,0267
Хлорид кобальта	0,004
Сульфат цинка	0,013
Молибдат натрия	0,001
Хлорид меди	0,001
Борная кислота	0,00025
AlCl3	0,00125
Лимонная ·Н2О	1,7
Моногидрат глюкозы	2
L-триптофан	0,1
Экстракт дрожжей	3
Мясной пептон	5

рН среды поддерживали на величине 7,0 добавлением водного раствора аммиака. Насыщенность кислородом поддерживали на 20% добавлением воздуха со скоростью 1 объем/объем среды/минуту при перемешивании. Глюкозу первоначально добавляли при концентрации 2 г/л. Затем непрерывно вводили дополнительное количество глюкозы, используя маточный раствор концентрацией 700 г/л глюкозы и 19,6 г/л MgSO₄·7H ₂0. Скорость добавления составляла 2,2 г глюкозы/ч на л среды. После ферментации в течение 24 часов клетки извлекали центрифугированием. Пасту с содержанием сухого остатка 26% использовали непосредственно для иммобилизации.

950 г клеточного осадка после центрифугирования, содержащего 26,0% (по массе) «сухих» клеток, суспендировали в 571,5 г фосфатного буферного раствора концентрацией 1 моль/литр. Суспендирование осуществляли при комнатной температуре в реакторе, снабженном трехлопастной винтовой мешалкой. После суспендирования величина рН составляла 8,0.

Фосфатный буферный раствор концентрацией 1 моль/литр получали растворением 165,5 г K₂HPO₄ и 6,8 г KH₂PO₄ в одном литре деионизированной воды. Исходная величина рН этого раствора составляла 9,0.

164,6 г водного раствора глутаральдегида концентрацией 6 % (по массе) медленно добавляли к суспензии клеток. Полученную смесь оставляли при перемешивании минимум на 1 час при комнатной температуре перед добавлением 395,2 г водного раствора полиазетидина (Kymene 617) концентрацией 12,5 % мас. Таким образом получали суспензию клеток, состав которой представлен ниже в таблице 2.

Таблица 2
Компонент	Содержание сухого остатка (%)	Количество (г)	Сухой вес (г)	% от общего количества	г сухого ост./л (%)
Клеточный Осадок	26,0	950,0	247,0	11,9	14,7
Фосфатный буферный раствор	15,23	571,5	87	4,2	5,9
Раствор Глутаральдегида	6,0	164,6	9,9	0,5	0,6
Раствор полиазедитина	12,5	395,2	49,4	2,4	2,9
Всего		2081,3	404,6	19,4

1800 г упомянутой суспензии клеток распыляли на 350 г гранул оксида алюминия диаметром 2,0 мм, которые псевдоожижали в потоке горячего воздуха (температура на входе 53°С). Скорость распыления устанавливали таким образом, чтобы поддержать температуру гранул при 35°С. После распыления в течение 170 минут получали 841 г биокатализатора, содержащего 25,5% (по массе) сухих клеток и 16,6% остаточной воды. Толщина покрытия составила 330 микрон. Диаметр покрытых гранул составил 2,6 мм. Отношение размера гранул к толщине покрытия составило 7.

1.2. Каталитическое превращение ГМТБН в ГМТБС.

Активность указанного катализатора, измеренная при 25°С при рН 6,6 в присутствии 0,1 моль/л ГМТБН, составила 0,56 кг ГМТБН, превращенного в 2-гидрокси-3-метилтиобутаноат аммония (ГМТБС), в час и на кг катализатора.

Термостатируемую колонку с внутренним диаметром 3 см и длиной 45 см заполняли 100 г катализатора. Колонку снабжали насосом через рециркуляционную петлю. Общий объем реактора составлял 430 мл. Петлю заполняли 25%-ным раствором аммониевой соли ГМТБН. Раствор подавали в колонку сверху, который протекал вниз со скоростью 20 литров в час. В сдвоенной рубашке вокруг колонки циркулировала вода, чтобы поддерживать температуру при 35°С. Минеральную воду вводили в петлю со скоростью 40 граммов в час. Объем реактора поддерживали на постоянном уровне, удаляя избыток жидкости из основания колонки. Получали постоянный поток с конверсией 95% нитрила. Концентрация ГМТБС, выходящей из реактора, составляла 25%. Период полураспада при 35°С в присутствии 0,2 молей/л ГМТБН составлял 30 часов.

Пример 2

2.1. Получение ферментативного катализатора:

1100 г клеточного осадка после центрифугирования, содержащего 26% (по массе) «сухих» клеток и полученного, как описано в примере 1, суспендировали в 13, 2 кг водного раствора, содержащего 9 г/л хлорида натрия. Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут в реакторе с хорошим перемешиванием. Клетки извлекали центрифугированием.

950 г промытого клеточного осадка, содержащего 26% (по массе) «сухих» клеток, обрабатывали так, как описано выше в примере 1, в результате чего получали 1800 г обработанной суспензии. После распыления в течение 170 минут получали 850 г катализатора, содержащего 25,5% (по массе) «сухих» клеток и 17% остаточной воды. Толщина покрытия составила 190 микрон. Диаметр ядра составил 2,2 мм. Отношение размера ядра к толщине покрытия составило 11,6.

2.2 Каталитическое превращение ГМТБН в ГМТБС

Активность и период полураспада катализатора измеряли так, как описано в примере 1, при 35°С и рН 6,6 в присутствии 0,1 моль/л ГМТБН. Активность составила 0,5 кг ГМТБН, превращенного в 2-гидрокси-3-метилтиобутаноат аммония (ГМТБС), в час и на кг катализатора. Период полураспада составил 70 часов.

Пример 3

3.1. Получение ферментативного катализатора

Повторяли методику осуществления примера 1, за исключением того, что использовали полимерную матрицу, состоящую из 23% полиэтиленимина и 77% полиазетидина. Конечный состав суспензии клеток представлен ниже в таблице 3.

Таблица 3
Компонент	Содержание сухого остатка	Количество (г)	Сухой Вес	% от общей массы	Г сухого ост./л воды
Клеточный осадок	26,0	400,0	104,0	7,5	8,5
Фосфатный буферный раствор	6,9	600,0	41,4	3,0	3,4
Раствор глутаральдегида	3,0	139,0	4,2	0,3	0,3
Раствор полиазетидина	5,0	208,0	10,4	0,8	0,9
Раствор полиэтиленимина	8,0	39,0	3,1	0,2	0,3
Всего		1386,0	163,1	11,8

1300 г указанной суспензии клеток распыляли на 400 г гранул оксида алюминия в тех же рабочих условиях, что и в примере 2. После распыления в течение 130 минут получали 553 г катализатора, содержащего 17,6% (по массе) «сухих» клеток и 7,5% остаточной воды. Толщина покрытия составила 210 микрон. Диаметр ядра составил 2,2 мм. Отношение размера ядра к толщине покрытия составило 10.

Полученный катализатор использовали для конверсии ГМТБН в ГМТБС и получали такие же результаты, что и для других катализаторов, описанных выше.

Пример 4

4.1. Получение ферментативного катализатора с активностью полиамидазы:

134 г клеточной массы рекомбинанта Escherichia coli, содержащей активность полиамидазы, полученную, как подробно описано в патентной заявке Франции № 9508916, включенной в данное описание в качестве ссылки, суспендировали в 230 г фосфатного буфера (0,2 М, рН 8,0). Повторяли методику, описанную в примере 3, и 540 г суспензии клеток распыляли на 400 г гранул оксида алюминия в тех же рабочих условиях, что и в примере 1.

4.2. Каталитический гидролиз NYLON 66

Ферментативную активность измеряли в соответствии со способом патента Франции 95098016. Каталитическая активность, измеренная при 30°С и рН 7 в присутствии 5 г/л олигомеров NYLON 66, составила 140 г олигомеров NYLON 66, превращенных в адипиновую кислоту, в час и на литр катализатора. Период полураспада превысил 790 часов.

Сравнительный пример А

А.1. Получение ферментативного катализатора:

100 г суспензии клеток, полученной так, как описано в примере 1, распыляли на 350 г гранул оксида алюминия диаметром 2,0 мм, которые псевдоожижали в потоке горячего воздуха (температура на входе 53°С). Скорость распыления регулировали таким образом, чтобы поддерживать температуру гранул при 35°С. После распыления в течение 170 минут получали 385 г катализатора, содержащего 3% (по массе) «сухих» клеток. Толщина покрытия составила 20 микрон. Диаметр ядра составил 2 мм. Отношение размера ядра к толщине покрытия составило 100.

А.2. Каталитическое превращение ГМТБН в ГМТБС.

Активность и период полураспада биокатализатора измеряли так, как описано в примере 1, при 25°С и рН 6,6 в присутствии 0,1 моль/л ГМБТН. Активность составила 0,06 кг ГМТБН, превращенного в 2-гидрокси-4-метилтиобутаноат аммония (ГМТБС), в час и на кг катализатора. Период полураспада составил 11 часов.