способ подготовки препарата для диагностики изменений конъюнктивы глазного яблока

Формула изобретения

Способ подготовки препарата для диагностики изменений конъюнктивы глазного яблока, включающий соскоб эпителия бульбарной конъюнктивы после предварительной местной анестезии раствором 0,5% дикаина, нанесение на поверхность предметного стекла с последующим цитологическим исследованием, отличающийся тем, что соскабливаемый материал высушивают естественным путем в течение 10-12 мин, фиксируют 96% этиловым спиртом, путем однократного погружения, после чего проводят окрашивание в течение 15-17 мин по Романовскому-Гимзе, затем краску смывают проточной водой и высушивают естественным путем, после чего проводят цитологическое исследование.

Описание изобретения к патенту

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для доклинической диагностики воздействий УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока.

Уровень техники

Известен способ диагностики конъюнктивального соскоба при фаринго-конъюнктивальной лихорадке, который заключается в цитоскопии конъюнктивального соскоба в комплексе с клиническими и вирусологическими исследованиями (см. А.А.Авдыкович Цитоскоскопия конъюнктивального соскоба при фаринго-конъюнктивальной лихорадке / Вестник офтальмологии. 1963. №1, стр.46-51).

Недостатком этого способа является использование дополнительных методов исследования: серологического и вирусологического для диагностики данного способа.

Известен способ цитологического исследования конъюнктивы при трахоме, который заключается в параллельных клинических и цитологических признаках трахомы (см. И.П.Маслова Изучение эпителия конъюнктивы век при трахоме с помощью электронного микроскопа / Вестник Офтальмологии. 1963. №3, стр.17-22).

Недостатком данного способа является использование высокоспециализированного оборудования - электронного микроскопа.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту и принятый авторами за прототип является способ изучения структурных особенностей эпителиальных клеток при весеннем катаре, включающий соскоб эпителия бульбарной конъюнктивы, после предварительной местной анестезии раствором 0,5% дикаина, нанесенным на поверхность предметного стекла с последующим цитологическим исследованием (см. З.П.Волоховская Дистрофия ядер эпителиальных клеток сенсибилизированной конъюнктивы / Здравоохранение Туркменистана. 1982. №6, стр.16-18).

Недостатком данного способа является диагностика дистрофических поражений ядерных структур только у больных с сезонным аллергическим конъюнктивитом, и не учитываются дистрофические проявления переднего отрезка глаза под действием внешних факторов.

Раскрытие изобретения

Задачей предлагаемого изобретения является выявление последствий воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока.

Технический результат, который может быть получен с помощью предлагаемого изобретения, сводится к более точному, доступному, дешевому, быстрому диагностированию доклинических изменений конъюнктивы глазного яблока.

Технический результат достигается с помощью способа диагностики воздействий УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока, включающий соскоб эпителия бульбарной конъюнктивы, после предварительной местной анестезии раствором 0,5% дикаина, нанесение на поверхность предметного стекла, причем соскабливаемый материал высушивают естественным путем в течение 10-12 минут, фиксируют 96% спиртом путем однократного погружения, после чего проводят окрашивание в течение 15-17 минут по Романовскому-Гимзе, затем краску смывают проточной водой и соскобы высушивают естественным путем. Цитологические препараты микроскопируют при увеличении 7*20, а затем с использованием иммерсионной микроскопии при увеличении 7*90 с помощью бинокулярного микроскопа "Биолам Р-15".

Сущность способа диагностики воздействий УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока заключается в следующем.

Способ диагностики воздействий УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока включает цитологическое исследование соскобов эпителия бульбарной конъюнктивы у пациентов в 3 диагностических группах.

Способ проводят таким образом: соскобный материал с бульбарной конъюнктивы берут расслаивателем (ALKON) после предварительной местной анестезии раствором 0,5% дикаина и наносят на поверхность чистого обезжиренного предметного стекла. Соскобный материал высушивают естественным путем, фиксируют 96% этиловым спиртом, окрашивают по Романовскому-Гимзе. Затем краску смывают проточной водой, соскобы высушивают естественным путем. Цитологические препараты микроскопируют при увеличении 7*20, а затем с использованием иммерсионной микроскопии при увеличении 7*90 с помощью бинокулярного микроскопа "Биолан Р-15".

Осуществление изобретения

Примеры конкретного выполнения способа диагностики воздействий УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока.

Изучение влияния УФ-излучения на орган зрения в последнее десятилетие стало одним из приорететных направлений. Это объясняется рядом факторов: климатическими и региональными условиями, разрушением озонового слоя, распространением пищевых и лекарственных фотосенсибилизирующих агентов.

Поэтому вопросы профилактики поражения органа зрения вообще и в конкретном географическом регионе требуют индивидуального решения.

Имеются эпидемиологические, клинические и гистологические данные о связи времени воздействия УФ-излучения с возникновением изменений конъюнктивы: птеригиум, пингвекула (см. Я.П.Бергмансон, Т.М.Шелдон Профилактика повреждений глаза УФ-излучением "Глаз". 1999. №3, стр.23-27), (см. Clinicopathologic correlation of disease, Saint Lois, 1978 Chapter 10, p.474).

Пример 1

Способ диагностики воздействий УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока проводят таким образом.

Соскобный материал с бульбарной конъюнктивы берут расслаивателем (ALKON) после предварительной местной анестезии раствором 0,5% дикаина и наносят на поверхность чистого обезжиренного предметного стекла. Соскобный материал высушивают 2-3 минуты естественным путем, фиксируют 96% этиловым спиртом и окрашивают по Романовскому-Гимзе 4-5 минут.

Микроскопию цитологических препаратов проводят при увеличении 7*20, а затем с использованием иммерсионной микроскопии при увеличении 7*90 с помощью бинокулярного микроскопа "Биолан Р-15".

Способ диагностики воздействий УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока проводился у 86 пациентов (172 глаза), которые распредилились на 3 диагностические группы.

1 группа - 25 (29,06%) пациентов, мужчины - 11 (44%), женщины - 14 (56%) возраст 20-30 лет.

2 группа - 28 (32,5%) пациентов, мужчины - 12 (42,9%), женщины - 16 (57,1%), возраст 30-40 лет.

3 группа - 33 (38,4%) пациента, мужчины - 17 (51,5%), женщины - 16 (48,5%), возраст 40-55 лет.

1 группу составили пациенты, не имеющие жалоб на орган зрения и клинических признаков воспаления.

При микроскопии препараты эпителия конъюнктивы рассмотреть не удается, так как окраска неравномерная.

2 группу составили пациенты с клиническими признаками дистрофии конъюнктивы: пингвекула и птеригиум.

При микроскопии препараты также не достаточно окрашены для изучения.

В 3 группу вошли пациенты с клиническими признаками начальной заднекапсулярной и субкапсулярной катарактой.

При микроскопии неравномерное окрашивание препаратов затрудняет их диагностику.

В ходе проведения способа доклинической диагностики воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока по примеру 1 и сравнивая с нормой диагностику эпителия бульбарной конъюнктивы (см. И.П.Маслова / Изучение эпителия конъюнктивы век при трахоме с помощью электронного микроскопа / Вестник Офтальмологии. 1963, №3, стр.20) (см. Г.В.Егорова, А.А.Федоров / Кератоконус и синдром сухого глаза / Клиническая офтальмология, том 5, 2004, №1, стр.31), микроскопия соскобов эпителия бульбарной конъюнктивы не удалась, так как выявлена неравномерная окраска препаратов в 3 диагностических группах.

Пример 2

Способ диагностики воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока был проведен аналогично примеру 1, но отличается тем, что соскобный материал высушивают 4-5 минут и окрашивают по Романовскому-Гимзе 8-9 минут.

1 группу составили пациенты не, имеющие жалоб на орган зрения и клинических признаков воспаления.

При микроскопии препарат бледной окраски, клетки едва просматриваются, диагностика затруднена.

2 группу составили пациенты с клиническими признаками дистрофии конъюнктивы: пингвекула, птеригиум.

При микроскопии клетки окрашены недостаточно для точной диагностики.

В 3 группу вошли пациенты с клиническими признаками начальной заднекапсулярной и субкапсулярной катарактой.

При микроскопии препарат слабо окрашен, диагностически неинформативен.

В ходе проведения способа диагностики воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока по примеру 2 и сравнив с нормой, выявлено недостаточное окрашивание препаратов в 3 диагностических группах, что затрудняет проведение диагностики.

Пример 3

Способ диагностики воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока был проведен аналогично примеру 1, 2, но отличается тем, что соскобный материал высушивают естественным путем 10-12 минут, фиксируют 96% этиловым спиртом - однократным погружением, после чего окрашивают 15-17 минут по Романовскому-Гимзе, затем краску смывают проточной водой и соскобы высушивают естественным путем. Цитологические препараты микроскопируют при увеличении 7*20, а затем с использованием иммерсионной микроскопии при увеличении 7*90 с помощью бинокулярного микроскопа "Биолам Р-15".

1 группу составили пациенты с клинически здоровой конъюнктивой (25 пациентов). При микроскопии определялись пласты клеток плоского эпителия овальной и округлой формы, ядра нормохромные, хроматин распределен равномерно, мелкозернистый. Ядро овальной или округлой формы, с четкими контурами, расположено в средней части клетки или несколько смещено к суженному концу. Размер ядер составляет более половины диаметра клеток. Цитоплазма окрашена интенсивно, гомогенна, с четкими контурами. Иногда в цитоплазме определяется зона просветления вокруг ядра или вакуоли. Границы клеток четкие, иногда ровные с одной из сторон. Также встречаются скопления и пласты клеток с отростками цитоплазмы (клетки-"паучки").

На основании проведения способа диагностики воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока, 1 группу составили пациенты с практически здоровой конъюнктивой; 2 группу составили пациенты с клиническими признаками дистрофии конъюнктивы: пингвекула, птеригиум.

Цитологическая картина у пациентов с птеригиумом (16 пациентов): в препаратах наряду с неизмененными пластами клеток плоского эпителия встречаются разрозненно лежащие и в пластах клетки с признаками дистрофии: округлой, овальной, вытянутой формы. Ядра пикнотичные, округлые, овальные, расположенные центрально. Цитоплазма окрашена слабо, гомогенная, вакуолизированная.

Цитологическая картина у пациентов с пингвекулой (12 пациентов): в препарате пласты клеток плоского эпителия овальной и округлой формы, ядра нормохромные и с признаками дистрофии: округлые, овальные, пикнотичные, расположены центрально, хроматин распределен равномерно, мелкозернистый. Цитоплазма гомогенна, с четкими контурами. Иногда в цитоплазме определяется зона просветления вокруг ядра или вакуоли. Границы клеток четкие, иногда ровные с одной из сторон.

На основании проведения способа диагностики воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока выявлены дистрофические проявления во 2 группе пациентов.

В 3 группу вошли пациенты с клиническими признаками начальной заднекапсулярной и субкапсулярной катарактой.

При микроскопии эпителия конъюнктивы у пациентов с кортикальной (15) и заднекапсулярной (18) катарактой отмечались пласты клеток овальной и округлой формы, увеличение размеров эпителиальных клеток и ядер, появляются неровности контуров ядер у части клеток, хроматин распределен равномерно или с участками разряжения, в некоторых клетках определяется вакуолизация, цитоплазма окрашена равномерно.

На основании проведения способа диагностики воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока в 3 группе пациентов выявляются признаки пролиферирующего плоского эпителия, о чем свидетельствует увеличение размеров эпителиальных клеток и ядер, появление неровности контуров ядер.

В ходе проведения способа диагностики воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока по примеру 3, сравнивая с нормой эпителия конъюнктивы, выявлены наиболее оптимальные условия окрашивания препаратов по Романовскому-Гимзе для 3 диагностических групп.

Пример 4

Способ диагностики воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока был проведен аналогично примеру 1, 2, 3, но отличается тем, что соскобный материал высушивают в термостате 8-9 минут, фиксируют 96% этиловым спиртом - однократным погружением, после чего окрашивают 25-27 минут по Романовскому-Гимзе.

1 группу составили пациенты с клинически здоровой конъюнктивой. На цитограмме клетки и ядра гиперхромны, диагностика затруднена.

Во 2 группу вошли пациенты с клиническими признакам дистрофии конъюнктивы: пингвекула и птеригиум.

При микроскопии учитывать диагностические изменения соскобного материала не удается, так как интенсивная окраска препарата.

В 3 группу вошли пациенты с клиническими признаками начальной заднекапсулярной и субкапсулярной катарактой.

При микроскопии гиперхромия ядра и цитоплазмы эпителиоцитов не дает четкой диагностической картины.

В ходе проведения способа диагностики воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока по примеру 4 выявлено интенсивное окрашивание препаратов в 3 диагностических группах, что затрудняет анализ микроскопии.

Таким образом, способ достоверной, доклинической диагностики воздействий УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока дает пример 3 и является наиболее оптимальным.

Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества:

- точность диагностики изменений конъюнктивы глазного яблока под воздействием УФ-излучения в 3 возрастных группах;

- экономически недорогое выполнение способа диагностики воздействий Уф-излучения на конъюнктиву глазного яблока;

- быстрота выполнения способа диагностики воздействий УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока;

- доклиническая диагностика изменений эпителия бульбарной конъюнктивы.