Пептиды, содержащие более 20 аминокислот, гастрины, соматостатины, меланотропины, их производные: ...инсулины – C07K 14/62

Группа изобретений относится к области биотехнологии и может быть использована при производстве препаратов инсулинов для терапевтических целей. Предложен комплекс конъюгата инсулина с двухвалентным катионом металла группы II или переходного металла, где инсулин конъюгирован с модифицирующей группировкой: -X-R ¹-Y-PAG-Z-R² (IV), в которой: X, Y и Z представляют собой независимо выбранные связывающие группы и каждая из них возможно присутствует, и X, когда присутствует, связан с соединением инсулином ковалентной связью, где X, Y, Z независимо могут быть выбраны из -S-, -O-, -NH- и -С(O)-; по меньшей мере один из R ¹ или R² присутствует и представляет собой низший алкил, возможно включающий карбонильную группу, и когда R ¹ представляет собой низший алкил, тогда R² представляет собой блокирующую группу, выбранную из -CH₃ , -H, тозилата или -С(O)ОН; PAG представляет собой линейную или разветвленную углеродную цепь, включающую одну или более группировок PEG, содержащих от 2 до 10 (СН₂СН₂О)-субъединиц, и возможно включающую одну или более дополнительных группировок, выбранных из -S-, -O-, -NH- и -С(O)-; и где модифицирующая группировка имеет максимальное число от 3 до 25 тяжелых атомов, выбранных из C, S, N и O, и связана с лизином в положении, выбранном из группы, состоящей из положений В26, B27, В28, В29 и В30 инсулина в пределах 5 аминокислот C-конца B-цепи, тем самым давая моноконъюгат. Конъюгат инсулина является таким же или более растворимым, чем соответствующий неконъюгированный инсулин, и растворимость в воде конъюгата инсулина уменьшена путем добавления цинка. Полученные комплексы проявляют улучшенную химическую стабильность по сравнению с не находящимися в комплексе конъюгатами инсулина. Изобретения также включают способ получения таких комплексов, фармацевтические композиции для лечения недостаточности инсулина у человека, содержащие такие комплексы, и их применение в изготовлении лекарства для лечения диабета. 5 н. и 46 з.п. ф-лы, 42 ил., 40 табл., 86 пр.

Изобретение относится к биохимии. Представлены новые аналоги инсулина, а также способ их получения. Описано лекарственное средство для лечения диабета, содержащее представленный аналог инсулина, а также композиция, содержащая указанный аналог. Изобретение позволяет пролонгировать профиль время/действие. 12 н. и 19 з.п. ф-лы, 4 ил., 36 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к новым аналогам инсулина, и может быть использовано в медицине. Получают аналог инсулина, в котором по меньшей мере две гидрофобные аминокислоты заменены гидрофильными аминокислотами по сравнению с родительским инсулином и где A-цепь аналога инсулина содержит по меньшей мере одну мутацию и B-цепь содержит по меньшей мере одну мутацию по сравнению с родительским инсулином, при этом по меньшей мере одна мутация в А-цепи находится в одном или более сайтах расщепления, выбранных из группы, состоящей из A13-14, A14-15 и A19-20, и по меньшей мере одна мутация в В-цепи находится в одном или более сайтах расщепления, выбранных из группы, состоящей из B2-3, B6-7, B9-10, B10-11, B13-14, B14-15, B16-17, B22-23, B24-25, B25-26, и где аминокислота в положении B30 удалена. Аналог инсулина используют в составе фармацевтической композиции для лечения или профилактики гипергликемии, сахарного диабета 1 или 2 типа. Изобретение позволяет получить аналог инсулина с повышенной стабильностью в отношении одного или более протеолитических ферментов по сравнению с родительским инсулином. 6 н. и 38 з.п. ф-лы, 4 ил., 5 табл., 11 пр.

Настоящее изобретение относится к производным дез(B30)человеческого инсулина, которые имеют боковую цепь, присоединенную к -аминогруппе лизинового остатка, присутствующего в В-цепи исходного инсулина, где эта боковая цепь имеет общую формулу-W-X-Y-Z, где W, X, Y и Z являются такими, как определено в описании. 3 н. и 13 з.п. ф-лы, 4 табл., 37 пр.

Изобретение относится к ацилированному аналогу инсулина, содержащему остаток лизина, который соединен с С-концом аминокислотного остатка А21, где ацильная группировка, включающая алкиленгликолевую группировку, соединена с остатком лизина в положении А22. Такие соединения можно вводить легочным путем. 3 н. и 4 з.п. ф-лы, 51 пр.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к новому пептидному аналогу инсулиноподобного фактора роста-1 (IGF-1), содержащему аминокислотную замену метионина в положении 59 на Asn, Leu, Nle, Ile, Arg, A6c, Glu, Trp или Tyr, а также другие дополнительные замены, вставки и делеции. Указанный пептид или его фармацевтически приемлемую соль используют в составе фармацевтической композиции для лечения IGF-1-опосредованных заболеваний, а также в способе лечения низкорослости. Изобретение позволяет получить аналог-агонист IGF-1, обладающий повышенной биологической активностью по сравнению с нативным IGF-1. 3 н. и 14 з.п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к хроматографическому способу очистки аналога инсулина, выбранного из аспартата, лизпро и гларгина, атозибана или эптифибатида из смеси, содержащей по меньшей мере одну родственную примесь. В способе используют агенты для образования ионных пар в ОФ-препаративной линейной хроматографии, позволяя получать высокую степень чистоты целевого конечного продукта. 6 з.п. ф-лы, 10 пр.

Настоящее изобретение предоставляет способ регулирования условий для сайт-специфического связывания полипептида и непептидильного полимера посредством регулирования рН и содержания спирта реакционной среды. Способ предназначен для предотвращения образования побочных конъюгатов, в которых непептидильный полимер связывается с физиологически важным аминокислотным остатком. 14 з.п. ф-лы, 36 ил., 2 табл., 25 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, конкретно, и может быть использовано для получения рекомбинантного инсулина гларгина. Способ включает стадию культивирования дрожжей, трансформированных вектором, содержащим последовательность ДНК, определенную формулой Х-В-Y-А, кодирующей предшественника инсулина гларгина, в которой Х представляет собой последовательность лидерного пептида, содержащую по меньшей мере одну аминокислоту, В представляет собой В1-В30 последовательность аминокислот В-цепи молекулы инсулина гларгина, Y представляет собой линкерный пептид, содержащий по меньшей мере две аминокислоты, А представляет собой А1-А21 последовательность аминокислот А-цепи молекулы инсулина гларгина, стадию выделения экспрессирующегося предшественника инсулина гларгина, стадию кристаллизации выделенного предшественника инсулина гларгина, стадию проведения ферментативной конверсии кристаллов предшественника инсулина гларгина при рН от 8 до 10 в присутствии трипсина или трипсиноподобного фермента и водорастворимых органических растворителей в соотношении от 40% до 60% реакционной смеси с образованием инсулина гларгина, содержащего по меньшей мере одну родственную примесь. Затем проводят стадию очистки ОФ-ВЭЖХ инсулина гларгина на хроматографической матрице, с использованием полярного органического буферного растворителя в водной фазе, содержащей буфер на основе органической кислоты, в которой сначала уравновешивают матрикс 10%-ным ацетонитрилом в 250 мМ уксусной кислоты с последующей элюцией инсулина гларгина в указанном ацетонитриле. Затем повторно уравновешивают матрикс 10%-ным ацетонитрилом в буфере на основе органической кислоты в концентрации от 20 мМ до 200 мМ при рН от 3 до 8,5 с последующей элюцией инсулина гларгина в указанном ацетонитриле и далее повторно уравновешивают матрикс 6%-ным этанолом в буфере на основе органической кислоты в концентрации от 10 мМ до 50 мМ с последующей элюцией указанного инсулина гларгина в указанном этаноле. Далее осаждают очищенный инсулин гларгин посредством добавления буфера на основе лимонной кислоты и хлорида цинка при рН от 6 до 8. Изобретение позволяет получить инсулин гларгин с чистотой по меньшей мере 96% и содержанием гликозилированных примесей по большей мере 1%. 11 з.п.ф-лы, 9 ил., 8 табл., 9 пр.

Изобретение описывает хроматографический способ очистки инсулина, аналога инсулина или производного инсулина из смеси, содержащей по меньшей мере одну родственную примесь с использованием нелинейного градиента, позволяющего получать лучшее разрешение при разделении и более высокую чистоту целевого продукта. 2 н. и 12 з.п. ф-лы, 12 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению аналогов инсулина из их соответствующих предшественников, и может быть использовано в медицине. Способ получения аналогов инсулина из их предшественников предусматривает проведение одностадийной ферментативной реакции, включающей комбинаторное и одновременное использование оптимальных количеств трипсина и карбоксипептидазы В, которые действуют синергично, направляя реакцию управляемым способом, для того чтобы избежать продукции случайных нежелательных побочных продуктов. Изобретение позволяет сократить количество операционных стадий и получить аналоги инсулина с более высоким выходом и чистотой. 2 н. и 18 з.п. ф-лы, 5 пр.

Способ получения высокоочищенного кристаллического инсулина любого происхождения включает проведение, по меньшей мере, одной колоночной обращено-фазовой жидкостной хроматографической очистки инсулина-сырца в водно-органических элюатах с ионными модификаторами на неполярных сорбентах, причем перед колоночной очисткой дополнительно проводят предварительную очистку путем перекристаллизации инсулина-сырца, после которой осуществляют фильтрацию растворенного кристаллизованного инсулина-сырца в апирогенной воде, подкисленной 1,5 М хлороводородной кислотой до рН 1,5-4,0, сначала через органический, а затем стерильный фильтры, после чего доводят объем отфильтрованного раствора с помощью хлороводородной кислоты до заданного и направляют очищенный раствор на колоночную очистку, проводимую со скоростью потока 1-3 см/мин^-1, при этом в качестве подвижной фазы для разделения используют смесь, содержащую ортофосфорную кислоту (85%) 0,045М, сульфат натрия 0,010 М и находящиеся в соотношении 60-70%:40-30% (по объему) апирогенную воду и этанол, а в качестве подвижной фазы для промывки используют смесь апирогенной воды и этанола, взятые в соотношении 40-60%:60-40% (по объему) соответственно, затем полученный после хроматографической очистки элюат помещают в стерильный, охлажденный кристаллизатор, поддерживая рН на уровне 3,3-4,9 и, тщательно перемешивая, охлаждают до температуры 2-15°С, при этом полученный кристаллический инсулин высушивают с этиловым спиртом. В качестве органического фильтра используют целлюлозный фильтр. Изобретение обеспечивает упрощение и сокращение технологического процесса за счет проведения полной очистки инсулина-сырца в одну стадию во время высокоэффективной жидкостной хроматографии. 3 з.п. ф-лы, 3 пр.

Настоящее изобретение относится к новым производным человеческого инсулина, которые являются растворимыми при физиологических значениях рН и обладают пролонгированным профилем действия. Изобретение также относится к способам получения таких производных, к фармацевтическим композициям, содержащим их, к способам лечения диабета и гипергликемии с применением производных инсулина по изобретению и к применению таких производных инсулина при лечении диабета и гипергликемии. 4 н. и 12 з.п. ф-лы, 21 пр., 4 ил.

Настоящее изобретение относится к коньюгатам полипептида и олигосахарида или его фармацевтически приемлемой соли, в которых полипептид коньюгирован по меньшей мере к одному олигосахаридно-спейсерному остатку, олигосахарид представляет собой синтетический сульфатированный пентасахаридный остаток и по существу обладает аффинностью к антитромбину III, и спейсер является связью или по существу фармакологически неактивным гибким сшивающим остатком. Коньюгаты настоящего изобретения имеют улучшенные фармакокинетические свойства по сравнению с соответствующими неконъюгированными полипептидами. 2 н. и 11 з.п. ф-лы, 24 ил., 7 табл., 28 пр.

Изобретение относится к комплексу, включающему конъюгат инсулина, содержащий нативный инсулин или его полипептидный аналог, конъюгированные с модифицирующей группировкой, где полипептидный аналог проявляет сходную активность относительно нативного инсулина, и где модифицирующая группировка содержит полиалкиленгликолевый (PAG) компонент и алкильный компонент, и катион, где конъюгат инсулина образует комплекс с двухвалентным катионом металла группы II или переходного металла. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим такие комплексы, их способам получения. Изобретение также относится к композициям жирных кислот для введения комплексов конъюгатов соединений инсулинов по изобретению. 6 н. и 54 з.п. ф-лы, 42 ил.

Настоящее изобретение относится к новым, селектируемым гибридным полипептидам, проявляющим по меньшей мере две гормональные активности, содержащим первый биологически активный модуль пептидного гормона ковалентно связанный по меньшей мере с одним дополнительным биологически активным модулем пептидного гормона, которые могут быть использованы в качестве агентов для лечения и профилактики метаболических заболеваний и нарушений, связанных с избыточной массой тела. 18 з.п. ф-лы, 6 ил., 6 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения инсулиновых соединений. В растворителе, содержащем от 55% до 70% воды (мас./мас.), предшественник инсулина или предшественник производного инсулина подвергают ферментативному расщеплению при щелочных значениях рН. При ферментативном расщеплении используют трипсин или лизилспецифичную протеазу, предпочтительно Achromobacter lyticus протеазу I. Затем без выделения промежуточного продукта из реакционной смеси к указанному промежуточному продукту ферментативно присоединяют нуклеофильное соединение, представляющее собой эфир аминокислоты, амид аминокислоты, пептид, эфир пептида или амид пептида в реакционной смеси, имеющей содержание воды в интервале от 10% до 50% воды (мас./мас.), при кислых значениях рН, близких к нейтральному значению рН. При необходимости производят удаление защитных(ой) групп(ы). Изобретение позволяет получить инсулиновое соединение из его предшественника эффективным усовершенствованным способом. 2 н. и 22 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к получению рекомбинантного инсулина человека, и может быть использовано для приготовления лекарственных препаратов для лечения сахарного диабета. Гибридный белок - предшественник инсулина человека состоит из N-концевого фрагмента гамма-интерферона человека, соединенного через пептидный линкер с аминокислотной последовательностью проинсулина человека. Рекомбинантный инсулин человека получают путем культивирования штамма-продуцента Escherichia coli JM109/pNINS11, несущего плазмиду pHINS11, выделения телец включений и растворения их в буфере, содержащем мочевину и дитиотреитол. Далее проводят ренатурацию гибридного белка, осаждение примесных соединений, очистку ренатурированного гибридного белка ионообменной хроматографией, совместный ферментативный гидролиз гибридного белка трипсином и карбоксипептидазой Б. На последнем этапе проводят очистку инсулина катионообменной хроматографией и методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на обращенных фазах. Изобретение позволяет упростить получение высокоочищенного рекомбинантного инсулина человека и повысить его выход. 6 н.п. ф-лы, 2 ил., 4 табл.

Настоящее изобретение относится к производным дез(В30) человеческого инсулина, которые имеют боковую цепь, присоединенную к -аминогруппе остатка лизина, присутствующего в В-цепи исходного инсулина, где эта боковая цепь имеет общую формулу: -W-X-Y-Z, где W, X, Y и Z являются такими, как определено в описании. 3 н. и 12 з.п. ф-лы, 4 табл.

Настоящее изобретение относится к способу ацилирования одной или нескольких аминогрупп пептида, который выбирают из группы, включающей экзендин-3, экзендин-4, Arg³⁴ -GLP-1(7-37), Gly⁸-GLP-1(7-36)-амид, Gly ⁸-GLP-1(7-37), Val⁸-GLP-1(7-36)-амид, Val⁸-GLP-1(7-37), Val⁸ -Asp²²-GLP-1(7-36)-амид, Val ⁸Asp²²-GLP-1(7-37), Val ⁸Glu²²-GLP-1(7-36)-амид, Val ⁸Glu²²-GLP-1(7-37), Val ⁸Lys²²-GLP-1(7-36)-амид, Val ⁸Lys²²-GLP-1(7-37), Val ⁸Arg²²-GLP-1(7-36)-амид, Val ⁸Arg²²-GLP-1(7-37), Val ⁸His²²-GLP-1(7-36)-амид, Val ⁸His²²-GLP-1(7-37), дез(В30)-инсулин человека и их аналоги, в котором реакцию ацилирования проводят в водной смеси, содержащей менее 10% мас./мас. апротонного полярного растворителя, и осуществляют взаимодействие пептида с ацилирующим агентом общей формулы I, где n равно 0-8; R¹ означает COOR⁴; R² означает липофильную часть молекулы; R³ вместе с карбоксильной группой, к которой присоединен R ³, означает реакционноспособный сложный эфир или реакционноспособный N-гидроксиимидоэфир; и R⁴ выбирают из группы, включающей водород, С_1-12-алкил и бензил; в основных условиях в водной смеси, при этом ацилирующий агент добавляют к реакционной смеси в виде раствора, стабилизированного путем добавления кислоты. 16 з.п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в медико-биологической промышленности. Предложены новые полипептиды - предшественники инсулина или его аналогов, характеризующиеся повышенной стабильностью структуры и высоким уровнем экспрессии при получении в виде рекомбинантных форм в дрожжевых клетках. Полипептиды по изобретению отличаются от природной формы предшественника инсулина тем, что содержат укороченный С-пептид, включающий остаток ароматической аминокислоты, и имеют общую формулу: В (1-27)-X₂-X₃-X₁ -Y-A (1-21), где Х₁-пептидная последовательность из 1-3 аминокислотных остатков, в которой рядом с Y расположен остаток ароматической аминокислоты; Х₂-Pro или Asp; Х ₃-Lys; Y-Lys или Arg; A (1-21) - А-цепь инсулина человека, а В (1-27) - первые 27 аминокислотных остатков В-цепи инсулина человека. Раскрыт способ получения новых предшественников инсулина с помощью технологии рекомбинантных ДНК и последующего преобразования их в активный гормон. 5 с. и 4 з.п. ф-лы, 6 табл., 10 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в биохимических, иммунологических и биологических исследованиях, а также при производстве препаратов инсулинов для терапевтических целей. Полусинтетический инсулин человека получают путем транспептидации свиного инсулина в присутствии трипсина при весовом соотношении трипсина и свиного инсулина, равном 1:300-1000, и при молярном избытке ди-трет-бутилового эфира треонина по отношению к свиному инсулину в водно-органической среде. Ингибирование реакции проводят путем снижения рН и разбавлением реакционной смеси водой в 2-3 раза. Очистку полученного эфира инсулина человека осуществляют путем проведения ВЭЖХ с последующим получением кристаллов сырого инсулина человека и повторным проведением ВЭЖХ. Способ обеспечивает увеличение выхода эфира инсулина человека до 98% и уменьшение содержания сопутствующих родственных примесей в конечном продукте до 0,9%.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения правильно скрученного, содержащего предшественник инсулина химерного белка. Химерный белок содержит пептидильный фрагмент протяженностью 20-92 аминокислот, который на 60% идентичен первым 20 N-аминокислотным остаткам SEQ ID N:1 или SEQ ID N:2, и пептидильный фрагмент предшественника инсулина, содержащий цепь А и цепь В человеческого инсулина. С-конец первого пептидильного фрагмента связан с N-концом пептидильного фрагмента предшественника инсулина с помощью Arg или Lys. Инсулин получают путем контактирования экспрессированного химерного белка с хаотропным агентом или меркаптаном. Изобретение позволяет получать предшественник инсулина в биоактивной конформации, а также скринировать пептидильный фрагмент, способный улучшать укладку предшественника инсулина. 3 н. и 13 з.п. ф-лы, 3 ил.

Описан способ сушки кристаллов протеинов исходя из водной суспензии кристаллов протеинов, отличающийся тем, что суспензию кристаллов протеинов сушат в центробежной сушилке сушильным газом, причем сушильный газ перед процессом сушки увлажняют водой, и причем кристаллы протеинов после их отфильтровывания из суспензии кристаллов протеинов помещают в сушильную среду, состоящую из смеси воды и неводного, смешиваемого с водой в любом соотношении растворителя, который обладает более низким давлением пара, чем вода. При этом предпочтительно используют сушильный газ, увлажненный водой. Суспензию кристаллов протеинов для сушки предпочтительно переводят в псевдоожиженный слой. Технический результат: получение кристаллов протеинов с определенным содержанием воды. 10 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается производного инсулина или его физиологически приемлемой соли с ускоренным по сравнению с человеческим инсулином наступлением действия, в котором аспарагин (Asn) в положении В3 цепи В заменен на природный основной аминокислотный остаток и по меньшей мере один аминокислотный остаток в положениях В27, В28 или В29 цепи В замещен на другой природный нейтральный или кислый аминокислотный остаток, причем аспарагин (Asn) в положении А21 цепи А может быть заменен на Asp, Gly, Ser, Thr или Ala, а фенилаланин (Phe) в положении В1 цепи В и аминокислотный остаток в положении В30 цепи В могут отсутствовать. Описываются также ДНК-последовательности, кодирующие предшественник производного инсулина, вектор экспрессии, содержащие эту ДНК, а также штаммы, экспрессирующие предшественник инсулина, и фармацевтическая композиция с понижающей, соответственно регулирующей уровень глюкозы в крови эффективностью. Преимущество изобретения заключается в разработке препарата с ускоренным наступлением действия. 6 н. и 17 з.п. ф-лы, 6 табл., 1 ил.