средство, обладающее гепатопротекторным действием

Формула изобретения

Средство, обладающее гепатопротекторным действием, на основе экстракта растительного происхождения, отличающееся тем, что средство представляет собой содержащий до 50% полифенольных соединений продукт экстракции этанолом гребней аралии маньчжурской - Aralia mandshurica Rupr. et Maxim, семейства аралиевых - Araliaceae.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к биологическим составам на основе экстрактов растительного происхождения и может быть использовано в качестве гепатопротектора, а также средства, повышающего сопротивляемость организма к воздействию химических веществ техногенного происхождения, стрессовым ситуациям, алкогольным и лекарственным отравлениям.

В связи с прогрессирующим ухудшением экологической обстановки человек все более активно подвергается воздействию различных веществ техногенного происхождения. В нашей стране гигиеническое регламентирование охватывает в настоящее время около 2 тыс. вредных химических веществ, для которых установлено более 3 тыс. гигиенических нормативов предельно допустимого содержания в различных объектах окружающей среды. Влияние стрессовых ситуаций (гипо- и гипертермия, высокая физическая нагрузка, дыхание гипоксическими смесями, нахождение в зоне техногенных катастроф и др.), несбалансированное питание, алкоголизм настоятельно требуют поиска нетрадиционных подходов к фармакопрофилактике возникающих нарушений в организме. Известно, что основным барьером, нейтрализующим токсические загрязнения в организме человека и животных, является печень. Заболевания печени и билиарной системы составляют 40% в группе нозологических форм, относящихся к патологии пищеварительной системы.

В настоящее время ведется активный поиск средств, повышающих устойчивость печени к патологическим воздействиям, усиливающих ее обезвреживающие функции путем повышения активности ферментной системы, а также способствующих восстановлению ее функций при различных повреждениях, в том числе при алкогольной интоксикации.

В качестве средства, повышающего общую устойчивость организма, известен экстракт гребней винограда (а.с. №1473139, опубл. 10.09.1998).

Известно средство, обладающее антиалкогольным действием, полученное путем экстракции спиртом предварительно высушенных и измельченных гребней винограда (а.с. №1072309, опубл. 10.09.1998).

Известны также препараты, обладающие гепатопротекторным действием, в которых активным началом является группа флавоноидов, относящихся к классу растительных полифенольных соединений, выделенная из экстракта плодов расторопши пятнистой (Sylybum marianum L). На ее основе разработан ряд лекарственных препаратов, близких по составу и действию, которые производятся в разных странах под различными названиями: "Силимарин", "Силибор", "Силибинин", "Карсил" и др.

В качестве средств, обладающих гепатопротекторным эффектом за счет содержащихся в их составе флавоноидов, известны также экстракты из гребней калины (п. РФ №2177330, опубл. 27.12.2001 г.), лимонника китайского (п. РФ №2179031, опубл. 10.02.2002 г.) и экстракт биомассы Maackia amurensis Rupr.et Maxim (п. РФ №2244553, опубл. 20.01.2005).

Наиболее близким к заявляемому средству является известный, широко применяемый в медицине препарат "Легалон", содержащий в своем составе в качестве активного агента группу флавоноидов, выделенных из плодов расторопши пятнистой. Препарат «Легалон» (далее легалон) является эталонным гепатопротектором, который рекомендован официальными изданиями Фармакопейного комитета в качестве препарата сравнения при испытании новых средств, обладающих гепатопротекторными свойствами растительной природы (Венгеровский А.И., Маркова И.В. и др., Методические указания по изучению гепатозащитной активности фармакологических веществ // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Москва. 2000. С.228-231). Препарат выпускается в виде драже, капсул и суспензий.

Легалон обладает гепатопротекторным и антитоксическим действием. Механизм действия связан с ингибированием перекисного окисления липидов, вследствие чего происходит предотвращение разрушения клеточных мембран. В поврежденных гепатоцитах препарат стимулирует синтез белков и фосфолипидов, в результате чего происходит стабилизация клеточных мембран, предотвращается потеря компонентов клетки, например трансаминаз. Препарат препятствует проникновению в клетку некоторых гепатотоксических веществ. (Лекарственные препараты зарубежных фирм в России, М. - Астрафармсервис, 1993, с.350).

Задачей изобретения является расширение ассортимента гепатопротекторных средств.

Поставленная задача решается средством, обладающим гепатопротекторным действием, на основе продукта экстракции этанолом гребней аралии маньчжурской - Aralia mandshurica Rupr. et Maxim., семейства аралиевых - Araliaceae, содержащего до 50% полифенольных соединений.

Технический результат заключается в проявлении выраженного гепатопротекторного эффекта экстракта гребней аралии маньчжурской - Aralia mandshurica Rupr. et Maxim., семейства аралиевых - Araliaceae.

В качестве сырья для получения средства используют гребни маньчжурской аралии. По мнению авторов использование гребней связано с тем, что они являются той частью растения, которая, находясь между основным стеблем и плодами, содержащими наследственный материал, содержит наиболее высокие концентрации антиоксидантов, способных предохранять плоды от факторов неблагоприятного воздействия как со стороны материнского растения, так и со стороны окружающей среды.

Экстракт получают способом, обычным для приготовления экстрактов из растительного сырья (Муравьев И.А. Технология лекарств: Учебник в 2-х томах. Москва. Медицина. 1980. С.704). Для этого гребни аралии высушивают при температуре, не превышающей 40°С, и измельчают для ускорения и улучшения процесса экстракции. Измельченное сырье экстрагируют, как правило, 40% этанолом при соотношении сырья к экстрагенту 1:5.

Такие соотношения являются оптимальными, но не единственно возможными, поскольку экстракцию можно осуществлять этанолом с другой процентной концентрацией и при других соотношениях экстрагента и сырья, получая тот же качественный набор экстрактивных веществ, который и определяет гепатопротекторное действие средства. Сама же гепатопротекторная активность средства, в свою очередь, является суммарным действием как полифенольных соединений, так и других компонент, образующихся при экстракции заявляемого растительного сырья. Данное соотношение определяет только количество перешедших в экстракт активных компонент сырья.

Сухой остаток полученного экстракта по данным колориметрического метода с использованием реактива Фолина-Дениса содержит до 50% полифенольных соединений.

Готовое средство обладает низкой токсичностью (ЛД ₅₀ составляет 18 мл/кг) и не оказывает вредного действия при длительных введениях в желудок и парэнтерально, что позволяет провести экспериментальные исследования, показавшие выраженное гепатопротекторное действие экстракта на модели алкогольной интоксикации.

Эксперимент проводили по схеме, приведенной в работе Gajdos А. с соавторами ("Effet curatif de la(+)-catechine sur les troubles biochimigues du foie de rat intoxique par l'ethanol", C.R.Seances Soc. Biol.Fil, v.166, No.2, p.277-279), а в качестве препарата сравнения использовали легалон.

Эксперимент проводили на крысах-самцах Вистар массой тела 130-180 г, содержавшихся на стандартном рационе питания. Экстракт из гребней аралии животным вводили перорально после последнего дня введения этанола в дозе 0,2 мл на 100 г массы ежедневно в течение 7 дней. Для исключения влияния этанола исходный экстракт гребней аралии упаривали в вакуумном испарителе при температуре не выше 37°С до 2/3 объема, а затем доводили дистиллированной водой до первоначального объема. Обработанный таким способом экстракт гребней аралии использовали в эксперименте. Легалон вводили по этой же схеме в виде взвеси в 1% крахмальном клейстере в дозе 100 мг/кг массы тела. Выбор дозы для препарата сравнения осуществляли на основе литературных данных (Венгеровский А.И., Марков И.В. и др., Доклиническое изучение гепатозащитных средств/ Ведомости Формкомитета. 1999. №2, С.9-12). Этанол вводили внутрибрюшинно 2 раза в сутки в дозе 7,5 мл на 1 кг массы тела животного в течение 7 дней. Животные были разделены на следующие группы: 1-я - контрольная (интактные); 2-я - введение 33% этанола; 3-я - введение 33% этанола в течение 7 дней с последующей отменой (депривация) в течение 7 дней; 4-я - ведение легалона после 7-дневной алкоголизации; 5-я - введение экстракта из гребней аралии после 7-дневной алкоголизации. Через 14 дней после начала эксперимента крыс выводили из эксперимента декапитацией и определяли биохимические показатели в печени и плазме крови.

Анализ полученных данных по воздействию этилового спирта на биохимические параметры печени крыс показывает, что в содержании фракций нейтральных липидов отмечется достоверное увеличение триацетилглицерина (ТАГ) на 4,0% (20,50±0,23% против 19,69±0,24% в контроле, Р<0,05) и свободных жирных кислот (СЖК) на 15% (17,25±0,27% против 14,67±0,34% в контроле, Р<0,001) (табл.1).

Эти изменения обусловлены усилением периферического липолиза (стрессовая реакция на этанол), в результате которого происходит поступление жирных кислот и глицерина в печень из жировой ткани, с последующей их реэтерификацией в ТАГ, при одновременном снижении способности синтеза фосфолипидов. Подтверждением этого является уменьшение содержания общих фосфолипидов на 24% (52,46±2,00% против 68,70±2,17 в контроле, Р<0,001), что в дальнейшем может приводить к жировому перерождению печени (Lieber С.S.Metabolism of Alcohol/ Clinics in liver disease. 2005. Vol.9, N 1, P.1-35). Увеличение холестерина (ХС) на 13% (18,01±0,23% против 15,99±0,42% в контроле, Р<0,001) связано с усилением его синтеза из ацетил-КоА, образовавшегося при окислении этанола. Уменьшение количества эфиров холестерина (ЭХС) на 14% (16,75±0,89% против 19,42±0,61% в контроле, Р<0,05) обусловлено специфическим ингибированием этанолом активности ацил-КоА: холестерин-ацилтрансферазы (АХАТ) (Carrasco M.P., Segovia J.L., Marco С.Incorporation of exogenous precursors into neutral lipids and phospholipids in rat hepatocytes: effect ofethanol in vitro/ Biochem Pharmacol. 1998. Vol.56, N 12, P.1639-1644).

Анализ фракционного состава фосфолипидов показывает достоверное уменьшение основных структурных компонентов мембран фосфатидилхолина (ФХ) - на 11% (43,70±1,25% против 48,46±0,58% в контроле, Р<0,01) и фосфатидилэтаноламина (ФЭ) на 13% (22,92±1,34% против 26,36±0,86% в контроле, Р<0,05) при одновременном увеличении содержания соответствующих лизофракций фосфолипидов (ЛФХ) - на 80% (4,55±0,16% против 2,53±0,13% в контроле, Р<0,001) и лизофосфотидилэтаноламинов (ЛФЭ) на 67% (4,51±0,25 против 2,70±0,20 в контроле, Р<0,001). Это обусловлено активированием фосфолипазы A ₂ под действием этанола (Zheng Z., Barkai A.I. et al., Effects of ethanol on the incorporation of free fatty acids into cerebral membrane phospholipids/ Neurochem Int. 1996. Vol.28, N 5-6, P.551-555). При этом возросло количество сфингомиелина (СМ) на 54% (8,94±0,61% против 5,82±0,46% в контроле, Р<0,01), что является защитной реакцией организма на флюидизацию мембран этанолом (Ridgway, 2000). Отмечались изменения в содержании метаболически активных фракций. Так, количество ФИ увеличилось на 28% (5,70±0,23% против 4,44±0,33% в контроле, Р<0,01), а ФС, наоборот, уменьшилось на 19% (3,08±0,19% против 3,81±0,26% в контроле, Р<0,05). Содержание дифосфатидилглицерола (ДФГ) увеличилось на 19% (5,03±0,27% против 4,24±0,22% в контроле, Р<0,05), что по нашему мнению обусловлено, с одной стороны, увеличением содержания глицерина, который необходим для синтеза ДФГ, а с другой увеличением размеров митохондрий под действием этанола (Wakabayashi Т. Megamitochondria formation - physiology and pathology/ J.Cell.Mol.Med. 2002. Vol.6, N 4, P.497-538).

Такая разбалансировка в липидном составе печени крыс обусловливает увеличение проницаемости мембран и изменение активности мембраносвязанных ферментов (Zerouga M., Beauge F. Rat synaptic membrane fluidity parameters after intermittent exposures to ethanol in vivo/ Alcohol. 1992. Vol.9, N 4, P.311-315). Подтверждением этого вывода является увеличение в плазме крови активности аланинаминотрансферазы (АлАТ) на 75% (Р<0,001) (табл.2), являющегося показателем цитолиза гепатоцитов.

Мембраноповреждающее действие этанола распространялось и на субклеточные мембраны, что сопровождалось достоверным снижением активности мембраносвязанной лизосомальной -глюкозидазы на 18% (Р<0,05). Увеличение активности цитозольной -галактозидазы на 13% (Р<0,05) обусловлено увеличением проницаемости мембран лизосом и выходом матричного фермента. В биохимическом механизме подобной ферментной дезорганизации и модификации мембранных фосфолипидов немаловажное значение имеет и инициируемое этанолом перекисное окисление липидов (ПОЛ) (Rouach H., Fataccioli V. et al., Gentil M., French S.W., Morimoto M., Nordmann R.Effect of chronic ethanol feeding on lipid peroxidation and protein oxidation in relation to liver pathology/ Hepatology. 1997. Vol.25, N 2, P. p351-355). Количество малонового альдегида (МДА) возросло на 35% (Р<0,001), которое составило 92,9±1,4 нмоль/г (в контроле 68,9±1,7 нмоль/г, Р<0,001). Образование супероксиданионов в результате активации микросомальных фрементов монооксигензаной системы (Albano E., French S.W. et al., Hydroxyethyl radicals in ethanol hepatotoxicity/ Front Biosci. 1999. Vol.15, N 4, P.D533-D540) при интоксикации этанолом способствовало увеличению активности супероксиддисмутазы (СОД) до 344,9±13,0 ед/мг белка (108,5±11,0 ед/мг белка в контроле). При этом, достоверно снизилось содержание восстановленного глутатиона (Г-SH) на 18% (Р<0,001) и активность глутатионредуктазы (ГР) на 60% (Р<0,001). Полученные результаты свидетельствуют о рассогласовании системы антиоксидантной защиты (АОЗ), а также антирадикальной защиты (образование гидроксиэтильных свободных радикалов), на что указывает снижение общего показателя потенциала антиокислительной системы печени - антирадикальной активности (АРА) на 64%, которая составляла 227±15 ед/мг белка (в контроле 373±33 ед/мг белка; Р<0,01).

Известно, что острая алкогольная интоксикация сопровождается активацией челночных механизмов внемитохондриального окисления восстановленного никотинамидадениндинуклеотида (НАДН) в в окисленный никотинамидадениндинуклеотид (НАД ⁺) (Lieber C.S., Role ofoxidative stress and antioxidant therapy in alcoholic and nonalcoholic liver diseases/ Adv Pharmacol. 1997. Vol.38, N, P.601-628). Полученные нами данные по содержанию НАД⁺ в печени (снижение на 49%; Р<0,001) полностью совпадают с известными в литературе. Снижение пула НАД⁺ сопровождалось ростом лактата (увеличение на 42%; Р<0,001), что является компенсаторной реакцией (пируват-лактатный челночный цикл) для реокисления НАДН в НАД⁺ .

Таким образом, экспериментальные данные свидетельствуют о том, что при интоксикации этиловым спиртом развивается выраженный гепатотоксический эффект, который проявляется в виде существенных сдвигов в липидном и углеводном обмене, в разбалансировке ферментных систем, а также нарушении антиоксидантного и антирадикального статуса организма.

Через 7 дней после отмены этанола (3-я группа, период депривации) большинство биохимических параметров к норме не возвращается. На уровне показателя 2-й группы остается содержание ТАГ (20,60±0,34% против 19,69±0,24% в контроле, Р<0,05). Еще больше выросло содержание СЖК, которое превышает контрольные показатели на 34% (19,63±1,10% против 14,67±0,34% в контроле. Р<0,001), что свидетельствует о том, что жировая инфильтрация не устраняется (табл.1). Количество общих фосфолипидов (ФЛ) оставалось сниженным на 13% (60,28±2,19%, Р<0,05). Уменьшение количества ХС до 15,69±0,93% (на 23% меньше, чем во 2-й группе) обусловлено отсутствием избытка ацетил-КоА, который образуется при окислении этанола. В то же время количество ЭХС снизилось до 14,44±1,42% (на 14% меньше, чем во 2-й группе), то есть активность АХАТ при отмене этанола в течение 7 дней не восстановилась.

Анализ фракционного состава фосфолипидов в период отмены этанола показывает, что содержание ЛФХ остается все еще выше контрольного уровня на 41% (3,57±0,15% против 2,53±% в контроле, Р<0,01) (табл.3), что свидетельствует о сохранении высокой фосфолипазной активности. Еще меньше стало количество ФС (2,74±0,33%), что составляет 72% (Р<0,05) от контрольного уровня. Обращает на себя внимание резкое снижение на 19% (3,42±0,14% против 4,24±% в контроле, Р<0,01) количества ДФГ по сравнению с контролем (во 2-й группе его количество было выше контроля на 19%).

Следует отметить факт еще большего снижения активности мембраносвязанной -глюкозидазы до 0,12±0,013 ммоль/г/мин по сравнению с контролем (Р<0,01), что свидетельствует о нарушении структурной целостности лизосомальных мембран и их проницаемости. Проницаемость мембран гепатоцитов также не восстанавливалась в период депривации, о чем свидетельствует повышенная на 42% (1,15±0,05 мкмоль/мл/час против контроля 0,81±0,03 мкмоль/мл/час; Р<0,001) активность АлАТ в плазме крови.

В период депривации сохранялось рассогласование ферментов антиоксидантной защиты. Так, активность СОД оставалась на уровне показателей 2-й группы (в 3 раза выше контрольного уровня) (табл.2). Пул восстановленного глутатиона стал еще меньше и был на 28% (Р<0,001) ниже контрольных величин. Это обусловлено более низкой активностью основного фермента его обмена ГР на 55% (Р<0,01) по отношению к контролю. Количество МДА было выше на 23% (84,9±1,9 нмоль/г против 68,9±1,7 нмоль/г в контроле; Р<0,001), чем у интактных животных, что обусловлено сохранением высокой активности ПОЛ. Все эти факторы являются результатом низкого антиоксидантного статуса организма, в пользу чего свидетельствует низкий уровень АРА в печени, который был на 35% ниже (Р<0,01) по сравнению с контрольными величинами.

Таким образом, отмена этанола в течение 7 дней сопровождается неполным восстановлением функционального состояния печени крыс. По мнению авторов, период отмены токсического агента является стрессом для организма, так как возросли величины изменений некоторых изученных биохимических показателей, которые были отмечены в период интоксикации этанолом.

При введении животным экстракта из гребней аралии, а также гепатопротектора легалона в период отмены этанола отмечается нормализация исследуемых биохимических показателей в печени. Было выявлено, что полученный биологический эффект влияния исследуемых препаратов, в общем, идентичен, но, в ряде случаев, имеет разную степень выраженности.

При сравнении фракционного состава нейтральных липидов (НЛ) в печени 4-5 групп с таковыми величинами в 3-й группе (депривация) отмечалось снижение количества ТАГ, в среднем, на 15-27% (Р<0,01-0,001), что составляло 17,5±1,21% (аралия) и 15,04±0,95% (легалон) против 20,6±0,34% при депривации (табл.1). Аналогичная направленность изменений прослеживалась в содержании СЖК, величина которых была снижена в печени крыс 4-5 групп, в среднем на 21-24% (Р<0,05-0,001). Так, в группе крыс, получавших экстракт из гребней аралии, количество СЖК - 15,03±0,71%, а при введении легалона - 15,11±0,59%, по сравнению с 19,63±1,10% при депривации. То есть как легалон, так и заявляемое средство, вводимые животным в период отмены этанола, снимают состояние стресса, что обусловливает торможение липолиза в жировой ткани и препятствует накоплению ТАГ в печени.

Таким образом, оба растительных препарата - и легалон, и экстракт гребней аралии, дают выраженный гепатопротекторный эффект, проявляющийся в снятии жирового перерождения печени.

Введение экстракта гребней аралии способствовало увеличению содержания ЭХС, которое возросло на 53% (Р<0,001) по сравнению с 3-й группой. Легален также способствовал увеличению содержания ЭХС на 52% (Р<0,01) по сравнению с группой депривации (табл 1). Содержание ЭХС в печени животных, получавшей экстракт из гребней аралии, на 14% (Р<0,01-0,05) превышал таковой уровень в группе интактных животных. Повышение уровня ЭХС свидетельствует о восстановлении этерифицирующей функции печени под действием полифенольного комплекса исследуемых препаратов.

Оба препарата способствовали восстановлению до уровня интактного контроля содержания основных структурных компонентов мембран (ФХ и ФЭ) при одновременной нормализации содержания соответствующих лизофракций (ЛФХ и ЛФЭ). При сравнении величин ЛФХ и ЛФЭ в печени крыс 4-5 групп с таковыми в 3-й группе (депривация), выявлено их достоверное снижение на 28-40% (Р<0,05) для ЛФХ и на 15-18% (Р<0,05) для ЛФЭ (табл.3). Известно (Lindahl М, Tagesson С Flavonoids as phospholipase A2 inhibitors: importance of their structure for selective inhibition of group II phospholipase A2/ Inflammation. 1997. Vol.21, N 3, P.347-356), что флавоноиды ингибируют фосфолипазу А и тем самым перпятствуют разрушению фосфолипидов.

В обеих группах, получавших препараты, на уровне интактных величин сохранялось содержание метаболически активных фракций фосфолипидов (ФЛ) - дифосфатидилглицерола (ДФГ) и фосфатидилсерина (ФС).

Обращает на себя внимание факт повышения концентрации фосфатидной кислоты (ФК) и фосфатидилиноситола (ФИ) по отношению к контролю на 20-28% (Р<0,05) в группе, получавшей экстракт из гребней аралии. Этот феномен обусловлен синтезом фосфолипидов из ТАГ для восстановления структуры мембран, нарушенных этанолом. Усиление синтеза метаболически активной ФК может быть вполне допустимо. В пользу данного факта свидетельствует и увеличение содержания ОФЛ в среднем на 16% (Р<0,01) по сравнению с 3-й группой (депривация). В 4-й группе (легалон) содержание ФК было ниже на 38% (Р<0,01), чем в 3-й группе и у интактных животных. Данный феномен, наряду с фактом недостоверного увеличения количества ОФЛ на 8% (65,53±2,36%), указывает на использование ФК для их биосинтеза, который активируется под действием полифенолов легалона, без увеличения биосинтеза самой ФК.

Таким образом, как экстракт из гребней аралии, так и легалон, вводимые животным в период отмены этанола, способствуют активации биосинтетических реакций фосфолипидов из триацилглицерина, что в свою очередь приводит к ликвидации жировой инфильтрации печени, обусловленной его накоплением. Кроме того, восстановление метаболических реакций синтеза фосфолипидных фракций и поддержание их соотношения определяет мембранопротекторный эффект исследуемых растительных препаратов. Подтверждением этого является восстановление до контрольного уровня активности -глюкозидазы, прочно связанной с мембраной лизосом и -галактозидазы, локализованной в матриксе лизосом, во всех группах, получавших гепатопротекторы (табл.2). Отмечается снижение до уровня контроля активности АлАТ, что также указывает на нормализацию проницаемости мембран гепатоцитов, увеличенной под действием этанола.

Исследование биохимических параметров системы АОЗ печени животных 4-й- 5-й групп показало, что оба препарата одинаково эффективно препятствовали накоплению в печени МДА (снижение на 18%, Р<0,001) по сравнению с таковым показателем в 3-й группе, что свидетельствовало о нормализации уровня ПОЛ. Это обусловлено тем, что растительные полифенолы являются ловушками свободных радикалов (Rice-Evans C.A., and Miller N.J. Antioxidant activities of flavonoids as bioactive components of food/ Biochem Soc Trans. 1996. Vol.24, N 3, P.829-835), чем способствуют снижению активности СОД, которая в печени животных 5-й группы достоверно не отличалась от контрольных показателей. При этом в группе, получавшей легалон, активность СОД оставалась на 50% выше контрольной величины (табл.2).

При определении активности ГР наблюдали сходную картину. Так, в 5-й группе активность ГР достоверно не отличалась от контрольного значения, превышая при этом таковую в 3-й группе в 2 раза (Р<0,001), тогда как в 4-й группе (легалон), она хотя и была выше, чем в группе «чистой» депривации, но составляла 65% (Р<0,05) от контрольного значения. Величина восстановленного глутатиона превышала соответствующий показатель у животных 3-й группы на 36% (Р<0,001). Более низкая активность ГР в 4-й группе, очевидно, послужила причиной менее эффективного восстановления пула восстановленного глутатиона, содержание которого хотя и превышало на 29% (Р<0,001) таковое в 3-й группе, но тем не менее оставалось на 9% (Р<0,05) ниже контрольного показателя. Все это определило более высокие значения АРА печени у животных 5-й группы. Этот показатель восстановился до уровня контроля, превышая таковой в 3-й группе на 54% (Р<0,001). В печени крыс, получавших легалон, АРА оставалась на уровне величины у животных 2-й группы, что на 65% ниже контрольного значения (Р<0,01). При этом АРА при введении легалона оставалась на уровне 2-й группы, но на 40% (Р<0,01) ниже контрольной величины.

Введение легалона и экстракта из гребней аралии сопровождалось увеличением пула окисленной формы НАД+ по сравнению с показателями 3-й группы (депривация). При этом следует отметить факт повышенного на 19% (Р<0,05), по сравнению с контролем, содержания НАД+ в печени животных, получавших экстракт из гребней аралии. При введении легалона эта величина соответствовала контрольному уровню.

В печени животных 5-й группы концентрация молочной кислоты соответствовала контрольным значениям, но была ниже, в среднем, на 22% (Р<0,001) таковой величины в 3-й группе. При введении легалона эта величина достоверно не отличалась от таковой в 3-й группе и была на 17% (Р<0,05) выше, чем у интактных животных, что указывает на протекание процессов анаэробного гликолиза и сохраняющееся состояние тканевой гипоксии.

Факт восстановления уровня антирадикальной активности печени, пула восстановленного глутатиона, концентрации лактата и более высокого содержания НАД+ свидетельствует о регуляции окислительно-восстановительного баланса в организме под действием полифенолов гребней аралии, которые эффективно инактивируют свободные радикалы. Благодаря этому увеличивается уровень НАД+. Поскольку полифенолы обладают и протонофорными свойствами, у исследуемого препарата возникает возможность формирования пула восстановленного глутатиона.

Полученные нами экспериментальные результаты свидетельствуют о том, что экстракт из гребней аралии, содержащий полифенольный комплекс, проявляет выраженное антитоксическое действие при поражении этиловым спиртом. Они способствуют ускоренному восстановлению каскадов метаболических реакций, обеспечивая нормализацию биохимических показателей углеводного и липидного обмена, а также системы антиоксидантной защиты.

Механизм терапевтического действия заявляемого средства обусловлен благоприятным влиянием полифенолов на нарушение токсикантом метаболизма и функций печени, что выражается в ингибировании свободнорадикальных реакций и уменьшении образования токсических продуктов липопероксидации; поддержании уровня восстановленного глутатиона и антирадикальной активности печени; восстановлении пула НАД+, снижении ацидоза и тканевой гипоксии; стабилизации мембран лизосом и гепатоцитов за счет регуляции синтеза холестерина, его этерификации и включения в структуру мембран; нормализации этерифицирующей функции печени.

При этом следует отметить, что заявляемого средства превосходит эталонный гепатопротектор легалон по способности восстанавливать биосинтетические процессы фосфолипидного обмена, увеличивать антирадикальную активность печени, образование НАД+ и нормализации пула восстановленного глутатиона.

В качестве факторов химической природы был избран, помимо этилового спирта, тиопенталовый наркоз. Тиопентал вводили крысам внутрибрюшинно в дозе 60 мг на кг массы тела через 2 часа после внутрижелудочного введения легалона (100 мг на кг массы тела) или экстракта из гребней аралии (0,2 мл на 100 г массы). В контрольной группе погибла 1 крыса. Во 2-й и 3-й группах гибели не было. Как видно из таблицы 4, предварительное введение препаратов сопровождается снижением времени бокового положения, что указывает на активацию монооксигеназной системы, осуществляющей биотрансформацию ксенобиотиков. Действие экстракта из гребней аралии и легалона было идентичным.

Таким образом, исходя из полученных экспериментальных данных, следует:

1. Экстракт из гребней аралии обладает выраженным гепатопротекторным действием как при алкогольном поражении печени, так и при введении тиопентала.

2. Механизм терапевтического действия экстракта из гребней аралии обусловлен его благоприятным влиянием на нарушения метаболизма и функцию печени под действием токсиканта:

- ингибирует свободнорадикальные реакции, повышает интегральную антирадикальную активность печени и уменьшает образование токсических продуктов липопероксидации;

- стабилизирует мембраны лизосом и тормозит выход в цитоплазму гепатоцитов мембранотропных гидролаз;

- нормализует структуру гепатоцитов за счет регуляции синтеза холестерина, его этерификации и включения в структуру мембран;

- нормализует этерифицирующую функцию печени, характеризующуюся синтезом фосфолипидов из триацилглицерина;

- восстанавливает пул окисленного НАД⁺, снижая ацидоз и повышая активность процессов энергообеспечения за счет активации аэробного гликолиза.

- обеспечивает необходимую концентрацию восстановленного глутатиона в системе антиоксидантной защиты печени, за счет протонофорных свойств

3. Исследованный экстракт из гребней аралии превосходит эталонный гепатопротектор легален по способности восстанавливать биосинтетические процессы фосфолипидного обмена, увеличивать образование НАД+ и нормализации пула восстановленного глутатиона, а также увеличивать антирадикальную активность печени.

Таким образом, заявляемое средство позволяет расширить ассортимент гепатопротекторных средств, при этом находят применение новые источники полифенольных соединений, в частности, дикорастущие виды растений непищевого назначения Дальнего Востока.

Таблица 1.
Влияние растительных препаратов на содержание общих фосфолипидов (в % от общих липидов) и нейтральных липидов (в % от суммы фракций) в печени крыс при поражении этиловым спиртом. (М±м).
Биохимические параметры	1 группа -Контроль (интактные)	2 группа Этанол	3 группа Депривация	4 группа Депривация + легален	5-я группа Депривация + эк ст. аралии
Общие фосфолипиды	68,70±2,17	52,46±2,00***	60,28±2,19*	65,53±2,36	l)67,95±2,15
Триацилглицерины	19,69±0,24	20,5±10,23*	20,60±0,34*	3)15,0,4±0,95***	2)17,5±1,11*
Свободные жирные кислоты	14,67±0,34	17,25±0,27***	19,63±1,10***	3)15,11±0,59	2)15,03±0,71
Эфиры жирных кислот	16,82±1,62	16,30±1,11	16,18±1,56	17,56±1,90	16,45±1,31
Холестерин	15,99±0,42	18,01±0,23***	15,69±0,93	16,79±0,74	16,26±0,70
Эфиры холестерина	19,42±0,61	16,75±0,89*	14,44±1,42**	2)22,00±1,29	3)22,15±1,10*
Остаточная фракция	13,41±0,67	11,19±0,29	13,46±0,47	13,50±0,96	12,61±0,88
Примечание. Достоверные различия с контролем: * - Р<0,05; ** - Р<0,01; *** - Р<0,001; с 3-й группой 1) - Р<0,05; 2) - Р<0,01; 3) - Р<0,001.

Таблица 2.
Влияние растительных препаратов на биохимические показатели печени крыс при поражении этиловым спиртом (М+м).
Биохимические параметры	1 группа Контроль (интактные)	2 группа Этанол	3 группа Депривация	4 группа Депривация + легалон	7 группа Депривация + экстракт гребней аралии
МДА (нмоль/г)	68,9±1,7	92,9±1,4***	84,9±1,9***	3)69,7±1,2	3) 68,7±1,2
Г-SH (мкМ/г)	7,1±0,15	5,8±0,09***	5,1±0,16***	3) 6,6±0,16*	3)6,94±0,25
АА (ед/мг белка)	373±33	227±15**	244±25**	227±20**	3)375±19
-глюкозидаза (мкмоль/г/мин)	0,17±0,01	0,14±0,01*	0,12±0,013**	2)0,18±0,01	2)0,17±0,01
-галактозидаза (мкмоль/г/мин)	0,395±0,02	0,446±0,01*	0,420±0,01	2)0,340±0,02	2)350±0,02
СОД (ед/мг белка)	108,5±11,0	344,9±13,0***	314,5±12,3***	3)162,6±11,8**	3)125±9,6
ГР (нмоль/мин/мг белка)	1,31±0,15	0,51±0,08***	0,59±0,09**	0,86±0,13*	3)1,25±0,05
АлАТ мкмоль/мл/час	0,81±0,03	1,42±0,02***	1,15±0,05***	3)0,83±0,01	3)0,80±0,02
НАД+ (мкмоль/г)	0,51±0,04	0,26±0,03***	0,28±0,04**	3)0,52±0,03	3)0,61±0,02*
Лактат (мкмоль/г)	6,45±0,09	9,13±0,35***	8,03±0,36***	7,55±0,44*	3)6,25±0,21
Примечание. Достоверные различия с контролем: * - Р<0,05; ** - Р<0,01; *** - Р<0,001; с3 3-й группой 1) - Р<0,05; 2) - Р<0,01; 3) - Р<0,001..

Таблица 3.
Влияние растительных препаратов на фосфолипидный состав печени крыс при поражении этиловым спиртом (в % от суммы всех фракций (М±м).
Фракции фосфолипидов	1 группа Контроль (интактные)	2 группа Этанол	3 группа Депривация	4 группа Депривация + легалон	5 группа Депривация + экстракт гребней аралии
Фосфатидилхолин	48,46±0,58	43,70±1,25**	47,83±1,90	47,90±1,05	48,15±1,02
Лизофосфатидилхолин	2,53±0,13	4,55±0,16***	3,57±0,15**	3)2,14±0,21	3)2,5±0,16
Сфингомиелин	5,82±0,46	8,94±0,61**	5,60±0,13	5,56±0,38	5,50±0,22
Фосфатидилэтаноламин	26,36±0,86	22,92±1,34*	27,86±2,20	27,70±1,01	26,08±,89
Лизофосфатидилэтаноламин	2,70±0,20	4,51±0,25***	2,90±0,11	2,75±0,15**	2,65±0,13***
Фосфатидилсерин	3,81±0,26	3,08±0,19*	2,74±0,33*	1)3,95±0,28	1) 3,68±0,16
Фосфатидилинозит	4,44±0,33	5,70±0,23**	4,40±0,13	3)5,80±0,23**	3)5,65±0,19**
Фосфатидная кислота	1,64±0,14	1,57±0,18	1,68±0,19	2)1,05±0,07**	1,98±0,07*
Дифосфатидилглицерин	4,24±0,22	5,03±0,57	3,42±0,14**	4,15±0,39	1)4,75±0,28
Примечание. Достоверные различия с контролем: * - Р<0,05; ** - Р<0,01; *** - Р<0,001; с 3-й группой 1) - Р<0,05; 2) - Р<0,01; 3) - Р<0,001.

Таблица 4.
Влияние растительных препаратов на величину времени тиопенталового наркоза (мин; М±м).
1-я (контроль)	2-я (легален)	3-я (экстракт из гребней аралии)
54,1±2,28	43,2±2,44*	42,5±2,57*
Примечание. Достоверные различия с контролем: * - Р<0,05;