Общие способы получения пептидов: .экстракция, разделение, очистка – C07K 1/14

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии и касается способа получения очищенного антигена Dirofilaria immitis. Представленный способ включает механическую гомогенизацию, центрифугирование гомогената, отбор надосадочной жидкости и использование ее как антигена, при этом для гомогенизации используют головной конец длиной 2 см половозрелой самки Dirofilaria immitis, который помещают в 0,25 М водный раствор сахарозы в соотношении 1:3, замораживают при температуре -18°С, проводят механическую гомогенизацию и экстракцию белков в 0,25 М водном растворе сахарозы при 4°С в течение 12 часов, далее проводят ультразвуковую гомогенизацию супернатанта при 70 кГц 5 раз по 30 секунд с интервалом в 30 секунд в 3 циклах при 0°С, образовавшийся после ультразвуковой гомогенизации супернатант растворяют в охлажденном ацетоне при температуре 0°С в соотношении 1:20 с экспозицией 1 час при температуре 4°С. Представленное изобретение позволяет получить антиген с высокими показателями чувствительности и специфичности и может быть использовано в диагностике дирофиляриоза у людей и животных. 2 табл., 1 пр.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен способ очистки фактора, способствующего заживлению ран, представляющего собой фактор роста гепатоцитов (HGF). Все стадии способа очистки осуществляют в присутствии антитромбина III (AT-III). Согласно предложенному способу осуществляют размораживание замороженного источника, содержащего HGF, и удаление осадка из размороженного источника. Далее полученный раствор, содержащий супернатант и AT-III, приводят в контакт с носителем для аффинной хроматографии на основе иммобилизованного гепарина. Затем отделяют раствор от носителя для аффинной хроматографии. Приводят носитель в контакт с десорбционным буфером с ионной силой, достаточной для десорбции HGF. Собирают десорбционный буфер, содержащий HGF, AT-III и богатый гистидином гликопротеин (HRGP). Также предложены композиции для заживления ран, содержащие очищенный указанным способом HGF, AT-III и/или HRGP. Изобретения позволяют повысить постадийный выход фактора роста гепатоцитов, при этом в присутствии АТ-III фактор роста гепатоцитов сконцентрирован в элюате. 6 н. и 20 з.п. ф-лы, 2 табл., 6 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу получения очищенного рекомбинантного GDF-5-подобного белка. Способ включает разрушение клеток E.coli с помощью гомогенизатора высокого давления при давлении разрушения от 800 до 900 бар. Выделяют тельца включения из разрушенных клеток E.coli центрифугированием. Обрабатывают выделенные тельца включения денатурирующим буфером для солюбилизации, содержащим мочевину и L-аргинин. Очищают солюбилизированный мономер рекомбинантного GDF-5-подобного белка центрифугированием и хроматографией. Предложенное изобретение позволяет получить очищенный рекомбинантный GDF-5-подобный белок с высоким выходом. 6 з.п. ф-лы, 10 ил., 2 табл., 5 пр.

Изобретение относится к способу производства 2S-белка канолы, предусматривающий солюбилизацию белков канолы из муки из масличных семян канолы с применением раствора хлорида натрия, имеющего концентрацию соли от 0,25М до 0,35М и pH от 5 до 6 с образованием раствора белков канолы. Отделяют раствор белков канолы от остаточной муки из масличных семян канолы. Осуществляют контактирование раствора белков канолы с катионообменной средой при pH от 5 до 6 для связывания с катионообменной средой предпочтительно 2S-белка канолы, а не других белков канолы. Отделяют связанный 2S-белок канолы от несвязанных белков канолы и примесей и извлекают связанный 2S-белка канолы из катионообменной среды с помощью водного раствора хлорида натрия, с концентрацией соли от 0,55 до 0,7 М. Способ обеспечивает получение 2S-белка канолы чистотой 99,9%. 5 з.п. ф-лы, 9 табл., 2 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и медицине (практической онкологии), а именно к разработке способа получения эстроген-связывающего белка эмбриональной природы (ЭСБ). Способ предусматривает следующее. Осадок А₀ (отход, получаемый при промышленном получении гамма-глобулиновой фракции из абортивной крови на первой стадии фракционирования) экстрагируют 0,05 М натрий-ацетатным буфером. Полученный экстракт центрифугируют с получением супернатанта. Полученный супернатант хроматографируют и рехроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе. При этом балластные белки элюируют 0,05 М натрий-ацетатным буфером с последующей элюцией ЭСБ-содержащей фракции линейным градиентом молярности натрий-ацетатного буфера от 0,05 М до 0,25 М. Сбор фракций, элюируемых в интервале 0,075 М - 0,15 М ацетата натрия с последующим концентрированием, диализом против дистиллированной воды и лиофильной сушки. Высушенную фракцию растворяют в 0,015 М натрий-ацетатном буфере и наносят на КМ-целлюлозу, уравновешенную тем же буфером (0,015 М натрий-ацетатный буфер) с последующим проведением ступенчатой элюции, концентрированием фракции, содержащей ЭСБ и -1-кислый гликопротеин ( -1-КГП) и полученной элюцией 0,15 М натрий-ацетатным буфером. Концентрированием этой фракции. Диализа против 0,01 М трис НСl-буфера, содержащего 0,15 М NaCl с последующим нанесением полученной фракции на колонку с иммуносорбентом IgG анти- -1-КГП-сефароза. При этом не связывающуюся с иммуносорбентом фракцию диализируют и лиофильно сушат с последующим проведением гель - проникающей ВЭЖХ на колонке с TSK- гелем в 0,1 М калий-фосфатном буфере, содержащем 0,1 М хлористого калия и 5 мМ трилона Б. Фракцию, содержащую высокоочищенный ЭСБ, диализирут против дистиллированной воды и лиофильно сушат. Изобретение позволяет расширить арсенал средств, используемых в диагностике злокачественных новообразований. 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ получения, выделения и очистки рчГ-КСФ. Осуществляют получение клеток рекомбинантного штамма-продуцента, а затем концентрирование культуральной жидкости. Разрушают бактериальные клетки при выделении тел включения двукратной обработкой высоким давлением. Удаляют примесные белки. Растворяют тела включения и осуществляют восстановление белка. Проводят ренатурацию белка длительностью 70-90 часов с разбавлением раствора белка до 400 л. Полученный раствор наносят на анионообменную ХК диаметром 300 мм с линейной скоростью нанесения 600-1000 мл/мин. Затем проводят концентрирование рчГ-КСФ последовательно на хроматографических колонках с анионообменным и катионообменным сорбентами. Затем осуществляют очистку рчГ-КСФ на катионообменнике в режиме рецикла фракций и стабилизацию диализом. Способ позволяет получать за один цикл стабильный препарат рчГ-КСФ в количестве 15-20 г с гомогенностью более 97% по ВЭЖХ и с гемостимулирующей активностью 1000-1400%. 4 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 пр.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Описан белково-полипептидный комплекс (БПК), обладающий тканеспецифическим регенеративно-репаративным и омолаживающим действием на кожную ткань, получаемый из экстрагированного гомогената нервной и кожной тканей эмбрионов копытных сельскохозяйственных животных, способ его получения и фармкомпозиция на его основе. БПК включает тканеспецифические отрицательно заряженные слабо кислые, нейтральные белки и полипептиды с молекулярными массами от 0,5 до 200 кДа, причем не менее 70% от общей массы белка имеет молекулярную массу в диапазоне от 20 до 180 кДа. БПК используют в качестве активного действующего компонента в фармацевтических композициях, предназначенных для получения лечебных и косметологических средств. Изобретения позволяют получать препараты, обладающие высокой биологической активностью и предназначенные для лечения аутоиммунных, сосудистых, травматических, токсических заболеваний кожи, а также используемые в эстетической медицине и косметологии. 3 н. и 2 з.п. ф-лы, 14 ил., 11 пр.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Описан белково-полипептидный комплекс (БПК), обладающий антигипоксическим, тканеспецифическим репаративным действием на центральную и периферическую нервную систему, получаемый из экстрагированного гомогената нервной ткани эмбрионов копытных сельскохозяйственных животных сроком гестации от середины первой до середины последней трети беременности, способ его получения и фармкомпозиция на его основе. БПК включает тканеспецифические отрицательно заряженные слабокислые, нейтральные белки и полипептиды с молекулярными массами от 0,5 до 200 кДа, причем не менее 70% от общей массы белка имеет молекулярную массу в диапазоне от 20 до 160 кДа. БПК используют в качестве активного действующего компонента в фармацевтических композициях, предназначенных для получения лечебных средств. Изобретения позволяют получать препараты, обладающие высокой биологической активностью и предназначенные для лечения заболеваний центральной и периферической нервной системы, гипоксических состояний, а также используемые в спортивной медицине, медицине катастроф. 3 н. и 2 з.п. ф-лы, 14 ил., 1 табл., 13 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Готовят биомассу грамотрицательных бактерий Salmonella typhi семейства Enterobacteriacea. Выделяют пептидогликан клеточной стенки (ПКС) бактерий с помощью экстракции биомассы 45% водным фенолом при температуре 70-90°С или водными растворами ионных или неионных детергентов при температуре 37-100°С. Проводят препаративный ферментативный гидролиз для расщепления нерастворимого ПКС с применением лизоцима при рН 4,5-8,9 и температуре 10-37°С. Одновременно удаляют фармакологически приемлемую смесь веществ из реакционной смеси диализом с применением полупроницаемых мембран для ультрафильтрации с размером отсечки до 5 кДа. Проводят выделение смеси веществ также с помощью колоночной гель-проникающей хроматографии, в частности препаративной гель-хроматографии на колонках с Сефадексом или TSK-гелем. Способ позволяет получить фармакологически-приемлемую смесь веществ, включающую следующие компоненты: -N-ацетил-D-глюкозаминил-(1 4)-N-ацетил-D-мурамоил-(L-аланил-D-изоглютаминил-мезо-диаминопимелиновая кислота) (ГМтри);

-N-ацетил-D-глюкозаминил-(1 4)-N-ацетил-D-мурамоил-(L-аланил-D-изоглютаминил-мезо-диаминопимелоил-D-аланин) (ГМтетра); и

димер ГМтетра (диГМтетра), в котором связь между мономерными остатками ГМтетра осуществляется за счет карбоксильной группы терминального D-аланина одного остатка ГМтетра и -аминогруппы мезо-диаминопимелиновой кислоты другого остатка ГМтетра, причем связанные между собой тетрапептидные остатки расположены в разных полисахаридных цепях. Выход целевого продукта составляет 320 мг. 3 з.п. ф-лы, 2 табл., 3 пр.

Настоящее изобретение относится к области биохимии. Предложен способ очистки антител посредством добавления отрицательно заряженного полиэлектролита, такого как поливинилсульфоновая кислота, поливинилсульфонат, полистиролсульфоновая кислота или полиакриловая кислота, к смеси, содержащей антитело, и выделения получаемого преципитата, содержащего антитело. Использование изобретения может найти дальнейшее применение в технологии выделения антител из биологических жидкостей и их очистки. 12 з.п. ф-лы, 13 табл., 38 ил., 13 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу получения и очистки рекомбинантного гормона роста человека (рГРЧ). Предложенный способ получения и очистки рГРЧ включает растворение телец включения в 2 М мочевине при рН=11.0, проведение процесса ренатурации в буферном растворе 20 мМ Трис-НСl при рН=8.0. В качестве окислителя сульфогидрильных групп рГРЧ используют перекись водорода. Проводят отщепление N-концевого метионина с помощью лейциновой аминопептидазы. Хроматографическую очистку рГРЧ проводят с помощью двухстадийной ионообменной хроматографии на сорбенте Q Sepharose FF и стадии очистки с помощью гидрофобной хроматографии на сорбенте Butyl Sepharose 4 FF. Применяют гель-фильтрацию на Sephadex G-25 и ионообменную хроматографию на Q Sepharose FF, pH=6,5. После чего используют гель-фильтрацию на Sephacryl S-100HR. Предложенное изобретение позволяет получить препарат высокоочищенного белка рГРЧ фармакопейного качества, пригодного для производства лекарственных препаратов. 3 ил., 2 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ получения овомукоида. К белку утиных яиц добавляют равный объем смеси 0,5 М водного раствора трихлоруксусной кислоты и органического растворителя в объемном отношении 1:1,8-2,3. Отделяют образующийся осадок фильтрованием при 0-5°С. Затем добавляют к фильтрату органический растворитель в объемном отношении органического растворителя и фильтрата 3-3,5:1. Удаляют надосадочную жидкость декантированием при 0-5°С. Удаляют низкомолекулярные примеси из овомукоида ультрафильтрацией. Лиофильно высушивают овомукоид. В качестве органического растворителя используют смесь этанола и ацетона в объемном отношении 40-65:60-35. Изобретение способствует повышению выхода овомукоида до 1,66 г/100 мл яичного белка и увеличению степени чистоты овомукоида до 99,5%. 1 табл., 5 пр.

Изобретение относится к области медицины. Предложено связывающее вещество патогенной изоформы прионного белка, включающее лактоферрин. Предложены способ обнаружения и способ выделения патогенной изоформы прионного белка, включающие стадию контактирования образца со связующим веществом патогенной изоформы прионного белка и стадию отделения связанного компонента от связывающего вещества патогенной изоформы прионного белка, приведенного в контакт с образцом. Способ обнаружения дополнительно включает стадию обнаружения патогенной изоформы прионного белка, содержащейся в компоненте, отделенной от связывающего вещества патогенной изоформы прионного белка. Изобретение обеспечивает быстрые, простые и высокочувствительные способы обнаружения и выделения патогенной изоформы прионного белка без его ферментативной обработки протеазой К. 3 н. и 3 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в биохимии, протеомике и фармакологии для экспрессии и получения сложных трансмембранных белков из бактериальных штаммов-продуцентов. Предложена экспрессирующая конструкция для экспрессии одно- или многопроходных трансмембранных полипептидов в бактериальной клетке-хозяине. Данная конструкция содержит белок-кодирующий полинуклеотид, строго регулируемый промотор, имеющий низкую базальную активность в клетке-хозяине, и лидерную последовательность, содержащую энхансер инициации трансляции. Строго регулируемый промотор содержит, по меньшей мере, один позитивный регуляторный элемент контроля и, по меньшей мере, один негативный регуляторный элемент контроля, причем один или более из позитивных и негативных регуляторных элементов контроля представляет собой гетерологичный регуляторный элемент контроля. Кроме того, предлагается способ получения экспрессированного трансмембранного полипептида и способ его выделения из клетки-хозяина. Предложенные способы обеспечивают получение трансмембранных полипептидов с высокими выходами, с нативной конформацией и/или в растворимой форме. 7 н. и 46 з.п. ф-лы, 28 ил., 6 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для выделения рекомбинантного фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) из культуры прокариотических клеток. Проводят стадии выделения рекомбинантного белка VEGF из культуры клеток и растворения в первом буферном растворе, рН более 9, который содержит в конечной концентрации: 1 М мочевину, 300 мМ аргинин, 10 мМ CHES, 5 мМ EDTA, рН 11, или 1 М мочевину, 300 мМ аргинин, 10 мМ ТРИС, 5 мМ EDTA, рН 11. Затем осуществляют рефолдинг растворенного белка во втором буферном растворе с добавлением воздуха, рН>9, но 11, который содержит в конечной концентрации: 1 М мочевину, 15 мМ цистеин, 2 мМ DTT, 100 мМ аргинин, 10 мМ CHES, 5 мМ EDTA, рН 10, или 1 М мочевину, 15 мМ цистеин, 0,5-2 мМ DTT, 100 мМ аргинин, 10 мМ ТРИС, 5 мМ EDTA, рН 10, и выделяют повторно свернутый рекомбинантный белок. Как вариант возможно проведение растворения и рефолдинга указанного белка в комбинированном буферном растворе, рН>9, но 11, с добавлением воздуха или кислорода, где комбинированный буферный раствор содержит в конечной концентрации: 1 М мочевину, 15 мМ цистеин, 2 мМ DTT, 100 мМ аргинин, 10 мМ CHES, 5 мМ EDTA, рН 10, или 1 М мочевину, 15 мМ цистеин, 0,5-2 мМ DTT, 100 мМ аргинин, 10 мМ ТРИС, 5 мМ EDTA, рН 10. Изобретение позволяет выделять повторно свернутый рекомбинантный белок VEGF из культуры прокариотических клеток. 2 н. и 14 з. п. ф-лы, 10 ил.

Группа изобретений относится к способу получения человеческого альбумина с высокой связывающей способностью для применения, в частности, в детоксикационной терапии. Способ получения раствора человеческого альбумина из плазмы крови человека включает: а) получение фильтрата из плазмы крови, представляющего собой раствор альбумина, по существу свободный от нерастворимых остатков денатурированного белка и других соединений, не растворимых в этаноле; b) первую стадию диафильтрации; с) стабилизацию продукта, полученного на стадии (b), раствором NaCl и N-ацетилтриптофаном без добавления жирных кислот; d) пастеризацию продукта, полученного на стадии (с); е) вторую стадию диафильтрации до полного удаления N-ацетилтриптофа с получением раствора человеческого альбумина. Предложенный способ обеспечивает получение раствора человеческого альбумина с инактивированными вирусами, обладающего высокой способностью к связыванию и переносу молекул и ассоциированных соединений, который может быть использован для применения в детоксикационной терапии посредством выведения токсинов из крови предпочтительно способами инфузии альбумина, плазмофереза и замены альбумина или с помощью экстракорпоральной системы. 2 н. и 12 з.п. ф-лы, 1 табл., 5 ил.

Изобретение относится к способу выделения рекомбинантных белков из трансформированных хозяев. Данные рекомбинантные белки содержат индуцирующую белковые тельца последовательность, слитую с последовательностью представляющего интерес продукта. При осуществлении способа получают водный гомогенат трансформированных клеток-хозяев, которые экспрессируют слитый белок в виде рекомбинантных подобных белковым тельцам скоплений (RPBLA), обладающих плотностью приблизительно от 1,1 до 1,35 г/мл. Гомогенат центрифугируют с образованием фракций с различной плотностью, либо в отсутствие дополнительного обеспечивающего плотность раствора, либо с помощью слоя с определенной плотностью, которая меньше чем плотность RPBLA. В результате образуются фракции, которые содержат относительно сниженную концентрацию RPBLA, и фракция, которая содержит относительно повышенную концентрацию RPBLA. Фракцию со сниженной концентрацией RPBLA отделяют от фракций с относительно повышенной концентрацией RPBLA. Затем очищают указанный слитый белок. Изобретение обеспечивает простоту осуществления, быстроту и эффективную очистку рекомбинантных белков. 14 з.п. ф-лы, 8 ил., 1 табл.

В изобретении раскрывается устройство на основе технологии SSB для очистки, разделения, модификации и/или иммобилизации химических объектов или биологических объектов в текучей среде. Устройство по изобретению содержит одну или несколько опор из микропроволоки, закрепленных своими концами и имеющих многослойную структуру, состоящую из центрального стержня и по меньшей мере одного покрывающего слоя, пригодных для связывания химических или биологических объектов с функциональным покрытием или лигандами, находящимися на поверхности опор из микропроволоки при отсутствии воздействия магнитного поля, создаваемого между опорами из микропроволоки и частицами, находящимися в текучей среде. Описан также способ очистки, разделения, модификации и/или иммобилизации химических или биологических объектов, находящихся в текучей среде посредством этого устройства. Изобретение позволяет осуществлять процесс очистки, разделения, модификации и/или иммобилизации объектов, находящихся в текучей среде, при более высокой скорости потока. 3 н. и 21 з.п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к области молекулярной биологии. Получают идентификационный пептид с аминокислотной последовательностью: Gly-Pro-Ala-Pro-Gln-Pro-Asp-Glu-Asp-Leu-Lys-Arg-Gln. Полученный пептид применяют для идентификации, очистки или выделения содержащих его рекомбинантных белков. Для получения рекомбинантных белков с полипептидной меткой применяют экспрессирующий вектор pDED. Вектор содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность идентификационного белка. Изобретение позволяет расширить спектр методов идентификации рекомбинантных белков. 5 н. и 9 з.п. ф-лы, 6 ил., 1 табл.

Изобретение относится к области биохимии и может быть использовано для удаления белков и аминного азота из водных растворов. Способ включает адсорбцию белков на гидроалюмосиликатном природном сорбенте, содержащем такие минералы, как глины, цеолит, полевые шпаты, слюды, кальцит, и фильтрование. Адсорбцию проводят при рН 1-3 1-10 минут. Изобретение позволяет быстро и качественно осуществить процесс депротеинизации раствора. 3 табл.

Изобретение относится к биотехнологии. Способ предусматривает следующее. Восстанавливают плазматическую фракцию Коэна IV1. Осуществляют анионообменную хроматографию раствора, содержащего альфа-1-антитрипсина на анионообменном геле, предпочтительно на DEAE Sepharose® fast flow. Полученный элюат концентрируют ультрафильтрацией. Затем дополнительно осуществляют хроматографию на гидрофобном носителе и обработку фракции, содержащей альфа-1-антитрипсин материалом, который содержит иммобилизованную форму гепарина. После чего инактивируют, покрытые липидной оболочкой вирусы, путем добавления детергентов и, необязательно, растворителя. Затем осуществляют высаливание детергентов путем последующего увеличения концентрации соли до 0,5 М. Отделение детергентов и вирусных частиц путем нанофильтрации с размером пор 15-20 нм. Изобретение позволяет повысить частоту получаемого продукта и его безопасность. 3 н. и 14 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к области биохимии, а именно к получению липопротеинов из семян подсолнечника. Семена подсолнечника измельчают, обезжиривают, экстрагируют и разделяют на фазы центрифугированием. Затем осуществляют двукратное осаждение полученного липопротеинового комплекса кислотой в изоэлектрической точке при рН=4.6-4.8, обработку щелочным раствором, промывку твердого остатка водой и сушку. Экстрагирование обезжиренного остатка ведут трисглицинатным буфером при соотношении семена:буфер 1:16.7, затем настаивают в течение двух часов. Центрифугирование проводят при 8000 об/мин в течение 15 минут, а осаждают 0.1 н. раствором янтарной кислотой. Сушку осуществляют до остаточной влажности 6-8%. Предлагаемый способ позволяет получить липопротеиновый комплекс из семян подсолнечника с повышенным содержанием белка, менее токсичный при уменьшении временного интервала. 3 з.п. ф-лы, 1 табл., 1 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии и препаративной биохимии и может быть использовано в биофамакологии и медицине. Клетки дрожжей P.pastoris последовательно трансформируют двумя разными генетическими конструкциями, содержащими ген предшественника человеческого сывороточного альбумина (ЧСА). Полученный штамм-продуцент культивируют в питательной среде. Рекомбинантный ЧСА выделяют из культуральной среды путем осветления указанной среды, а также проведения стадий последовательного центрифугирования при 2000 и 10000 g, ультрафильтрации, диализа и катионообменной хроматографии на колонке Source S. Целевой продукт представляет собой элюат, включающий рекомбинантный человеческий сывороточный альбумин, 50-мМ фосфатный буфер, содержащий 400 мМ хлорида натрия, с рН 9. Применение изобретения позволяет расширить арсенал средств, направленных на получение рекомбинантного ЧСА, и получать рекомбинантный ЧСА в виде продукта, который помимо рекомбинантного ЧСА содержит 50-мМ фосфатный буфер, содержащий 400 мМ хлорида натрия, и имеет рН 9. 2 н.п. ф-лы, 6 ил.

Изобретение относится к биотехнологии. Способ получения тимических пептидов предусматривает измельчение препарата иммунотропной ткани млекопитающих, содержащей пептиды с тимической активностью, гомогенизацию, центрифугирование и фильтрацию с очисткой и выделением целевого продукта. Перед гомогенизацией производят троекратное замораживание и оттаивание ткани в смеси с дистиллированной водой. Далее проводят центрифугирование указанной смеси и фильтрацию надосадочной жидкости с получением фильтрата, который осаждают 0,1-0,6 М сульфосалициловой кислотой, а затем выделяют из фильтрата фракцию белка с относительной молекулярной массой менее 10 кДа. Надосадочную жидкость осаждают 0,33% фосфорно-вольфрамовой кислотой, выдерживают в течение 60 минут, декантируют, центрифугируют и отделяют осадок, который суспендируют в дистиллированной воде. После чего растворяют осадок, добавляя насыщенный щелочной раствор до рН 9,0, полученный раствор диализуют, осветляют центрифугированием и отделяют надосадочную жидкость. Центрифугирование осуществляют при 8000 об/мин в течение 30 минут, надосадочную жидкость подвергают адсорбционной хроматографии на гидроксилаппатите в водной системе, причем фракцию белка, не адсорбирующуюся на колонке, концентрируют. Полученную белковую фракцию подвергают гель-фильтрации, отбирают белковую фракцию с относительной молекулярной массой менее 10 кДа. Способ позволяет получить тимические пептиды с высокой удельной активностью и чистотой. 2 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к биотехнологическому способу получения лекарственных средств. Способ предусматривает разрушение клеток дрожжевого продуцента ИЛ-2, в котором осуществлен синтез целевого белка (ИЛ-2) и который не секретирует этот целевой белок, и отделение водонерастворимой фракции. При получении в препарате сохраняют водонерастворимые компоненты разрушенных клеток. Препарат интерлейкина-2, полученный данным способом, имеет меньшую себестоимость, активен при пероральном введении и в некоторых обстоятельствах оказывается более активным, чем препараты ИЛ-2, очищенные от компонентов фракции дрожжевых стенок. 2 н. и 11 з.п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к области генной и белковой инженерии и может быть использовано в медицине и фармацевтической промышленности. Сконструирована рекомбинантная плазмидная ДНК pER-Gl, обеспечивающая синтез гибридного полипептида, содержащего глюкагон человека и интеин, в клетках Escherichia coli. Путем трансформации штамма E.coli ER2566 плазмидой pER-Gl получен продуцент указанного гибридного полипептида. Разработан способ получения рекомбинантного глюкагона человека, предусматривающий получение и культивирование продуцента гибридного полипептида, содержащего глюкагон человека и интеин, с последующим выделением и расщеплением указанного гибридного белка. Применение изобретения позволяет получить рекомбинантный человеческий глюкагон с высоким выходом и по упрощенной технологии. 3 н.п. ф-лы, 3 ил.

(56) (продолжение):

CLASS="b560m"intein.Biochim Biophys Acta. 1998 Sep 8; 1387(1-2):422-32. JP 3254692, 13.11.1991.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способу очистки рекомбинантных белков из штаммов-продуцентов микроорганизмов, и может быть использовано в структурной протеомике, при рентгеноструктурном анализе белков с неизвестной функцией, антигенном картировании белков и создании вакцин на основе рекомбинантных белков. В способе очистки рекомбинантных белков из штаммов-продуцентов микроорганизмов используют наночастицы двухвалентных металлов с диаметром частиц 20-100 нм. При этом связывание рекомбинантных белков проводят непосредственно в грубом лизате клеток, а отделение частиц от несвязавшихся белков выполняют с помощью магнитной сепарации. Изобретение позволяет заменить крайне дорогостоящие хроматографические методы, которые применяются в настоящее время для очистки рекомбинантных белков и, тем самым, ускорить и снизить стоимость очистки целевого препарата. 2 ил.

(56) (продолжение):

CLASS="b560m"(MetAP). Biochimie. 2003, v.85, n.10, p.993-997. RU 2260500 C1, 20.09.2005. PALENZUELA D.O. et al. Purification of the recombinant protein TmpA from Treponema pallidum using immobilized metal ion affinyty chromatography. Biotecnol. Apl. 2000, v.17, n.2, p.89-93.

Изобретение относится к области биотехнологии и генной инженерии и может быть использовано в фармацевтической промышленности и медицине. Способ получения рекомбинантного плацентарного фактора роста (PLGF) предусматривает культивирование модифицированных прокариотических клеток, содержащих индуцибельную систему экспрессии PLGF, до достижения OD⁶⁰⁰ 14-50 с последующей индукцией экспрессии, экстракцию, очистку и солюбилизацию телец включения, обогащение полученной смеси димерной и мультимерной формой экспрессированного белка с помощью анионообменной хроматографии и выделение PLGF преимущественно в димерной форме посредством обращено-фазовой хроматографии. PLGF, полученный данным способом, является очищенным и находится преимущественно в димерной форме. Применение изобретения позволяет получать PLGF с высокой удельной активностью и высоким выходом. 2 н. и 25 з.п. ф-лы, 5 ил.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам адсорбционной хроматографии бычьего сывороточного альбумина (БСА) с использованием модифицированных адсорбентов, и может быть использовано для выделения БСА из растворов. Способ включает адсорбцию БСА на адсорбенте - модифицированном хитозаном углеродном волокне, который получают электрохимической обработкой углеродного волокна в растворе хитозана в разбавленной соляной кислоте в присутствии NaCl в условиях поляризации, а элюцию БСА проводят в условиях катодной поляризации при потенциалах (-0,3)÷(-0,9) В. Преимуществом заявленного способа является возможность выделения БСА из растворов без примесей. 1 з.п. ф-лы, 1 ил.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в фармацевтической промышленности. Очищенный препарат уриказы млекопитающего разделяют на фракции с последующим объединением тех фракций, в которых при измерении светового рассеяния и ультрафиолетового поглощения не обнаруживается присутствие агрегатов уриказы млекопитающего, превышающих размер октамера. Полученный препарат конъюгируют с поли(этиленгликолем) или поли(этиленоксидом) и используют в фармацевтическом составе для понижения уровня мочевой кислоты в жидкости или ткани организма. Применение изобретения позволяет уменьшить иммуногенное действие уриказы, не ухудшая ее уриколитическое действие. 4 н. и 15 з.п. ф-лы, 6 ил.