Общие способы получения пептидов: ..хроматографией – C07K 1/16

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения препарата антитела или его антигенсвязывающего участка с уменьшенным содержанием белков клеток-хозяев (БКХ) из смеси-образца. Предложенное изобретение может быть использовано для получения препарата антитела. Способ включает доведение pH до значений 3-4 для образования первичного выделенного образца. Далее доводят pH первичного выделенного образца до значений 6-8. Приводят первичный выделенный образец в контакт со смолой для аффинной хроматографии на основе белка A. Вымывают смолу для афинной хроматографии буферным раствором. Собирают образец после аффинной хроматографии. Приводят образец после аффинной хроматографии в контакт с ионообменной смолой и собирают образец после ионообмена. Приводят образец после ионообмена в контакт со смолой для хроматографии гидрофобных взаимодействий (ХГВ) и собирают образец после ХГВ. Предложенное изобретение позволяет получить препарат антитела или его антигенсвязывающего участка с уменьшенным содержанием БКХ. 24 з.п. ф-лы, 12 ил., 8 табл., 4 пр.

Изобретение относится к способу получения гликопротеина, который является единообразным в выражении функций, обусловленных сахаридной цепочкой (например, время полужизни в крови), а также в единицах физиологической активности, то есть гликопротеина, имеющего единообразные аминокислотную последовательность, структуру сахаридной цепочки и структуру высшего порядка, физиологическую активность, способ скрининга на гликопротеин, способ получения смеси гликопротеинов. 3 н. и 3 з.п. ф-лы, 37 ил., 4 табл., 6 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения рекомбинантного фактора свертываемости крови VIII человека с делецией В-домена (hFVIII-BDD). Рекомбинантной плазмидной ДНК ДНК рАР227, кодирующей полипептид с последовательностью hFVIII-BDD, включающей также MAR - область прикрепления к ядерному матриксу гена лизоцима птиц, усилитель транскрипции вируса CMV, внутренний сайт инициации трансляции IRES вируса энцефаломиокардита, ген DHFR мыши, сигнал полиаденилирования вируса SV40, ген аминогликозид-3'-фосфотрансферазы, обеспечивающей устойчивость к генетицину (Neo), кассету для экспрессии в клетках бактерий гена -лактамазы, обеспечивающей устойчивость к ампицилину, трансформируют клетки линии Cricetulus griseus CHO DHFR (-) с получением линии клеток Cricetulus griseus CHO 2H5, продуцирующей рекомбинантный hFVIII-BDD со стабильно высоким выходом на уровне около 20 МЕ/мл/24 ч. Культивирование клеток-продуцентов проводят в среде DME/F12, содержащей 2-4% фетальной бычьей сыворотки, 1% диметилсульфоксида и 50 МЕ/л инсулина. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 5 ил., 9 пр.

Способ очистки белка Фактора свертывания VIII из раствора включает: а) контактирование белка с мультимодальной смолой или смолой смешанного типа действия, содержащей лиганды, которые включают гидрофобную часть и отрицательно заряженную часть; b) элюцию белка элюирующим буфером, содержащим по меньшей мере 1,5 М соли и по меньшей мере 40% (вес/объем) этиленгликоля, пропиленгликоля или их смеси и ионы кальция. Способ представляет собой одностадийный хроматографический процесс, при котором происходят захват и очистка белка Фактора свертывания VIII, не требующий доведения рН или электропроводности в ходе стадии загрузки. Способ стабилизации белка Фактора свертывания VIII, при котором происходят захват и стабилизация белка Фактора свертывания VIII за один проход белка через колонку с мультимодальной смолой, содержащей лиганды, которые включают гидрофобную часть и отрицательно заряженную часть, и элюция белка элюирующим буфером, содержащим по меньшей мере 1,5 М соли и по меньшей мере 40% (вес/объем) этиленгликоля, пропиленгликоля или их смеси и ионы кальция. Изобретение обеспечивает сокращение объема колонки примерно в 250 раз и «коэффициент очистки», по меньшей мере равный 30, высокий показатель стабильности для белкового продукта. 2 н. и 14 з.п. ф-лы, 4 ил., 4 табл., 7 пр.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен способ выделения и очистки целевого белка посредством хроматографии, в котором хроматография удаляет или уменьшает содержание прионов (PrP^sc). Осуществляют взаимодействие потенциально PrP^sc-загрязненного образца, содержащего целевой белок, с комбинированным хроматографическим материалом, содержащим лиганд. Лиганд выбирают из положительно заряженного N-бензил-N-метилэтаноламинового лиганда; отрицательно заряженного лиганда 2-(бензоиламино)бутановой кислоты; фенилпропилового лиганда; N-гексилового лиганда; 4-меркаптоэтилпиридинового лиганда; лиганда 3-[{3-метил-5-((тетрагидрофуран-2-илметил)амино)-фенил}амино]бензойной кислоты. Затем создают буферные условия в хроматографических условиях, таких, чтобы целевой белок связывался с комбинированным хроматографическим материалом, а PrP^sc не связывался с комбинированным хроматографическим материалом. Затем элюируют целевой белок. Также предложена фракция фармацевтически применимого целевого белка с пониженным содержанием прионового белка. Изобретение позволяет, применяя единственную хроматографическую смолу, получать фракцию целевого белка с уменьшенным содержанием PrP^sc от >1 до 4 lg(10). 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 3 табл., 2 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и медицине (практической онкологии), а именно к разработке способа получения эстроген-связывающего белка эмбриональной природы (ЭСБ). Способ предусматривает следующее. Осадок А₀ (отход, получаемый при промышленном получении гамма-глобулиновой фракции из абортивной крови на первой стадии фракционирования) экстрагируют 0,05 М натрий-ацетатным буфером. Полученный экстракт центрифугируют с получением супернатанта. Полученный супернатант хроматографируют и рехроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе. При этом балластные белки элюируют 0,05 М натрий-ацетатным буфером с последующей элюцией ЭСБ-содержащей фракции линейным градиентом молярности натрий-ацетатного буфера от 0,05 М до 0,25 М. Сбор фракций, элюируемых в интервале 0,075 М - 0,15 М ацетата натрия с последующим концентрированием, диализом против дистиллированной воды и лиофильной сушки. Высушенную фракцию растворяют в 0,015 М натрий-ацетатном буфере и наносят на КМ-целлюлозу, уравновешенную тем же буфером (0,015 М натрий-ацетатный буфер) с последующим проведением ступенчатой элюции, концентрированием фракции, содержащей ЭСБ и -1-кислый гликопротеин ( -1-КГП) и полученной элюцией 0,15 М натрий-ацетатным буфером. Концентрированием этой фракции. Диализа против 0,01 М трис НСl-буфера, содержащего 0,15 М NaCl с последующим нанесением полученной фракции на колонку с иммуносорбентом IgG анти- -1-КГП-сефароза. При этом не связывающуюся с иммуносорбентом фракцию диализируют и лиофильно сушат с последующим проведением гель - проникающей ВЭЖХ на колонке с TSK- гелем в 0,1 М калий-фосфатном буфере, содержащем 0,1 М хлористого калия и 5 мМ трилона Б. Фракцию, содержащую высокоочищенный ЭСБ, диализирут против дистиллированной воды и лиофильно сушат. Изобретение позволяет расширить арсенал средств, используемых в диагностике злокачественных новообразований. 1 табл., 1 пр.

Предлагается способ получения чистого кристаллического D-изоглутамил-D-триптофана, включающий стадию снятия защиты с по существу чистого N-трет-бутоксикарбонил-D-изоглутамил-D-триптофана или его диэфира с получением по существу чистого D-изоглутамил-D-триптофана. Предлагается аморфная аммонийная соль D-изоглутамил-D-триптофана (1:1). Также предлагается способ получения чистой моноаммонийной соли D-изоглутамил-D-триптофана из по существу чистого N-трет-бутоксикарбонил-D-изоглутамил-D-триптофана. Заявлено соединение H-D-Glu-( -D-Trp-OR²)- -OR¹

Изобретение относится к области биохимии. Готовят биомассу грамотрицательных бактерий Salmonella typhi семейства Enterobacteriacea. Выделяют пептидогликан клеточной стенки (ПКС) бактерий с помощью экстракции биомассы 45% водным фенолом при температуре 70-90°С или водными растворами ионных или неионных детергентов при температуре 37-100°С. Проводят препаративный ферментативный гидролиз для расщепления нерастворимого ПКС с применением лизоцима при рН 4,5-8,9 и температуре 10-37°С. Одновременно удаляют фармакологически приемлемую смесь веществ из реакционной смеси диализом с применением полупроницаемых мембран для ультрафильтрации с размером отсечки до 5 кДа. Проводят выделение смеси веществ также с помощью колоночной гель-проникающей хроматографии, в частности препаративной гель-хроматографии на колонках с Сефадексом или TSK-гелем. Способ позволяет получить фармакологически-приемлемую смесь веществ, включающую следующие компоненты: -N-ацетил-D-глюкозаминил-(1 4)-N-ацетил-D-мурамоил-(L-аланил-D-изоглютаминил-мезо-диаминопимелиновая кислота) (ГМтри);

-N-ацетил-D-глюкозаминил-(1 4)-N-ацетил-D-мурамоил-(L-аланил-D-изоглютаминил-мезо-диаминопимелоил-D-аланин) (ГМтетра); и

димер ГМтетра (диГМтетра), в котором связь между мономерными остатками ГМтетра осуществляется за счет карбоксильной группы терминального D-аланина одного остатка ГМтетра и -аминогруппы мезо-диаминопимелиновой кислоты другого остатка ГМтетра, причем связанные между собой тетрапептидные остатки расположены в разных полисахаридных цепях. Выход целевого продукта составляет 320 мг. 3 з.п. ф-лы, 2 табл., 3 пр.

Настоящее изобретение относится к кристаллическим модификациям: 1 (полиморфная форма F), 2 (полиморфная форма I) и 3 (полиморфная форма X) мононатриевой соли D-изоглутамил-D-триптофана (1:1), характеризующиеся пиками на порошковой рентгенограмме, представленными в материалах заявки, а также к содержащим их фармацевтическим композициям. Изобретение описывает их применение для лечения различных болезней и состояний организма, по меньшей мере, одного аутоиммунного заболевания, которое выбирают из группы, состоящей из псориаза, атопического дерматита и ревматоидного артрита. Также настоящее изобретение раскрывает способы получения завленных кристаллических модификаций мононатриевой соли D-изоглутамил-D-триптофана (1:1), 16 н. и 26 з.п. ф-лы, 4 пр., 9 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению высокоочищенных композиций рекомбинантных витамин К-зависимых белков, и может быть использовано для снижения примесей белка S в этих композициях. Способ предусматривает проведение стадии контактирования исходной композиции, содержащей рекомбинантный витамин К-зависимый белок, продуцируемый в условиях культивирования клеток, с твердофазным веществом, которое способно связывать этот витамин К-зависимый белок, и сбора получающейся вторичной композиции, содержащей этот витамин К-зависимый белок. После этого проводят контактирование вторичной композиции, полученной на предыдущей стадии, с твердофазным веществом, несущим аффинные лиганды, которое способно связывать белок S, в то время как рекомбинантный витамин К-зависимый белок не связывается с указанной твердой фазой и проскакивает хроматографическую колонку; и сбор получающейся композиции, содержащей рекомбинантный витамин К-зависимый белок. Изобретение позволяет уменьшить уровень белка S по меньшей мере в 2 раза. 2 н. и 28 з.п. ф-лы, 24 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Предложены способы выделения очищенного белкового продукта (варианты) и способы выделения очищенного антитела (варианты) посредством хроматографии в режиме слабого распределения. Способы предусматривают пропускание загружаемой жидкости, содержащей белковый продукт или антитело, через среду при рабочих условиях, которые в одном варианте реализации способа обеспечивают связывание по меньшей мере 1 мг продукта на 1 мл среды. В другом варианте реализации способа рабочие условия характеризуются значением коэффициента распределения, равным по меньшей мере 0.1. Причем указанные рабочие условия определяют посредством скрининга. Указанную среду выбирают из группы, включающей заряженную ионообменную среду, смолу для хроматографии с гидрофобным взаимодействием, смолу для аффинной хроматографии с иммобилизованными металлами. Затем осуществляют выделение очищенного продукта из элюата, выходящего из колонки. Способы обеспечивают высокий выход очищенного белкового продукта или антитела при использовании высоких величин нагрузок 50-500 мг продукта/мл среды. 8 н. и 176 з.п. ф-лы, 13 ил., 30 табл., 8 пр.

Изобретение относится к области фармацевтической химии, конкретно к способу хроматографической очистки циклического пептида октреотида I, и имеет своей целью разработку полупромышленного процесса очистки октреотида-сырца. Сущность изобретения заключается в том, что очистка осуществляется методом препаративной ВЭЖХ, в частности, на сорбенте VYDAK С18 120А 10 мкм (производитель Grace) с использованием в качестве элюента тройной системы изопропиловый спирт - вода - уксусная кислота в присутствии неорганичесих и (или) органических иодидов, например, таких как йодистый калий, йодистый аммоний, йодистый натрий или йодистый тетраалкиламмоний (N⁺RR'R''R'''I^- , где R, R', R'', R''' - алкил С1-С4 или бензил).

D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys -Thr-OI (I)

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу очистки группы высокомолекулярных белковых антигенов фасциол. Очистку высокомолекулярных белковых антигенов фасциол проводят с использованием высокоэффективной хроматографии. Причем белковые экстракты фасциол (F.hepatica и F.gigantica) фракционируют гель-фильтрацией экстракта на колонке HR 10/30 с суперозой 12. После чего полученный при первом фракционировании пул фракций, в которых обнаружены высокомолекулярные белковые антигены, повторно хроматографируют на колонке с тем же сорбентом. Антигенную активность фракций определяют реакцией диффузионной преципитации в агаровом геле с использованием трех типов сывороток, содержащих антитела к разным антигенным компонентам фасциол. Полученный данным способом продукт может быть использован в качестве диагностикума, а также для изучения молекулярных основ иммунологического родства и видовых различий в антигенах разного происхождения. Предложенное изобретение позволяет повысить степень очистки группы высокомолекулярных белковых антигенов двух видов фасциол (F.hepatica и F.gigantica). 4 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу получения иммуногенного рекомбинантного экстраклеточного фрагмента коннексина-43. Изобретение может найти применение в методологии создания биологически активных антител, связывающихся с живой клеткой, адресной доставки лекарственных препаратов к клеткам-мишеням. Предложенный способ включает клонирование второй экстраклеточной петли Е2 Сх43, представляющей собой фрагмент коннексина-43 Q173-1208 с аминокислотной последовательностью QWYIYGFSLSAVYTCKRDPCPHQVDCFLSRPTEKTI, в два плазмидных вектора pCBDQ и pHPMLQ. После чего осуществляют трансформацию полученными плазмидными ДНК клеток E.coli. Затем проводят культивирование трансформированных клеток до оптической плотности 0,7-0,9. Далее осуществляют индукцию экспрессии плазмиды 0,9-1,1 мМ изопропилтиогалактозидом. После чего проводят наработку рекомбинантных белков слияния и их выделение в присутствии 7,9-8,1 М мочевины методом хроматографии на Ni-NTA агарозе. Предложенное изобретение позволяет разработать способ получения иммуногенного рекомбинантного экстраклеточного фрагмента коннексина-43 крысы в составе высокоиммуногенного химерного белка, пригодного для создания моноклональных антител. 2 ил., 1 табл.

Изобретение относится к области биохимии и может быть использовано в качестве биохимического инструмента в коагулометрии и онкологии или для получения фармацевтической композиции для лечении состояний, сопровождающихся гиперактивацией свертывающей системы под действием тромбина и/или гиперпролиферацией. Сущность изобретения состоит в том, что из яда кобры Naja haje путем трехстадийной жидкостной хроматографии выделяют вещество полипептидной природы с молекулярной массой 14350 Да, с N-концевой аминокислотной последовательностью, гомологичной таковой фосфолипаз А2 яда змей, и обладающее свойствами селективного прямого ингибитора тромбина смешанного типа, а также антипролиферативным действием. Изобретение позволяет получить селективный прямой ингибитор тромбина, обладающий антипролиферативным действием. 1 табл., 3 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в пищевой промышленности. Для получения 6-O- -D-глюкопиранозил-D-сорбита (1,6-GPS) изомальтулозу подают в реакционный раствор, содержащий фермент, обладающий способностью катализировать превращение изомальтулозы в 1,6-GPS, из которого выделяют целевой продукт после инкубации при температуре 20-40°С. До или во время инкубации в реакционный раствор добавляют восстановительные эквиваленты. Фермент выделяют посредством анионообменной и двух аффинных хроматографии из неочищенного экстракта микроорганизма рода Gluconobacter, содержащего ген фермента, обладающего способностью катализировать превращение изомальтулозы в 1,6-GPS. Получена нуклеиновая кислота, кодирующая фермент, обладающий способностью катализировать превращение изомальтулозы в 1,6-GPS. Вектор, содержащий данную нуклеиновую кислоту, предназначен для обеспечения экспрессии этого фермента в клетке-хозяине. Применение изобретения позволяет получить 6-О- -D-глюкопиранозил-D-сорбит из изомальтулозы посредством одной единственной ферментативной реакции. 6 н. и 20 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в фармацевтической промышленности. Антагонист рецептора интерлейкина-1 человека получают с помощью рекомбинантного штамма Е. coli, содержащего плазмиду, которая обеспечивает продукцию указанного белка. Для этого данный штамм культивируют. Затем из бактериальных клеток выделяют целевой продукт с использованием трехстадийной хроматографии и концентрирования на гидрофобном сорбенте. Причем первую и третью стадию указанной хроматографической очистки проводят на катионообменной смоле, а на втором этапе хроматографии используют анионообменную смолу. Применение изобретения позволяет получить антагонист рецептора интерлейкина-1 человека высокой чистоты. 6 з.п. ф-лы, 1 табл.

(56) (продолжение):

CLASS="b560m"J.Shanxy Univ. Natur. Sci. Ed. 2001. 24, N 3, с.259-261. Eur J Biochem. 1995 Feb 1; 227 (3): 838-47.

Изобретение относится к биотехнологии и хроматографии и может быть использовано в области синтеза биополимеров на полимерных носителях или в процессе хроматографической очистки биополимеров в биологических, химических, медицинских исследованиях, а также при производстве биологически активных веществ. Установка содержит цилиндрическую камеру с крышкой, заполненную полимерным носителем, подвижную перегородку, постоянно прижатую к полимерному носителю и жестко соединенную с дополнительной перегородкой, делящей полость цилиндрической камеры на камеру постоянного объема, сообщенную с атмосферой, и камеру переменного объема. Пористые фильтры установки контактируют с полимерным носителем и сообщены с входным и выходным патрубками. Держатель фильтра установлен внутри подвижной перегородки и сообщен с входным патрубком и уплотняющей манжетой, размещенной на боковой поверхности держателя. Уплотняющая манжета, держатель и подвижная перегородка выполнены в виде тел вращения, имеющих соприкасаемые поверхности параболической формы. Бочкообразное уплотнение установлено в крышке камеры и контактирует с подвижной перегородкой. На концах подвижной перегородки и входного патрубка, выходящих за пределы цилиндрической камеры, установлены ограничители с возможностью вертикального перемещения, между которыми размещена пружина. Такая конструкция повышает эффективность уплотнения подвижных элементов. 1 з.п. ф-лы, 1 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии и биохимии и может быть использовано в медико-биологической промышленности. Предложен способ получения рекомбинантного фактора некроза опухолей альфа (ФНО-альфа) человека, предусматривающий культивирование штамма - продуцента E.coli SG20050/pTNF311, разрушение клеток ультразвуком, извлечение целевого белка и 3-стадийную хроматографическую очистку продукта на DEAE-целлюлозе в линейном градиенте NaCl при рН 8,0, на гидроксилапатите в линейном градиенте К-фосфата при рН 8,0 и на гидроксилапатите в линейном градиенте К-фосфата при рН 6,7. Получаемый предложенным способом рекомбинантный ФНО-альфа отличается пониженным содержанием примесных белков, нуклеиновых кислот и особенно липополисахаридов, что обеспечивает возможность его непосредственного медицинского использования. 2 табл., 5 ил.

Изобретение относится к биотехнологии, генной инженерии и медицине, в частности к способам получения компонентов для питательных сред из гидролизатов животного белка. Предложен способ получения казаминовых кислот методом гель-хроматографии неочищенного кислотно-гидролизованного казеина с содержанием общего азота 0,7-0,95 г в 100 мл раствора и концентрацией 6-10% на сефадексе G-15, элюирование дистиллированной водой фракций элюата, отбор активных фракций элюата спектрофотометрией порций элюата (D₂₅₄), упаривание активных фракций под вакуумом и при температуре не более 55°С. Метод позволяет упростить и удешевить технологический процесс получения казаминовых кислот, а также получать казаминовые кислоты, обладающие высокой ростстимулирующей активностью. 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл.