Получение пептидов или протеинов: .с известной последовательностью из двух или более аминокислотных остатков, например глутатиона – C12P 21/02

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к лейколектинам, и может быть использовано в медицине. Получен полипептид лейколектин, характеризующийся SEQ ID NO:1-8. Для рекомбинантного получения лейколектина используют кодирующую его нуклеиновую кислоту, встроенную в вектор экспрессии, которым трансформируют клетку-хозяина. Для определения присутствия или определения количества полипептида лейколектина в образце используют антитело или антиген-связывающий фрагмент вариабельной области указанного антитела, которое специфически связывается с полипептидом лейколектином. Полипептид лейколектин или кодирующую его нуклеиновую кислоту используют в составе фармацевтической композиции в терапии патологических нарушений кожи и слизистых. Изобретение позволяет эффективно лечить или проводить профилактику аутоиммунных нарушений кожи, воспалительных заболеваний кожи или слизистой оболочки, или поврежденной кожи у животного. 11 н. и 5 з.п. ф-лы, 19 ил., 3 табл., 12 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к модифицированному фактору Виллебранда (VWF), и может быть использовано в медицине. Рекомбинантным путем получают модифицированный VWF, слитый в С-концевой части своего первичного продукта трансляции с N-концевой частью альбумина посредством линкера SSGGSGGSGGSGGSGGSGGSGGSGGSGGSGS. Полученный модифицированный VWF используют в составе фармацевтической композиции для лечения или профилактики нарушения свертываемости крови. Изобретение позволяет получить модифицированный VWF, который сохраняет способность к N-концевой димеризации и С-концевой мультимеризации, имея при этом удлиненный полупериод функционального существования в плазме крови по сравнению с полупериодом функционального существования VWF. 8 н. и 9 з.п. ф-лы, 5 ил., 4 табл., 11 пр.

L-ФУКОЗА 1 6 СПЕЦИФИЧНЫЙ ЛЕКТИН

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен L-фукоза 1 6-специфичный лектин, экстрагируемый из базидиального гриба или сумчатого гриба, характеризующийся пиковым значением молекулярной массы около 4500 m/z, определяемым при масс-спектрометрическом анализе MALDI-TOF. Новый L-фукоза 1 6-специфичный лектин обладает высоким сродством к L-фукоза 1 6 сахарной цепи, определяемым константой ассоциации 1,0×10 ⁴ М^-1 или более (при 25ºС), и имеет константу ассоциации 1,0×10³ М^-1 или менее (при 25ºС) с высокоманнозными сахарными цепями и/или гликолипидами, не содержащими L-фукоза 1 6 сахарную цепь. В одном варианте предложенный L-фукоза 1 6 специфичный лектин представляет собой белок или пептид, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:2-6. L-фукоза 1 6-специфичный лектин используют для специфического обнаружения L-фукоза 1 6 сахарной цепи и эффективной очистки L-фукоза 1 6 сахарной цепи или сахарной цепи, не содержащей L-фукозу 1 6. 6 н. и 10 з.п. ф-лы, 38 ил., 8 табл., 4 пр.

Настоящее изобретение относится к иммунологии и биотехнологии. Предложены варианты нуклеиновых кислот, каждый из которых кодирует аминокислотную последовательность тяжелой цепи иммуноглобулина IgG1. Указанная цепь содержит на С-конце СН3-домена глицин-лизиновый дипептид, кодируемый кодоном ggaaaa, ggcaaa или gggaaa. Описаны: плазмида, кодирующая тяжелую цепь иммуноглобулина; клетки-варианты, обеспечивающие экспрессию иммуноглобулина IgG1; способ получения иммуноглобулина в клетках млекопитающего; способ улучшения экспрессии иммуноглобулина в клетках млекопитающего; - использующие варианты нуклеиновой кислоты. Использование изобретения обеспечивает предупреждение экспрессии побочного продукта массой 80 кДа, что может найти применение при производстве иммуноглобулинов. 7 н. и 11 з.п. ф-лы, 7 ил., 3 табл., 6 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается применения штамма дрожжей Komagataella pastoris ВКПМ Y-727. Охарактеризовано применение штамма дрожжей Komagataella pastoris ВКПМ Y-727 в качестве реципиента для конструирования продуцентов целевого белка, необязательно включающее введение в него мутаций, обеспечивающих использование ауксотрофных селективных маркеров. Представленное решение может быть применимо при получении рекомбинантных белков без использования метанола в качестве индуктора экспрессии генов. 8 ил., 4 табл., 10 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к рекомбинантной продукции белков человека, и может быть использовано для получения гибридного рекомбинантного эритропоэтина человека. Конструируют нуклеотидные последовательности, кодирующие гибридные белки EPO-TR 1,6, EPO-TR 4 и EPO-TR 6. Белок ЕРО-TR 1,6 представляет собой рекомбинантный эритропоэтин человека, слитый с фрагментом TR 1,6 белка MUC1 человека. Белок EPO-TR 4 представляет собой рекомбинантный эритропоэтин человека, слитый с фрагментом TR 4 белка MUC1 человека. Гибридный белок EPO-TR 6 представляет собой рекомбинантный эритропоэтин человека, слитый с фрагментом TR 6 белка MUC1 человека. Гибридные белки получают путем роллерного культивирования в подходящих условиях модифицированной линии клеток млекопитающих СНО, содержащей кодирующую белок нуклеотидную последовательность с последующим выделением гибридного белка из культуральной жидкости. Изобретение позволяет получить гибридный рекомбинантный эритропоэтин человека, обладающий пролонгированным действием. 4 н.п. ф-лы, 4 ил, 7 табл., 9 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к мутеинам липокалина слезной жидкости человека, и может быть использовано в медицине. Мутеин липокалина слезной жидкости человека (hTLc) имеет обнаруживаемую аффинность связывания с рецепторной тирозинкиназой Met (c-Met) человека, или ее доменом, или фрагментом c-Met человека. Мутеин содержит от 6 до 18 аминокислотных замен относительно аминокислотной последовательности зрелого липокалина слезной жидкости человека (SWISSPROT DATABANK ENTRY P31025; SEQ ID NO:36), которые выбраны из группы, состоящей из Arg 26 Thr, Val, Pro, Ser, Gly; Glu 27 Gln, Gly, Val, Ser; Phe 28 Met, Asp; Pro 29 Leu, Ile, Ala, Trp; Glu 30 Leu, Gly, Arg, Phe; Met 31 Ser; Asn 32 Leu, Arg, Val, Gln; Leu 33 Tyr, Val, Ile, Thr, Phe; Glu 34 Val, Arg, Ala; Leu 56 Asn; Ile 57 Gln; Ser 58 Ile, Val; Asp 80 Tyr; Lys 83 Ala; Glu 104 Asp; Leu 105 Thr; His 106 Trp и Lys 108 Gly. Также мутеин может дополнительно содержать следующие замены: Cys 61 Ser; Cys 101 Ser; Cys 153 Ser; Arg 111 Pro; Lys 114 Trp; Thr 37 Ser; Met 39 Ile, Leu; Asn 48 Ser; Lys 52 Thr, Met; Met 55 Leu; Lys 65 Arg, Leu; Ala 79 Leu, Ser; Ala 86 Thr; Ile 89 Ser, Gln, Thr, His; Thr 40 Cys; Glu 73 Cys; Arg 90 Cys; Asp 95 Cys; Lys 121 Cys; Asn 123 Cys и Glu 131 Cys. Изобретение позволяет эффективно лечить патологические расстройства, в которые вовлечен путь HGF/c-Met, а также проводить идентификацию c-Met человека в образце. 12 н. и 38 з.п.ф-лы, 16 ил., 9 табл., 25 пр.

Настоящее изобретение относится к области микробиологии и касается способа получения RTX-токсина ApxI. Представленный способ осуществляют путем культивирования бактерий Actinobacillus pleuropneumoniae в культуральной среде, которая обеспечивает рост бактерий, причем указанная культуральная среда содержит бороглюконат в концентрации менее 60 ммоль/л для образования в среде комплекса кальций-бороглюконат. Изобретение позволяет повысить выход RTX-токсина ApxI, что может быть применимо при производстве вакцин. 4 з.п. ф-лы, 4 табл.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу получения антитела, у которого изменены фармакокинетические свойства при сохранении антиген-связывающей активности вариабельной области, который предусматривает стадии: (а) получение антител, в которых модифицирован заряд аминокислотных остатков, выбранных из аминокислотных остатков в положениях 31, 61, 62, 64 и 65 вариабельной области тяжелой цепи и в положениях 24, 27, 53, 54 и 55 вариабельной области легкой цепи в соответствии с нумерацией по системе Кабата, где модификация заряда аминокислотных остатков приводит к изменению 1,0 или более в теоретической изоэлектрической точке вариабельной области антитела, и (b) отбор антитела с сохраненной антиген-связывающей активностью от антител, полученных на стадии (а). Изобретение позволяет эффективно изменять фармакокинетические свойства антитела, сохраняя его антиген-связывающую активность. 7 з.п. ф-лы, 62 ил., 34 табл.

Настоящее изобретение относится к области микробиологии и касается способа получения RTX-токсинов ApxI или ApxIII путем культивирования бактерий Actinobacillus pleuropneumoniae в жидкой культуральной среде. Охарактеризованный способ заключается в том, что во время экспоненциальной фазы роста бактерий и продукции RTX-токсинов через среду пропускают воздух, причем содержание углекислого газа в воздухе выше нормального атмосферного уровня и составляет до 10 об.%. Представленное изобретение позволяет повысить выход токсинов ApxI или ApxIII, что может быть применимо при производстве вакцин. 6 з.п. ф-лы, 4 табл.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к созданию лекарственных препаратов с замедленным высвобождением белковых или пептидных лекарственных средств, и может быть использовано в медицине. Физиологически активный белок или полипептид сливают с вариантом альфа-1-антитрипсина, имеющим по меньшей мере один мутированный аминокислотный остаток. Мутации производят в следующих положениях: остаток аспарагина вместо остатка пролина в положении 357; или остаток аспарагина вместо остатка пролина в положении 357 и остаток треонина вместо серина в положении 359; или остаток аспарагина вместо остатка пролина в положении 357 и остаток серина вместо цистеина в положении 232; или остаток аспарагина вместо остатка пролина в положении 357, остаток треонина вместо серина в положении 359 и остаток серина вместо цистеина в положении 232. Изобретение позволяет увеличить время полужизни физиологически активного белка или полипептида in vivo путем поддержания его устойчивой циркуляции в крови. 2 н. и 5 з.п. ф-лы, 13 ил., 7 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа синтеза целевого секретируемого белка человека в клетках дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Способ включает культивирование в подходящих условиях дрожжей Saccharomyces cerevisiae и секрецию целевого белка, причем секреция направлена лидерным полипептидом, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO1 и представляющим собой вариант про-области лидерного полипептида белка PpPIR1 Pichia pastoris. Представленное изобретение расширяет арсенал способов получения целевого белка в дрожжах Saccharomyces cerevisiae и увеличивает возможности для эффективного синтеза таких белков. 2 ил., 4 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения рекомбинантного фактора свертываемости крови VIII человека с делецией В-домена (hFVIII-BDD). Рекомбинантной плазмидной ДНК ДНК рАР227, кодирующей полипептид с последовательностью hFVIII-BDD, включающей также MAR - область прикрепления к ядерному матриксу гена лизоцима птиц, усилитель транскрипции вируса CMV, внутренний сайт инициации трансляции IRES вируса энцефаломиокардита, ген DHFR мыши, сигнал полиаденилирования вируса SV40, ген аминогликозид-3'-фосфотрансферазы, обеспечивающей устойчивость к генетицину (Neo), кассету для экспрессии в клетках бактерий гена -лактамазы, обеспечивающей устойчивость к ампицилину, трансформируют клетки линии Cricetulus griseus CHO DHFR (-) с получением линии клеток Cricetulus griseus CHO 2H5, продуцирующей рекомбинантный hFVIII-BDD со стабильно высоким выходом на уровне около 20 МЕ/мл/24 ч. Культивирование клеток-продуцентов проводят в среде DME/F12, содержащей 2-4% фетальной бычьей сыворотки, 1% диметилсульфоксида и 50 МЕ/л инсулина. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 5 ил., 9 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения тканевого активатора плазминогена человека. Рекомбинантной плазмидной ДНК рВК415, кодирующей полипептид с последовательностью тканевого активатора плазминогена человека, включающей также MAR - область прикрепления к ядерному матриксу гена лизоцима птиц, усилитель транскрипции вируса CMV, внутренний сайт инициации трансляции IRES вируса энцефаломиокардита, ген DHFR мыши, сигнал полиаденилирования вируса SV40, ген аминогликозид-3'-фосфотрансферазы, обеспечивающей устойчивость к генетицину (Neo) и кассету для экспрессии в клетках бактерий гена -лактамазы, обеспечивающей устойчивость к ампицилину, трансформируют клетки линии Cricetulus griseus CHO DHFR(-) с получением линии клеток Cricetulus griseus CHO 1F8, продуцирующей рекомбинантный белок тканевого активатора плазминогена со стабильно высоким выходом на уровне до 190 мг/л. Культивирование клеток-продуцентов проводят в перфузионных условиях в присутствии смеси, состоящей из добавки CHO Bioreactor supplement и бутирата натрия или диметилсульфоксида, с последующим выделением целевого продукта. 3 н. и 2 з.п. ф-лы, 5 ил., 3 табл., 8 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения рекомбинантного фактора свертываемости крови IX человека (hFIX). Рекомбинантная плазмидная ДНК рАК380, содержащая ген белка rhFIX, MAR - область прикрепления к ядерному матриксу гена лизоцима птиц, усилитель транскрипции вируса CMV, внутренний сайт инициации трансляции IRES вируса энцефаломиокардита, ген DHFR мыши, сигнал полиаденилирования вируса SV40, ген аминогликозид-3'-фосфотрансферазы для устойчивости к генетицину (Neo), кассету для экспрессии в клетках бактерий гена -лактамазы для устойчивости к ампицилину, используется для получения рекомбинантного фактора hFIX в клетках линии Cricetulus griseus CHO 1E6. Путем трансформации линии клеток С.griseus CHO DHFR - рекомбинантной плазмидной ДНК рАК380 получают линию клеток С.griseus CHO 1E6, продуцирующую рекомбинантный hFIX со стабильно высоким выходом на уровне 50 мг/л/24 ч. После культивирования клеток-продуцентов выделяют hFIX путем псевдоаффинной хроматографии на Q-Сефарозе с элюцией 10 мМ CaCl₂, затем на Heparin-Сефарозе FF с элюцией 600 мМ NaCl и хроматографии на гидроксиапатите типа I с элюцией 600 мМ К₃РО₃ и хроматографии на Source 30Q с элюцией 600 мМ ацетатом аммония. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 5 ил., 7 пр., 3 табл.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу синтеза целевого белка с пониженным ксилозилированием, пониженным фукозилированием или их комбинацией. Способ включает в себя введение в растение, часть растения или растительную клетку нуклеотидной последовательности на 80-100 % идентичной нуклеотидной последовательности, определенной в SEQ ID NO: 17, и кодирующей составной белок, содержащий цитоплазматический концевой сегмент, трансмембранный домен, стволовую область (CTS домен) N-ацетилглюкозаминилтрансферазы (GNT1), слитую с каталитическим доменом бета-1,4-галактозилтрансферазы (GalT), причем указанная первая нуклеотидная последовательность функционально связана с первой регуляторной областью, являющейся активной в растении; и второй нуклеотидной последовательностью для кодирования целевого белка, причем указанная вторая нуклеотидная последовательность функционально связана со второй регуляторной областью, являющейся активной в растении, а также транзиентную коэкспрессию первой и второй нуклеотидных последовательностей с синтезом целевого белка, содержащего гликаны, с пониженным ксилозилированием, пониженным фукозилированием или их комбинацией при сравнении с таким же целевым белком, полученным из дикого растения. Раскрыты нуклеиновая кислота, кодирующая белок, модифицирующий гликозилирование целевого белка, составной белок для модификации гликозилирования целевого белка, нуклеиновая кислота, его кодирующая, а также растение, растительная клетка и семя, содержащие указанную нуклеиновую кислоту или указанный составной белок. Изобретение позволяет эффективно получать целевой белок с пониженным ксилозилированием, пониженным фукозилированием или их комбинацией. 7 н. и 13 з.п. ф-лы, 7 ил., 9 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к бис-Met-гистонам, и может быть использовано в медицине. Молекула нуклеиновой кислоты кодирует полипептид, состоящий из двух остатков метионина в качестве первого и второго N-концевых аминокислотных остатков, соединенных через пептидную связь со зрелым эукариотическим гистоном. Полипептид получают путем культивирования клетки-хозяина, трансформированной вектором экспрессии, включающим указанную молекулу нуклеиновой кислоты. Полипептид используют в составе фармацевтической композиции для лечения рака, бактериальных, вирусных или грибковых инфекций. Также полипептид используют в составе композиции для диагностики пациента в отношении наличия ответа на фармацевтическую композицию, содержащую указанный полипептид, или в отношении излечимости с ее помощью. Изобретение позволяет увеличить эффективность рекомбинантной экспрессии и облегчить определение указанного полипептида в присутствии эндогенных гистонов при сохранении биологической активности зрелого эукариотического гистона. 12 н. и 5 з.п. ф-лы, 3 ил., 6 табл., 7 пр.

Группа изобретений относится к биохимии. Предложены соединения лабиринтопептинов А1, А2, или А3 формулы (I), где {A}, {B}, {C}, R₁-R₆, m и n имеют значения, указанные в формуле изобретения. Соединения получают при ферментации штамма Actinomadura namibiensis DSM 6313 в приемлемых условиях в культуральной среде до образования одного или нескольких соединений формулы (I). Предложены ДНК, кодирующая препролабиринтопептин А2, и ДНК, кодирующая препролабиринтопептин А1, а также препролабиринтопептины А1 и А2, пролабиринтопептины А1 и А2. Лабиринтопептины формулы (I) применяют для лечения инфекций, вызываемых грамположительными бактериями, вирусных инфекций и/или невропатической боли, вызываемой воспалением. 11 н. и 13 з. п. ф-лы, 4 табл., 20 пр.

Изобретение относится к области биохимии и биотехнологии. Представлена протеаза, обладающая усовершенствованной молокосвертывающей активностью, содержащая аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 80% идентичую SEQ ID NO: 3, где указанная протеаза имеет, по меньшей мере, одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из: (а) замены глутамина, соответствующего глутамину в положении 265 в SEQ ID NO:3, на кислую аминокислоту; и (b) замены глутамина, соответствующего глутамину в положении 266 в SEQ ID NO:3, на кислую аминокислоту. Описаны ДНК, кодирующая указанную протеазу; экспрессионный вектор, содержащий указанную ДНК; и клетка, трансформированная указанным вектором, предназначенная для экспрессии указанной протеазы. Предложен способ получения протеазы, обладающей усовершенствованной молокосвертывающей активностью, включающий культивирование указанной трансформированной клетки в культуральной среде и выделение протеазы из культуральной среды. Изобретение позволяет получить протеазу с улучшенной молокосвертывающей активностью. 5 н. и 11 з.п. ф-лы, 2 ил., 4 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, конкретно, и может быть использовано для получения рекомбинантного инсулина гларгина. Способ включает стадию культивирования дрожжей, трансформированных вектором, содержащим последовательность ДНК, определенную формулой Х-В-Y-А, кодирующей предшественника инсулина гларгина, в которой Х представляет собой последовательность лидерного пептида, содержащую по меньшей мере одну аминокислоту, В представляет собой В1-В30 последовательность аминокислот В-цепи молекулы инсулина гларгина, Y представляет собой линкерный пептид, содержащий по меньшей мере две аминокислоты, А представляет собой А1-А21 последовательность аминокислот А-цепи молекулы инсулина гларгина, стадию выделения экспрессирующегося предшественника инсулина гларгина, стадию кристаллизации выделенного предшественника инсулина гларгина, стадию проведения ферментативной конверсии кристаллов предшественника инсулина гларгина при рН от 8 до 10 в присутствии трипсина или трипсиноподобного фермента и водорастворимых органических растворителей в соотношении от 40% до 60% реакционной смеси с образованием инсулина гларгина, содержащего по меньшей мере одну родственную примесь. Затем проводят стадию очистки ОФ-ВЭЖХ инсулина гларгина на хроматографической матрице, с использованием полярного органического буферного растворителя в водной фазе, содержащей буфер на основе органической кислоты, в которой сначала уравновешивают матрикс 10%-ным ацетонитрилом в 250 мМ уксусной кислоты с последующей элюцией инсулина гларгина в указанном ацетонитриле. Затем повторно уравновешивают матрикс 10%-ным ацетонитрилом в буфере на основе органической кислоты в концентрации от 20 мМ до 200 мМ при рН от 3 до 8,5 с последующей элюцией инсулина гларгина в указанном ацетонитриле и далее повторно уравновешивают матрикс 6%-ным этанолом в буфере на основе органической кислоты в концентрации от 10 мМ до 50 мМ с последующей элюцией указанного инсулина гларгина в указанном этаноле. Далее осаждают очищенный инсулин гларгин посредством добавления буфера на основе лимонной кислоты и хлорида цинка при рН от 6 до 8. Изобретение позволяет получить инсулин гларгин с чистотой по меньшей мере 96% и содержанием гликозилированных примесей по большей мере 1%. 11 з.п.ф-лы, 9 ил., 8 табл., 9 пр.

Изобретение относится к области генной инженерии, молекулярной и клеточной биологии. Предложена плазмидная генетическая конструкция pOL-DsRed2, построенная на основе плазмидного вектора pIRES (Clontech), в который помещены фрагменты кДНК генов ОСТ4 и LIN28 человека, соединенные нуклеотидной последовательностью, кодирующей F2А-пептид, и кДНК гена, кодирующая флуоресцентный белок DsRed2. Изобретение обеспечивает одновременную трансляцию белков ОСТ4 и LIN28 человека и флуоресцентного белка DsRed2 при получении индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека и животных в медицине и ветеринарии. 2 з.п. ф-лы, 1 табл., 1 ил.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ выделения и очистки рекомбинантного гормона роста человека, секретируемого дрожжами Saccharomyces cerevisiae в процессе их ферментации в соответствующих условиях. Осаждают целевой белок из освобожденной от биомассы культуральной жидкости путем либо подкисления до pH 2,9-4,0, либо добавлением полиэтиленгликоля 3000-6000 Да. Затем растворяют полученный осадок в подходящем растворителе. Осуществляют предварительную очистку целевого белка либо методом анионообменной хроматографии при pH 5,6, либо методом диафильтрации в присутствии 0,1-0,5 M хлористого натрия. Затем проводят основную очистку целевого белка методом анионообменной хроматографии при pH не менее 7,3 и гель-фильтрацию. Изобретение позволяет получить гормон роста, свободный от родственных белков, белков продуцента-хозяина и других примесей, таких как пигменты, с выходом до 60%. 8 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к клеточным технологиям, и может быть использовано для получения рекомбинантных белков в культуре клеток. Способ предусматривает культивирование клеток млекопитающих, экспрессирующих представляющий интерес рекомбинантный белок, в культуральной среде, содержащей препятствующее старению соединение, выбранное из карнозина, ацетил-карнозина, гомо-карнозина, ансерина и K-аланина и их комбинаций, в условиях и в течение времени, достаточных для экспрессии белка. Изобретение позволяет улучшить характеристику культуры клеток, выбранную из: повышенного титра, повышенной удельной продуктивности клеток, повышенной жизнеспособности клеток, повышенной интегральной плотности жизнеспособных клеток, уменьшенного накопления высокомолекулярных агрегатов, уменьшенного накопления кислотных молекул и их комбинаций. 4 н. и 40 з.п. ф-лы, 14 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению рекомбинантного плазминогена человека, и может быть использовано в медицине для создания новых лекарственных препаратов с антиангиогенным терапевтическим эффектом. Способ заключается в экспрессии гена фрагмента плазминогена человека с 453 по 543 аминокислоту в составе клеток E.coli с последующим выделением и очисткой конечного продукта из периплазмы клеток. Экспрессию осуществляют в клетках E.coli BL21 (DE3), трансформированных рекомбинантными плазмидными ДНК pEK5 или pEK5H с физическими картами, представленными на фиг.2, содержащими ген целевого полипептида, слитый с геном сигнального пептида OmpA, ориджин репликации pUC ori, ген устойчивости к канамицину и ген, кодирующий lac-репрессор под контролем T7-промотора. При этом рекомбинантная плазмидная ДНК рЕК5Н дополнительно содержит между генами OmpA и целевого полипептида участки, кодирующие аминокислотные последовательности НННННН и DDDDK. Изобретение обеспечивает секрецию целевого полипептида в периплазму клетки с высоким выходом. 3 з.п. ф-лы, 5 ил., 6 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Представлен слитый пептид для нейтрализации или разрушения фосфорорганических соединений, содержащий сигнальный пептид ТАТ3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 5, представленной в описании, функционально связанный с последовательностью органофосфатгидролазы SEQ ID NO: 18, классифицируемую как белок ЕС 3.1.8. Описаны выделенный полинуклеотид, кодирующий указанный слитый белок; вектор, содержащий указанный полинуклеотид; и прокариотическая клетка-хозяин, содержащая указанный вектор и экспрессирующая указанный слитый белок. Предложен способ получения фермента, разрушающего фосфорорганические соединения, включающий экспрессию указанного полинуклеотида в прокариотической клетке-хозяине, и продукцию указанного фермента. Изобретение позволяет повысить экспрессию органофосфатгидролазы в клетке-хозяине. 5 н. и 8 з.п. ф-лы, 1 табл., 9 ил., 2 пр.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в медико-биологической промышленности при получении стафилокиназ, используемых в качестве тромболитических агентов. Предложен способ высокоэффективной продукции метионин-содержащей формы стафилокиназы (SAK-1) и некоторых ее биологически активных аналогов в клетке-хозяине, предусматривающий культивирование бактериальной клетки, трансформированной экспрессирующим вектором, который содержит последовательность ДНК, кодирующую SAK-1, при высокой степени аэрации и снижении уровня кислорода на 5% от атмосферного уровня при достижении экспоненциальной фазы роста. Применение изобретения обеспечивает существенное повышение выхода целевого продукта. 11 ил., 4 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу получения клетки СНО, способной продуцировать желаемый полипептид с высоким выходом, клетке, полученной данным способом, способу получения желаемого полипептида, способу количественного увеличения продукции полипептида клеткой СНО с сильной экспрессией переносчика таурина. Способ включает культивирование клетки СНО, в которую был искусственно перенесен ген переносчика таурина (TauT), была введена ДНК, кодирующая желаемый полипептид, и ДНК, кодирующая дигидрофолатредуктазу (DHFR), в присутствии концентрации метотрексата, при которой 90% или более клеток, в которые не был введен TauT, погибают в течение 3 недель после субкультивирования. Отбирают из числа выживших клеток СНО, клетку СНО, способную продуцировать желаемый полипептид с высоким выходом. Клетка, полученная данным способом, продуцирует желаемый полипептид с более высоким выходом, чем клетка СНО, трансфицированная ДНК, кодирующей желаемый полипептид, и ДНК, кодирующей DHFR, но не геном переносчика таурина. Способ получения желаемого полипептида включает культивирование вышеуказанной клетки и выделение желаемого пептида. Предложенное изобретение позволяет продуцировать желаемый полипептид с высоким выходом. 4 н. и 5 з.п. ф-лы, 10 ил., 6 пр.

Изобретение относится к области иммунологии и генной инженерии. Предложена ферментативно неактивная IgA1 протеаза с заменой Ser267Ala для применения в качестве компонента поливалентной вакцины, предназначенной для защиты человека от менингококковой инфекции и других микроорганизмов, патогенность которых обусловлена IgA1 протеазой. Изобретение включает полинуклеотид, кодирующий названную мутантную форму IgA1 протеазы Neisseria meningitidis серогруппы В; содержащую данный полинуклеотид рекомбинантную плазмидную ДНК, штамм Escherichia coli - продуцент мутантной формы IgA1 протеазы по изобретению; способ получения рекомбинантной формы фермента с помощью технологии рекомбинантных ДНК и рекомбинантную инактивированную IgA1 протеазу, проявляющую повышенный в сравнении с ферментом дикого типа уровень иммуногенности. 5 н. и 1 з.п. ф-лы, 1 табл., 5 ил., 7 пр.

Изобретение относится к соединению и его фармацевтически приемлемой соли, предназначенному для использования в качестве противогрибкового средства, в частности терапевтического средства против глубокого микоза. Собирают грибок Acremonium persicinum и циклические соединения выделяют из жидкости его культуры. 5 н. и 5 з.п. ф-лы, 16 табл., 5 пр., 6 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению белка, представляющего собой растворимый рецептор, в культуре клеток млекопитающего, и может быть использовано в медицине для получения фармацевтических композиций растворимого рецептора. Способ предусматривает: (а) выращивание клеток млекопитающего в культуре при пониженной температуре в диапазоне от 27,0°С до менее чем 30,0°С; и (b) выращивание клеток в культуре при пониженном рН в диапазоне от 6,8 до менее чем 7,0. Вариант способа предусматривает: (а) выращивание указанной культуры клеток в диапазоне температур от 27,0°С до менее чем 30,0°С; причем уровень гликозилирования получаемого белка увеличивается при увеличении температуры или уменьшается при уменьшении температуры до определенного заранее уровня; и (b) выращивание указанной культуры клеток в диапазоне рН от 6,8 до менее чем 7,0; причем уровень гликозилирования получаемого белка увеличивается при увеличении рН или уменьшается при уменьшении рН до определенного заранее уровня. Изобретение позволяет получить белковый продукт - растворимый рецептор со сниженным количеством неправильно свернутых и/или агрегированных молекул. 4 н. и 19 з.п. ф-лы, 45 ил., 1 табл., 2 пр.