Общие способы получения пептидов: ...ионообменная хроматография – C07K 1/18

Изобретение относится к способу очистки даптомицина, включающий стадии а) загрузки частично очищенного даптомицина в анионообменную хроматографическую колонку и последующие стадии очистки б) и в) в обращено-фазовых хроматографических колонках, где элюирующий буфер на стадии а) представляет собой раствор одновалентной соли и элюирующий буфер на стадии б) и в) представляет собой водный спирт. 3 н. и 13 з.п. ф-лы, 2 пр.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен способ очистки фактора, способствующего заживлению ран, представляющего собой фактор роста гепатоцитов (HGF). Все стадии способа очистки осуществляют в присутствии антитромбина III (AT-III). Согласно предложенному способу осуществляют размораживание замороженного источника, содержащего HGF, и удаление осадка из размороженного источника. Далее полученный раствор, содержащий супернатант и AT-III, приводят в контакт с носителем для аффинной хроматографии на основе иммобилизованного гепарина. Затем отделяют раствор от носителя для аффинной хроматографии. Приводят носитель в контакт с десорбционным буфером с ионной силой, достаточной для десорбции HGF. Собирают десорбционный буфер, содержащий HGF, AT-III и богатый гистидином гликопротеин (HRGP). Также предложены композиции для заживления ран, содержащие очищенный указанным способом HGF, AT-III и/или HRGP. Изобретения позволяют повысить постадийный выход фактора роста гепатоцитов, при этом в присутствии АТ-III фактор роста гепатоцитов сконцентрирован в элюате. 6 н. и 20 з.п. ф-лы, 2 табл., 6 пр.

Группа изобретений относится к способам получения препарата антитела против IL-18 или его антигенсвязывающей части со сниженным содержанием белка клетки-хозяина (БКХ) из образца смеси, содержащей антитело против IL-18 или его антигенсвязывающую часть, и по меньшей мере один БКХ. Способ включает понижение рН от 3,0 до примерно 4,0 образца смеси, доведение рН от 4,5 до примерно 5,5 и проводимости до 9±0,5 мС/см, нанесение образца на катионообменную смолу, осуществление хроматографии гидрофобного взаимодействия и сбор образца. Вариант способа включает осуществление анионообменной хроматографии перед стадией катионообменной хроматографии. Также вариант способа включает фильтрование образца перед анионообменной хроматографией. Группа изобретений позволяет получить препарат антитела с повышенным выходом и чистотой. Выход составляет 96±4%, чистота 99,51±0,26%. 3 н. и 25 з.п. ф-лы, 2 ил., 9 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ очистки антитела, включая антитела, связывающие CD20 и VEGF человека, из композиции, включающей антитело и, по меньшей мере, одно примесное соединение, где указанный способ включает стадии: (a) загрузки композиции на катионообменный материал, где указанная композиция имеет значение первого pH от 4,0 до 6,0; (b) промывки катионообменного материала первым промывочным буфером при pH, значение которого превышает значение pH композиции (а), где pH первого промывочного буфера составляет от 6,8 до 9,0; (c) промывки катионообменного материала вторым промывочным буфером при pH, значение которого меньше значения pH первого промывочного буфера, где второй промывочный буфер имеет проводимость от 0,5 до 3,0 мСм/см и pH от 5,0 до 6,0; и (d) элюирования антитела из катионообменного материала элюирующим буфером при проводимости, по меньшей мере, на 2 мСм/см большей, чем проводимость второго промывочного буфера, где pH второго промывочного буфера и pH элюирующего буфера являются приблизительно одинаковыми и где pH элюирующего буфера составляет от 5,0 до 6,0. Описан способ конъюгирования, включающий конъюгирование очищенного продукта, полученного указанным способом, с гетерологичной молекулой. Также представлен способ получения фармацевтической композиции, включающий объединения указанного очищенного продукта с фармацевтически приемлемым носителем. Изобретение позволяет достичь улучшенной очистки антител, используемых для лечения. 5 н. и 11 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 табл., 2 пр.

Настоящее изобретение предоставляет способ регулирования условий для сайт-специфического связывания полипептида и непептидильного полимера посредством регулирования рН и содержания спирта реакционной среды. Способ предназначен для предотвращения образования побочных конъюгатов, в которых непептидильный полимер связывается с физиологически важным аминокислотным остатком. 14 з.п. ф-лы, 36 ил., 2 табл., 25 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ выделения полимиксина В, продуцируемого спорообразующими бактериями Bacillus polymyxa. Осуществляют очистку нативного раствора, получаемого после отделения биомассы от культуральной жидкости, с использованием макропористого сильнокислотного катионита. Элюируют полимиксин В. Осаждают полимиксин В основание. Затем его переводят в раствор полимиксина В сульфата. Проводят финишную очистку раствора на сульфокислотном катионите и затем сушат. В качестве макропористого сильнокислотного катионита используют Dowex-MSC-1, а в качестве сульфокислотного катионита - КУ-2-20. Способ позволяет получать фармацевтически чистую субстанцию полимиксина В, соответствующую международным требованиям по качеству, при этом повысив выход антибиотика и упростив процесс его получения. 2 з.п. ф-лы, 5 пр.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен способ выделения и очистки целевого белка посредством хроматографии, в котором хроматография удаляет или уменьшает содержание прионов (PrP^sc). Осуществляют взаимодействие потенциально PrP^sc-загрязненного образца, содержащего целевой белок, с комбинированным хроматографическим материалом, содержащим лиганд. Лиганд выбирают из положительно заряженного N-бензил-N-метилэтаноламинового лиганда; отрицательно заряженного лиганда 2-(бензоиламино)бутановой кислоты; фенилпропилового лиганда; N-гексилового лиганда; 4-меркаптоэтилпиридинового лиганда; лиганда 3-[{3-метил-5-((тетрагидрофуран-2-илметил)амино)-фенил}амино]бензойной кислоты. Затем создают буферные условия в хроматографических условиях, таких, чтобы целевой белок связывался с комбинированным хроматографическим материалом, а PrP^sc не связывался с комбинированным хроматографическим материалом. Затем элюируют целевой белок. Также предложена фракция фармацевтически применимого целевого белка с пониженным содержанием прионового белка. Изобретение позволяет, применяя единственную хроматографическую смолу, получать фракцию целевого белка с уменьшенным содержанием PrP^sc от >1 до 4 lg(10). 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 3 табл., 2 пр.

Изобретение относится к способу производства 2S-белка канолы, предусматривающий солюбилизацию белков канолы из муки из масличных семян канолы с применением раствора хлорида натрия, имеющего концентрацию соли от 0,25М до 0,35М и pH от 5 до 6 с образованием раствора белков канолы. Отделяют раствор белков канолы от остаточной муки из масличных семян канолы. Осуществляют контактирование раствора белков канолы с катионообменной средой при pH от 5 до 6 для связывания с катионообменной средой предпочтительно 2S-белка канолы, а не других белков канолы. Отделяют связанный 2S-белок канолы от несвязанных белков канолы и примесей и извлекают связанный 2S-белка канолы из катионообменной среды с помощью водного раствора хлорида натрия, с концентрацией соли от 0,55 до 0,7 М. Способ обеспечивает получение 2S-белка канолы чистотой 99,9%. 5 з.п. ф-лы, 9 табл., 2 пр.

Изобретение описывает хроматографический способ очистки инсулина, аналога инсулина или производного инсулина из смеси, содержащей по меньшей мере одну родственную примесь с использованием нелинейного градиента, позволяющего получать лучшее разрешение при разделении и более высокую чистоту целевого продукта. 2 н. и 12 з.п. ф-лы, 12 пр.

Изобретение относится к области биохимии и молекулярной биологии прокариотической клетки и касается способа получения положительно заряженных белковых фракций с ингибирующей в отношении трипсина активностью в растущей популяции Escherichia coli. Способ включает консервацию клеток в присутствии забуференного 80-90% глицерина с последующим снятием клеточных оболочек 3% тритоном Х-100, экстракцию возрастающими концентрациями солей: 0,14 М, 0,35 М; 2 М NaCl, 6 М гуанидин гидрохлоридом с 0,1% в-меркаптоэтанолом, выделение из вышеперечисленных фракций положительно заряженных белков с помощью ионообменной хроматографии с амберлитом ИРЦ-50 в прерывистом градиенте гуанидин гидрохлорида: 6%, 8,9%, 10,6%, 13% в 0,1 М калий-фосфатном буфере рН 6,8 и определение в них ингибирующей в отношении трипсина активности. Представленное изобретение может быть применено к анализу молекулярно-генетических механизмов формирования структуры клетки прокариот и роли белковых компонентов в их организации, а также особенностей ремоделирования генома. 9 ил., 1 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ получения, выделения и очистки рчГ-КСФ. Осуществляют получение клеток рекомбинантного штамма-продуцента, а затем концентрирование культуральной жидкости. Разрушают бактериальные клетки при выделении тел включения двукратной обработкой высоким давлением. Удаляют примесные белки. Растворяют тела включения и осуществляют восстановление белка. Проводят ренатурацию белка длительностью 70-90 часов с разбавлением раствора белка до 400 л. Полученный раствор наносят на анионообменную ХК диаметром 300 мм с линейной скоростью нанесения 600-1000 мл/мин. Затем проводят концентрирование рчГ-КСФ последовательно на хроматографических колонках с анионообменным и катионообменным сорбентами. Затем осуществляют очистку рчГ-КСФ на катионообменнике в режиме рецикла фракций и стабилизацию диализом. Способ позволяет получать за один цикл стабильный препарат рчГ-КСФ в количестве 15-20 г с гомогенностью более 97% по ВЭЖХ и с гемостимулирующей активностью 1000-1400%. 4 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 пр.

Изобретение относится к области биохимии и молекулярной биологии и касается способа анализа процесса Арг-Х протеолиза в положительно заряженных фракциях белков супрамолекулярных структур в растущей популяции Escherichia coli. Представленный способ включает следующие стадии: консервация клеток в присутствии забуференного 80-90% глицерина, снятие клеточных оболочек 3% тритоном Х-100, экстракция возрастающими концентрациями солей: 0,14 М, 0,35 М; 2 М NaCl, 6 М гуанидин гидрохлоридом с 0,1% -меркаптоэтанолом, выделение из вышеперечисленных фракций положительно заряженных белков с помощью ионообменной хроматографии с амберлитом ИРЦ-50 в прерывистом градиенте гуанидин гидрохлорида: 6%, 8,9%, 10,6%, 13% на 0,1 М калий-фосфатном буфере рН 6,8 и определение в них сайтов чувствительности к Арг-Х протеолизу. Представленное изобретение может быть использовано при анализе молекулярно-генетических механизмов формирования структуры клетки прокариот и роли белковых компонентов в их организации, а также при изучении особенностей ремоделирования генома, что является необходимым для раскрытия путей регулирования механизмов воздействия макро- и микроорганизмов. 9 ил., 1 пр.

Настоящее изобретение относится к способу очистки монопегилированного эритропоэтина, включающему две катионообменных хроматографических стадии, где на обеих катионообменных хроматографических стадиях используется один и тот же тип катионита, а также к способу получения монопегилированного эритропоэтина в форме, являющейся в существенной степени гомогенной. 2 н. и 15 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл., 3 пр.

Изобретение относится к биохимии и молекулярной биологии. Предложен способ препаративного выделения основных белков из надмолекулярных структур растущей популяции Escherichia coli. Проводят консервацию клеток Escherichia coli в забуференном 80-90% глицерине при -25°С. Затем осадок клеток промывают 3% тритоном Х-100. Далее осуществляют экстракцию осадка возрастающими концентрациями солей: 0,14 М, 0,35 М; 2 М NaCl, 6 М гуанидин гидрохлоридом с 0,1% -меркаптоэтанолом. Выделяют из полученных фракций основные белки с помощью ионообменной хроматографии с амберлитом ИРЦ-50 в прерывистом градиенте гуанидин гидрохлорида: 6%, 8,9%, 10,6%, 13% на 0,1 М калий-фосфатном буфере рН 6,8. Способ позволяет получать фракции, обогащенные основными белками, при использовании микроколичества белка клеточных супраструктур Escherichia coli. 7 ил., 1 пр.

Изобретение относится к области хроматографической очистки полипептидов. Предложен способ получения монопегилированного эритропоэтина, включающий его хроматографическую очистку и регенерацию катионообменной хроматографической колонки после элюировании монопегилированного эритропоэтина. Элюирование адсорбированного монопегилированного эритропоэтина из колонки проводят забуференным водным раствором, содержащим хлорид Натрия в концентрации по меньшей мере 500 мМ, затем колонку промывают очищенной водой, вводят в колонку 0,5 М раствора гидроксида натрия, повторно промывают, вводят в колонку раствор, содержащий 0,5 М дигидрофосфата натрия и 1 М фосфорной кислоты, промывают, вводят в колонку 0,5 М раствора гидроксида натрия по меньшей мере на 4 часа и окончательно регенерируют колонку посредством ее промывания очищенной водой. Изобретение обеспечивает высокую чистоту монопегилированного эритропоэтина. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к способу очистки циклического или нециклического пептида, выбранного из группы пептидов, включающей эптифибатид, эксенатид, атозибан и незиритид или их комбинацию, из смеси, содержащей по меньшей мере одну примесь, включающему контактирование указанной смеси с матрицей для ОФ-ВЭЖХ и матрицей для ионообменной хроматографии и получение очищенного пептидного продукта с чистотой по меньшей мере 96% и, предпочтительно, составляет, по меньшей мере, около 99%. 10 з.п. ф-лы, 4 табл., 4 ил., 18 пр.

Способ очистки аполипопротеина А-1 включает смешивание фракции плазмы IV, полученной по способу низкотемпературного фракционирования этанолом с 1-8 М раствором мочевины для формирования подготовительного раствора фракции IV; загрузку подготовительного раствора в первую колонку для анионной хроматографии и последующее элюирование с 1-8 М раствором мочевины с получением раствора ароА-1 протеина; и загрузку раствора ароА-1 протеина во вторую колонку для анионной хроматографии и элюирование с 0-1 М раствором мочевины с получением чистого ароА-1 протеина. 25 з.п. ф-лы, 7 ил., 6 пр.

Изобретение относится к области биохимии и молекулярной биологии и может быть применено в разработках и построении компьютерных моделей организации генных и эпигенных сетей управления. Для анализа Арг-Х протеолиза и его ингибирования в негистоновых и гистоновых белках супрамолекулярных структур клеточных ядер растений отделяют зародыши от эндосперма в определенные интервалы времени от начала замачивания. Зародыши консервируют. Экстрагируют ядерные фракции и из ядерных фракций выделяют гистоновые и негистоновые белки с помощью ионообменной хроматографии с амберлитом ИРЦ-50 в прерывистом градиенте гуанидин гидрохлорида. В белках определяют сайты Арг-х протеазо- и ингибитор-трипсиновой активности. 4 ил.

Настоящее изобретение относится к способу выделения Apo2L/TRAIL из смеси, в котором Apo2L/TRAIL выделяют в кристаллической форме с чистотой не менее 99%. 29 з.п. ф-лы, 5 ил., 4 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу очистки белка рекомбинантной стафилокиназы. Предложенное изобретение может быть использовано в фармацевтической промышленности. Способ включает суспендирование клеток штамма Е.coli MZ08 - продуцента рекомбинантной стафилокиназы, характеризующейся аминокислотной SEQ ID NO:1, в фосфатном буферном растворе. Проводят гомогенизацию и центрифугирование полученного супернатанта, затем хроматографию в два этапа, на первом этапе осуществляют ионообменную хроматографию на колонке, заполненной DE-целлюлозой с получением фракции, обогащенной стафилокиназой. Затем полученную фракцию разбавляют раствором хлорида натрия и осуществляют второй этап с помощью металлхелатирующей аффинной хроматографии. Предложенное изобретение позволяет осуществлять очистку белка рекомбинантной стафилокиназы с высокой чистотой.

Из клеток растений экстрагируют ядерные фракции, из которых с помощью ионообменной хроматографии с амберлитом ИРЦ-50 в прерывистом градиенте гуанидин гидрохлорида выделяют гистоновые белки хроматина. Способ позволяет глубже изучить молекулярно-генетические механизмы структур клеточного ядра и роль белковых компонентов в их организации. 3 ил., 1 табл.

Настоящее изобретение относится к хроматографическому лиганду, представляющему собой N-бензил-N-метилэтаноламин, а также к способу получения сепарационной матрицы, содержащей указанный лиганд, и хроматографической колонки для очистки антител. 5 н. и 5 з.п. ф-лы, 4 табл., 6 ил.

СПОСОБ ОЧИСТКИ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНТЕРФЕРОНА -1b

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу получения рекомбинантного интерферона бета-1b человека. Предложенный способ очистки рекомбинантного интерферона бета-1b человека (рИФН бета-1b) предусматривает оптимизацию процессов отмывания тел включения, их растворения и рефолдинга целевого белка. Очистка рИФН бета-1b человека ведется с использованием в качестве основного детергента цвиттергента 3-14 для отмывки и растворения тел включения E.coli с последующим рефолдингом рИФН бета-1b, после чего осуществляют прехроматографическую обработку образца. Далее проводят хроматографию на Ceramic S, хроматографию на Source S30 и окисление с использованием смеси цистеамин/цистамин, после чего делают гель-фильтрацию на Superdex 75 Prep grade, хроматографию на Source Q30, гель-фильтрации на Sephacril S200HR и в конце осуществляют контроль эффективности очистки целевого белка методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Предложенный способ очистки позволяет обеспечить 10% выход целевого белка и получить рИФН бета-1b человека, отвечающий требованиям нормативных документов с высоким уровнем удельной противовирусной активности. 5 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения пэгилированного соматотропного гормона. Способ получения соматотропного гормона (СТГ) со сниженным содержанием агрегата его изоформ предусматривает отделение изоформ СТГ посредством анионообменного хроматографирования с применением анионообменной смолы для снижения содержания упомянутого агрегата до не более чем 10% (мас.), исходя из общей массы упомянутых изоформ и упомянутого агрегата. При этом осуществляют загрузку упомянутого СТГ, включающего дефенилаланиновую и/или трисульфидную примесь и/или его агрегат, на анионообменную смолу, выбранную из группы, включающей диэтиламиноэтилцеллюлозу и Q-сефарозу. Загрузку осуществляют при значении проводимости загрузки анионообменной смолы, меньшем либо равном 10 мСм/см, при pH загрузки анионообменной смолы от 5 до 10 и при загрузке анионообменной смолы СТГ, включающим упомянутую примесь или упомянутый агрегат, составляющую не более чем 10 г белка/л объема, заполненного анионообменной смолой. Изобретение позволяет получить соматотропный гормон со сниженным содержанием агрегата его изоформ, а также его антагонист со сниженным содержанием агрегата его изоформ и общим суммарным содержанием трисульфидной примеси и/или дефенилаланиновой примеси. 3 н. и 5 з.п. ф-лы, 5 ил., 8 табл.

Изобретение относится к области медицины и касается способа получения, выделения, очистки и стабилизации рекомбинантного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора человека (рчГ-КСФ), пригодного для медицинского использования, путем разрушения рекомбинантных бактериальных клеток, выделения тел включения, удаления примесных бактериальных белков, восстановления, ренатурации, хроматографической очистки и стабилизации рчГ-КСФ, а также иммунобиологического средства на его основе. Изобретение обеспечивает высокий выход, качество и стабильность рчГ-КСФ. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 5 ил., 6 табл.