Пептиды, содержащие более 20 аминокислот, гастрины, соматостатины, меланотропины, их производные: ...эритропоэтин (ЭПО) – C07K 14/505

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способу получения субстанции рекомбинантного эритропоэтина и ее нанокапсулированной форме, и может быть использовано в медицине. Способ включает последовательное культивирование в ростовой и накопительных средах, где ростовая среда содержит 5,0 мас.% сыворотки крови крупного рогатого скота и питательную среду Игла МЕМ, а накопительная содержит 49,0-80,0 мг/л пролина, 40,0-60,0 мг/л глицина и смесь равных долей сред DMEM и F-12. На основе полученной указанным образом субстанции рекомбинантного эритропоэтина получают ее нанокапсулированную форму. Изобретение позволяет получить субстанцию ЭПО с увеличенной специфической активностью и свободную от посторонних белковых примесей и пригодную для нанокапсулирования, а также упростить технологию ее получения. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 5 ил., 1 табл., 12 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к рекомбинантной продукции белков человека, и может быть использовано для получения гибридного рекомбинантного эритропоэтина человека. Конструируют нуклеотидные последовательности, кодирующие гибридные белки EPO-TR 1,6, EPO-TR 4 и EPO-TR 6. Белок ЕРО-TR 1,6 представляет собой рекомбинантный эритропоэтин человека, слитый с фрагментом TR 1,6 белка MUC1 человека. Белок EPO-TR 4 представляет собой рекомбинантный эритропоэтин человека, слитый с фрагментом TR 4 белка MUC1 человека. Гибридный белок EPO-TR 6 представляет собой рекомбинантный эритропоэтин человека, слитый с фрагментом TR 6 белка MUC1 человека. Гибридные белки получают путем роллерного культивирования в подходящих условиях модифицированной линии клеток млекопитающих СНО, содержащей кодирующую белок нуклеотидную последовательность с последующим выделением гибридного белка из культуральной жидкости. Изобретение позволяет получить гибридный рекомбинантный эритропоэтин человека, обладающий пролонгированным действием. 4 н.п. ф-лы, 4 ил, 7 табл., 9 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению пептидного производного - миметика ЭПО, имеющего формулу (I):

и его фармацевтических солей, где R ₁, R₅ выбраны из циклических пептидов, имеющих последовательности SEQ ID NO:5, 6, 7 и 8; n₁, n ₂ представляют собой целые числа, независимо выбранные из 0-10; R₂, R₄ выбраны из -СО или -CH ₂; R₃ выбран из О, S, CH₂, N(CH ₂)_n3NHR₆, NCO(CH₂) _n4NHR₆, CHOCONH(CH₂)_n5 NHR₆, CHSCON(CH₂)_n5NHR₆ или CHNHCON(CH₂)_n5NHR₆; где n₃ представляет собой целое число, выбранное из 1-10, n₄ представляет собой целое число, выбранное из 2-10, n₅ представляет собой целое число, выбранное из 2-10, R₆ выбран из Н или производных метоксиполиэтиленгликоля. Полученный пептид или его фармацевтически приемлемую соль используют в составе фармацевтической композиции для лечения расстройств, характеризующихся недостаточностью ЭПО, низкой или дефектной популяцией эритроцитов. Изобретение позволяет получить агонист рецептора ЭПО, обладающий повышенной биологической активностью по сравнению с уже существующими миметиками ЭПО. 5 н. и 10 з.п. ф-лы, 2 ил., 5 табл., 19 пр.

Настоящее изобретение относится к способу очистки монопегилированного эритропоэтина, включающему две катионообменных хроматографических стадии, где на обеих катионообменных хроматографических стадиях используется один и тот же тип катионита, а также к способу получения монопегилированного эритропоэтина в форме, являющейся в существенной степени гомогенной. 2 н. и 15 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл., 3 пр.

В изобретении описаны штаммы гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus ВКПМ Н-117, ВКПМ Н-116, ВКПМ Н-115, ВКПМ Н-113 и ВКПМ Н-114 - продуценты моноклональных антител, обладающих различной специфичностью к рекомбинантному эритропоэтину (ЭПО) человека и позволяющих отличать гликозилированную форму ЭПО от сопутствующих гипо- и дегликозилированных примесей. Оценка продуктивности штаммов и специфичности продуцируемых антител проведена на основе иммуноферментного анализа с использованием нескольких маркеров специфичности: рекомбинантного белка ЭПО; гипогликозилированного ЭПО (о-ЭПО), полученного в результате периодатного окисления природного антигена; дегликозилированного ЭПО (de-ЭПО), полученного в результате ферментативной обработки рекомбинантного ЭПО (PNGasa). Продуцируемые гибридомами моноклональные с указанной специфичностью необходимы для выделения гликозилированной формы ЭПО, а также количественного и качественного анализа смесей ЭПО. 5 н.п. ф-лы, 2 табл., 5 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению эритропоэтина, слитого с Fc-фрагментом человеческого IgG, и может быть использовано в медицине. Рекомбинантным путем получают слитый белок, содержащий природную молекулу человеческого эритропоэтина с остатком цистеина вблизи ее С-конца и фрагмент Fc человеческого IgG, содержащий шарнирную область, причем N-конец указанного Fc-фрагмента присоединен к указанному С-концу указанной молекулы эритропоэтина и при этом указанный Fc-фрагмент является природным, за исключением мутации, состоящей в замещении остатка цистеина в указанной шарнирной области, расположенного ближе всего к указанной эритропоэтиновой молекуле, нецистеиновым остатком, в результате чего первый цистеиновый остаток указанной шарнирной области, расположенный ближе всего к указанному N-концу, отделен по меньшей мере 12 или 17 аминокислотами от указанного остатка цистеина указанной молекулы эритропоэтина. Полученный пептид используют для стимуляции эритропоэза у млекопитающего. Изобретение позволяет получить слитый белок, обладающий активностью эритропоэтина, имеющий продленное время полужизни in vivo по сравнению с нативным человеческим эритропоэтином. 12 н. и 31 з.п. ф-лы, 20 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и к иммунологии. Изобретение представляет собой эритропоэтин, конъюгированный с полиэтиленгликолем, где ПЭГ присоединен к эритропоэтину посредством ароматической азогруппы. Изобретение позволяет увеличить время циркуляции эритропоэтина в крови с сохранением его биологической активности. 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл.

Изобретение относится к области медицины и касается Fc-эритропоэтин слитого белка с улучшенной фармакокинетикой. Сущность изобретения включает новые сиалилированные Fc-EPO слитые белки, предпочтительно включающие пару модификаций в Fc-части, а также в ЕРО части, которые имеют улучшенную фармакокинетику. В частности, Fc-EPO белки обладают длительным периодом полураспада в сыворотке крови и повышенной эффективностью in vivo. Fc-EPO слитые белки, синтезированные в клетках ВНК, обладают значительно более продолжительными периодами полураспада в сыворотке крови и повышенной эффективностью in vivo по сравнению с соответствующими Fc-EPO слитыми белками, полученными в других линиях клеток, таких как, например, клетки NS/0. Преимущество изобретения заключается в улучшении фармакокинетических свойств эритропоэтина. 8 н. и 15 з.п. ф-лы, 6 табл., 11 ил.

Изобретение относится к биоорганической химии и касается нового конъюгата эритропоэтина, способа его получения и фармацевтической композиции на его основе. Предложен конъюгат гидроксиэтилкрахмала и эритропоэтина, содержащий одну или несколько молекул гидроксиэтилкрахмала. Каждая молекула гидроксиэтилкрахмала конъюгирована с эритропоэтином, через углеводный фрагмент. Указанный гидроксиэтилкрахмал имеет молекулярную массу от 1 до 300 кДа и проявляет соотношение С ₂:С₆-замещения в диапазоне 2-20 по гидроксиэтильным группам. Предложен способ получения конъюгата гидроксиэтилкрахмала и эритропоэтина, в соответствии с которым необязательно частично или полностью ферментативно и/или химически удаляют концевую сиаловую кислоту и необязательно частично или полностью окисляют концевое сахаридное звено эритропоэтина с получением эритропоэтина, способного к реакции с модифицированным гидроксиэтилкрахмалом. В гидроксиэтилкрахмал вводят свободную гидразидную, гидроксиламиновую, тиольную или семикарбазидную функциональную группу с получением модифицированного гидроксиэтилкрахмала, который конъюгируют с эритропоэтином, способным к реакции с модифицированным гидроксиэтилкрахмалом, и получают конъюгат гидроксиэтилкрахмала и эритропоэтина, содержащий одну или несколько молекул гидроксиэтилкрахмала. Фармацевтическая композиция содержит конъюгат гидроксиэтилкрахмала и эритропоэтина, который обладает активностью эритропоэтина, и фармацевтически приемлемый разбавитель, адъювант и/или носитель. Технический результат - конъюгат гидроксиэтилкрахмала и эритропоэтина, обладающий активностью эритропоэтина. 3 н. и 16 з.п. ф-лы, 4 табл., 25 ил.

(56) (продолжение):

CLASS="b560m"biological activity of recombinant human erythropoietin produced in Chinese hamster ovary cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1989, 86:7819-22. КЕННЕДИ ДЖ.Ф., УАЙТ К.А. Полисахариды Бартон Д. и Оллис У.Д. Общая органическая химия, т.11. - М.: Химия, 1986, с.207-236, с.263-274.

Изобретение относится к области генной инженерии и может быть использовано в медико-биологической промышленности для получения белков терапевтического назначения, а также в медицине как средство для генной терапии. Предложены варианты конструкции ДНК, предназначенной для интегрирования в определенный сайт (сайт-мишень) хромосомной ДНК клетки, располагающийся перед интересующим эндогенным геном, за счет гомологичной рекомбинации между последовательностью указанного сайта-мишени и «направляющей» последовательностью, входящей в структуру данной конструкции. ДНК-конструкция также включает экзогенный промотор и экзон с неспаренным донорным сайтом сплайсинга или экзон с донорным сайтом и интрон с акцепторным сайтом сплайсинга. В результате встраивания такой конструкции в геном клетки образуются новые (не существующие в природе) транскрипционные единицы и обеспечивается возможность направленного изменения экспрессии любого эндогенного гена. 59 з.п. ф-лы, 15 ил., 7 табл.

Изобретение относится к области генной инженерии и биотехнологии и может быть использовано в медицине. С помощью технологии рекомбинантных ДНК получен гликозилированный полипептид (гликопротеид) эритропоэтина человека, обладающий способностью увеличивать продукцию ретикулоцитов и эритроцитов, а также повышать уровень синтеза гемоглобина и потребление железа клетками костного мозга и характеризующийся более высокой, по сравнению с эритропоэтином, выделенным из мочи человека, молекулярной массой. Описаны варианты кодирующих его последовательностей ДНК, включающие эти последовательности векторные конструкции, получение трансформированных линий клеток млекопитающих, продуцирующих рекомбинантный эритропоэтин человека, а также способ его получения и очистки. Предложены фармацевтические композиции, включающие гликозилированный полипептид (гликопротеид) эритропоэтина по изобретению в качестве активного начала. Применение изобретения позволяет масштабировать процесс получения активного эритропоэтина человека, пригодного для использования в медицине. 13 н. и 9 з.п. ф-лы, 4 ил., 21 табл.

Изобретение относится к молекулярной биологии и может быть использовано в медицине. Описан существенно гомогенный полипептид лиганд mpI, представляющий собой полипептидный фрагмент формулы X-hTPO-Y, где hTPO имеет аминокислотную последовательность фрагментов человеческого ТРО (hML), X - аминоконцевая аминогруппа или аминокислотный(е) остаток(ки), Y - карбоксиконцевая карбоксигруппа или аминокислотный(е) остаток(ки), или химерный полипептид, или фрагмент полипептида, содержащий N-концевые остатки аминокислотной последовательности hML. Изобретение охватывает также НК, кодирующую полипептид, экспрессирующий вектор, включающий НК. Описаны способы получения полипептида с использованием клетки-хозяина, трансформированного вектором, и антитела к полипептиду. Описанны методы и средства с использованием активных агентов данного изобретения. Полипептид лиганд mpI влияет на репликацию, дифференциацию или созревание клеток крови, особенно мегакариоцитов и прогениторных клеток мегакариоцитов, что позволяет использовать полипептиды по изобретению для лечения тромбоцитопении. 7 с. и 14 з.п. ф-лы, 42 ил., 15 табл.