Общие способы получения пептидов: ..комбинацией двух или более способов разного типа – C07K 1/36

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен способ очистки фактора, способствующего заживлению ран, представляющего собой фактор роста гепатоцитов (HGF). Все стадии способа очистки осуществляют в присутствии антитромбина III (AT-III). Согласно предложенному способу осуществляют размораживание замороженного источника, содержащего HGF, и удаление осадка из размороженного источника. Далее полученный раствор, содержащий супернатант и AT-III, приводят в контакт с носителем для аффинной хроматографии на основе иммобилизованного гепарина. Затем отделяют раствор от носителя для аффинной хроматографии. Приводят носитель в контакт с десорбционным буфером с ионной силой, достаточной для десорбции HGF. Собирают десорбционный буфер, содержащий HGF, AT-III и богатый гистидином гликопротеин (HRGP). Также предложены композиции для заживления ран, содержащие очищенный указанным способом HGF, AT-III и/или HRGP. Изобретения позволяют повысить постадийный выход фактора роста гепатоцитов, при этом в присутствии АТ-III фактор роста гепатоцитов сконцентрирован в элюате. 6 н. и 20 з.п. ф-лы, 2 табл., 6 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к рекомбинантной продукции белков человека, и может быть использовано для получения гибридного рекомбинантного эритропоэтина человека. Конструируют нуклеотидные последовательности, кодирующие гибридные белки EPO-TR 1,6, EPO-TR 4 и EPO-TR 6. Белок ЕРО-TR 1,6 представляет собой рекомбинантный эритропоэтин человека, слитый с фрагментом TR 1,6 белка MUC1 человека. Белок EPO-TR 4 представляет собой рекомбинантный эритропоэтин человека, слитый с фрагментом TR 4 белка MUC1 человека. Гибридный белок EPO-TR 6 представляет собой рекомбинантный эритропоэтин человека, слитый с фрагментом TR 6 белка MUC1 человека. Гибридные белки получают путем роллерного культивирования в подходящих условиях модифицированной линии клеток млекопитающих СНО, содержащей кодирующую белок нуклеотидную последовательность с последующим выделением гибридного белка из культуральной жидкости. Изобретение позволяет получить гибридный рекомбинантный эритропоэтин человека, обладающий пролонгированным действием. 4 н.п. ф-лы, 4 ил, 7 табл., 9 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ выделения и очистки рекомбинантного гормона роста человека, секретируемого дрожжами Saccharomyces cerevisiae в процессе их ферментации в соответствующих условиях. Осаждают целевой белок из освобожденной от биомассы культуральной жидкости путем либо подкисления до pH 2,9-4,0, либо добавлением полиэтиленгликоля 3000-6000 Да. Затем растворяют полученный осадок в подходящем растворителе. Осуществляют предварительную очистку целевого белка либо методом анионообменной хроматографии при pH 5,6, либо методом диафильтрации в присутствии 0,1-0,5 M хлористого натрия. Затем проводят основную очистку целевого белка методом анионообменной хроматографии при pH не менее 7,3 и гель-фильтрацию. Изобретение позволяет получить гормон роста, свободный от родственных белков, белков продуцента-хозяина и других примесей, таких как пигменты, с выходом до 60%. 8 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу получения комплекса иммуноглобулинов IgG, IgM и IgA для внутривенного введения. Способ включает растворение спиртовой фракции III Кона плазмы, содержащей иммуноглобулины в буферном растворе. Доводят концентрацию белка до 0,5-5%, устанавливают pH раствора 4,9-5,1 добавлением 1,0 М соляной кислоты при температуре 0-20°C. Проводят ультрафильтрацию, диафильтрацию, диализ или комбинацию этих методов. Осуществляют стерилизующую фильтрациию, при этом очистку от белковых примесей, включая липопротеиды, из фракций плазмы, осуществляют каприлатом натрия. Удаление изоагглютининов проводят аффинной хроматографией с использованием 0,1 М ацетатного буферного раствора при pH 5,2-6,5. Затем препарат прогревают для снижения антикомплементарной активности не выше 29°C в течение 18-48 часов и выстаивают не менее 1 месяца при комнатной температуре. Предложенное изобретение позволяет получить препарат, содержащий не только высокую концентрацию противовирусных, но и антибактериальных антител, ареактогенный при внутривенном введении. 2 з.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ получения, выделения и очистки рчГ-КСФ. Осуществляют получение клеток рекомбинантного штамма-продуцента, а затем концентрирование культуральной жидкости. Разрушают бактериальные клетки при выделении тел включения двукратной обработкой высоким давлением. Удаляют примесные белки. Растворяют тела включения и осуществляют восстановление белка. Проводят ренатурацию белка длительностью 70-90 часов с разбавлением раствора белка до 400 л. Полученный раствор наносят на анионообменную ХК диаметром 300 мм с линейной скоростью нанесения 600-1000 мл/мин. Затем проводят концентрирование рчГ-КСФ последовательно на хроматографических колонках с анионообменным и катионообменным сорбентами. Затем осуществляют очистку рчГ-КСФ на катионообменнике в режиме рецикла фракций и стабилизацию диализом. Способ позволяет получать за один цикл стабильный препарат рчГ-КСФ в количестве 15-20 г с гомогенностью более 97% по ВЭЖХ и с гемостимулирующей активностью 1000-1400%. 4 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Готовят биомассу грамотрицательных бактерий Salmonella typhi семейства Enterobacteriacea. Выделяют пептидогликан клеточной стенки (ПКС) бактерий с помощью экстракции биомассы 45% водным фенолом при температуре 70-90°С или водными растворами ионных или неионных детергентов при температуре 37-100°С. Проводят препаративный ферментативный гидролиз для расщепления нерастворимого ПКС с применением лизоцима при рН 4,5-8,9 и температуре 10-37°С. Одновременно удаляют фармакологически приемлемую смесь веществ из реакционной смеси диализом с применением полупроницаемых мембран для ультрафильтрации с размером отсечки до 5 кДа. Проводят выделение смеси веществ также с помощью колоночной гель-проникающей хроматографии, в частности препаративной гель-хроматографии на колонках с Сефадексом или TSK-гелем. Способ позволяет получить фармакологически-приемлемую смесь веществ, включающую следующие компоненты: -N-ацетил-D-глюкозаминил-(1 4)-N-ацетил-D-мурамоил-(L-аланил-D-изоглютаминил-мезо-диаминопимелиновая кислота) (ГМтри);

-N-ацетил-D-глюкозаминил-(1 4)-N-ацетил-D-мурамоил-(L-аланил-D-изоглютаминил-мезо-диаминопимелоил-D-аланин) (ГМтетра); и

димер ГМтетра (диГМтетра), в котором связь между мономерными остатками ГМтетра осуществляется за счет карбоксильной группы терминального D-аланина одного остатка ГМтетра и -аминогруппы мезо-диаминопимелиновой кислоты другого остатка ГМтетра, причем связанные между собой тетрапептидные остатки расположены в разных полисахаридных цепях. Выход целевого продукта составляет 320 мг. 3 з.п. ф-лы, 2 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ получения овомукоида. К белку утиных яиц добавляют равный объем смеси 0,5 М водного раствора трихлоруксусной кислоты и органического растворителя в объемном отношении 1:1,8-2,3. Отделяют образующийся осадок фильтрованием при 0-5°С. Затем добавляют к фильтрату органический растворитель в объемном отношении органического растворителя и фильтрата 3-3,5:1. Удаляют надосадочную жидкость декантированием при 0-5°С. Удаляют низкомолекулярные примеси из овомукоида ультрафильтрацией. Лиофильно высушивают овомукоид. В качестве органического растворителя используют смесь этанола и ацетона в объемном отношении 40-65:60-35. Изобретение способствует повышению выхода овомукоида до 1,66 г/100 мл яичного белка и увеличению степени чистоты овомукоида до 99,5%. 1 табл., 5 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению рекомбинантных белков в Escherichia coli, и может быть использовано для синтеза паратиреоидного гормона человека (rhPTH (1-34)). Конструируют кДНК, кодирующую химерный нуклеотид ORF под контролем индуцибельного промотора, выбранного из группы, состоящей из ara_BAD, trp, T7, lac, Pho и trc, путем амплификации кДНК с помощью RT-PCR с использованием ген-специфических праймеров, кодирующих rhPTH (1-34) химерный гибридный белок, в котором химерный гибридный партнер по существу состоит из 41 аминокислот, полученных из 124-164 аминокислоты пептида бета-галактозидазы (LacZ) Escherichia coli. Затем экспрессируют химерный гибридный белок в присутствии лактозы в качестве индуктора в пределах около 10-30% общего белка на основе массы. Изобретение позволяет упростить и удешевить синтез rhPTH (1-34) за счет оптимизации его экспрессии в Escherichia coli. 11 з.п. ф-лы, 15 ил., 2 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения и очистки ингибина-А человека. Измельчают кусочки плаценты и гомогенизируют. Добавляют физиологический раствор в соотношении 1:2. К полученной массе добавляют бутиловый спирт в расчете 1:10 и оставляют на сутки в холодильнике при t +4°C. Затем смесь центрифугируют с диэтиловым эфиром 1:3 в течение 10-12 минут при 5000 об/мин в рефрижераторной центрифуге двукратно. Надосадочную жидкость, содержащую ингибин, помещают в колбе в холодильник при t +4°C на сутки. Затем еще раз центрифугируют надосадочную жидкость и определяют общий белок в ней. Полученный раствор смешивают с равным объемом насыщенного раствора сульфата аммония и центрифугируют в рефрижераторной центрифуге в течение 45-50 мин при 10000 об/мин. Полученный осадок растворяют в ТРИС-HCl буфере с рН 7,8. Наносят на колонку лектин-сефарозы, уравновешенную ТРИС-HCl буфером. Пропускают весь объем растворенного осадка, полученного на предшествующей стадии. Колонку промывают 1 М раствором хлорида натрия, забуференного ТРИС-HCl буфером. Затем элюируют связанный на колонке ингибин-А 0,1 М раствором лактозы в боратном буфере рН 9,0. Элюат диализуют и концентрируют. Способ позволяет получать ингибин-А с выходом 16,3%, повышенной удельной активностью и высокой степенью очистки 138,8. 1 табл.

Группа изобретений относится к способу получения человеческого альбумина с высокой связывающей способностью для применения, в частности, в детоксикационной терапии. Способ получения раствора человеческого альбумина из плазмы крови человека включает: а) получение фильтрата из плазмы крови, представляющего собой раствор альбумина, по существу свободный от нерастворимых остатков денатурированного белка и других соединений, не растворимых в этаноле; b) первую стадию диафильтрации; с) стабилизацию продукта, полученного на стадии (b), раствором NaCl и N-ацетилтриптофаном без добавления жирных кислот; d) пастеризацию продукта, полученного на стадии (с); е) вторую стадию диафильтрации до полного удаления N-ацетилтриптофа с получением раствора человеческого альбумина. Предложенный способ обеспечивает получение раствора человеческого альбумина с инактивированными вирусами, обладающего высокой способностью к связыванию и переносу молекул и ассоциированных соединений, который может быть использован для применения в детоксикационной терапии посредством выведения токсинов из крови предпочтительно способами инфузии альбумина, плазмофереза и замены альбумина или с помощью экстракорпоральной системы. 2 н. и 12 з.п. ф-лы, 1 табл., 5 ил.

СПОСОБ ОЧИСТКИ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНТЕРФЕРОНА -1b

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу получения рекомбинантного интерферона бета-1b человека. Предложенный способ очистки рекомбинантного интерферона бета-1b человека (рИФН бета-1b) предусматривает оптимизацию процессов отмывания тел включения, их растворения и рефолдинга целевого белка. Очистка рИФН бета-1b человека ведется с использованием в качестве основного детергента цвиттергента 3-14 для отмывки и растворения тел включения E.coli с последующим рефолдингом рИФН бета-1b, после чего осуществляют прехроматографическую обработку образца. Далее проводят хроматографию на Ceramic S, хроматографию на Source S30 и окисление с использованием смеси цистеамин/цистамин, после чего делают гель-фильтрацию на Superdex 75 Prep grade, хроматографию на Source Q30, гель-фильтрации на Sephacril S200HR и в конце осуществляют контроль эффективности очистки целевого белка методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Предложенный способ очистки позволяет обеспечить 10% выход целевого белка и получить рИФН бета-1b человека, отвечающий требованиям нормативных документов с высоким уровнем удельной противовирусной активности. 5 табл.

Изобретение относится к биохимии. Препарат гипоаллергенного основного аллергена пыльцы березы r Bet v 1 получают с помощью одного или более этапов хроматографической очистки при использовании существенно небуферизованных водных оснований в качестве элюента и последующей нейтрализации. Гипоаллергенные основные аллергены пыльцы березы отличаются отсутствием или снижением связывания иммуноглобулина Е с одновременным сохранением терапевтически релевантной стимуляции Т-клеток. Поэтому полученный препарат может быть использован в качестве терапевтического агента с уменьшенными побочными эффектами для специфической иммунотерапии. 5 н. и 22 з.п. ф-лы, 1 табл., 4 ил.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложенный способ основывается на преобразовании телец включения в растворимую форму при использовании органических денатурирующих реагентов, а также при использовании хроматографических методов. При хроматографии выбирают неорганические, щелочные, солесодержащие элюенты. После окончания очистки получают рекомбинантные варианты Bet v 1 аллергена в форме, которая может непосредственно использоваться для медицинских целей. Преимущество способа состоит в минимальной обработке образца, использовании фармакологически совместимых веществ, кроме этого в процессе очистки раствора целевого белка эффективно удаляются эндотоксины. 11 з.п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам адсорбционной хроматографии бычьего сывороточного альбумина (БСА) с использованием модифицированных адсорбентов, и может быть использовано для выделения БСА из растворов. Способ включает адсорбцию БСА на адсорбенте - модифицированном хитозаном углеродном волокне, который получают электрохимической обработкой углеродного волокна в растворе хитозана в разбавленной соляной кислоте в присутствии NaCl в условиях поляризации, а элюцию БСА проводят в условиях катодной поляризации при потенциалах (-0,3)÷(-0,9) В. Преимуществом заявленного способа является возможность выделения БСА из растворов без примесей. 1 з.п. ф-лы, 1 ил.

Изобретение относится к области медицины и касается способа получения, выделения, очистки и стабилизации рекомбинантного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора человека (рчГ-КСФ), пригодного для медицинского использования, путем разрушения рекомбинантных бактериальных клеток, выделения тел включения, удаления примесных бактериальных белков, восстановления, ренатурации, хроматографической очистки и стабилизации рчГ-КСФ, а также иммунобиологического средства на его основе. Изобретение обеспечивает высокий выход, качество и стабильность рчГ-КСФ. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 5 ил., 6 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в пищевой, косметической, медицинской и других областях промышленности. Способ включает очистку белкового сырья, добавку воды и льда, измельчение смеси с последующим гидролизом. По окончании гидролиза гомогенизируют коллагенсодержащий раствор и отделяют коллаген. Гидролиз проводят в две стадии. Первую стадию выполняют путем обработки реакционной смеси липазой из гриба Rhizopus oryzae, а на второй стадии используют протеолитический фермент в виде нейтральной протеазы. Изобретение позволяет получить коллаген, близкий по своим физико-химическим и структурно-механическим свойствам к природному. 3 з п. ф-лы.