Получение азотсодержащих органических соединений: ..лизин, диаминопимелиновая кислота, треонин, валин – C12P 13/08

Изобретение относится к области биохимии и представляет собой способ получения L-аминокислоты - L-лизина, L-треонина, L-аспарагина, L-аспарагиновой кислоты, L-метионина или L-изолейцина - предусматривающий культивирование бактерии Escherichia coli в среде для получения и накопления L-аминокислоты и сбор L-аминокислоты. Бактерию модифицируют таким образом, чтобы повысить экспрессию ее гена gltP или гена gltS. Изобретение позволяет повысить выход целевой L-аминокислоты. 11 з.п. ф-лы, 5 табл., 5 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ микробиологического синтеза L-треонина с использованием бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, в которой ген fumA инактивирован. Изобретение позволяет получать L-треонин с высокой степенью эффективности. 2 н.п. ф-лы, 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ биосинтеза L-лизина на ферментационных средах. Готовят основную ферментационную среду на основе ферментолизата крахмала в количестве 8-15% по глюкозе и дополнительную ферментационную среду, содержащую компоненты основной ферментационной среды, концентрированные в 2-3,5 раза. Стерилизуют их. Биосинтез L-лизина осуществляют с использованием штамма-продуцента Corynebacterium glutamicum BKM Ac-2577D (BIGOR 55). Загружают в ферментер основную питательную среду в количестве 1/3 от ее объема. Затем производят засев основной ферментационной питательной среды 10-20% посевного материала, выращенного в две стадии. Процесс биосинтеза ведут с непрерывной подачей подпитки, начиная с 8-16 час культивирования. При этом поддерживают ингибирующую концентрацию редуцирующих веществ в культуральной жидкости 4-8%. После заполнения аппарата до максимального объема через 60-66 часов культивирования и далее каждые 6-12 часов в течение всего остального процесса биосинтеза часть культуральной жидкости в количестве 10-15% от максимального объема перекачивают в аппарат для дображивания. В этом аппарате продолжают процесс биосинтеза в течение 6-12 часов при тех же условиях, что и в основном аппарате, но без подачи дополнительной питательной среды. Затем выделяют L-лизин. Изобретение позволяет вести процесс биосинтеза в течение длительного времени без снижения скорости синтеза L-лизина и обеспечивает получение культуральной жидкости с концентрацией L-лизина перед выделением не ниже 100 г/л. 4 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ ионообменного выделения лизина из культуральной жидкости. Отделяют биомассу путем микрофильтрации. Осветляют нативный раствор. Осветленный раствор обессоливают, пропуская через ионообменную систему из 10 одинаковых колонн с соотношением высоты к диаметру 0,8, соединенных в последовательности: анионит в ОН-форме - катионит в H⁺-форме, со скоростью 2-2,5 объема раствора на объем системы. Обессоленный раствор пропускают через колонну с анионитом в ОН-форме. Образующийся раствор лизина-основания пропускают через колонну с катионитом. Осуществляют элюцию лизина с катионита 3-5н, предпочтительнее 4н, раствором щелочи. В полученный концентрированный элюат лизина барботируют газообразный хлористый водород, вызывая одновременно нейтрализацию и кристаллизацию лизина. Способ позволяет обойтись в технологическом процессе без операций выпарки, что приводит к экономии энергозатрат. 1 з.п. ф-лы, 1 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ получения кристаллов гидрохлорида основной аминокислоты из бульона для ферментации сульфата основной аминокислоты или ферментационного реакционного раствора. Реакцию ферментации катализируют жизнеспособными клетками микроба, продуцирующего основную аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из аргинина, лизина, орнитина и гистидина. Бульон или раствор характеризуется эквивалентным отношением ион сульфата/основная аминокислота от 50 до 150%. К ферментационному бульону сульфата основной аминокислоты или раствору для ферментативных реакций добавляют хлорид металла, выбранный из группы: кальций, калий, магний и барий, в эквивалентном отношении от 80 до 120% относительно иона сульфата. При этом поддерживают рН от 3 до 8,5 и температуру от 20 до 90°С. Далее удаляют кристаллы сульфата металла. Охлаждают полученный бульон или ферментационный раствор, поддерживая концентрацию сульфата металла ниже значения его насыщенной концентрации. Отделяют кристаллы гидрохлорида основной аминокислоты и накапливают их. Способ позволяет получать кристаллы гидрохлорида основной аминокислоты чистотой 99% и выходом 90-95%. 1 з.п. ф-лы, 3 табл., 3 пр.

Настоящее изобретение относится к области биохимии. Представлен белок, способный придавать бактерии семейства Enterobacteriaceae устойчивость к ингибированию роста L-цистеином и выбранный из группы, состоящей из: (а) белка, представленного в SEQ ID NO: 2 или его варианта; и (в) белка, представленного в SEQ ID NO: 4 или его варианта; а также представлен фрагмент ДНК, кодирующий указанный белок. Описана бактерия-продуцент L-аминокислоты семейства Enterobacteriaceae, содержащая указанный фрагмент ДНК. Предложен способ получения L-аминокислоты, включающий культивирование указанной бактерии в питательной среде и выделение указанной L-аминокислоты из культуральной жидкости. Изобретение позволяет увеличить выход продуцируемой L-аминокислоты. 4 н. и 8 з.п. ф-лы, 12 табл., 1 ил., 8 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение касается способа получения L-лизина с использованием бактерии Escherichia coli, содержащей варианты dapA гена бактерии В. subtilis. Изобретение позволяет получить L-лизин с высокой степенью эффективности. 3 н. и 3 з.п. ф-лы, 4 пр.

Измельчают крахмалсодержащее сырье (зерновые) с получением измельченного продукта, включающего твердые, не содержащие крахмала компоненты в количестве не менее 20 мас.%. Готовят суспензию продукта помола в жидкости на основе воды, чтобы получить в результате пульпу муки с содержанием сухой массы от по меньшей мере 45 мас.%. Нагревают ее в сопловом котле путем подачи водяного пара до температуры, превышающей температуру клейстеризации крахмала. Проводят гидролиз пульпы муки посредством разжижения и последующего осахаривания в присутствии фермента -амилазы в количестве от 0,002 до 3,0 мас.% от общего количества используемого крахмалсодержащего сырья с получением водной среды М. Добавляют водную среду М к ферментационной среде, в которой культивируют микроорганизм, способный к сверхсинтезу органического соединения с получением ферментационного бульона. Способ позволяет получить органическое соединение - твердый или частично твердый нелетучий продукт микробного метаболизма, например монокарбоновые, ди- и трикарбоновые кислоты с 3-10 атомами углерода, несущие при необходимости гидроксильные группы, протеиногенные и непротеиногенные аминокислоты, витамины и биополимеры. 14 табл., 5 пр.

Способ получения по меньшей мере одного органического соединения, имеющего по меньшей мере 3 атома углерода или по меньшей мере 2 атома углерода и по меньшей мере один атом азота посредством ферментации включает следующие стадии: а1) помол зерен злаковых культур в качестве источника крахмала. Полученный размолотый материал содержит по меньшей мере 20 мас.% не содержащих крахмал твердых составляющих источника крахмала. На стадии а2) проводят суспендирование размолотого материала в водной жидкости и ферментативный гидролиз части крахмала в размолотом материале и, при необходимости, последующее осахаривание. Получают жидкость (1), содержащую моносахариды или олигосахариды; и на стадии b) добавляют жидкость (1) в концентрации по меньшей мере 50 мас.% к ферментационной среде, содержащей микроорганизм, продуцирующий органическое соединение, при ферментационных условиях. Изобретение обеспечивает повышение выхода целевого продукта. 16 з.п. ф-лы, 10 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии. Проводят размол пшеничных, кукурузных и ржаных зерен в качестве источника крахмала с получением продукта помола, содержащего по меньшей мере 20 мас.% от общего количества не содержащих крахмала твердых компонентов. Готовят суспензию продукта помола в жидкости на основе воды и разжижают в присутствии фермента -амилазы до получения содержащей декстрины водной среды (1) с концентрацией эквивалентов глюкозы не менее 40% масс. от общей массы среды (1). Культивируют микроорганизм, способный к сверхсинтезу органического соединения в водной ферментационной среде (2). Добавляют среду (1) к ферментационной среде (2), в которой микроорганизмы метаболизируют содержащиеся в среде (1) декстрины в отсутствие ферментов, гидролизующих декстрины до моносахаридов. Способ позволяет получить органическое соединение - твердый или частично твердый нелетучий продукт микробного метаболизма, например белковый. 19 з.п. ф-лы, 8 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при кормлении животных и людей. Способ предусматривает получение сахарсодержащей питательной среды с содержанием более 20% мас. моносахаридов от общей массы среды путем размола источника крахмала, выбранного из зерен кукурузы, или ржи, или тритикале, или пшеницы. Отбор части продукта помола. Приготовление суспензии из части продукта помола с использованием воды. Внесение в полученную суспензию части разжижающего крахмал фермента с последующим периодическим или непрерывным добавлением оставшейся части продукта помола до достижения вязкости среды не более 20 Па·с с получением суспензии. Полученную суспензию нагревают до температуры выше температуры желатинизации используемого крахмала с последующим охлаждением и внесением в суспензию оставшейся части разжижающего фермента. Разжиженный продукт помола охлаждают до оптимальной температуры осахаривающего фермента и вносят осахаривающий фермент. В сахарсодержащую питательную среду вносят штамм микроорганизма, продуцирующего желаемый(е) продукт(ы) метаболизма с последующим культивированием его на этой питательной среде с получением ферментационного бульона. Отделяют от ферментационного бульона не более 30% масс. содержащихся в этом бульоне твердых веществ и удаляют из него летучие компоненты до остаточной влажности около 20% масс., с последующей сушкой целевого продукта, содержащего от 10 до 80% одного нелетучего продукта метаболизма, от 1 до 50% биомассы продуцента, от 1 до 50% масс., не содержащих крахмала твердых компонентов источника крахмала и от 0 до 40% масс., прочих вспомогательных веществ. Изобретения позволяют упростить способ получения целевого продукта и сократить сроки его получения. 2 н. и 21 з.п. ф-лы, 30 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, спиртовой и кормовой промышленности, может быть использовано при производстве кормовых добавок, обогащенных белком и аминокислотами. Питательную среду для проведения микробного синтеза лизина готовят путем ферментативного гидролиза помола зернового сырья ферментной композицией, включающей -амилазу, глюкоамилазу, комплекс протеаз, включающий протеиназу и пептидазу, эндо- и экзо- -глюканазу, ксиланазу. К полученному ферментолизату, являющемуся источником углерода и азота, добавляют раствор диаммония фосфата. Изобретение позволяет улучшить качественные характеристики питательной среды, повысить степень гидролиза высокомолекулярных полисахаридов и белковых веществ, увеличить выход целевого продукта с единицы зернового сырья. 1 з.п. ф-лы, 4 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ выделения L-лизина из культуральной жидкости. Осуществляют подкисление освобожденной от биомассы культуральной жидкости до рН 1,9-2,3. Сорбируют лизин из полученного раствора на сильносшитом полистирольном сульфокатионите до состояния насыщения или близкого к нему. Промывают катионит от указанного раствора водой при температуре 70-85°С и расходе обессоленной воды 1,1-1,3 объема на объем слоя ионита. Проводят элюцию 5% раствором аммиака. Отбирают лизинсодержащую фракцию по достижении рН 6-7. В отобранную лизинсодержащую фракцию вводят серусодержащий антиоксидант в количестве 0,28-0,43%. Осуществляют первичное вакуум-упаривание фракции с концентрированием раствора в 2,3-2,8 раза. Нейтрализуют полученный концентрат соляной кислотой. Адсорбционо осветляют его на макропористом слабоосновном анионите конденсационного типа. Проводят вторичное вакуум-упаривание. Затем кристаллизуют лизин монохлоргидрат. Отделяют кристаллы от маточника и сушат их при температуре 85-90°С. Процесс выделения L-лизина характеризует высокая чистота кристаллического продукта 99,1-100% при уровне необратимых потерь менее 6,1%. 2 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-треонина, который включает в себя культивирование микроорганизма, принадлежащего к роду Escherichia, который способен продуцировать L-треонин, в ферментирующей среде, содержащей источник углерода, источник азота и источник серы, и выделение L-треонина из среды, при этом концентрация серы в среде регулируется таким образом, чтобы ее концентрация составляла 0,35 г/л или ниже. Изобретение позволяет получать L-треонин с высокой степенью эффективности. 2 н. и 17 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способам ионообменного выделения лизина из культуральной жидкости, получаемого микробиологическим способом. Предложен способ выделения лизина из культуральной жидкости, который заключается в том, что содержащую лизин культуральную жидкость подкисляют серной кислотой до рН 1,5-1,9, в охлажденном виде подают на ионообменную колонку с катионитом КУ-2-8 в аммонийной форме, а целевой продукт десорбируют 4,5% раствором NH₄OH. Изобретение позволяет повысить селективность процесса сорбции лизина, упростить процесс, устранить ряд отмывок. 2 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-лизина культивированием бактерии Methylophilus, активность аспартокиназы в которой повышена путем трансформации посредством введения в клетки ДНК, кодирующей аспартокиназу. Такая бактерия может расти, используя метанол в качестве основного источника углерода, и обладает способностью продуцировать L-лизин. Изобретение позволяет получать L-лизин с высокой степенью эффективности. 4 н. и 4 з.п.ф-лы, 7 ил., 6 табл.

РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pT7 pckA::loxpcat ОБЕСПЕЧИВАЮЩАЯ СИНТЕЗ L-ТРЕОНИНА В КЛЕТКАХ Escherichia coli, И РЕКОМБИНАНТНЫЙ ШТАММ Escherichia coli FTR2717 (KCCM-10475) - ПРОДУЦЕНТ L-ТРЕОНИНА

Изобретение относится к биотехнологии, в частности генетической инженернии. Сконструирована рекомбинантная плазмида pT pckA::loxpcat путем клонирования неполного pckA-гена в рТ7Blue-вектор. Плазмида содержит фрагмент pckA-гена, который включает в себя устойчивый к хлорамфениколу ген и loxP-сайты. Путем трансформации клеток Е.coli плазмидной ДНК pT7 pckA::loxpcat получен штамм Е.coli FTR2717 - продуцент L-треонина. Изобретение позволяет существенно повысить выход L-треонина в присутствии высоких концентраций глюкозы. 2 н.з.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ продуцирования L-лизина или L-треонина, включающий культивирование бактерии в среде для продуцирования и секреции L-лизина или L-треонина, сбор и выделение L-лизина или L-треонина из среды. При этом указанная бактерия представляет собой бактерию Escherichia, которая обладает способностью продуцировать L-лизин или L-треонин, при этом указанная бактерия модифицирована так, что нарушена нормальная функция малеинового фермента в клетке, при этом малеиновый фермент кодируется геном sfcA и/или геном b2463. Изобретение позволяет получать L-лизин или L-треонин с высокой степенью эффективности. 11 з.п. ф-лы, 4 ил., 11 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-лизина. L-лизин получают путем культивирования бактерии Methylophilus, которая может расти, используя метанол в качестве основного источника углерода, и обладает способностью продуцировать L-лизин, и у которой активность дигидродипиколинатсинтазы повышена путем трансформации посредством введения в клетки ДНК, кодирующей дигидродипиколинатсинтазу, в среде, содержащей в качестве основного источника углерода метанол, чтобы продуцировать и накопить L-лизин в культуре, и сбором L-лизина из культуры. Изобретение позволяет получать L-лизин с высокой степенью эффективности. 4 н. и 2 з.п. ф-лы, 7 ил., 6 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-аминокислоты с использованием коринеформной бактерии, который включает культивирование коринеформной бактерии, обладающей способностью продуцировать L-аминокислоту в среде, приводящее к накоплению L-аминокислоты в среде или клетках бактерии, и отбор L- аминокислоты из среды или клеток бактерии. При этом коринеформная бактерия модифицирована таким образом, что в нее введен ген метанолдегидрогеназы, гены гексулозофосфатсинтазы и фосфогексулоизомеразы и также ген, кодирующий фактор, усиливающий активность метанолдегидрогеназы. Это придает бактерии способность утилизировать метанол. Изобретение позволяет получать L-аминокислоты с высокой степенью эффективности. 2 н. и 5 з.п. ф-лы, 4 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-треонина с использованием бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, которая модифицирована таким образом, что в указанной бактерии инактивирован ген pnp. Изобретение позволяет получать L-треонин с высокой степенью эффективности. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл.

(56) (продолжение):

CLASS="b560m"autocontrol. J Bacteriol. 2001 Jul; 183(13):3848-54. US 4430430, 07.02.1984. SU 1694643 А1, 30.11.1987.

Данное изобретение относится к области пищевой промышленности и медицины и касается производства высокоочищенных аминокислотных смесей. Способ включает отделение взвешенных частиц, осветление белкового гидролизата на осветляющем сорбенте. Гидролизат освобождают от аммиака, пропуская его через обессоливающую систему со скоростью от 2-х до 3-х объемов на объем обессоливающей системы/час, после чего проводят сорбцию аминокислот на катионите в Н ⁺-форме. Элюцию аминокислот с катионита проводят раствором щелочи. Элюат подвергают микрофильтрации и сушке. Обессоливающая система представляет собой систему последовательно соединенных ионообменных колонн с чередованием катионит - анионит, в которой объем анионита обеспечивает избыток его полной ионообменной емкости по сравнению с катионитом на 20-25%. Способ позволяет повысить эффективность ионообменной очистки аминокислот. 5 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл.

Изобретение относиться к биотехнологии и представляет собой выделенные молекулы нуклеиновой кислоты Corynebacterium glutamicum, которые кодируют полипептид, обладающий диаминопимелат-эпимеразной активностью. Изобретение относиться также к рекомбинантным экспрессирующим векторам, содержащим такие молекулы нуклеиновых кислот, и клеткам-хозяевам, в которые были введены эти экспрессирующие векторы. Данное изобретение касается также способа получения аминокислот при помощи культивирования указанных клеток. Изобретение позволяет расширить ассортимент ферментов и получать аминокислоты с высокой степенью эффективности. 24 н. и 12 з.п. ф-лы, 4 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-треонина. Согласно способу культивируют мутантный Е.coli, в котором находящийся на хромосоме Е.coli ген fadR выключен, выделяют полученный L-треонин из культуры. Изобретение относится также к кассете для выключения гена fadR, которая содержит антибиотик-маркер, введенный в кодирующую область гена fadR, и к способу получения мутантного Е.coli, включающего введение в продуцирующий L-треонин Е.coli кассеты для выключения гена fadR и отбор мутантного Е.coli, в котором ген fadR выключен. Изобретение позволяет получать L-треонин с высокой степенью эффективности. 4 н. и 3 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-треонина с использованием бактерии, принадлежащей к роду Escherichia в которой ген ltaE инактивирован. Изобретение позволяет получать L-треонин с высокой степенью эффективности. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-треонина. Согласно способу ген треониндегидратазы (tdc), присутствующий в геномной ДНК микроорганизма, частично инактивируют с использованием рекомбинантной технологии. Штамм микроорганизма E.coli pGm TN-PPC12 (КСММ-10236) трансформируют фрагментом ДНК tdc::loxpKan и получают штамм E.coli TRN212 (КССМ-10353). Данный штамм культивируют для получения L-треонина. Заявленное изобретение позволяет значительно увеличить выход L-треонина. 3 н.п. ф-лы, 3 ил., 4 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-треонина с использованием бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, в котором указанная бактерия, обладающая способностью к продукции L-треонина, модифицирована таким образом, что экспрессия гена, выбранного из группы, включающей в себя glk, pgi, pfkA, tpiA, gapA, pgk, eno, и pykA, кодирующего ферменты гликолиза, усилена. Заявленное изобретение позволяет получать L-треонин с высокой степенью эффективности. 2 н. и 5 з.п. ф-лы, 1 ил., 12 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-треонина с использованием бактерий, принадлежащих к роду Escherichia, указанная бактерия модифицирована с целью увеличения активности аспартат- -полуальдегиддегидрогеназы. Согласно предложенному способу бактерию выращивают в питательной среде, а затем полученный и накопленный L-треонин выделяют из культуральной жидкости. Заявленное изобретение позволяет получать L-треонин с высокой степенью эффективности. 2 н. и 9 з.п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к содержащим лизин водным добавкам к кормам для животных и к способам их получения. Изобретение включает культивирование продуцирующего L-лизин микроорганизма, при необходимости удаление биомассы, доведение рН ферментационного бульона или надосадочной жидкости, полученной путем центрифугирования, до значения от 2 до 7. Причем содержание в добавке L -лизина равно от 18 до 35% в пересчете на общую массу добавки. Способ позволяет получить добавку, обладающую лучшей стабильностью при хранении. 2 н.п. и 3 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к анализу кормовых средств, кормовых добавок и других препаратов, содержащих лизин и метионин. Для определения содержания свободных аминокислот - лизина и/или метионина в кормовых средствах готовят растворы кормовых средств, перешедшие в раствор, определяемые аминокислоты превращают в их дансильные производные и определяют их содержание в растворе методом капиллярного электрофореза. По полученным данным рассчитывают содержание свободного лизина и метионина в анализируемом образце кормового средства. Это позволяет быстро и достоверно определять содержание свободных лизина и метионина в кормовых средствах. 2 з.п. ф-лы, 1 табл.

(56) (продолжение):

CLASS="b560m"1998. ДОНСОН Р. Справочник биохимика, М., Мир, 1991, с.322. RU 2198538 С2, 20.02.2003.