производные 2-[1-(1,1-диоксотиетанил-3)-1,2,4-триазолил-5-тио]уксусной кислоты, обладающие гемореологической активностью

Формула изобретения

1. Производные 2-[1-(1,1-диоксотиетанил-3)-1,2,4-триазолил-5-тио]уксусной кислоты общей формулы

где R=H₂N⁺ (CH₂CH₂OH) ₂ (Ia); R=H₃N⁺ CH₂CH₂OH (Ib).

2. Соединение по п.1, представляющее собой диэтаноламмониевую соль 2-[3-бром-1-(1,1-диоксотиетанил-3)-1,2,4-триазолил-5-тио]уксусной кислоты.

3. Соединение по п.1, представляющее собой моноэтаноламмониевую соль 2-[3-бром-1-(1,1-диоксотиетанил-3)-1,2,4-триазолил-5-тио]уксусной кислоты.

4. Производные по п.1, обладающие гемореологической активностью.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к фармацевтической химии и фармакологии, и может быть использовано для создания новых корректоров гемореологических нарушений.

Задачей изобретения является расширение арсенала биологически активных веществ, обладающих гемореологической активностью.

Технический результат - получение веществ, обладающих выраженной гемореологической активностью.

Сущность изобретения: производные 2-[1-(1,1-диоксотиетанил-3)-1,2,4-триазолил-5-тио] уксусной кислоты (Ia, b) общей формулы

где R=Н₂N⁺ (СН₂СН₂OH) ₂ (Ia); R=Н₃N⁺ CH₂СН₂ОН (Ib),

обладающие гемореологической активностью.

В качестве препарата сравнения взят пентоксифиллин (3,7-дигидро-3,7-диметил-1- (5-оксогексил)-1Н-пурин-2,6-дион, Aventis, Германия), который длительное время используется в клинике как корректор реологических нарушений (Hikiami H., Goto H., Sekiya N. [et al.] // Phytomedecine. - 2003. - Vol.10, №6-7. - P.459-466).

Заявляемые соединения синтезируют следующим образом.

Взаимодействием 3,5-дибром-1 -(1,1-диоксотиетанил-3)-1,2,4-триазола (Исхакова Г.Ф. Синтез 3,5-дибром-1-(1,1-диоксотиетанил-3)-1,2,4-триазола (Исхакова Г.Ф., Клен Е.Э., Халиуллин Ф.А. // Науки о человеке: сборник статей Третий международный конгресс молодых ученых и специалистов. - Томск, 2002. - С.217-218) с тиогликолевой кислотой в присутствии гидроксида калия в среде этанола синтезируют 2-[3-бром-1-(1,1-диоксотиетанил-3)-1,2,4-триазолил-5-тио] уксусную кислоту, реакцией которой с моноэтаноламином или диэтаноламином в среде этанола при кипячении в течение 0,5 часа получают соответствующие соли 2-[3-бром-1-(1,1-диоксотиетанил-3)-1,2,4-триазолил-5-тио] уксусной кислоты.

Пример 1. Синтез соединения Ia.

Смесь 1,65 г (5 ммоль) 3,5-дибром-1-(1,1-диоксотиетанил-3)-1,2,4-триазола, 0,92 г (10 ммоль) тиогликолевой кислоты и 0,84 г (15 ммоль) калия гидроксида кипятят в 50 мл этанола 1 час. Раствор упаривают до сухого остатка. Остаток растворяют в воде. К раствору добавляют разведенную серную кислоту до рН=3. Выделившийся осадок отфильтровывают, промывают водой. Сушат. Получают 0,91 г (53%) 2-[3-бром-1-(1,1-диоксотиетанил-3)-1,2,4-триазолил-5-тио] уксусной кислоты с Т_пл 214-216°С. Очищают кристаллизацией из этанола.

Элементный анализ.

Найдено, %: С 24,8; Н 2,6; N 12,5; S 18,9. C ₇H₈BrN₃O ₄S₂.

Вычислено, %: С 24,5; Н 2,4; N 12,3; S 18,7.

Спектр ЯМР ¹ Н (DMSO - D6), , м.д.: 4,05 (2Н, с, SCH₂); 4,60-4,73 (2Н, м, S(CH)₂);

4,78-4,92 (2Н, м, S(CH)₂); 5,34-5,47 (1Н, м, NCH).

Раствор 1,71 г (5 ммоль) 2-[3-бром-1-(1,1-диоксотиетанил-3)-1,2,4-триазолил-5-тио] уксусной кислоты и 0,68 г (6,5 ммоль) диэтаноламина в 50 мл этанола кипятят 0,5 часа. Раствор упаривают до сухого остатка. Остаток промывают ацетоном, фильтруют. Сушат. Получают 1,39 г (62%) диэтаноламмониевой соли 2-[3-бром-1-(1,1-диоксотиетанил-3)-1,2,4-триазолил-5-тио]уксусной кислоты с Т_пл 227-230°С. Очищают кристаллизацией из этанола.

Элементный анализ.

Найдено, %: С 29,2; Н 4,2; N 12,6; S 14,6. C₁₁H ₁₉BrN₄O₆S ₂.

Вычислено, %: С 29,5; Н 4,3; N 12,5; S 14,3.

Спектр ЯМР ¹Н (DMSO - D6), , м.д.: 3,38-3,62 (8Н, м, N(CH₂CH ₂O)₂); 3,68 (2Н, с, SCH ₂); 4,56-4,70 (2Н, м, S(CH)₂); 4,75-4,86 (2Н, м, S(CH)₂); 5,32-5,46 (1Н, м, NCH).

Заявляемое соединение представляет собой порошок белого цвета, растворимый в воде, диметилформамиде, при нагревании - в этаноле.

Пример 2. Синтез соединения Ib.

Раствор 1,71 г (5 ммоль) 2-[3-бром-1-(1,1-диоксотиетанил-3)-1,2,4-триазолил-5-тио]уксусной кислоты и 0,40 г (6,5 ммоль) моноэтаноламина в 50 мл этанола кипятят 0,5 часа. Охлаждают до комнатной температуры, выпавший осадок отфильтровывают, промывают этанолом, сушат. Получают 0,94 г (47%) моноэтаноламмониевой соли 2-[3-бром-1-(1,1-диоксотиетанил-3)-1,2,4-триазолил-5-тио]уксусной кислоты с Т_пл 251-251,5°С. Очищают кристаллизацией из этанола.

Элементный анализ.

Найдено, %: С 26,6; Н 3,4; N 13,7; S 16,2. C₉H ₁₅BrN₄O₅S ₂.

Вычислено, %: С 26,8; Н 3,7; N 13,9; S 15,9.

Спектр ЯМР ¹Н (DMSO - D6), , м.д.: 3,39 (4Н, уш. с, NCH₂CH ₂O); 3,67 (2Н, с, SCH2); 4,57-4,88 (4Н, м, 2S(CH) ₂); 5,32-5,48 (1Н, м, NCH).

Заявляемое соединение представляет собой порошок белого цвета, растворимый в воде, диметилформамиде, при нагревании - в этаноле.

Острая токсичность заявляемых соединений.

Острую токсичность определяли на крысах при внутривенном введении. Гибель животных регистрировалась в течение двух недель. Расчет величины ЛД₅₀ производили по методу Прозоровского (Прозоровский В.Б. и соавт. // Фармакол. и токсикол. - 1978. - №4. - С.497-502). Результаты представлены в таблице 1.

Гемореологическая активность.

Гемореологическую активность заявляемых соединений изучали методом воспроизведения нарушений реологических свойств крови in vitro. Синдром повышенной вязкости крови моделировали с помощью гипертермии (Плотников М.Б., Колтунов А.А., Алиев О.И. // Бюлл. эксп. биол. и мед. - 1996. - №9. - С.274-275), с использованием крови кроликов. Соединения Ia, Ib и пентоксифиллин в концентрациях 10, 50, 100 и 500 мкмоль/л добавляли в пробы крови за 10 минут до начала инкубации. В контрольные образцы добавляли 10 мкл теплого (37°С) физиологического раствора (0,89%-ный раствор хлорида натрия). Вязкость проб крови измеряли в сантипуазах (сПз) до и после инкубации на вискозиметре АКР-2 (Ruscan Reaseach Ltd., Россия), принцип действия которого основан на методе ротационной вискозиметрии со свободно плавающим цилиндром-ротором (Добровольский Н.А., Лопухин Ю.М., Парфенов А.С. [и др.] // Реологические исследования в медицине: сб. науч. тр. - М.: НЦХ РАМН, 1998. - C.45-5L). Влияние веществ на агрегацию эритроцитов оценивали по индексу агрегации, рассчитываемому как отношение вязкости крови при скорости сдвига 3 с^-1 к вязкости крови при 100 с ^-1 (Dinten L. // Aging. - 1989. - №1. - Р.99-125). Расчет ингибирующего влияния заявляемых соединений на агрегацию эритроцитов производили по формуле:

ИнАЭ=100-(В/А)*100%,

где ИнАЭ - индекс ингибирования агрегации эритроцитов;

А - индекс агрегации эритроцитов без изучаемого соединения;

В - индекс агрегации эритроцитов после инкубации суспензии с изучаемым соединением.

Заявляемые соединения в исследуемых концентрациях вызывали статистически значимое по сравнению с контролем снижение индекса ингибирования агрегации эритроцитов (таблица 2). Как видно из таблицы, гемореологическая активность заявляемых веществ превышает таковую у пентоксифиллина. Наибольшая величина эффекта наблюдается для соединения Ia в концентрации 100 мкмоль/л.

При определении величины эффективной концентрации (ЕС₂₀), вызывающей снижение индекса агрегации эритроцитов на 20% (таблица 2) (Духанин А.С., Губаева Ф.Р. // Эксперим. и клинич. фармакология. - 1998. - №4. - С.66 - 71), установлено, что заявляемые соединения Ia, Ib превосходят по гемореологической активности пентоксифиллин в 3,1 и 1,7 раза соответственно

В качестве объективного показателя условной широты терапевтического действия использовали условный терапевтический индекс (УТИ), который рассчитывали делением показателя острой токсичности LD₅₀ на показатель эффективной концентрации ЕС₂₀. УТИ для соединения Ia равен 13,30, соединения Ib 103,82, а для пентоксифиллина 1,92. По величине УТИ заявляемые соединения Ia, Ib превосходят препарат сравнения в 6,93 и 54,07 раза соответственно.

Таким образом, представленные химические соединения (Ia, Ib) обладают гемореологической активностью, существенно превосходят пентоксифиллин по терапевтической широте и выгодно отличаются более низкой токсичностью.

ПРОИЗВОДНЫЕ 2-[1-(1,1-ДИОКСОТИЕТАНИЛ-3)-1,2,4-ТРИАЗОЛИЛ-5-ТИО]УКСУСНОЙ КИСЛОТЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ГЕМОРЕОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ

Таблица 1
Острая токсичность заявляемых соединений и препарата сравнения
Соединение	Показатель острой токсичности LD50, крысы в/в
	ммоль/кг				мг/кг
Ia	0,838				374,86
Ib	>14,95				6029,0
Пентоксифиллин	0,379				105,48
Таблица 2
Гемореологические эффекты заявляемых соединений и препарата сравнения в опытах in vitro
Соединение		Индекс ингибирования агрегации эритроцитов (%) при концентрации соединения					ЕС20, мкмоль/л
		10	50	100		500
Ia		-11,59±1,81**	-15,26±3,91**	-22,22±6,57*		-	63,0
1b		-10,79±2,33*	-15,37±1,97*	-19,98±4,82*		-29,48±5,41*	114,0
Пентоксифиллин		-6,00±1,54*	-14,56±3,71**	-18,59±3,66**		-28,13±2,84***	197,4
Примечание * - отличие от контроля достоверно (р<0,05);
** - отличие от контроля достоверно (р<0,01);
*** - отличие от контроля достоверно (р<0,001).