Получение пептидов или протеинов: .гидролизом пептидной связи, например белковых гидролизатов – C12P 21/06

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу выделения низкомолекулярных пептидов из сырья животного происхождения, которые могут служить в качестве биологически активных веществ при создании фармацевтических или косметических композиций. Способ включает ферментативный гидролиз исходного сырья, центрифугирование с последующей стерилизующей фильтрацией полученной субстанции через мелкопористые фильтры с диаметром пор 0,2 мкм. В качестве исходного сырья используют эритромассу крови доноров, которую предварительно подвергают гемолизу, вирусинактивации, инактивации фермента после ферментативного гидролиза. Проводят осветление раствором перекиси водорода с конечной концентрацией 0,83% с последующим выдерживанием при 66 °С в течение 15 мин. Изобретение позволяет выделить низкомолекулярные пептиды и повысить их биологическую активность. 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и медицинской диагностики. Предложен способ детекции белков в амилоидном состоянии, в котором получают образец лизата культуры дрожжей или ткани млекопитающего, добавляют к образцу ионный детергент, концентрируют белки в амилоидной форме на ацетатцеллюлозной мембране и детектируют их с использованием аптамеров, их конъюгатов или антител, специфичных к амилоидной форме белков. Также предложен набор для детекции белков в амилоидном состоянии. Изобретение может быть использовано в медицине для диагностики амилоидозов. 2 н. и 7 з. п. ф-лы, 6 ил., 7 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано при получении рекомбинантных форм представляющих практический интерес белков. Предложен способ получения рекомбинантного белка через его гибридный предшественник с природным сайтом расщепления энтеропептидазой, который обеспечивает повышение качества (гомогенности) и выхода целевого продукта в условиях, когда гибридный белок обнаруживает дополнительные (скрытые) сайты расщепления энтеропептидазой. Результат достигается путем замены в природном сайте расщепления энтеропептидазой Асп-Асп-Асп-Асп-Лиз аминокислотного остатка лизина (Лиз) аминокислотным остатком аргинина (Арг) и последующего расщепления гибридного предшественника легкой каталитической субъединицей энтеропептидазы человека или быка. 3 табл., 3 ил., 4 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению аналогов инсулина из их соответствующих предшественников, и может быть использовано в медицине. Способ получения аналогов инсулина из их предшественников предусматривает проведение одностадийной ферментативной реакции, включающей комбинаторное и одновременное использование оптимальных количеств трипсина и карбоксипептидазы В, которые действуют синергично, направляя реакцию управляемым способом, для того чтобы избежать продукции случайных нежелательных побочных продуктов. Изобретение позволяет сократить количество операционных стадий и получить аналоги инсулина с более высоким выходом и чистотой. 2 н. и 18 з.п. ф-лы, 5 пр.

Способ получения дрожжевого экстракта предусматривает использование дрожжей с содержанием рибонуклеиновой кислоты 8% по весу или более для получения дрожжевой суспензии. Дрожжи выбирают из группы, включающей хлебопекарные дрожжи, сброженные Saccharomyces cerevisiae и Torula. Осуществляют стерилизацию дрожжевой суспензии при температуре 40-95°С, центрифугирование дрожжевой суспензии. В полученную после центрифугирования надосадочную жидкость добавляют протеазу, нуклеазу и трансаминазу. Энзимолиз осуществляют в течение 12-25 часов при pH 4,0-6,8 и температуре 35-80°С. При этом упомянутые ферменты добавляют в количестве 0,1-0,3% по весу в пересчете на сухое вещество надосадочной жидкости. Осуществляют тепловую обработку в течение 50-70 минут при температуре 75-90°С, концентрируют надосадочную жидкость до 35-40% по весу и осуществляют распылительную сушку. Полученный указанным способом дрожжевой экстракт содержит 4-30% двунатриевой соли инозината и двунатриевой соли гуанилата. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 2 ил., 3 табл., 10 пр.

Изобретение относится к микробиологической и медицинской промышленности, генной инженерии, биотехнологии. На основе конструирования рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих структурные гены интерферона альфа-2b или альфа-2а человека под контролем регулируемого промотора, получены штаммы бактерий Escherichia coli, обеспечивающие синтез в нерастворимой форме белков-предшественников зрелых безметиониновых интерферонов альфа-2b или альфа-2а человека. В составе белков-предшественников последовательности зрелых безметиониновых интерферонов альфа-2b или альфа-2а слиты с последовательностью белка SUMO (SMT3) дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Получен штамм бактерий Escherichia coli, обеспечивающий биосинтез протеиназы ULP275 для ферментативного процессинга белков-предшественников безметиониновых интерферонов. Разработан способ получения безметиониновых интерферонов, который предусматривает сопряженное проведение процессов ренатурации, формирования дисульфидных связей и ферментативного выщепления безметиониновых интерферонов альфа-2b или альфа-2а из состава белков-предшественников под действием протеиназы ULP275. 4 н. и 2 з.п. ф-лы, 20 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Описаны способы получения симвастатина. В одном варианте способ осуществляют путем взаимодействия монаколина J и ацилтиоэфира, который отдает ацильную группу С8-гидроксильной группе монаколина J в присутствии ацилтрансферазы LovD; и ацилтрансферазы LovD и региоселективного ацилирования С8-гидроксильной группы монаколина J ацилтрансферазой LovD, использующей ацильную группу ацилтиоэфира. Во втором варианте - путем взаимодействия ловастатина и ацилтиоэфира, который отдает ацильную группу С8-гидроксильной группе монаколина J в присутствии ацилтрансферазы LovD и ацилтрансферазы LovD и воздействия ацилтрансферазы LovD, приводящего к гидролизу ловастатина до монаколина J и использованию ацильной группы ацилтиоэфира для региоселективного ацилирования С8-гидроксильной группе монаколина J. Изобретение расширяет арсенал средств получения симвастатина. 2 н. и 10 з.п. ф-лы, 24 ил., 5 табл., 4 пр.

Изобретение относится к микробиологической и медицинской промышленности, генной инженерии, биотехнологии. На основе конструирования рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих структурный ген интерферона альфа-2b человека под контролем регулируемого промотора, получен штамм бактерий Escherichia coli, обеспечивающий синтез в нерастворимой форме белка-предшественника зрелого безметионинового интерферона альфа-2b человека. В составе белка-предшественника последовательность зрелого безметионинового интерферона альфа-2b слита с последовательностью белка SUMO (SMT3) дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Получен штамм бактерий Escherichia coli, обеспечивающий биосинтез протеиназы ULP275 для ферментативного процессинга белка-предшественника безметионинового интерферона. Представлен способ получения безметионинового интерферона, который предусматривает сопряженное проведение процессов ренатурации, формирования дисульфидных связей и ферментативного выщепления безметионинового интерферона альфа-2b из состава белка-предшественника под действием протеиназы ULP275. Изобретение расширяет арсенал средств получения безметионинового IFN-a2 человека. 3 н.п. ф-лы.

Изобретение относится к микробиологической промышленности, медицинской биотехнологии и генной инженерии. Предложен новый способ получения безметионинового интерферона-альфа2b человека. Вначале конструируют рекомбинантные плазмидные ДНК, содержащие ген интерферона-альфа2b человека, перед которым расположен сайт протеолиза энтеропептидазой, и трансформируют ими клетки Escherichia coli. Культивируют клетки и выделяют тельца включения синтезированного предшественника. Затем осуществляют частичную ренатурацию выделенного предшественника в присутствии препятствующего замыканию дисульфидных связей дитиоэритриола. Проводят гидролиз предшественника ферментом энтеропептидазой с образованием безметионинового интерферона-альфа2b человека. После завершения реакции гидролиза предшественника проводят полную ренатурацию интерферона-альфа2b человека в присутствии способствующей замыканию дисульфидных связей пары соединений цистин и цистеин. Очистка полученного белка осуществляется методом хроматографии на КМ-сефарозе. 5 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано как стимулятор роста или компонент питательных сред для культивирования лактобактерий, а также в медицинской микробиологии. Промытый тибетский молочный гриб помещают в стеклянную емкость и добавляют 65,7 л (1:3) водопроводной воды, подогретой до температуры (45±1)°С. Смесь расщелачивают Nа₂СО ₃ до рН 8,2-8,3 по фенолфталеину. Затем загружают измельченную поджелудочную железу крупного рогатого скота в количестве 0,101 кг. К общему объему содержимого добавляют 2% хлороформа, запробковывают плотно ватно-марлевым тампоном с пергаментом и помещают в термокамеру при температуре (48±1)°С. Выдерживают в течение 9-10 суток, встряхивая в течение первых суток через каждые 10-15 мин по 4-5 мин, а в последующие дни через каждые 1,5-2 ч по 4-5 мин. Динамику ферментативного процесса контролируют по нарастанию аминного азота. На 9-10 сутки увеличение данного показателя прекращается, термокамеру отключают, гидролизат оставляют на сутки. Затем фильтруют через фильтровальное полотно. В фильтрат добавляют 2% хлороформа, пробкуют резиновой пробкой, хранят при температуре от 2 до 8°С. Аминный азот в готовом гидролизате 567,8 л/гр. Цвет: прозрачный, коньячный. Изобретение обеспечивает удешевление и упрощение способа получения ферментативного гидролизата из тибетского молочного гриба, повышение выхода бактериальной биомассы с высоким показателем сухого вещества. 2 н.п. ф-лы, 4 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к биологически активному пептиду, который обладает антигипертонической активностью. Предложенное изобретение может быть использовано для профилактики гипертонических заболеваний. Биологически активный пептид характеризуется аминокислотной последовательностью LLYQQPVLGPVRGPFPIIV. Данный пептид получают из белка молока ферментативным гидролизом. После чего осуществляют очистку и ультрафильтрацию полученных гидролизатов с использованием мембран с диаметром пор 10 и 15 кД при рН 6,0-6,5. Предложенное изобретение позволяет получать биологически активный пептид, который обладает антигипертонической активностью.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к генной инженерии, и может быть использовано в биомедицинской промышленности. Предложен способ получения целевого пептида путем расщепления полипептида или слитого белка вариантом протеазы OmpT с заменой аминокислоты в положении 97 аминокислотой, выбранной из группы, включающей аланин, лейцин, фенилаланин, метионин, серин, треонин, цистеин, аспарагин, глутамин, глутаминовую кислоту и гистидин, по сайту, структура которого характеризуется общей формулой Pn Р2-Р1-Р1'-Р2' Pn', где P1 - аргинин или лизин, Р2 и Р2' - аминокислота, не являющаяся глутаминовой или аспарагиновой кислотой, а Р1' - аланин, валин, изолейцин, фенилаланин, метионин, серин, треонин, цистеин, тирозин или аспарагин. Применение изобретения может обеспечить эффективное и специфическое выделение терапевтических пептидов с любым типом N-концевой последовательности. 2 н. и 20 з.п.ф-лы, 3 табл., 20 ил.

Настоящее изобретение относится к процессу и аппарату для отделения и очистки белка, представляющего интерес, в потоке тканевой культуральной жидкости, получаемой в ходе непрерывного процесса перфузионной ферментации. Аппарат, предложенный настоящим изобретением, в котором поддерживают стерильные условия, в целом включает систему непрерывной перфузионной ферментации, систему непрерывного удаления частиц, интегрированную с системой перфузионной ферментации и приспособленную для непрерывного приема тканевой культуральной жидкости из нее и непрерывного производства осветленной тканевой культуральной жидкости, и систему непрерывной очистки, интегрированную с системой удаления частиц и приспособленную для непрерывного приема осветленной тканевой культуральной жидкости из нее и постоянного производства выделенного продукта, содержащего белок, представляющий интерес, причем система непрерывной очистки является системой ультрафильтрации. Процесс включает получение в ходе непрерывного процесса перфузионной ферментации гетерогенной тканевой культуральной жидкой смеси, содержащей белок, представляющий интерес, непрерывное удаление из нее крупнодисперсных загрязняющих примесей с получением осветленной тканевой культуральной жидкости, содержащей белок, представляющий интерес, и очистку белка от осветленной культуральной жидкости ультрафильтрацией, при этом удельная скорость потока тканевой культуральной жидкой смеси в ходе непрерывного процесса перфузионной ферментации, непрерывного удаления загрязняющих примесей непрерывной очистки поддерживается на постоянном уровне. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 17 ил., 2 табл.