способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии

Формула изобретения

Способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии, включающий отбор пробы, экстракцию, фильтрацию, дегидратацию натрия сульфатом безводным, упаривание, нанесение растворенного сухого остатка на хроматографическую пластинку, разгонку в системе подвижных растворителей гексан:ацетон (4:3), обработку раствором ортотолидина с последующим облучением ультрафиолетовыми лучами в течение 3-5 мин, обработку результатов анализа, отличающийся тем, что в качестве пробы берут навеску органов или тканей животных массой от 50 до 200 мг, экстракцию проводят ацетоном, растворенный сухой остаток наносят на пластины для тонкослойной хроматографии «Сорбфил».

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарной токсикологии и санитарии, а именно к определению остаточных количеств инсектицида в органах и тканях животных при подозрении на отравление имидаклопридом, а также в продуктах животного происхождения.

Известен способ определения имидаклоприда в яблоках, сливах и винограде, включающий экстракцию имидаклоприда хлороформом, последующую очистку экстрактов от коэкстрактивных веществ смесью ацетона с гексаном на колонке с оксидом алюминия, выпаривание, нанесение элюента ацетоном на пластинки для хроматографии «Силуфол» или «Сорбфил» с последующей разгонкой в разных системах подвижных растворителей, идентификацию реагентами ортотолидином либо раствором бромфенолового синего и лимонной кислоты. Диапазон определяемых концентраций 0,2-0,5 мкг, предел обнаружения 0,07 мг/кг. Процент определения составляет 73-84% [Методические указания по определению имидаклоприда в яблоках, сливах и винограде методом тонкослойной хроматографии. Сборник № 30. - Киев, 2001. - С.63-68].

Недостатками данного способа являются его трудоемкость и длительность, затрудняющие воспроизведение указанной чувствительности. Использование большой навески способствует образованию большого количества коэкстрактивных веществ, мешающих проведению анализа и требующих включение этапа очистки экстракта, что ведет к снижению чувствительности метода и увеличению времени для проведения анализа.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому способу является метод определения имидаклоприда в картофеле, огурцах, томатах и томатном соке. 25 г измельченной средней пробы анализируемого образца помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 мл, приливают 50 мл смеси ацетон+вода (9+1, об.+об.) и перемешивают на аппарате для встряхивания в течение 30 минут. Полученный экстракт фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр «синяя лента» в колбу Бунзена. Экстракцию повторяют дважды порциями по 50 мл смеси ацетон+вода (9+1, об.+об.). Остаток на фильтре промывают 20 мл ацетона. Объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе при температуре водяной бани 40°C до объема 50 мл. Остаток помещают в делительную воронку вместимостью 250 мл, приливают 50 мл насыщенного водного раствора хлорида натрия, 50 мл хлороформа и энергично встряхивают в течение 3 минут. Отделяют нижний слой хлороформа. Экстракцию повторяют дважды, порциями хлороформа по 30 минут. Хлороформный экстракт сушат настаиванием над натрием сульфатом безводным (20 г) в течение 30 минут при периодическом перемешивании и упаривают на ротационном испарителе при температуре водяной бани 40°C до объема 1 мл. Остаток хлороформа удаляют в токе азота или сухого воздуха досуха. Остаток в колбе растворяют в 50 мл ацетонитрила и помещают в делительную воронку вместимостью 250 мл, приливают 15 мл гексана и энергично встряхивают в течение 1-3 минут. Гексан отбрасывают. Операцию повторяют дважды порциями гексана по 15 мл. Ацетонитрил упаривают на ротационном испарителе при температуре водяной бани 40°C до объема 1 мл. Остаток ацетонитрила удаляют в токе азота или сухого воздуха досуха. Сухой остаток растворяют 25 мл этилацетата и пропускают через колонку, заполненную 10 г флоризила и 2 г безводного сульфата натрия. Этилацетат, прошедший через колонку, отбрасывают. Затем элюируют имидаклоприд из колонки 25 мл ацетонитрила со скоростью 2 мл/мин. Упаривают элюат на ротационном испарителе при температуре водяной бани 40°C до объема 1 мл, а затем досуха в токе азота или сухого воздуха. Сухой остаток растворяют в 0,2 мл ацетона и количественно наносят на хроматографическую пластинку «Силуфол». Хроматографирование проводят в системе подвижных растворителей гексан:ацетон (4:3). Для проявления имидаклоприда пластинку обрабатывают раствором ортотолидина и помещают под УФ-лампу на 3-5 минут. Имидаклоприд проявляется в виде синего пятна на светлом фоне. Обработку результатов анализа проводят по формуле:

,

где

X - содержание имидаклоприда в пробе, мг/кг;

A - количество имидаклоприда в пробе, найденное на пластинке, мкг;

P - масса пробы, г;

R - среднее значение определения, найденное предварительно, %.

[Методические указания по определению микроколичеств пестицидов в пищевых продуктах, кормах и внешней среде. Сборник № 30. - Киев, 2001. - С.80-86.]

Недостатком данного метода определения имидаклоприда является его низкая чувствительность и избирательность, длительность проведения анализа.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является повышение чувствительности и избирательности способа, сокращение продолжительности проведения анализа.

Технический результат достигается тем, что в способе определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии, включающем отбор пробы, экстракцию, фильтрацию, дегидратацию натрия сульфатом безводным, упаривание, нанесение растворенного сухого остатка на хроматографическую пластинку, разгонку в системе подвижных растворителей гексан:ацетон (4:3), обработку раствором ортотолидина с последующим облучением ультрафиолетовыми лучами в течение 3-5 минут, обработку результатов анализа, в качестве пробы берут навеску органов или тканей животных массой от 50 до 200 мг, экстракцию проводят ацетоном, растворенный сухой остаток наносят на пластины для тонкослойной хроматографии «Сорбфил».

Уменьшение массы пробы биологического объекта позволяет снизить количество коэкстрактивных веществ в экстракте, мешающих проведению анализа, что повышает чувствительность и избирательность метода.

Использование в качестве экстрагента ацетона связано с высокой растворимостью имидаклоприда в растворителе, быстрым испарением при выпаривании экстракта, которое проводят сразу после экстракции без этапа очистки. Очистка экстракта не требуется, так как ацетон хорошо растворяет остатки имидаклоприда и не смывает со дна колбы Бунзена налет коэкстрактивных веществ, при этом потери имидаклоприда минимальны, что повышает чувствительность и избирательность метода, снижает его продолжительность.

Использование пластинок для тонкослойной хроматографии «Сорбфил» позволяет получить хорошо визуализируемые с достаточной концентрацией пятна имидаклоприда и адекватно оценить содержание его в пробе (в диапазоне от 0,1 до 10 мкг), что повышает чувствительность и избирательность метода.

Способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии осуществляют следующим образом. Берут, например, 200 мг органов или тканей, измельчают и экстрагируют ацетоном по 4 мл трижды по 30 минут. Экстракт фильтруют через воронку с бумажным фильтром «синяя лента», заполненным натрием сульфатом безводным, в колбу Бунзена. Объединенный экстракт упаривают на ротационном испарителе при температуре водяной бани 40°C до объема 1 мл, а затем досуха в токе азота или сухого воздуха. Сухой остаток растворяют 0,2 мл ацетона и наносят на пластину для тонкослойной хроматографии «Сорбфил». Пластинку помещают в камеру, насыщенную парами гексан:ацетон (4:3). После подъема фронта растворителя на 10 см пластинку высушивают, обрабатывают свежеприготовленным раствором ортотолидина и помещают под УФ-лампу. Имидаклоприд проявляется в виде синего пятна на светлом фоне. Обработку результатов проводят по формуле:

,

где

X - содержание имидаклоприда в пробе, мг/кг;

A - количество имидаклоприда в пробе, найденное на пластинке, мкг;

P - масса пробы, г;

R - среднее значение определения, найденное предварительно, %.

Метрологическая характеристика метода определения представлена таблице 1.

Таблица 1
Метрологическая характеристика метода определения имидаклоприда (n=5, P=0,95)
Анализируемая проба	Предел количественного определения, мг/кг	Среднее значение определения, %	Стандартное отклонение S, %	Доверительный интервал при =0,05, %
Кровь	0,04	90,6	2,88	87,02-94,17
Содержимое желудка	0,05	88,8	3,03	85,03-92,56
Почка	0,05	89,8	2,59	86,6-93,01
Легкое	0,05	89,2	2,86	85,64-92,76
Мышечная ткань	0,04	89,8	2,28	86,97-92,63

Анализ метрологических характеристик способа определения имидаклоприда в биологических объектах показывает высокую чувствительность и избирательность за счет уменьшения навески пробы и точного подбора экстрагента - ацетона. Исключение многочисленных этапов очистки позволяет сократить продолжительность проведения анализа в два раза. Способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии прост и экономичен в осуществлении.

Предлагаемый способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии может быть использован в лабораториях для контроля качества продуктов животного происхождения при использовании в рационе животных кормовых культур, обработанных пестицидами, содержащими имидаклоприд, а также осуществлять прижизненную или посмертную диагностику токсикоза при случайных острых отравлениях.

Предлагаемый способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием тонкослойной хроматографии был апробирован в условиях научной лаборатории кафедры диагностики, внутренних незаразных болезней и фармакологии ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет».

Источники информации

1. Методические указания по определению имидаклоприда в яблоках, сливах и винограде методом тонкослойной хроматографии. Сборник № 30. - Киев, 2001. - С.63-68.

2. Методические указания по определению микроколичеств пестицидов в пищевых продуктах, кормах и внешней среде. Сборник № 30. - Киев, 2001. - С.80-86 (прототип).