Пептиды, содержащие более 20 аминокислот, гастрины, соматостатины, меланотропины, их производные: ....бета-интерферон – C07K 14/565

ПРОМЫШЛЕННЫЙ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ И ОЧИСТКИ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНТЕРФЕРОНА -1b ЧЕЛОВЕКА ИЗ ТЕЛЕЦ ВКЛЮЧЕНИЯ

Изобретение относится к области биохимии. Раскрыт способ получения и очистки интерферона -1b. Предложенный способ получения и очистки интерферона -1b включает отмывку телец включения 0,3% раствором трифторуксусной кислоты в воде, с последующим центрифугированием, экстракцию белка из отмытых телец включения раствором, содержащим 1-пропанол:вода в соотношении (1:1) с добавлением 0,3% трифторуксусной кислоты, очистку с помощью обращенно-фазовой хроматографии на сорбенте С₄, рефолдинг в буферном растворе, содержащем 1% лаурат натрия, 50 мМ Na₂HPO₄ при рН 9.0 с добавлением 10 мкМ сульфата меди, растворенного в аммиаке, экстракцию интерферона -1b из водного раствора с помощью 75% раствора фенола в воде и очистку с помощью обращенно-фазовой хроматографии на сорбенте C₁₈. Также раскрыто применение 0,3% раствора трифторуксусной кислоты для отмывки телец включения, содержащих интерферон -1b. Изобретение позволяет получать очищенный интерферон -1b в промышленных масштабах в эффективном количестве. 3 н.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл., 3 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, для изготовления лекарственных препаратов для иммунокоррекции или использования как компонент тест-системы для определения интерферонового статуса человека в норме и патологии. Технический результат достигается созданием рекомбинантной плазмидной ДНК pFastBac-B17R, несущей фрагмент генома вируса оспы коров. Штамм рекомбинантного бакуловируса BvB17RG получен с помощью рекомбинантной плазмидной ДНК pFastBac-B17R и депонирован в коллекции культур микроорганизмов ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора под номером V-388, является продуцентом растворимого белка-аналога клеточного рецептора интерферонов I-го типа вируса оспы коров. Техническим результатом изобретения является расширение спектра препаратов нового поколения. 2 н.п.ф-лы, 5 ил.

Изобретение относится к протеиновым аналогам интерферона- , в которых аспарагин в положении 25, в соответствии с нумерацией аминокислот в нативном интерфероне- , деамидирован, и цистеин в положении 17, в соответствии с нумерацией аминокислот в нативном интерфероне- , делетирован или замещен нейтральной аминокислотой, которые проявляют повышенные уровни биологической активности нативного интерферона- человека и не требуют НА для стабилизации протеина. Деамидированный продукт пригоден для крупномасштабного производства по введению в содержащие НА или не содержащие НА терапевтические средства для лечения заболеваний, включая рассеянный склероз. Также представлен способ пептидного картирования с помощью эндопротеиназы-С, которая дает хроматографический профиль протеинов при использовании ферментативного расщепления с последующей RP-HPLC, пригодна для качественного контроля в качестве ID и/или количественного теста деамидированных продуктов. 5 н. и 16 з.п. ф-лы, 18 ил., 6 табл.

СПОСОБ ОЧИСТКИ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНТЕРФЕРОНА -1b

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу получения рекомбинантного интерферона бета-1b человека. Предложенный способ очистки рекомбинантного интерферона бета-1b человека (рИФН бета-1b) предусматривает оптимизацию процессов отмывания тел включения, их растворения и рефолдинга целевого белка. Очистка рИФН бета-1b человека ведется с использованием в качестве основного детергента цвиттергента 3-14 для отмывки и растворения тел включения E.coli с последующим рефолдингом рИФН бета-1b, после чего осуществляют прехроматографическую обработку образца. Далее проводят хроматографию на Ceramic S, хроматографию на Source S30 и окисление с использованием смеси цистеамин/цистамин, после чего делают гель-фильтрацию на Superdex 75 Prep grade, хроматографию на Source Q30, гель-фильтрации на Sephacril S200HR и в конце осуществляют контроль эффективности очистки целевого белка методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Предложенный способ очистки позволяет обеспечить 10% выход целевого белка и получить рИФН бета-1b человека, отвечающий требованиям нормативных документов с высоким уровнем удельной противовирусной активности. 5 табл.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ очистки интерферона бета человека из рекомбинантной культуры, содержащей интерферон бета человека, включающий проведение аффинной хроматографии и обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ОФ-ВЭЖХ). Аффинная хроматография включает адсорбцию культуры, содержащей интерферон бета, на уравновешенной хроматографической колонке, промывание колонки промывочным буферным раствором А с рН 6,5-7,5, содержащим 30-60 мас.% пропиленгликоля, и промывочным буферным раствором В с рН 6,5-7,5, содержащим 10-30 мас.% пропиленгликоля и 1-2 М NaCl, с элюцией фракции, содержащей интерферон бета человека, буферным раствором с рН 6,5-7,5, содержащим 40-60 мас.% пропиленгликоля и 1-2 М NaCl. Полученный раствор подвергают диафильтрации и осуществляют ОФ-ВЭЖХ, элюируя интерферонсодержащую фракцию градиентом концентраций этанола от 30-50% до 65-90% при рН 2-5, с последующим концентрированием и гель-фильтрацией продукта. Получаемый интерферон бета характеризуется высокой степенью чистоты (99%) при упрощении технологии выделения. 3 з.п. ф-лы, 4 ил.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ очистки интерферона бета человека из рекомбинантной культуры, содержащей интерферон бета человека, включающий проведение аффинной хроматографии и катионообменной хроматографии. Аффинная хроматография включает адсорбцию культуры, содержащей интерферон бета, на уравновешенной хроматографической колонке для аффинной хроматографии, промывание колонки промывочным буферным раствором А с рН 6,5-7,5, содержащим 30-60 мас.% пропиленгликоля, и промывочным буферным раствором В с рН 6,5-7,5, содержащим 10-30 мас.% пропиленгликоля и 1-2 М NaCl с элюцией фракции, содержащей интерферон бета человека, буферным раствором с рН 6,5-7,5, содержащим 40-60 мас.% пропиленгликоля и 1-2 М NaCl. Полученный раствор подвергают диафильтрации и осуществляют катионообменную хроматографию, элюируя интерферонсодержащую фракцию при рН 5-7 градиентом концентрации NaCl в пределах 0-400 мМ с последующим концентрированном и гель-фильтрацией продукта. Получаемый интерферон бета характеризуется высокой степенью чистоты (99%) при упрощении технологии выделения. 3 з.п. ф-лы, 4 ил.