способ выбора препарата для иммунокоррекции

Формула изобретения

1. СПОСОБ ВЫБОРА ПРЕПАРАТА ДЛЯ ИММУНОКОРРЕКЦИИ, включающий определение in vitro модифицирующего действия иммунокорректоров, отличающийся тем, что предварительно определяют влияние препаратов на экспрессию комплекса дифференцировочных антигенов CД3, 4, 8, 38, HlAl, рассчитывают сумму баллов для каждого из маркеров по формуле



при К нижней границы нормы и по формуле



при K верхней границы нормы, где K и 0 процент клеток, несущих данный антиген соответственно до и после инкубации с препаратом, причем, если препарат, оптимально корректирующий соотношение СД4⁺/CД8⁺ клеток, не набрал максимальное число баллов, выбор между ним и препаратом, наиболее интенсивно увеличивающим экспрессию комплекса рецепторов и изменяющим в сторону повышения указанное соотношение, осуществляют по формуле





а в сторону понижения - по формуле





где СД4⁺/CД8⁺_оптим - оптимальное соотношение;

Б_макс - максимальное количество баллов,

и при результате менее 1,5 назначают препарат, набравший большое число баллов.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что при исходном изменении соотношения СД4⁺/CД8⁺ клеток > 2 или < 0,7 коэффициент изменения разности соотношения СД4⁺/CД8⁺ к изменению разности баллов равен или менее 1,2.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности иммунологии, в педиатрии и может быть использовано в практическом здравоохранении и научно-исследовательских учреждениях в целях повышения точности выбора и увеличения эффективности применения иммуннокорректоров.

Известны способы определения необходимости введения иммунокоррегирующих средств на основании определения in vitro их индивидуальной модифицирующей реакции поверхности мононуклеаров крови обследуемого лица. В большинстве своем в качестве критерия определения необходимости введения того или иного иммуностимулятора используется степень повышения реакции Т-розеткообразующих клеток (отражает изменения экспрессии на лимфоцитах СД2-Т клеточного антигена) под воздействием данного иммунокорректора.

Наиболее близким к заявляемому является способ, который выбран в качестве прототипа. После выделения мононуклеаров проводится инкубация их с иммунокоррегирующими препаратами. По степени увеличения Т-РОК в каждой пробе судят о чувствительности данного пациента к соответствующему препарату.

Недостатками прототипа является, с одной стороны, то, что этот способ выбора и назначения иммуннокорректора не учитывает исходное состояние, модифицирующее влияние лекарственных препаратов на экспрессию, соотношение других рецепторов, которые принимают участие в процессах клеточного распознавания, кооперации, осуществляющейся в процессе иммунного ответа, от наличия которых, соотношения зависит интенсивность, другие характеристики иммунного ответа. Известно, что наличие различных дифференцировочных антигенов ассоциировано с определенными функциями иммунокомпетентных клеток. Другим недостатком используемого способа является то, что применяющийся методический подход определения реакции мононуклеаров в реакции розеткообразующих клеток является методом, устанавливающим субпопуляции клеток опосредованно, тем самым менее точным и воспроизводимым, чем определение дифференцировочных маркеров с помощью моноклональных антител. В прототипе отсутствуют конкретные показатели, позволяющие оценить степень увеличения Т-РОК. В связи с указанными недостатками выбор иммунокорректора с помощью применяемого способа-прототипа может оказаться невозможным или этот выбор будет неоптимален.

Техническим результатом является повышение точности выбора и увеличение эффективности применения препарата.

Технический результат достигается тем, что предварительно определяют влияние препаратов на экспрессию комплекса дифференцировочных антигенов, например СД 3, 4, 8, 38, HLA1, исходя из суммы баллов, рассчитанных в отношении каждого из маркеров по формуле 100 при К (нижней границы нормы и 100 при К) верхней границы нормы, где К и O клеток, несущих данный антиген соответственно до и после инкубации с препаратом, причем, если препарат, оптимально корректирующий соотношение СД4-/СД8- клеток, не набрал максимальное число баллов, то выбор между ним и препаратом, наиболее интенсивно увеличивающим экспрессию комплекса рецепторов и изменяющим в сторону повышения вышеуказанное соотношение, осуществляют по формуле



в сторону понижения по формуле



где СД4^-/СД8^- оптим оптимальное соотношение;

Б_макс максимальное количество баллов, и при результате (1,5 назначают препарат, набравший большее число баллов. При исходном изменении соотношения СД4^-/СД8^-) 2 или (0,7 коэффициент изменения разности соотношения СД4^-/СД8^- к изменению разности баллов равен <1,2).<P> Сущность способа состоит в следующем.

Из пробы крови с использованием градиента плотности выделяют мононуклеары. Стандартизуют взвесь мононуклеаров (концентрацию доводят до 1-2х10 кл/мл) и отдельные порции их (по 0,02 мл) инкубируют 30 мин с 0,02 мл соответствующих иммунокорректоров в концентрациях, близких к терапевтическим (берут 3-5 препаратов, если необходимо и более, например: тималин 0,5 мкг/мл; Т-активин 0,1 мкг/мл; тимоптин 0,1 мкг/мл) и средой 199. Наличие рецепторов выявляют инкубацией с соответствующими антисыворотками в реакции непрямой или прямой иммунофлюоресценции. Модифицирующее действие препаратов на экспрессию комплекса дифферен- цировочных антигенов (например, СД3, 4, 8, 38, HLA1) определяют исходя из суммы балов, рассчитанных в соотношении каждого из маркеров по формуле при К< нижней границы нормы и при К> верхней границы нормы, оценка первоначальной экспрессии дифференцировочных маркеров может осуществляться как исходя из так и абсолютного количества клеток в мкл крови. После подсчета баллов и анализа соотношения СД4^-/СД8^- клеток, изменившегося под влиянием апробируемых препаратов, для иммунокоррекции выбирают препарат, набравший наибольшее число баллов и наилучшим образом изменивший в заданную сторону соотношение СД4^-/СД8^- клеток. Если препарат оптимально корректирующий соотношение СД4^-/СД8^- клеток, не набрал максимальное число баллов, выбор между ним и препаратом наиболее интенсивно увеличивающим экспрессию комплекса рецепторов и изменяющим в сторону повышения, понижения указанное соотношение производят соответственно исходя из формул



где СД4^-/СД8^- оптим оптимальное соотношение;

Б_макс максимальное количество набранных баллов, и при результате <1,5 назначают препарат, набравший большее число баллов. При исходном, более резком изменении соотношения СД4^-/СД8^- клеток >2 или <0,7 коэффициент выбора указанных формул равен <1,2. Если инкубация с отдельными препаратами не дает полностью желаемого эффекта изменения экспрессии рецепторов, инкубацию мононуклеаров, при необходимоси совместного использования иммунокорректоров, проводят с соответствующими смесями их (каждый препарат используется в дозе близкой к терапевтической). Выбор при необходимости совместного назначения иммунокорректоров осуществляется таким же самым способом.

Коэффициенты 1,5 и 1,2 выбраны на основании экспериментальных разработок, путем расчетов, показывающих, что превалирование изменений экспрессии общей суммы исследуемых рецепторов над изменениями соотношения СД4^-/СД8^- клеток в 1,5 раза является более существенным для воздействия, чем изменения экспрессии и соотношения этих 2-х рецепторов. При более резком изменении соотношения СД4^-/СД8^- клеток (>2 и <0,7) важность изменения экспрессии этих рецепторов возрастает поэтому коэффициент, определяющий разницу модифицирующего влияния препарата на экспрессию суммы рецепторов к изменению соотношения 2-х эффекторных субпопуляций мононуклеаров снижают до 1,2.

Иммунокоррекцию осуществляют выбранным препаратом по общеупотребляемым схемам: например, тималин вводят в/м глубоко в дозе 0,1-0,2 мг/кг веса тела 3-5 инъекций ежедневно по 1 уколу; Т-активин и тимоптин вводят 1 раз в день в/м, в дозе 1 мкг/кг веса тела 3-5 инъекций по 1-й ежедневно или с интервалом 7-10 дней.

Примеры конкретного выполнения способа.

П р и м е р 1. Г.Е. 26.03.88 г. М. Ленина, 153-44.

DS: Гиперплазия вилочковой железы. Приобретенное иммунодефицитное состояние, ЧДБ (см. табл.1)

Исходя из того, что экспрессия рецепторов под воздействием тималина in vitro возрастает наиболее сильно (140,21 балла) и данный препарат наиболее оптимально (до 1,06) корректирует соотношение СД4^-/СД8^- клеток, изначально сниженное до 0,7, данному больному назначено введение тималина в дозе 0,1 мг/кг веса в/м 1 раз в день N 5. Во время проведения (3 курса) иммунокоррегирующей терапии и после нее в течение 10 месяцев интеркурентными инфекциями не болела. До лечения же частые респираторные инфекции 1-2 раза в месяц. Интенсивность экспрессии рецепторов in vivo при последнем исследовании составила: СД4 29% СД3 78% СД8 24% СД38 22% HLAI 84% Соотношение СД4-/СД8- 1,2.

П р и м е р 2. А.О. 5.09.1975 г М. ул. Трояновского, 70/13.

DS: Атопический дерматит. Аллергическая ринусинусопатия, ЧДБ (см. табл. 2).

Установлено изменение экспрессии исследованных маркеров, несколько увеличенное соотношение СД4^-/СД8^- клеток за счет более резкого снижения выявляемости антигена СД8. Данное соотношение нормализовали Тимоптин и Т-активин. Однако, интенсивность изменения экспрессии исследованных антигенов была более выражена у Т-активина. Различия в изменении соотношения СД4^-/СД8^- при использовании 2-х указанных препаратов оказались незначительными в отношении к вариациям экспрессии исследуемых маркеров. Коэффициент формулы составил 1,4. В связи с вышеизложенным назначено введение Т-активина N 3.

В период проведения иммунокорригирующей терапии состояние ребенка улучшилось. Уменьшились аллергические проявления, исчезла риноррея, Интеркурентными заболеваниями не болел. Интенсивность экспрессии маркеров составила СД4 29% СД3 69% СД8 21% СД38 28% HLA1 81% Соотношение СД4^-/СД8^- 1,43. Данные изменения Т-РОК популяций мононуклеаров под воздействием иммуномодуляторов in vitro дали во всех случаях увеличение экспрессии рецепторов на 18-20% и выбор препарата по этим данным невозможен.

П р и м е р 3. Ч.О. 25.04.90 г. Д. ул. Набережная 1776-83.

DS: Тимомегалия 2 ст. Вторичное иммунодефицитное состояние, ЧДБ (см. табл.3).

У ребенка вторичное иммунодефицитное состояние с резким снижением СД4 и СД8 рецепторов. Соотношение СД^-/СД8^- клеток также резко уменьшено до 0,6. Инкубацией мононуклеаров крови установлено, что тимоптин и тималин коррегируют экспрессию рецепторов, увеличивая указанное соотношение. Коэффициент выбора между указанными препаратами равен 1,1, что <1,2, поэтому вышеуказанному пациенту назначено введение тималина N 3. До лечения частые ОРВИ, длительный, постоянный субфибрилитет. После 1-ого курса терапии субфибрилитет исчез. ОРВИ не болел. Экспрессия рецепторов СД3 72% СД4 17% СД8 16% СД38 20% HLA1 90% Соотношение СД4^-/СД8^- мононуклеаров 1,06. Иммунокорригирующая терапия продолжена.

П р и м е р 4. Р.Е. 21.11.89; М. Монтажная 54/4

DS: ЧДБ. Тимомегалия 1 ст. (см. табл.4).

У ребенка вторичное иммунодефицитное состояние с увеличением вилочковой железы. Соотношение СД4^-/СД8^- клеток снижено до 0,7. Инкубацией мононуклеаров крови установлено, что тималин, тимоптин и Т-активин корректируют экспрессию рецепторов, увеличивая вышеуказанное соотношение. Коэффициенты формулы между препаратом, наиболее оптимально корректирующим СД4^-/СД8^- маркеры, тималином и двумя другими препаратами тимоптином, Т-активином равны соответственно 1,5 и 9,7. Исходя из того, что исходное соотношение Т-хелперов и Т-супрессоров 0,7 при результате коэффициента 1,5 и более назначили тималин, более оптимально корректирующим соотношение этих эффекторных субпопуляций.

После 1-го курса терапии ОРВИ не болел. Экспрессия рецепторов СД3 70% СД4 14% СД8 12% СД38 14% HLA1 81% Соотношение СД4^-/СД8^-мононуклеаров равно 1,17.

П р и м е р 5. Ш.И. 4,06.85 г. М. Коминтерна 34,

DS: Атопический дерматит. ЧДБ (см. табл.5).

У ребенка вторичное иммунодефицитное состояние. Соотношение СД4^-/СД8^- клеток увеличено до 2. Инкубацией мононуклеаров установлено, что все использованные препараты, особенно Т-активин и тимоптин, корректируют вышеуказанное соотношение, снижая его. Коэффициент выбора, подсчитанный по формуле, 1,2, поэтому ребенку назначили введение Т-активина 5 инъекций. После проведенного курса терапии проявления аллергического дерматита уменьшились, ОРВИ болел. Продолжительность, выраженность течения болезни значительно легче, чем обычно (t соответственно 2 дня и 5-6 дней 38,5 и до 39,5-40^оС). Экспрессия рецепторов СД3 5% СД4 20% СД8 14% СД38 36% HLA1 74% Соотношение СД4^-/СД8^- мононуклеаров 1,43.

Приведенные примеры показывают, что применение для оценки потенциального действия иммунокорректора реакции Т-РОК или изменения экспрессии СД2 маркера далеко не всегда дает достаточную и объективную оценку влияния иммуностимуляторов на рецепторный аппарат мононуклеаров как вследствие возможной вариабельности методик (несовпадение абсолютных цифр клеток, обладающих рецептором по результатам Т-РОК и выявленных с помощью моноклональных антител пример 1), так и вследствие объективной невозможности установления оптимального препарата по результатам изменения экспрессии Т-клеточных рецепторов СД2 (почти равная стимуляция различными иммунокорригирующими препаратами рецепторов СД2- пример 3), возможности получения неправильных ориентиров исходя из результатов оценки иммунокорригирующего препарата по одному маркеру (пример 1: по результатам реакции Т-РОК введение тималина не показано, кажущийся лучший эффект принадлежит Т-активину) и т.д.

Проведенная иммунокоррекция по предлагаемому способу в сравнении со способом-прототипом позволила улучшить состояние иммунологических показателей (см. табл. 1), обеспечить более интенсивное (р < 0,05) снижение частоты заболеваемости ОРВИ детей, страдающих частыми болезнями.

Клинические и иммунологические показатели детей с измененной реактивностью, иммунокоррекция которым проводилась с использованием различных схем, приводятся в табл.6.

Таким образом, преимуществами предлагаемого способа является то, что он позволяет сделать оптимальный выбор иммунокорректора. Применение метода обеспечивает снижение числа заболеваний в группе часто болеющих детей по сравнению со способом-прототипом более чем в 3 раза, обуславливает более оптимальную коррекцию иммунного статуса (см. табл.6 СД4^-, СД8^- рецепторов, тенденция к увеличению рецепторов константной части HAL1).