способ прогнозирования возможности проявления побочных реакций на вакцинацию у детей

Формула изобретения

Способ прогнозирования возможности проявления побочных реакций на вакцинацию АКДС- и АДС-М-препаратами у детей путем исследования крови, отличающийся тем, что определяют уровень общих IgE и специфической сенсибилизации в тесте дегрануляции базофилов (ТДБ) к вакцинам, наличие специфических IgE к вакцинам и при превышении уровня общих IgE значений, соответствующих возрастной норме, наличии специфических IgE и превышении уровня специфической сенсибилизации в ТДБ к вакцинам значения, соответствующего норме, прогнозируют возможность появления побочных реакций и осложнений на вакцинацию.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а точнее - к микробиологии, и может быть использовано для отбора контингента детей с хронической патологией, подлежащих вакцинации.

Существовавшая до недавнего времени практика чрезвычайно широких медицинских отводов от вакцинации привела к неоправданному уменьшению иммунной прослойки среди детского населения (Костинов М.П. Реальность и необходимость вакцинации детей с аллергическими заболеваниями //Фарматека, 2003, №2, с.52-57; Покровский В.И. Вакцинопрофилактика: вопросы без ответов // Терапевтический архив, 2002, №11, с.5-6). Одной из нередких ссылок на причину медицинского отвода является наличие или предположение о наличии у ребенка различных заболеваний (аллергических, аутоиммунных и др.). Проведение прививок таким детям затруднено в связи с возможностью развития у них прививочных реакций и осложнений. Однако отказ от вакцинации детей с хронической патологией не является правомерным, так как они нуждаются в надежной защите от инфекционных заболеваний, которые протекают у них особенно тяжело, с частыми осложнениями и даже летальными исходами (Лакоткина Е.А., Черняева Т.В., Харит С.М. и др. Расширение возможностей вакцинации проведением прививок детям «особых групп» // Российский медицинский журнал, 1999, №3, с.31-33). Поэтому единственным способом защиты от инфекций детей с хронической патологией является вакцинация, проводимая с учетом индивидуальных особенностей детского организма. Решение этой проблемы возможно при своевременном прогнозировании формирования побочных реакций и осложнений у детей с учетом тяжести течения хронических заболеваний (Учайкин В.Ф., Шамшева О.В. Вакцинопрофилактика: настоящее и будущее. М., 2001, 399 с.; Харит С.М. Вакцинопрофилактика детей с иммунопатологическими заболеваниями. // Фарматека, 2003, №2, с.33-38).

В связи с этим особую актуальность приобретает разработка новых способов определения и прогнозирования побочных реакций и осложнений на вакцинацию у детей с хронической патологией, позволяющих производить отбор контингента детей, вакцинировать которых в данный момент противопоказано.

Проведенными исследованиями по патентной и научно-медицинской литературе выявлены различные способы определения и прогнозирования побочных реакций и осложнений на вакцинацию у детей.

Так, М.П.Костинов и И.И.Балаболкин использовали для определения индивидуальной чувствительности к вакцинации у детей полиэтиленгликоль (А.С. №1381396 «Способ определения индивидуальной чувствительности к профилактической вакцинации у детей» 1988 г., БИ №10). Способ заключается в том, что равные количества сыворотки крови смешивают с раствором боратного буфера и в одну из двух проб добавляют полиэтиленгликоль, инкубируют и определяют оптическую плотность в обеих пробах при длине волны 450 нм и при величине разности тысячекратных величин полученных оптических плотностей 60 и менее проводят отбор контингента детей для проведения профилактических прививок. Недостатком этого метода является то, что он может быть использован для определения индивидуальной чувствительности к профилактической вакцинации у детей только при острой респираторной вирусной инфекции.

Патентом №2195666 (2002 г., БИМП №36) защищен «Способ комплексной диагностики аллергии у детей с инфекционной патологией», включающий определение гистидиндекарбоксилазной активности культуры микроорганизма, выделенного от больного, уровня IgG и IgE, эозинофилов, базофилов, показателя общей аллергической настроенности организма. Недостатком данного способа является трудоемкость и многоэтапность, связанные с приготовлением многокомпонентных питательных сред, а также недостаточная достоверность.

Прототипом предлагаемого изобретения является «Способ прогнозирования вероятности поствакцинальных реакций у детей грудного возраста» (патент №2190850, 2002 г., БИМП №28). Этот способ заключается в следующем: забирают 0,05 мл крови из пальца в пробирку, где находится 0,05 мл физиологического раствора с консервантом крови «Глюгицир» (1 объем раствора «Глюгицир» и 3 объема физиологического раствора), центрифугируют в течение 10 минут при 2000 об/мин и определяют Р-белки в надосадочной жидкости с помощью антисыворотки. Для здоровых детей характерны показатели Р-белков 8644,44±668,75. Прогнозирование поствакцинальных осложнений проводят при показателях Р-белков ниже 4000 и выше 12000 ед.

Существенным недостатком данного метода является ограниченность контингента обследуемых строгими возрастными рамками и невозможность его использования для определения и прогнозирования побочных реакций и осложнений у детей с хронической патологией.

Целью настоящего изобретения является прогнозирование побочных реакций и осложнений у детей различных возрастных групп, страдающих хронической патологией, перед вакцинацией.

Эта цель достигается путем исследования крови пациента, в которой определяют уровень общих IgE и специфической сенсибилизации в тесте дегрануляции базофилов (ТДБ) к вакцинам, а также наличие или отсутствие специфических IgE к вакцинам. Возможность появления побочных реакций и осложнений на вакцинацию прогнозируют на основании превышения уровня общих IgE значений, соответствующих возрастной норме, наличию специфических IgE к вакцинам, и превышения уровня специфической сенсибилизации в ТДБ к вакцинам значения, соответствующего норме.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

Материалом для исследования служит кровь в объеме 3,0-5,0 мл, взятая из вены с соблюдением обычных правил асептики. В крови определяют уровень общих IgE, наличие специфических IgE к вакцинам в ИФА и уровень специфической сенсибилизации к вакцинам в ТДБ.

1. Уровень общих IgE

Уровень общих IgE определяют в ИФА с использованием коммерческих тест-систем по следующей методике:

- внесение во все лунки планшет, иммобилизованных моноклональными антителами к IgE, 100 мкл активирующего раствора;

- инкубация 20-25 мин при температуре (37+1)°С;

- промывание рабочим буферным;

- внесение по 100 мкл в лунку калибровочных проб и контрольной сыворотки;

- внесение в остальные лунки по 100 мкл рабочего буферного раствора и по 5 мкл исследуемых образцов, их перемешивание;

- инкубация 40 мин при температуре (37±1)°С;

- промывание рабочим буферным раствором;

- внесение по 100 мкл в лунку рабочего раствора конъюгата;

- инкубация 40 мин при температуре (37±1)°С;

- промывание рабочим буферным раствором;

- внесение по 100 мкл раствора ОФД;

- инкубация 15-20 мин при (22±4)°С;

- внесение по 50 мкл в лунку стоп-реагента;

- регистрация результатов реакции фотометрически при длине волны 492 нм с помощью мультискана или ридера произвольной марки.

Измерение оптической плотности (ОП) проводят в один прием во всех использованных лунках планшета не более чем через 30 мин после остановки реакции. Строят калибровочный график на прилагаемом к набору бланке в координатах: ось абсцисс - уровень общих IgE (МЕ/мл), ось ординат - оптическая плотность (ОП - 492 нм). Для этого полученные усредненные значения ОП для калибровочных проб 0-700 МЕ/мл наносят на бланк и последовательно соединяют точки отрезками прямой. Уровень общих IgE в исследуемых образцах определяют, нанося полученные значения оптической плотности в калибровочный график. Оценку результатов производят с учетом возрастной нормы IgE (Лебедев К.А., Понякина И.Д. Иммунная недостаточность. Нижний Новгород, 2003, с.186-188):

дети до 1 года 0-7 МЕ/мл;

1-3 года 2-21 МЕ/мл;

8-10 лет 5-76 МЕ/мл;

12-14 лет 11-98 МЕ/мл;

18-25 лет 19-133 МЕ/мл.

2. Наличие специфических IgE к вакцинам

Специфические IgE к вакцинам определяют аналогично описанной выше методике, однако предварительно проводят иммобилизацию планшет вакцинными препаратами. С этой целью используют неадсорбированный дифтерийный (ДА) и столбнячный (СА) анатоксины, коревую, паротитную, полиомиелитную, гепатитную и БЦЖ-вакцины в концентрации 10-15 мкг по белку (Lowry) в лунку. Вакцинные препараты вносят во все лунки планшет в объеме 100 мкл и оставляют при температуре (4±1)°С в течение 18±1 часов. Далее постановку ИФА осуществляют в соответствии со схемой, описанной выше. Положительными, т.е. содержащими специфические IgE к вакцинам, считают образцы сывороток, оптическая плотность (ОП) которых, определяемая при длине волны 492 нм, превышает таковую отрицательного контроля на 0,1 ед. ОП.

Наличие специфической сенсибилизации организма к конкретной вакцине констатируют по выявлению в сыворотке крови специфических IgE.

3. Уровень специфической сенсибилизации в ТДБ к вакцинам

Уровень специфической сенсибилизации в ТДБ к вакцинам определяют следующим образом:

5 мл крови из локтевой вены отбирают натощак в пробирку с гепарином (50 МЕ/мл), помещают в термостат при (37±1)°С на 40-60 мин. Верхний слой, представляющий собой плазму с лейкоцитами, отбирают автоматическими дозаторами в объеме 1,0 мл и центрифугируют при 1000 об/мин 5-7 мин. Супернатант удаляют, а осевшие на дно пробирки лейкоциты ресуспендируют в 0,25 мл забуференного физиологического раствора.

В лунки полистиролового планшета вносят по 25 мкл лейковзвеси и вакцины, а в контроль вместо вакцины добавляют забуференный физиологический раствор. Планшеты оставляют при (37±1)°С на 15 мин, после чего в каждую лунку вносят по 80 мкл красителя толуидинового синего (25 мг толуидинового синего на 100 мл 30% этилового спирта и 4 мкг/мл ледяной уксусной кислоты), тщательно перемешивают и заполняют камеры Горяева. Подсчитывают число нормальных и дегранулированных базофилов в контрольной и опытных пробах (оптимально на 50 клеток). Оценку результатов производят с учетом нормы, при которой число дегранулированных базофилов может достигать 30% (Benveniste Y.//Clin.Allergy. - 1981. - Vol.11 - Р.1-11).

Оценку полученных данных, характеризующих состояние детей перед вакцинацией, проводят по совокупности полученных результатов. При превышении уровня общих IgE значений, соответствующих возрастной норме, при наличии специфических IgE к вакцинам, и превышении уровня специфической сенсибилизации в ТДБ к вакцинам значения, соответствующего норме, прогнозируют возможность появления побочных реакций и осложнений на вакцинацию.

Пример 1.

Больная К.Н. (рег. №3230), 3 года. Обследование проведено за 5 дней до вакцинации АДС-М-анатоксином. Страдает лекарственной и вакцинальной аллергией, ремиссия 3 мес. Самочувствие на момент взятия крови (до вакцинации) удовлетворительное. Девочка правильного телосложения, достаточного питания. Кожные покровы и слизистые чистые, бледно-розовые. Лимфатические узлы не увеличены. В легких перкуторно ясный легочный звук, дыхание пуэрильное, хрипов нет. Больной было проведено обследование согласно заявляемому способу. Результаты обследования показали следующее:

- уровень общих IgE - 38 МЕ/мл - превышает возрастную норму,

- специфические IgE к ДА и СА обнаружены,

- в ТДБ с АДС-М-анатоксином обнаружено 31% дегранулированных базофилов - превышает норму.

Согласно заявляемому способу больной была прогнозирована возможность развития побочных реакций и осложнений. Несмотря на это ей была проведена вакцинация АДС-М-анатоксином с согласия родителей в условиях поликлиники. После вакцинации у девочки была отмечена местная реакция на вакцинацию в виде гиперемии (5,0×5,0 см), инфильтрата; субфебрильная лихорадка в течение 2-х дней (37,5-37,7°С) и симптомы интоксикации в виде гиподинамии, анорексии, вялости на протяжении 3-х дней.

Пример 2.

Больная Р.Н. (рег.№3252), 9 лет, страдает респираторным аллергозом, обследование проведено за 9 дней до вакцинации АДС-М-анатоксином. Самочувствие перед вакцинацией удовлетворительное. Девочка правильного телосложения, достаточного питания. Кожные покровы без изменений. Катаральных явлений нет. Лимфатические узлы не увеличены. В легких перкуторно ясный легочный звук, дыхание пуэрильное, хрипов нет. Больной было проведено обследование согласно заявляемому способу. Результаты обследования показали следующее:

- уровень общих IgE - 80 МЕ/мл - превышает возрастную норму,

- специфические IgE к ДА и СА обнаружены,

- в ТДБ с АДС-М-анатоксином обнаружено 37% дегранулированных базофилов - превышает норму.

Согласно заявляемому способу больной была прогнозирована возможность развития побочных реакций и осложнений на вакцинацию. Несмотря на это ей была проведена вакцинация АДС-М-анатоксином с согласия родителей. После вакцинации самочувствие ребенка ухудшилось: появилась субфебрильная температура в течение 3-х дней, в месте введения вакцины образовалась гиперемия 1,5×2,5 см, наблюдались симптомы интоксикации в виде головокружений, анорексии, вялости на протяжении 2-х дней.

Пример 3.

Больной К.Н. (рег №2573), 8 лет. Обследование проведено за 1 месяц до вакцинации АДС-М-анатоксином. Страдает вакцинальной и лекарственной аллергией. Самочувствие на момент взятия крови до вакцинации удовлетворительное. Мальчик правильного телосложения, повышенного питания. Кожные покровы и слизистые чистые, бледно-розовые. Лимфатические узлы не увеличены. В легких перкуторно ясный легочный звук, дыхание пуэрильное, хрипов нет. Больному было проведено обследование согласно заявляемому способу. Результаты обследования показали следующее:

- уровень общих IgE - 85 МЕ/мл - превышает возрастную норму,

- специфические IgE к ДА и СА обнаружены,

- в ТДБ с АДС-М-анатоксином обнаружено 34% дегранулированных базофилов - превышает норму.

Согласно заявляемому способу больной была прогнозирована возможность развития побочных реакций и осложнений на вакцинацию. Вакцинация была отложена.

Пример 4.

Больной Ж.А. (рег. №3223), 10 лет, страдает вакцинальной аллергией, обследование проведено за 1,5 мес. до вакцинации АДС-М-анатоксином. Самочувствие перед вакцинацией удовлетворительное. Мальчик правильного телосложения, достаточного питания. Кожные покровы без изменений. Катаральных явлений нет. Лимфатические узлы не увеличены. В легких перкуторно ясный легочный звук, дыхание пуэрильное, хрипов нет. Больному проведено обследование согласно заявляемому способу. Результаты обследования показали следующее:

- уровень общих IgE - 95 МЕ/мл - превышает возрастную норму,

- специфические IgE к Да и СА обнаружены,

- в ТДБ с АДС-М-анатоксином обнаружено 35% дегранулированных базофилов - превышает норму.

Согласно заявляемому способу больной была прогнозирована возможность развития побочных реакций и осложнений на вакцинацию. Вакцинация была отложена.

Предлагаемый способ был проверен на базе Городского центра по иммунопрофилактике г. Ростова-на-Дону. Обследовано 105 детей 1-15 лет с аллергическими заболеваниями перед вакцинацией АКДС-вакциной и АДС-М-анатоксином. Детям с повышенными показателями аллергостатуса проведение вакцинации было рекомендовано отложить, им проводили гипосенсибилизирующую терапию и после нормализации показателей аллергостатуса вакцинировали. При этом только у 5 детей была зарегистрирована реакция на вакцинацию. Проведенные нами исследования показали, что проведение обследования детей перед вакцинацией согласно заявляемому способу позволяет прогнозировать развитие побочных реакций и осложнений на вакцинацию. Результаты исследования подтвердили информационную ценность предлагаемого способа и позволили обоснованно подойти к решению вопроса о вакцинации детей с хронической патологией.

Способ имеет выраженный клинический и социально-экономический эффект, позволяя успешно прогнозировать возможность развития поствакцинальных реакций и осложнений у детей с хроническими заболеваниями и отсрочить вакцинацию.