способ получения стерилизованного порошкообразного панкреатина

Формула изобретения

1. Способ получения панкреатина, включающий нагревание диспергированной формы панкреатина, содержащей один или более растворителей, при температуре по крайней мере 85°С в течение 48 ч с получением общего содержания растворителей в диспергированной форме панкреатина, равного или менее 3,5 мас.% в любой момент процесса указанного нагревания, а диспергированную форму панкреатина выбирают из порошка, пеллет, микропеллет, микросфер, гранул и гранулятов.

2. Способ по п.1, включающий следующие стадии

(а) предварительное нагревание диспергированной формы панкреатина, содержащего один или более растворителей, до температуры по крайней мере 85°С и

(б) продолжение нагревания диспергированной формы панкреатина при температуре по крайней мере 85°С в течение периода до 48 ч с получением общего содержания растворителей в диспергированной форме панкреатина, равного или менее 3,5 мас.% в любой момент процесса стадии (б).

3. Способ по п.1, в котором диспергированная форма панкреатина нагревается в течение 12 ч.

4. Способ по п.1, в котором обеспечивается содержание растворителей от 0,1 мас.% до 3,5 мас.%.

5. Способ по п.2, который обеспечивает содержание растворителей от 0,1 мас.% до 3,5 мас.%.

6. Способ по п.2, в котором нагревание панкреатина на стадии (б) проводят в течение от 1 до 36 ч.

7. Способ по п.2, в котором нагревание панкреатина на стадии (б) проводят в течение от 8 до 48 ч.

8. Способ по п.1, в котором температура составляет от 85 до 100°С.

9. Способ по п.2, в котором температура процесса на стадии а) и температура процесса на стадии б) в обоих случаях составляет от 85 до 100°С.

10. Способ по п.1, в котором температура составляет от 85 до 95°С.

11. Способ по п.2, в котором температура на стадии а) и на стадии б) в обоих случаях составляет от 85 до 95°С.

12. Способ по п.1, в котором нагревание проводят в непрерывном режиме.

13. Способ по п.1, в котором нагревание проводят в ступенчатом режиме.

14. Способ по п.2, в котором нагревание на стадии б) проводят в непрерывном режиме.

15. Способ по п.2, в котором нагревание на стадии б) проводят в ступенчатом режиме.

16. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором титр вирусной примеси в диспергированном панкреатине после нагревания по крайней мере в 1000 раз меньше, предпочтительно в 10000 раз меньше, чем титр указанной вирусной примеси в диспергированном панкреатине до нагревания.

17. Способ по п.1, в котором содержание растворителей в диспергированной форме панкреатина в процессе нагревания определяют термогравиметрическим методом и/или методом водного титрования по Карлу Фишеру.

18. Способ по п.2, в котором содержание растворителей в диспергированной форме панкреатина в процессе нагревания определяют термогравиметрическим методом и/или методом водного титрования по Карлу Фишеру.

19. Способ по п.1, в котором диспергированную форму панкреатина выбирают из порошка.

20. Способ по п.2, в котором диспергированную форму панкреатина выбирают из порошка.

21. Способ по п.1, в котором активность липазы в панкреатине после нагревания составляет по крайней мере 50% по сравнению с активностью липазы до нагревания.

22. Способ по п.2, в котором активность липазы в панкреатине после нагревания составляет по крайней мере 50% по сравнению с активностью липазы до нагревания.

23. Панкреатин, полученный согласно способу по любому из пп.1-15 или 17-22, в котором активность липазы в панкреатине после нагревания составляет по крайней мере 50% по сравнению с активностью липазы до нагревания.

24. Панкреатин, полученный согласно способу по п.16, в котором активность липазы в панкреатине после нагревания составляет по крайней мере 50% по сравнению с активностью липазы до нагревания.

25. Фармацевтическая композиция для лечения внешнесекреторной недостаточности поджелудочной железы, включающая фармацевтически эффективное количество панкреатина по п.23 и один или более фармацевтически приемлемых экципиентов.

26. Фармацевтическая композиция для лечения внешнесекреторной недостаточности поджелудочной железы, включающая фармацевтически эффективное количество панкреатина по п.24 и один или более фармацевтически приемлемых экципиентов.

27. Фармацевтическая композиция по п.25, содержащая панкреатин в виде лекарственной формы, предназначенной для перорального введения, с немедленным и/или модифицированным высвобождением, и указанную лекарственную форму выбирают из группы, включающей таблетки, микротаблетки, пеллеты, микропеллеты, микросферы, гранулы, грануляты, порошки, суспензии, эмульсии, дисперсии, капсулы и пакетики.

28. Фармацевтическая композиция по п.27, в которой панкреатин получают в виде лекарственной формы, покрытой энтеросолюбильным слоем, устойчивым к кислоте желудочного сока.

29. Фармацевтическая композиция по п.25 в форме капсулы или пакетика.

30. Фармацевтическая композиция по п.27 или 28, которая представляет собой лекарственную форму для перорального введения с немедленным и/или модифицированным высвобождением.

31. Фармацевтическая композиция по п.25, которая содержит

(а) от 50 до 90 мас.% панкреатина по п.23, и

(б) от 10 до 50 мас.% фармацевтически приемлемых эксципиентов.

32. Фармацевтическая композиция по п.26, которая содержит

(а) от 50 до 90 мас.% панкреатина по п.24, и

(б) от 10 до 50 мас.% фармацевтически приемлемых эксципиентов.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к способу получения и применения панкреатина, в котором концентрацию одного или более биологических, прежде всего вирусных, примесей снижают при нагревании панкреатина.

Панкреатин, который получают из поджелудочной железы млекопитающих, включает различные пищеварительные ферменты, такие как липазы, амилазы и протеазы. Панкреатин используется для лечения внешнесекреторной недостаточности поджелудочной железы, которая часто возникает при кистозном фиброзе, хроническом панкреатите, после панкреатэктомии, после операции шунтирования желудочно-кишечного тракта (например, гастроэнтероктомии Бильрота II) и непроходимости протоков при новообразовании (например, поджелудочной железы или общего желчного протока). При использовании панкреатина в составе фармацевтических продуктов предпочтительно поддерживать высокий уровень активности различных пищеварительных ферментов. Однако эти ферменты разлагаются, например, при хранении, и чрезвычайно чувствительны к повышенным температурам. Таким образом, при использовании панкреатина требуются строго контролируемые условия для его переработки, обработки и хранения.

Поскольку панкреатин является продуктом животного происхождения, он также включает другие компоненты, присутствие которых нежелательно, например одну или более биологических примесей, например вирусы. В течение более 100 лет коммерческого использования фармацевтических продуктов, включающих панкреатин, не было зарегистрировано ни одного случая заражения пациентов панкреатином, содержащим вирус. Однако в настоящее время фирмы, выпускающие фармацевтические продукты из биологических тканей и/или жидкостей, подвергаются усиленному давлению со стороны административных органов, требующих увеличения степени безопасности выпускаемых продуктов и уменьшения всех видов примесей до минимально возможного уровня, независимо от патогенности любой примеси для человека или отсутствия патогенности. Следовательно, для применения панкреатина в составе фармакологических продуктов требуется свести к минимуму концентрацию биологических примесей до уровня общепринятых пределов детектирования.

Таким образом, при производстве, переработке и хранении панкреатина возникают трудности при разработке этих процессов с целью поддержания активности различных пищеварительных ферментов на высоком уровне и одновременно сведения к минимуму концентрации одной или более биологических примесей.

Оказалось, что используемые в настоящий момент способы получения панкреатина не обеспечивают эффективной инактивации всех биологических примесей, прежде всего определенных вирусов, до уровня чувствительности современных методов детектирования.

Известны различные подходы к снижению концентрации вирусов и бактерий в ферментативных композициях. Такие способы включают нагревание, фильтрацию, добавление химических ингибиторов или сенсибилизаторов, обработку излучением и продолжительное нагревание. Эти способы описаны в данном контексте ниже.

Нагревание означает нагревание продукта до 60°С в течение 70 ч, что приводит к деградации некоторых чувствительных соединений. В некоторых случаях нагревание приводит к разрушению значительной части ферментативной активности продукта.

Фильтрация включает фильтрование продукта для физического удаления примесей. К сожалению, данный способ приводит также к удалению высокомолекулярных продуктов. Более того, в определенных случаях, небольшие вирусы, примеси аналогичного размера и патогенные соединения не удаляются при фильтровании.

Способ добавления химических сенсибилизаторов включает добавление токсичных агентов, связывающихся с ДНК/РНК вируса и активирующихся под действием УФ или других видов излучения. Излучение приводит к образованию реакционноспособных промежуточных соединений и/или свободных радикалов, которые связываются с ДНК/РНК вируса, разрывают химические связи в цепи ДНК/РНК и/или образуют поперечные связи с ДНК/РНК или образуют комплекс, и таким образом репликация вируса не происходит. Данный способ требует отмывки продуктов от несвязанного сенсибилизатора, поскольку сенсибилизаторы проявляют токсичность, даже если они не являются мутагенными или канцерогенными, и такие сенсибилизаторы нельзя вводить пациенту.

В патенте US № 3956483 (Lewis) описан способ получения панкреатина, проявляющего пригодную амилолитическую, протеолитическую и липолитическую активность, и удаления вредных бактерий при сохранении указанной активности. Указанный способ включает нагревание панкреатина до достаточно высокой температуры от 120°F до 180°F (приблизительно 49-82°С). Однако в патенте не описан способ снижения концентрации вирусов до установленного в настоящее время предела детектирования.

В патенте US 6749851 (Mann) описана обработка композиций, включающих пищеварительные ферменты, при стабилизации композиций на первой стадии при (а) снижении температуры или (б) уменьшении количества растворителей или (в) добавлении в композицию стабилизатора, с последующим облучением композиции на второй стадии.

В статье Braeuniger и др., Int. J.Hyg. Environ. Health 203, с.71-75, 2000 описано использование нагревания для ингибирования бычьего парвовируса. Было установлено, что ингибирование бычьего парвовируса зависит от времени обработки и влажности. Высокое содержание влаги позволяет снизить продолжительность нагревания, которое обеспечивает такую же степень ингибирования, как и при низком содержании влаги и высокой продолжительности обработки. Однако в указанной статье не упоминается об эффекте, который оказывает нагревание на ферменты, такие как липазы, амилазы и протеазы, входящие в состав панкреатина животного происхождения. Таким образом, в настоящее время существует необходимость в способе, который обеспечивает получение панкреатина с высоким уровнем ферментативной активности при одновременном сниженном содержании биологических примесей.

Было установлено, что при получении панкреатина можно использовать определенные условия, при которых концентрация одного или более биологических примесей снижается, а активность ферментов поддерживается на приемлемом уровне. Прежде всего, было установлено, что способ по настоящему изобретению можно использовать для снижения концентрации вирусных примесей в панкреатине. Более того, способ по настоящему изобретению удовлетворяет стандартным рекомендациям в отношении удаления вирусов из биологических продуктов (например, рекомендации "Note For Guidance on Virus Validation Studies: The Design, Contribution and Interpretation of Studies Validating the Inactivation and Removal of Viruses", изд. комитета по контролю непатентованных лекарственных средств (Committee For Proprietary Medicinal Products) (упоминаемое в данном контексте как "CPMP/BWP/268/95")) и в то же время позволяет поддерживать ферментативную активность (например, липазы, протеазы и амилазы) на приемлемом уровне.

Другим преимуществом описанного в данном контексте способа и полученного панкреатина, а также фармацевтических композиций, включающих панкреатин, полученный согласно способу по настоящему изобретению, является его применимость в лабораторном, полупрепаративном и производственном масштабах.

Соответственно, один из вариантов осуществления настоящего изобретения включает способ получения панкреатина, который позволяет снизить концентрацию одной или более биологических примесей, прежде всего вирусов, при нагревании диспергированной формы панкреатина, содержащей один или более растворителей при температуре по крайней мере 85°С, причем общее содержание растворителей в диспергированной форме панкреатина составляет по крайней мере до 9 мас.% в любой момент в процессе вышеупомянутого нагревания. В результате получают панкреатин с приемлемым уровнем ферментативной активности, в котором концентрация одной или более биологических примесей, прежде всего одной или более вирусных примесей, снижена.

В другом варианте настоящего изобретения описан способ получения панкреатина, включающий следующие стадии:

(а) предварительное нагревание диспергированной формы панкреатина, содержащего один или более растворителей до температуры по крайней мере 85°С и

(б) дальнейшее нагревание диспергированной формы панкреатина при температуре по крайней мере 85°С в течение периода до 48 ч, при этом общее содержание растворителей в диспергированной форме панкреатина составляет по крайней мере 9 мас.% в любой момент в процессе стадии (б).

Еще один вариант настоящего изобретения включает панкреатин, полученный, как указано выше.

Другой вариант включает способ получения фармацевтической композиции, содержащей панкреатин согласно описанному в данном контексте способу, причем указанную фармацевтическую композицию получают в виде лекарственной формы, пригодной для перорального введения с немедленным и/или модифицированным высвобождением, которую выбирают из группы, включающей таблетки, микротаблетки, пеллеты, микропеллеты, гранулы, грануляты, порошки, суспензии, эмульсии, дисперсии, капсулы, пакетики, а также другие лекарственные формы.

Еще один вариант настоящего изобретения включает фармацевтическую композицию, содержащую

(1) фармакологически эффективное количество панкреатина, причем указанный панкреатин нагревают по крайней мере до 85°С в виде диспергированной формы панкреатина, содержащей один или более растворителей, при этом общее содержание растворителей в панкреатине составляет менее 9 мас.% в любой момент в процессе нагревания, причем титр вирусной примеси в панкреатине после нагревания по крайней мере в 1000 раз меньше, чем титр вирусной примеси в панкреатине до нагревания,

(2) один или более фармацевтически приемлемых экципиентов.

Другой вариант настоящего изобретения включает фармацевтическую композицию в форме капсулы или пакетика, при этом капсула или пакетик включают панкреатин, полученный согласно вышеописанному способу.

Еще один вариант включает способ лечения внешнесекреторной недостаточности поджелудочной железы при введении безопасного и эффективного количества панкреатина, полученного согласно вышеописанному способу.

Другие объекты, признаки и преимущества описаны ниже в виде вариантов осуществления настоящего изобретения и частично представляются очевидными при прочтении описания или при применении настоящего изобретения на практике. Эти объекты и преимущества описаны на примере способов и композиций, заявленных в описании и формуле настоящего изобретения.

Краткое описание чертежей

Фиг.1. Активность липазы после нагревания панкреатина при температуре 80°С, 85°С, 90°С, 95°С и 100°С, содержание растворителя составляет 1%. Активность липазы определяли через 2, 4, 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч.

Фиг.2. Активность липазы после нагревания панкреатина при температуре 90°С и 95°С, содержание растворителя составляет 3%. Активность липазы определяли через 2, 4, 8, 15, 24 и 48 ч.

Фиг.3. Активность липазы после нагревания панкреатина при температуре 80°С, содержание растворителя составляет 3%, 6%, 9% и 12%. Активность липазы определяли через 0,5, 1,0 и 3,0 ч.

Фиг.4. Логарифм снижения титра свиного панкреатина, содержащего примесь свиного парвовируса (сокращенно - панкреатин, содержащий PPV) после нагревания при температуре 80°С, 85°С, 90°С, 95°С и 100°С, содержание растворителя составляет 1%. Содержание вируса определяли через 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч.

Фиг.5. Логарифм снижения титра панкреатина, содержащего PPV, при нагревании при температуре 90°С и 95°С, содержание растворителя составляет 1% и 3% в течение 12 ч. Концентрацию вируса определяли через 3, 6 и 12 ч.

Если не указано иное, все технические и специальные термины, использованные в данном контексте, имеют общепринятое в данной области техники значение.

Использованный в данном контексте термин «стерилизовать» означает снижение концентрации по крайней мере одной биологической примеси в панкреатине, прежде всего в панкреатине в диспергированной форме, полученном согласно вышеописанному способу. Более подробно термин «стерилизовать» означает снижение концентрации по крайней мере одной вирусной примеси в панкреатине, прежде всего в панкреатине в диспрегированной форме, полученном согласно вышеописанному процессу.

Использованный в данном контексте термин «панкреатин» означает панкреатин, полученный из поджелудочной железы любого млекопитающего, например бычий и свиной панкреатин. Например, в настоящем изобретении можно использовать панкреатин, полученный, как описано в патенте US № 4623624 или по аналогичной методике. Для повышения эффективности снижения содержания биологических примесей в панкреатине предпочтительно использовать диспергированную форму панкреатина, которая совместима с условиями способа, описанного в данном контексте. Диспергированные формы панкреатина включают, например, порошки, пеллеты, микропеллеты, микросферы, гранулы и грануляты. Предпочтительные результаты получают при использовании панкреатина в виде порошка, например порошкообразного панкреатита, полученного напрямую в процессе получения панкреатина. Панкреатин, использованный в настоящем изобретении, содержит также один или более фармацевтически приемлемых экципиентов, совместимых с условиями способа, описанного в данном контексте, и которые выбирают, например, из фармацевтически приемлемых экципиентов, приведенных ниже.

Использованный в данном контексте термин «биологическая примесь (примеси)» означает примесь, которая в результате прямого или косвенного контактирования с панкреатином оказывает отрицательное воздействие на панкреатин или на пациента, которому вводится панкреатин. Более того, термин «активная биологическая примесь» означает биологическую примесь, которая оказывает отрицательное действие, сама по себе или в комбинации с другим фактором, таким как вторая биологическая примесь, на процесс получения панкреатина или на пациента, которому вводится панкреатин. Такие биологические примеси включают, без ограничения перечисленным, вирусы и/или бактерии. Бактерии включают, без ограничения перечисленным, плесневые грибы и/или дрожжи. Биологическая примесь может являться патогеном для человека.

Использованный в данном контексте термин «вирус» или «вирусная примесь (примеси)» означает безоболочечные вирусы. Более подробно термин «вирус» или «вирусная примесь (примеси)» включает так называемые высокорезистентные вирусы, такие как парвовирусы, прежде всего парвовирус свиней, цирковирус, прежде всего цирковирус свиней, и калицивирус, прежде всего калицивирус свиней. Парвовирус свиней (PPV) является общепринятой моделью вируса для всего класса высокорезистентных вирусов, прежде всего для высокорезистентного вируса свиней. Более того, термин «вирус» или «вирусная примесь (примеси)» в данном контексте также означает пикорнавирусы, прежде всего пикорнавирус свиней, реовирусы, прежде всего реовирус свиней, астровирусы, прежде всего астровирус свиней, аденовирусы, прежде всего аденовирус свиней, и вирусы герпеса, прежде всего вирус герпеса свиней.

Использованный в данном контексте термин «растворитель» или «растворители» означает количество или процентное соотношение жидкости, присутствующей в панкреатине, в виде связанной или включенной в комплекс жидкости или в виде несвязанной жидкости. Несвязанная жидкость означает жидкость, присутствующую в нагреваемом панкреатине, которая не связана или не включена в комплекс с панкреатином. Такие жидкости, содержащиеся в панкреатине, обычно включают воду или безвредный для фермента органический растворитель и смеси воды с безвредными для ферментов органическими растворителями. Пригодные безвредные для ферментов органические растворители включают, например, летучие органические растворители, такие как ацетон, хлороформ, дихлорметан или С₁-С₄алканолы с прямой или разветвленной цепью, прежде всего метанол, этанол, 1-пропанол, 2-пропанол, 2-бутанол, трет-бутанол или их смеси. В качестве безвредного для ферментов органического растворителя предпочтительно используют 2-пропанол. Обычно соотношение воды и безвредного для ферментов органического растворителя составляет от 50:1 до 3:1, более предпочтительно от 30:1 до 10:1.

Термин «температурный интервал», например, от 85°С до 100°С, означает любую температуру в пределах указанного интервала, а также температурный профиль, который используют для получения различных температур в пределах указанного интервала, включая границы интервала. Температурный интервал в ходе процесса, описанного в данном контексте, используют в непрерывном или периодическом режиме в течение всех периодов времени, указанных для данного температурного интервала.

Описанный в данном контексте способ включает нагревание диспергированной формы панкреатина, содержащей один или более растворителей, при температуре по крайней мере 85°С и содержащей общее количество растворителя в диспергированной форме панкреатина менее 9 мас.% в любой момент указанного периода нагревания. В одном варианте диспергированную форму панкреатина нагревают в течение 48 ч.

В другом варианте содержание растворителей в панкреатине составляет менее 8 мас.%, более предпочтительно менее 6 мас.%, обычно менее 5 мас.%, наиболее предпочтительно менее 3,5 мас.%, предпочтительно от 0,1 мас.% до 3,5 мас.%, более предпочтительно от 0,1 мас.% до 3 мас.%, наиболее предпочтительно от 0,1 мас.% до 1,6 мас.%. В еще одном варианте содержание растворителя составляет менее 7,5%, 7,0%, 6,5%, 6,0%, 5,5%, 5,0%, 4,5%, 4,0%, 3,5%, 3,0%, 2,5%, 2,0%, 1,5%, 1,0% или 0,5%.

В другом варианте согласно описанному в данном контексте способу используют диспергированный панкреатин, прежде всего порошкообразный панкреатин, исходное содержанием растворителя в котором составляет 9 мас.% или менее, обычно от 2 до 3,5 мас.%. Панкреатин нагревают до необходимой температуры, которая составляет от 85°С до 100°С, например 90°С. В ходе предварительной стадии нагревания содержание растворителя в панкреатине снижается в зависимости от времени и температуры. Следует понимать, что продолжительность предварительного нагревания зависит от количества материала и его исходной температуры, и продолжительность составляет от приблизительно 15 мин до 10 ч. После стадии предварительного нагревания дисперсию панкреатина продолжают нагревать при температуре по крайней мере 85°С, обычно при температуре от 85°С до 100°С, например при 90°С, в течение требуемого периода времени, т.е. до 48 ч, например в течение 24 ч. При использовании параметров способа, описанных в данном контексте (обычно при атмосферном давлении), содержание растворителя при завершении стадии предварительного нагревания обычно составляет от 0,1 мас.% до 1,6 мас.%. Содержание растворителя от 0,1 мас.% до 1,6 мас.%, наблюдаемое при завершении стадии предварительного нагревания, сохраняется относительно постоянным во всем интервале предпочтительных параметров способа. После завершения описанного в данном контексте способа нагретый панкреатин можно хранить в нормальных условиях (т.е. при комнатной температуре и нормальной влажности). Снижение вирусных примесей в панкреатине, которое обеспечивается согласно описанному в данном контексте способу, также сохраняется в указанных условиях окружающей среды, поскольку любая вирусная примесь, описанная в данном контексте, необратимо дезактивируется в условиях указанного способа.

В другом варианте диспергированный панкреатин предварительно нагревают до температуры по крайней мере 85°С и продолжают нагревать по крайней мере при 85°С в течение от 1 до 36 ч, более предпочтительно в течение от 8 до 30 ч, еще более предпочтительно от 10 до 24 ч. В еще одном варианте диспергированный панкреатин предварительно нагревают до температуры по крайней мере 85°С и продолжают нагревать по крайней мере при 85°С в течение от 1 до 36 ч, например 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч, 24 ч, 25 ч, 26 ч, 27 ч, 28 ч, 29 ч, 30 ч, 31 ч, 32 ч, 33 ч, 34 ч, 35 ч или 36 ч, в другом варианте диспергированный панкреатин предварительно нагревают до температуры по крайней мере 85°С и продолжают нагревать по крайней мере при 85°С в течение от 10 до 30 ч.

В другом варианте панкреатин предварительно нагревают до температуры по крайней мере 85°С, т.е. до температуры от 85°С до 100°С, и продолжают нагревать при температуре от 85°С до 100°С, более подробно при температуре 85°С, 86°С, 87°С, 88°С, 89°С, 90°С, 91°С, 92°С, 93°С, 94°С, 95°С, 96°С, 97°С, 98°С, 99°С, 100°С или при любой температуре в интервале между указанными целыми значениями температуры. В еще одном варианте панкреатин предварительно нагревают до температуры по крайней мере 85°С, т.е. до температуры от 85°С до 95°С, и продолжают нагревать при температуре от 85°С до 95°С, более подробно при температуре 85°С, 86°С, 87°С, 88°С, 89°С, 90°С, 91°С, 92°С, 93°С, 94°С, 95°С или при любой температуре в интервале между указанными целыми значениями температуры. В другом варианте панкреатин предварительно нагревают до температуры по крайней мере 85°С, т.е. до температуры от 90°С до 100°С, и продолжают нагревать при температуре от 90°С до 100°С, более подробно при температуре 90°С, 91°С, 92°С, 93°С, 94°С, 95°С, 96°С, 97°С, 98°С, 99°С, 100°С или при любой температуре в интервале между указанными целыми значениями температуры. В более предпочтительном варианте панкреатин предварительно нагревают до температуры по крайней мере 85°С, т.е. до температуры от 90°С до 95°С, и продолжают нагревать при температуре от 90°С до 95°С, более подробно при температуре 90°С, 91°С, 92°С, 93°С, 94°С, 95°С или при любой температуре в интервале между указанными целыми значениями температуры.

В еще одном варианте такого способа содержание растворителей в продукте составляет от 0,1 мас.% до 3,5 мас.% и панкреатин предварительно нагревают до температуры по крайней мере 85°С, т.е. до температуры от 85°С до 100°С, и продолжают нагревать в течение от 8 до 30 ч при температуре от 85°С до 100°С.

В другом варианте содержание растворителей составляет от 0,1 мас.% до 3,0 мас.% и панкреатин предварительно нагревают до температуры по крайней мере 85°С, т.е. до температуры от 85°С до 95°С, и продолжают нагревать в течение от 10 до 30 ч при температуре от 85°С до 95°С.

В еще одном варианте содержание растворителей составляет от 0,1 мас.% до 1,6 мас.% и панкреатин предварительно нагревают до температуры по крайней мере 85°С, т.е. до температуры от 85°С до 95°С, и продолжают нагревать в течение от 10 до 30 ч при температуре от 85°С до 95°С.

В каждом отдельном или нескольких вариантах таких способов концентрация одной или более биологических примесей в панкреатине снижается, прежде всего снижается концентрация одного или более вирусов без изменения активности панкреатина. В одном варианте в панкреатине снижается концентрация высокорезистентных вирусов, более предпочтительно снижается концентрация свиного парвовируса.

Настоящее изобретение также включает панкреатин, полученный согласно способу, описанному в данном контексте. Все условия, описанные в данном контексте, также можно применять к панкреатину, полученному указанным способом.

Еще один вариант включает способ получения фармацевтической композиции, содержащей панкреатин, полученный согласно способу, описанному в данном контексте, причем такую фармацевтическую композицию получают в виде лекарственной формы, пригодной для перорального введения. Пероральные формы получают в виде формы с немедленным высвобождением или модулированным высвобождением, такие лекарственные формы включают таблетки, микротаблетки, пеллеты, микропеллеты, микросферы, гранулы, грануляты, порошки, суспензии, эмульсии, дисперсии, капсулы, пакетики, а также другие лекарственные формы.

В другом варианте такого способа для получения фармацевтической композиции панкреатин и/или его лекарственную форму покрывают энтеросолюбильным слоем, устойчивым к кислоте желудочного сока.

В еще одном варианте такого способа для получения фармацевтической композиции панкреатин или лекарственную форму с энтеросолюбильным покрытием необязательно помещают в пакетики и/или в капсулы.

В данном контексте описаны фармацевтические композиции, включающие

(1) фармакологически эффективное количество панкреатина, причем панкреатин нагревают при температуре по крайней мере 85°С в форме диспергированного панкреатина, содержащей один или более растворителей, причем общее содержание растворителя, содержащегося в панкреатине, составляет менее 9 мас.% в любой период нагревания, причем уровень титра вирусной примеси в панкреатине после нагревания по крайней мере в 1000 раз меньше по сравнению с титром до нагревания, и

(2) один или более фармацевтически приемлемых экципиентов.

В еще одном варианте такой фармацевтической композиции панкреатин включен в состав лекарственной формы, пригодной для перорального введения. Пероральная лекарственная форма представляет собой препарат с немедленным высвобождением и/или модулированным высвобождением, причем такие лекарственные формы представляют собой таблетки, микротаблетки, пеллеты микропеллеты, гранулы, грануляты, порошки, суспензии, эмульсии, дисперсии, капсулы, пакетики, а также другие лекарственные формы.

В другом варианте таких фармацевтических композиций панкреатин и/или фармацевтически приемлемые экципиенты покрывают энтеросолюбильным слоем, устойчивым к кислоте желудочного сока.

Настоящее изобретение также включает фармацевтическую композицию в форме капсулы или пакетика, которые содержат описанный в данном контексте панкреатин.

В одном варианте такая фармацевтическая композиция содержит фармацевтически приемлемый экципиент.

В еще одном варианте такая фармацевтическая композиция представляет собой лекарственную форму для перорального введения. Лекарственная форма для перорального введения представляет собой препарат с немедленным высвобождением и/или модулированным высвобождением, причем такие лекарственные формы представляют собой таблетки, микротаблетки, пеллеты, микропеллеты, гранулы, грануляты, порошки, суспензии, эмульсии, дисперсии, капсулы, пакетики, а также другие лекарственные формы.

В другом варианте фармацевтической композиции панкреатин и/или фармацевтически приемлемые экципиенты и/или их лекарственные формы покрывают энтеросолюбильным покрытием, устойчивым к кислоте желудочного сока.

Фармацевтические композиции, описанные в данном контексте, включают фармацевтически приемлемые экципиенты. Фармацевтически приемлемые экципиенты, используемые в вышеописанных композициях, включают сахара, такие как лактоза, сахароза, маннит и сорбит, крахмалы, такие как кукурузный крахмал, крахмал из тапиоки, картофельный крахмал, целлюлоза и ее производные, такие как натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, этилцеллюлоза и метилцеллюлоза, фосфаты кальция, такие как дифосфат кальция и трифосфат кальция, сульфат натрия, сульфат кальция, поливинилпирролидон, поливиниловый спирт, стеариновая кислота, стеараты щелочноземельных металлов, такие как стеарат магния и кальция, стеариновая кислота, растительные масла, такие как арахисовое, хлопковое, кунжутное, оливковое и кукурузное, неионные, катионные и анионные ПАВ, полимеры этиленгликоля, бетациклодекстрин, жирные спирты, гидролизованные злаки, а также другие нетоксичные совместимые наполнители, связующие, дезинтегрирующие агенты, например тальк, буферные вещества, консерванты, антиоксиданты, замасливатели, вкусовые добавки и другие экципиенты, пригодные для использования в фармацевтических составах.

Содержание панкреатина в фармацевтических композициях по настоящему изобретению составляет от 0,1% до 100%, например 0,1%, 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%, 0,6%, 0,7%, 0,8%, 0,9%, 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100%, предпочтительно от 25% до 90%, например 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или 90%, более предпочтительно от 50% до 90%, например 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или 90% (мас.%), причем указанные композиции включают соответствующее количество фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, экципиентов и/или носителей.

В одном варианте фармацевтические композиции включают (а) от 50 мас.% до 90 мас.% панкреатина, полученного согласно вышеописанному способу, и (б) от 10 мас.% до 50 мас.% фармацевтически приемлемого экципиента, например, полимера этиленгликоля, прежде всего этиленгликоль 2000, 3000, 4000, 6000, 8000 и/или 10000, причем общее содержание компонентов (а) и (б) составляет 100 мас.%.

В другом варианте фармацевтические композиции включают (а) от 55 мас.% до 85 мас.% панкреатина, полученного согласно вышеописанному способу, (б) от 5 мас.% до 35 мас.% полимера этиленгликоля, (в) от 1,0 мас.% до 20 мас.% пропан-2-ола и (г) необязательно от 0 мас.% до 10 мас.% вазелинового масла, а суммарное содержание компонентов (а), (б), (в) и (г) в каждом случае составляет 100 мас.%. Другие композиции, включающие панкреатин, описаны, например, в ЕР 0583726 и ЕР 0826375.

Описанный в данном контексте способ проводят при любой температуре, по крайней мере при 85°С, при которой не наблюдается неприемлемый уровень инактивации панкреатина. Согласно описанному в данном контексте способу «приемлемый уровень» инактивации зависит от некоторых признаков конкретного способа, описанного в данном контексте, таких как природа и характеристики конкретного образца панкреатина, и/или предполагаемое назначение нагреваемого панкреатина, причем указанный уровень определяется эмпирически специалистом в данной области техники. «Неприемлемый уровень» инактивации означает такой уровень, который исключает безопасное и эффективное применение нагреваемого панкреатина. Конкретное значение уровня инактивации для данного образца панкреатина определяют с использованием известных методов.

При использовании в составе фармацевтических композиций требуется сохранение ферментативной активности после нагревания на уровне 50% или более, предпочтительно 70% или более, более предпочтительно 85% или более и наиболее предпочтительно 90% от исходной ферментативной активности.

Для определения условий, обеспечивающих минимальный уровень потерь ферментативной активности, проводят ряд экспериментов. В нескольких сериях указанных экспериментов определяли исходную и остаточную ферментативную активность липазы как основного фермента до и после нагревания в определенных экспериментальных условиях, которые подробно описаны ниже.

В аналогичной серии экспериментов определяли снижение концентрации биологических примесей. В таких экспериментах определяли значение титра вируса высокорезистентного парвовируса свиньи как основного вируса до и после нагревания в определенных экспериментальных условиях, которые подробно описаны ниже. В каждом эксперименте использовали образцы свиного панкреатина, в которые добавлен парвовирус свиньи.

Титры вирусов, включая стандартные отклонения для образцов, содержащих PPV, определяли по конечной точке титрования, рассчитывая величину половины максимальной инфицирующей дозы тканевой культуры (TCID₅₀) по формуле Спирмена-Кербера, как описано в статье "Bundesanzeiger" № 84, май 4, (1994). Таким образом готовили серийные разбавления (1:3) в среде для клеточных культур и аликвоту каждого разбавления добавляли в лунки 96-луночного микропланшета, содержащие соответствующие клетки-мишени в восьми повторах. Планшет инкубировали в течение от шести до семи сут, затем клетки исследовали под микроскопом на присутствие индуцированного вирусом СРЕ. Титры вируса рассчитывали, как описано выше, и данные представляли в виде значения log ₁₀TCI₅₀/мл, причем интервал достоверности составлял 95%. Степень инактивации или удаления вирусов при обработке выражали в виде логарифмического фактора снижения (LRF). Значение LRF рассчитывали, как описано в инструкциях ЕС III/8115/89-EN (в настоящее время инструкции CPMP/BWP/268/95), приложение II, в виде разности титров вируса для контрольного образца и образцов после нагревания.

При использовании в составе фармацевтических композиций требуется снижение концентрации активной биологической примеси, прежде всего снижение концентрации вирусных примесей, т.е. логарифмическое снижение титра составляет по крайней мере 3,0, предпочтительно 3,5, более предпочтительно 4,0, наиболее предпочтительно 4,5 или более. Согласно инструкциям по безопасности в отношении содержания вирусов в биологических продуктах (см., например, CPMP/BWP/268/95), способ, обеспечивающий величину логарифма снижения титра, равную 40, обычно считают надежным и приемлемым в отношении инактивации вирусов.

Логарифмическое снижение титра вирусов означает снижение концентрации вируса в единицах десятичного логарифма (log₁₀), т.е. логарифм снижения титра, равный 3, означает снижение концентрации вируса в 1000-9999 раз, а логарифм снижения, равный 4, означает снижение концентрации вируса в 10000-99999 раз. Способ стерилизации панкреатина является наиболее эффективным, если при использовании такого способа наблюдается удовлетворительное снижение даже высокорезистентных вирусов в панкреатине.

Для определения условий, обеспечивающих наиболее эффективное логарифмическое снижение титра, проводили ряд экспериментов. Из-за технических ограничений в настоящее время можно оценивать снижение концентрации биологических примесей в образцах панкреатина только на уровне титров от 4,5 до 5,0 (предел чувствительности).

В первой серии экспериментов определяли активность липазы после нагревания в течение определенных периодов времени при различной и постоянной температурах. В первом эксперименте определяли активность липазы после нагревания в течение 0, 2, 4, 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч при 80°С при содержании растворителя 1%. Во втором эксперименте определяли активность липазы после нагревания в течение 0, 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч при 8 5°С при содержании растворителя 1%. В третьем эксперименте определяли активность липазы после нагревания в течение 0, 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч при 90°С при содержании растворителя 1%. В четвертом эксперименте определяли активность липазы после нагревания в течение 0, 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч при 95°С при содержании растворителя 1%. В пятом эксперименте определяли активность липазы после нагревания в течение 0, 6, 12, 15, 18, 21 и 24 ч при 100°С при содержании растворителя 1%. Результаты указанной первой серии экспериментов показаны в табл.1 и на фиг.1.

Таблица 1
Нагревание панкреатина при 80°С, 85°С, 90°С, 95°С и 100°С (содержание растворителя 1%). Данные представлены в табл.1 в виде средних значений для двух опытов, н/о - не определено.
Время выдерживания, ч	Остаточная активность липазы, %
Температура	80°С	85°С	90°С	95°С	100°С
0	100,0	100,0	100,0	100,0	100,0
2	99,3	н/о	н/о	н/о	н/о
4	99,0	н/о	н/о	н/о	н/о
6	98,8	98,9	95,0	91,1	84,0
12	97,7	96,2	91,7	86,1	71,4
15	96,5	94,7	90,6	84,2	66,3
18	94,6	93,5	88,6	80,1	60,3
21	93,6	93,5	87,0	77,8	56,0
24	92,5	92,1	85,8	77,8	52,8
30	91,3	90,7	83,7	74,8	н/о

Результаты, представленные в табл.1 и фиг.1, свидетельствуют о том, что при постоянном содержании растворителя 1% активность лампы уменьшается по мере увеличения периода выдерживания при данной температуре. Более того, активность липазы снижается в большей степени при более высокой температуре в течение данного периода выдерживания. Установлено, что при использовании в составе фармацевтических композиций нагревание в течение до 30 ч включительно при температуре до 95°С включительно обеспечивает получение панкреатина, проявляющего приемлемую остаточную ферментативную активность при содержании растворителя 1%. Установлено, что при использовании в составе фармацевтических композиций нагревание в течение до 24 ч включительно при температуре до 100°С включительно обеспечивает получение панкреатина, проявляющего приемлемую остаточную ферментативную активность при содержании растворителя 1%.

Во второй серии экспериментов определяли активность липазы после нагревания при содержании растворителя 3%. В первом эксперименте определяли активность липазы после нагревания в течение 0, 2, 4, 6, 8, 15, 24 и 48 ч при 90°С и 95°С при содержании растворителя 3%. Результаты второй серии экспериментов приведены в табл.2 и на фиг.2.

Таблица 2
Нагревание панкреатина при 90°С и 95°С (содержание растворителя 3%)
Время выдерживания, ч	Активность липазы, %
Температура	90°С	95°С
0	100,0	100,0
2	94,1	95,1
4	91,1	90,2
8	86,8	81,4
15	84,0	66,0
24	71,4	54,1
48	53,5	31,3

Данные, приведенные в табл.2 и на фиг.2, свидетельствуют о том, что при постоянном содержании растворителя 3% активность липазы уменьшается по мере увеличения периода времени выдерживания при данной температуре. Более того, активность липазы снижается в большей степени при более высокой температуре в течение указанного периода времени выдерживания. Установлено, что при использовании в составе фармацевтических композиций нагревание в течение до 48 ч включительно при температуре до 90°С включительно обеспечивает получение панкреатина, проявляющего приемлемую остаточную ферментативную активность при содержании растворителя 3%. Установлено, что при использовании в составе фармацевтических композиций нагревание в безводных условиях в течение до 24 ч включительно при температуре до 95°С включительно обеспечивает получение панкреатина, проявляющего приемлемую остаточную ферментативную активность при содержании растворителя 3%.

В третьей серии экспериментов активность липазы определяли после нагревания в течение 0,5, 1,0 и 3,0 ч при 80°С при различном, но постоянном содержании растворителя 3%, 6%, 9% и 12%, соответственно. Результаты этих экспериментов показаны в табл.3 и на фиг.3.

Данные, приведенные в табл.3 и на фиг.3, свидетельствуют о том, что при постоянной температуре, но различном содержании растворителя - 3%, 6%, 9% и 12%, соответственно, активность липазы уменьшается по мере увеличения периода выдерживания при 80°С. Более того, активность липазы снижается в большей степени при более высоком содержании растворителя при нагревании в течение данного периода времени выдерживания. Установлено, что при использовании в составе фармацевтических композиций нагревание в течение до 3 ч включительно при температуре 80°С обеспечивает получение панкреатина, проявляющего приемлемую остаточную ферментативную активность при содержании растворителя 6%. Установлено также, что при использовании в составе фармацевтических композиций нагревание в безводных условиях в течение до 1 ч включительно при температуре 80°С включительно обеспечивает получение панкреатина, проявляющего приемлемую остаточную ферментативную активность при содержании растворителя 9%.

Данная серия экспериментов свидетельствует о том, что ферменты чувствительны к нагреванию в продолжительные периоды и к высокой концентрации растворителей. Исходная высокая активность ферментов сохраняется при нагревании в контролируемых условиях, т.е. в течение короткого периода времени, и/или при низкой температуре, и/или при низком содержании растворителя. В одном варианте настоящего изобретения исходная высокая активность ферментов сохраняется, если ферменты нагревают при низкой температуре и низком содержании растворителей в течение короткого периода времени.

Для оценки снижения концентрации парвовируса свиньи определяли величину log₁₀ TCID₅₀ после нагревания в течение 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч при 80°С, 85°С, 90°С, 95°С и 100°С при постоянном содержании растворителя 1%. Результаты этих экспериментов приведены в табл.4. В табл.4 и следующих таблицах титры со знаком «менее» ( ) означают предел чувствительности метода.

Таблица 4
Нагревание панкреатина, содержащего PPV, при 80°С, 85°С, 90°С, 95°С и 100°С при содержании растворителя 1%, н/о - не определено, LTR - логарифмическое снижение титра.
Время выдерживания, ч	Величина log10 TCID50 панкреатина, содержащего PPV
Температура выдерживания	80°С	85°С	90°С	95°С	100°С
0	7,2	7,2	7,8	7,8	7,8
6	6,9	6,0	5,5	4,7	-
12	5,6	5,1	4,0	3,9	3,8
15	5,8	4,1	3,8	3,8	н/о
18	5,0	4,0	3,8	3,8	н/о
21	4,8	3,9	3,8	3,8	н/о
24	4,6	3,9	3,8	3,8	3,8
30	4,2	3,8	3,8	3,8	н/о
18 ч без обработки	7,9	7,5	7,7	7,8	7,8 (24 ч)
30 ч без обработки	7,5	7,5	7,4	7,3	н/о
LTR (в течение 18 ч без обработки по сравнению с выдерживанием 18 ч при х°С)	2,9	3,5	3,9	4,0	н/о
LTR (в течение 30 ч без обработки по сравнению с выдерживанием 30 ч при x°С)	3,3	3,7	3,6	3,5	4,0 (в течение 24 ч по сравнению с выдерживанием в течение 24 ч при 100°С)

Получали дополнительные партии порошкообразного панкреатина 2-4 и обрабатывали их при 85°С, как описано выше в табл.4 и ниже в примере 13. Для оценки снижения количества парвовируса свиньи (PPV) определяли величину log₁₀ TCID₅₀ после нагревания в течение 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч при 85°С при постоянном содержании растворителя 1%. Результаты дополнительных экспериментов приведены в табл.4а.

Таблица 4а
Нагревание 3 различных партий панкреатина, содержащего PPV, при 85°С, содержание растворителя 1%. Знак «±» означает доверительный интервал 95%, знак «*» означает, что инфекционный вирус в образце не определяется, LTR - логарифмическое снижение титра.
Время выдерживания, ч Температура	Величина log10 TCID50 панкреатина, содержащего PPV, 85°С
Номер партии панкреатина	2	3	4
0	7,5±0,2	7,5±0,2	7,2±0,3
6	5,9±0,3	5,6±0,2	5,9±0,2
12	4,9±0,3	4,6±0,4	4,8±0,3
15	4,3±0,3	4,3±0,3	4,4±0,3
18	4,1±0,3	3,8±0,2	4,2±0,1
21	3,9±0,2	3,8±0,2	3,9±0,2
24	3,7±0,1	3,7*	3,8±0,1
30	3,7±0,1	3,7±0,1	3,8*
Выдерживание в течение 18 ч без обработки	7,7±0,2	7,7±0,3	7,7±0,3
Выдерживание в течение 30 ч без обработки	7,7±0,3	7,4±0,3	7,6±0,3
LTR (в течение 18 ч без обработки по сравнению с выдерживанием 18 ч при 85°С)	3,6±0,4	3,9±0,4	3,5±0,3
LTR (в течение 30 ч без обработки по сравнению с выдерживанием 30 ч при 85°С)	4,0±0,3	3,7±0,4	3,8±0,3

В таблице 5 приведено логарифмическое снижение титра по сравнению с исходным образцом до эксперимента. На фиг.4 приведено логарифмическое снижение титра в панкреатине, содержащем PPV, после нагревания при 80°С, 85°С, 90°С, 95°С и 100°С, содержание растворителя - 1%.

Таблица 5
Логарифмическое снижение титра после нагревания панкреатина, содержащего PPV, при 80°С, 85°С, 90°С, 95°С и 100°С, содержание растворителя 1%, н/о - не определено.
Время выдерживания, ч	Величина логарифмического снижения титра парвовируса свиньи
Температура	80°С	85°C	90°C	95°C	100°С
0	0,0	0,0	0,0	0,0	0,0
6	0,3	1.2	2,3	3,1	н/о
12	1,6	2,1	3,8	3,9	4,0
15	1,4	3,1	4,0	4,0	н/о
18	2,2	3,2	4,0	4,0	н/о
21	2,4	3,3	4,0	4,0	н/о
24	2,6	3,3	4,0	4,0	4,0
30	3,0	3,4	4,0	4,0	н/о

Данные, представленные в табл.4 и 5 и на фиг.4, свидетельствуют о том, что при постоянном содержании растворителя 1% логарифмическое снижение титра увеличивается по мере увеличения периода выдерживания при данной температуре. Более того, логарифмическое снижение титра снижается в большей степени при более высокой температуре. Установлено, что при использовании в составе фармацевтических композиций нагревание в течение до 30 ч включительно при температуре 80°С обеспечивает получение панкреатина, в котором наблюдается приемлемое снижение концентрации биологической примеси при содержании растворителя 1%. Эксперименты, проведенные в течение 12 ч при температуре 90°С, обеспечивают получение панкреатина, в котором наблюдается снижение концентрации активной биологической примеси при содержании растворителя 1%. Эксперименты, проведенные в течение 15 ч при температуре 90°С, обеспечивают получение панкреатина, в котором наблюдается еще более высокая степень снижения концентрации активной биологической примеси при содержании растворителя 1%.

Данные, приведенные в табл.4а, свидетельствуют о том, что требования соответствующих организаций по уровню безопасности биологических продуктов в отношении содержания вирусов (см., например, CPMP/BWP/268/95) удовлетворяются при использовании параметров, указанных в табл.4а, т.е. логарифмическое снижение титра, равное 4,0, достигается при нагревании при 85°С (см., например, партия 2, LTR через 30 ч). Подобные эксперименты с использованием дополнительных партий панкреатина, проведенные при 80°С, свидетельствуют о том, что требования по уровню безопасности биологических продуктов в отношении вирусов не удовлетворяются, т.е. логарифмическое снижение титра, равное 4,0, не достигается при проведении процесса при 80°С.

В другой серии экспериментов определяли величину log₁₀ TCID₅₀ после нагревания в течение 12 ч при постоянной температуре и различном, но постоянном содержании растворителя 1% и 3% соответственно. Результаты этих экспериментов приведены в табл.6.

Таблица 6
Нагревание панкреатина, содержащего PPV, при 90°С и 95°С, содержание растворителя 1% и 3%, соответственно.
Время выдерживания, ч	Log10 TCID50 панкреатина, содержащего PPV
Температура	90°С, содержание растворителя 1%	90°С, содержание растворителя 3%	95°С, содержание растворителя1%	95°С, содержание растворителя 3%
0	8,2	8,2	8,2	8,2
3	6,8	6,2	6,4	6,1
6	5,9	5,8	6,1	5,1
12	5,0	4,9	4,6	5,0

В табл.7 приведено логарифмическое снижение титра (результаты представлены в табл.5) парвовируса свиньи по отношению к исходному значению. На фиг.5 показано логарифмическое снижение титра панкреатина, содержащего PPV, после нагревания при 90°С и 95°С при содержании растворителя 1% и 3% соответственно. Эксперименты, результаты которых представлены в табл.6 и 7, проводили в модифицированных условиях по сравнению с экспериментами, результаты которых приведены в табл.5.

Таблица 7
Логарифмическое снижение титра панкреатина, содержащего PPV, при нагревании до 90°С и 95°С, содержание растворителя 1% и 3%, соответственно.
Время выдерживания, ч	Логарифмическое снижение титра парвовируса свиньи (PPV)
Температура	90°С, содержание растворителя 1%	90°С, содержание растворителя 3%	95°С, содержание растворителя 1%	95°С, содержание растворителя 3%
0	0,0	0,0	0,0	0,0
3	1,4	2.0	1,8	2,1
6	2,3	2,4	2,1	3,1
12	3,2	3,3	3,6	3,2

Данные, приведенные в табл.6 и 7 и на фиг.5, свидетельствуют о том, что при постоянном содержании растворителей 1% и 3% соответственно, логарифмическое снижение титра увеличивается по мере увеличения периода выдерживания при данной температуре. Более того, логарифмическое снижение титра увеличивается в большей степени при содержании растворителя 3%, по сравнению с содержанием растворителя 1%. Установлено, что при использовании в составе фармацевтических композиций нагревание в течение по крайней мере 12 ч при температуре 95°С обеспечивает получение панкреатина, в котором наблюдается приемлемое снижение концентрации биологической примеси при содержании растворителя 3%. Установлено также, что при использовании в составе фармацевтических композиций нагревание в течение 12 ч при температуре 90°С обеспечивает получение панкреатина, в котором наблюдается приемлемое снижение концентрации биологической примеси при содержании растворителей 1% или 3% соответственно.

Данная серия экспериментов свидетельствует о том, что концентрация свиного парвовируса эффективно уменьшается при нагревании в описанных выше условиях. Из полученных данных следует, что более эффективное снижение наблюдается при использовании высоких температур и/или при увеличении периода инкубации и/или при увеличении концентрации растворителя. В одном варианте настоящего изобретения концентрация парвовируса свиньи эффективно снижается при нагревании вируса при пригодных температуре и содержании растворителя в течение достаточного периода времени.

Результаты, полученные с целью снижения концентрации парвовируса свиньи, отличаются от результатов, полученных при определении ферментативной активности. Таким образом, для специалиста в данной области техники представляется очевидным, что при разработке способа стерилизации панкреатина возникают проблемы при попытке сохранить высокий уровень активности различных пищеварительных ферментов и в то же время снизить концентрацию одного или более биологических примесей, прежде всего вирусов, до приемлемого уровня.

Данные приведенных выше экспериментов свидетельствуют о том, что при использовании в составе фармацевтических композиций концентрация парвовируса свиньи в панкреатине в условиях эксперимента снижается, а уровень активности липазы сохраняется на приемлемом уровне. Указанные экспериментальные условия в общем виде описаны ниже:

Нагревание в течение 48 ч при температуре по крайней мере 85°С при содержании растворителей менее 9 мас.%.

Оптимизацию содержания растворителя и режима нагревания проводят при любом давлении, которое не оказывает отрицательного действия на нагреваемый панкреатин. Описанный в данном контексте способ проводят при атмосферном, пониженном или повышенном давлении. Пригодное давление определяет эмпирически специалист в данной области техники. В одном варианте способ проводят при атмосферном или пониженном давлении. В другом варианте способ проводят при атмосферном давлении. В еще одном варианте способ, описанный в данном контексте, проводят в вакууме, при этом одновременно проводят стерилизацию.

Аналогичным образом согласно способу, описанному в данном контексте, нагревание проводят в любой атмосфере, которая не оказывает отрицательного воздействия на обрабатываемый панкреатин. Обычно способ, описанный в данном контексте, проводят в стандартной атмосфере. В одном варианте способ проводят в атмосфере с пониженным содержанием кислорода или в инертной атмосфере. При использовании инертной атмосферы в качестве газа предпочтительно используют азот или благородные газы, такие как гелий или аргон, более предпочтительно благородные газы с более высокой молекулярной массой, наиболее предпочтительно аргон. Следует понимать, что комбинацию одного или более признаков, описанных в данном контексте, можно использовать для дальнейшего сведения к минимуму нежелательных эффектов при осуществлении описанных способов с сохранением пригодной эффективности удаления биологических примесей.

Содержание растворителей в панкреатине уменьшают любым известным в данной области техники методом для снижения содержания растворителя в препарате одного или более пищеварительных ферментов, который не оказывает отрицательного действия на препарат. Такие способы включают, без ограничения перечисленным, упаривание, концентрирование, концентрирование при центрифугировании, стеклование, добавление растворимых веществ, лиофилизацию (в присутствии или отсутствие аскорбата) и сушку с распылением.

Предпочтительным способом снижения содержания растворителя в панкреатине является концентрирование с последующим использованием любого другого способа, известного специалисту в данной области техники. Концентрирование проводят при контролируемом нагревании препарата и последующем упаривании нежелательного растворителя или при упаривании при пониженном давлении. Для обеспечения требуемого содержания растворителя можно также использовать комбинацию указанных двух методов, которые проводят в мягких условиях, т.е. упаривание при пониженной температуре и пониженном давлении. Независимо от выбранного метода, полученный препарат должен характеризоваться требуемым содержанием растворителя.

Описанный в данном контексте способ можно проводить в любом масштабе, в лабораторном масштабе, на уровне от 1 г до 1000 г, в пилотных установках на уровне от 1 кг до 50 кг и в промышленном масштабе на уровне по крайней мере 100 кг, предпочтительно от 200 кг до 1500 кг.

Примеры

Следующие примеры приведены только для иллюстрации изобретения и не ограничивают объем настоящего изобретения. Специалисту в данной области техники представляется очевидным, что возможны другие пригодные модификации и варианты, которые включены в объем настоящего изобретения.

Определение ферментативной активности

Активность липазы определяли методом Solvay, как описано в монографии (Ph. Eur., Pancreas Pouder, European Pharmacopoeia 5.0, 2179-2182; 01/2005:0350).

Определение содержания растворителя

Содержание растворителей, например воды, как описано в данном контексте, определяли рекомендованным FDA методом по модифицированной методике К. Фишера (Meyer and Boyd, Analytical Chem., 31:215-219, (1959), May и др., J.Biol. Standartization, 10:249-259, (1982), Centers for Biological Evaluation and Research, FDA, Docket № 89D-0140, 83-93, (1990)). Количественное содержание других растворителей определяли известными методами для каждого конкретного растворителя. Другие пригодные способы определения содержания растворителей в панкреатине в ходе или после завершения описанного в данном контексте способа, также включенные в объем настоящего изобретения, включают, например, термогравиметрические методы (включая сушку в инфракрасном и микроволновом излучении), спектрометрические методы (включая инфракрасную спектроскопию, микроволновую спектроскопию и ЯМР), кондуктометрию, спектроскопию в декаметровом диапазоне или теплопроводность. Обычно предпочтительным способом определения содержания растворителей в панкреатине является термогравиметрический метод (т.е. определение «потерь при сушке»), так как данный способ учитывает все жидкости, которые присутствуют в панкреатине, включая воду и совместимые с ферментами органические растворители, например изопропанол. Термогравиметрические способы прежде всего пригодны для определения содержания растворителей в панкреатине на уровне от 9 мас.% до 3,5 мас.%. Если необходимо определить более низкое содержание растворителей в панкреатине, например, менее 3,5 мас.%, предпочтительно менее 3 мас.% или наиболее предпочтительно менее 1,6 мас.%, содержание воды в растворителях, содержащихся в панкреатине, обычно должно превышать содержание совместимых с ферментами органических растворителей, содержащихся в панкреатине. Таким образом, предпочтительно определять содержание растворителей на уровне менее 3,5 мас.%, предпочтительно менее 3 мас,%, еще более предпочтительно менее 1,6 мас.% при использовании более чувствительного способа Карла Фишера или его модификации. Для определения содержания растворителей в технических партиях и для непрерывного анализа следует использовать метод инфракрасной спектроскопии, если содержание растворителей составляет менее 3,5 мас.%, предпочтительно менее 3 мас.%, еще более предпочтительно менее 1,6 мас.%, например, в равновесном состоянии при нагревании после предварительного нагревания. Предпочтительными являются методы анализа в ближней инфракрасной области спектра (NIR), известные специалистам в данной области. Методы анализа инфракрасной области спектра обычно необходимо стандартизовать по данным метода сравнения, которым является, например, метод титрования Карла-Фишера или его модификация. В связи с этим, наиболее предпочтительным способом измерения общего содержания растворителей в панкреатине является комбинация термогравиметрического метода (т.е. определение потерь при высушивании панкреатина, прежде всего панкреатина с высоким содержанием растворителей) с методом Карла Фишера или его модификацией (т.е. определением остаточного содержания воды в панкреатине, прежде всего в панкреатине с низким содержанием растворителей).

Определение снижения количества парвовируса свиньи

Титр вируса в обработанных образцах определяли методом конечной точки титрования вируса и рассчитывали величину TCID₅₀ по формуле Спирмена-Кербера, как описано в статье Bundesanzeiger № 84, May 4, (1994). Чтобы исключить несовместимость панкреатина с индикаторными клетками Pk-13 (из почек свиньи), исследуемый материал перед титрованием в каждом случае разбавляли на 3 log (например, 1:2000). Способность обработки панкреатина инактивировать или удалять вирусы оценивали по логарифмическому фактору снижения. Чтобы оценить снижение титра вируса независимо от обязательного снижения инфекционности в ходе инкубационного периода, которое до некоторой степени обусловлено свойствами самого исследуемого материала, образцы выдерживали в определенные периоды времени без обработки. Величину логарифмического снижения титра (LTR) образцов рассчитывали как разность между титром вируса (log ₁₀ TCID₅₀/мл) образца без обработки и конечной точкой титрования образца, как описано в инструкциях ЕС III/8115/89-EN, приложение II (в настоящее время CPMP/BWP/268/95).

Нагревание

При осуществлении способа в лабораторном масштабе нагревание проводили в сушильном шкафу (например, фирмы Memmert, ULE 400) или на роторном испарителе (например, фирмы Buchi, R-144) на водяной бане (например, фирмы Buchi, B-480). В масштабах пилотной установки использовали вакуумную сушку (фирмы Hosokawa, Vrieco-Nauta®, объемом 120 л). В промышленном масштабе использовали вакуумную сушку (фирмы Hosokawa, Vrieco-Nauta®, объем 4000 л).

Получение стандартизованного порошкообразного панкреатина

От 50 кг до 1000 кг влажного панкреатина (исходное содержание растворителей 40-50%) сушили в вакуум-сушильном шкафу при постоянном перемешивании. Температуру повышали в ступенчатом режиме от 60°С до 95°С. Затем сушку проводили при температуре по крайней мере 70°С до содержания растворителя <3,5%. Порошкообразный панкреатин с содержанием растворителей 6 мас.%, 9 мас.% или 12 мас.% соответственно получали, извлекая образцы из сушильного шкафа на более ранних стадиях процесса сушки через соответствующие периоды времени.

а) Дальнейшие стадии получения стандартизированного порошкообразного панкреатина в лабораторном масштабе включают: нагревание при требуемой температуре до содержания растворителя в образцах 1 мас.% или 3 мас.%, соответственно, в соответствии с исходными требованиями, как описано ниже (примеры 1-11).

Согласно другим способам получения стандартизированного порошкообразного панкреатина с содержанием растворителей 6 мас.%, 9 мас.% и 12 мас.%, соответственно, к порошкообразному панкреатину с содержанием растворителей 3,5 мас.% добавляли соответствующее количество растворителя, например, воды, пропан-2-ола или их смеси, и полученные увлажненные образцы панкреатина гомогенизировали и получали образцы с требуемым содержанием растворителей.

б) Дальнейшие стадии получения стандартизированного порошкообразного панкреатина в пилотной установке включают: нагревание при требуемой температуре до содержания растворителя 1 мас.% и доводили температуру до 80°С-100°С в соответствии с исходными требованиями, как описано ниже (примеры 1-11).

Дальнейшая обработка панкреатина для оценки содержания парвовируса свиньи включает:

В соответствии с общепринятыми в фармацевтике и науке принципами в панкреатин добавляли парвовирус свиньи для модельных исследований. Парвовирус добавляли в образцы в соответствии с инструкцией CPMP/BWP/268/95.

После проведения стандартной сушки (см. выше) панкреатина, порошок охлаждали и ресуспендировали в воде (при этом получали 40% суспензию для гомогенного распределения вируса в порошке панкреатина). Затем в панкреатин добавляли высококонцентрированную суспензию парвовируса свиньи в культуральной среде в соотношении 9:1 (суспензия панкреатина/суспензия вируса). Полученную суспензию лиофилизировали и нагревали при температуре от 80°С до 100°С до содержания растворителей 1 мас.% и 3 мас.%, соответственно, согласно исходным требованиям, как описано ниже (примеры 12-20).

Пример 1

48 кг стандартизированного панкреатина с содержанием растворителей 1 мас.% нагревали при 80°С в течение 30 ч. Активность липазы определяли через 0, 2, 4, 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч. Результаты указанных экспериментов приведены в табл.1 и на фиг.1.

Пример 2

48 кг стандартизированного панкреатина с содержанием растворителей 1 мас.% нагревали при 85°С в течение 30 ч. Активность липазы определяли через 0, 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч. Результаты указанных экспериментов приведены в табл.1 и на фиг.1.

Пример 3

48 кг стандартизированного панкреатина с содержанием растворителей 1 мас.% нагревали при 90°С в течение 30 ч. Активность липазы определяли через 0, 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч. Результаты указанных экспериментов приведены в табл.1 и на фиг.1.

Пример 4

48 кг стандартизированного панкреатина с содержанием растворителей 1 мас.% нагревали при 95°С в течение 30 ч. Активность липазы определяли через 0, 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч. Результаты указанных экспериментов приведены в табл.1 и на фиг.1.

Пример 5

48 кг стандартизированного панкреатина с содержанием растворителей 1 мас.% нагревали при 100°С в течение 30 ч. Активность липазы определяли через 0, 6, 12, 15, 18, 21 и 24 ч. Результаты указанных экспериментов приведены в табл.1 и на фиг.1.

Пример 6

1,5 г стандартизированного панкреатина с содержанием растворителей 3 мас.% нагревали при 90°С в течение 48 ч. Активность липазы определяли через 0, 2, 4, 8, 6, 15, 24 и 48 ч. Результаты указанных экспериментов приведены в табл.2 и на фиг.2.

Пример 7

1,5 г стандартизированного панкреатина с содержанием растворителей 3 мас.% нагревали при 95°С в течение 48 ч. Активность липазы определяли через 0, 2, 4, 8, 6, 15, 24 и 48 ч. Результаты указанных экспериментов приведены в табл.2 и на фиг.2.

Пример 8

1,5 г стандартизированного панкреатина с содержанием растворителей 3 мас.% нагревали при 80°С в течение 3,0 ч. Активность липазы определяли через 0,5, 1,0 и 3,0 ч. Результаты указанных экспериментов приведены в табл.3 и на фиг.3.

Пример 9

1,5 г стандартизированного панкреатина с содержанием растворителей 6 мас.% нагревали при 80°С в течение 3,0 ч. Активность липазы определяли через 0,5, 1,0 и 3,0 ч. Результаты указанных экспериментов приведены в табл.3 и на фиг.3.

Пример 10

1,5 г стандартизированного панкреатина с содержанием растворителей 9 мас.% нагревали при 80°С в течение 3,0 ч. Активность липазы определяли через 0,5, 1,0 и 3,0 ч. Результаты указанных экспериментов приведены в табл.3 и на фиг.3.

Пример 11

1,5 г стандартизированного панкреатина с содержанием растворителей 12 мас.% нагревали при 80°С в течение 3,0 ч. Активность липазы определяли через 0,5, 1,0 и 3,0 ч. Результаты указанных экспериментов приведены в табл.3 и на фиг.3.

Пример 12

1,5 г панкреатина, содержащего парвовирус свиньи, с содержанием растворителей 1 мас.% нагревали при 80°С в течение 30 ч. Концентрацию вируса определяли через 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч. Результаты указанных экспериментов приведены в табл.4 и 5, на фиг.4.

Пример 13

1,5 г панкреатина, содержащего парвовирус свиньи, с содержанием растворителей 1 мас.% нагревали при 85°С в течение 30 ч. Концентрацию вируса определяли через 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч. Результаты указанных экспериментов приведены в табл.4, 4а и 5, на фиг.4.

Пример 14

1,5 г панкреатина, содержащего парвовирус свиньи, с содержанием растворителей 1 мас.% нагревали при 90°С в течение 30 ч. Концентрацию вируса определяли через 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч. Результаты указанных экспериментов приведены в табл.4 и 5, на фиг.4.

Пример 15

1,5 г панкреатина, содержащего парвовирус свиньи, с содержанием растворителей 1 мас.% нагревали при 95°С в течение 30 ч. Концентрацию вируса определяли через 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч. Результаты указанных экспериментов приведены в табл.4 и 5, на фиг.4.

Пример 16

1,5 г панкреатина, содержащего парвовирус свиньи, с содержанием растворителей 1 мас.% нагревали при 100°С в течение 30 ч. Концентрацию вируса определяли через 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч. Результаты указанных экспериментов приведены в табл.4 и 5, на фиг.4.

Пример 17

1,5 г панкреатина, содержащего парвовирус свиньи, с содержанием растворителей 1 мас.% нагревали при 90°С в течение 12 ч. Концентрацию вируса определяли через 3, 6 и 12 ч. Результаты указанных экспериментов приведены в табл.6 и 7, на фиг.5.

Пример 18

1,5 г панкреатина, содержащего парвовирус свиньи, с содержанием растворителей 3 мас.% нагревали при 90°С в течение 12 ч. Концентрацию вируса определяли через 3, 6 и 12 ч. Результаты указанных экспериментов приведены в табл.6 и 7, на фиг.5.

Пример 19

1,5 г панкреатина, содержащего парвовирус свиньи, с содержанием растворителей 1 мас.% нагревали при 95°С в течение 12 ч. Концентрацию вируса определяли через 3, 6 и 12 ч. Результаты указанных экспериментов приведены в табл.6 и 7, на фиг.5.

Пример 20

1,5 г панкреатина, содержащего парвовирус свиньи, с содержанием растворителей 3 мас.% нагревали при 95°С в течение 12 ч. Концентрацию вируса определяли через 3, 6 и 12 ч. Результаты указанных экспериментов приведены в табл.6 и 7, на фиг.5.

Пример 21

Фармацевтическая композиция, включающая панкреатин

Фармацевтическую композицию, включающую панкреатин, получали, как описано в данном контексте: 10 кг панкреатина, полученного способом, как описано в примере 2, смешивали с 2,5 кг этиленгликоля 4000 и 1,5 кг пропан-2-ола, при этом получали смесь, которую затем экструдировали известным способом в экструдере. Микропеллеты панкреатина получали, как описано в ЕР 0583726, и затем упаковывали в капсулы или пакетики.

Пример 22

Микропеллеты панкреатина, покрытые слоем, устойчивым к кислоте желудочного сока

Ядра микропеллетов панкреатина, полученные, как описано в примере 21, покрывали слоем, устойчивым к кислоте желудочного сока. Например, ядра микропеллет панкреатина покрывали слоем пленкообразующих агентов, устойчивых к кислоте желудочного сока, таких как ацетат-сукцинат гидроксипропилметилцеллюлозы (HPMCAS), фталат гидроксипропилметилцеллюлозы (НРМСР), ацетат-фталат целлюлозы (CAP) или поливинилацентат-фталат (PVAP). В качестве пленкообразующих агентов использовали также сополимеры, такие как, например, сополимеры метакриловой кислоты и метилметакрилата или метакриловой кислоты и этилакрилата. Пленкообразующие агенты наносили на ядра микропеллетов панкреатина с использованием различных установок для нанесения пленочных покрытий, например устройство для нанесения покрытий, в обычной форме, например в виде раствора в органическом растворителе или в виде водной или органической дисперсии, необязательно в смеси со стандартным пластификатором. Полученные микропеллеты панкреатина, покрытые слоем, устойчивым к кислоте желудочного сока, характеризуются высокой объемной плотностью, например, в диапазоне от 0,6 г/мл до 0,85 г/мл, что позволяет повысить насыпную массу в каждой капсуле и, таким образом, повысить содержание активного агента в каждой капсуле. Подробное описание получения микропеллет панкреатина, покрытых слоем, устойчивым к кислоте желудочного сока, описаны в ЕР 0583726.

Все ссылки, включая публикации, заявки на выдачу патента и патенты, цитированные в данном контексте, включены в данное описание в качестве ссылок, в той же степени, как если бы каждая ссылка индивидуально и специально включена в данное описание.

Все численные значения представлены в виде приблизительной величины, как если бы перед числом указано «приблизительно». Аналогичным образом представлены численные интервалы, в которых, если не указано иное, максимальное и минимальное значения в пределах указанного интервала указаны в виде приблизительной величины, как если бы перед числом указано «приблизительно». Таким образом, при использовании величины, выше или ниже указанных пределов, можно получить практически аналогичные результаты, что и по сравнению с величиной в пределах интервала. Использованный в данном контексте в отношении численного значения термин «приблизительно» имеет обычное в данной области техники значение. Величина отклонения от конкретного числового предела определяется многими факторами. Например, некоторые факторы включают критичность элемента и/или влияние величины данного отклонения на свойства заявленного предмета, а также другие факторы, известные специалистам в данной области. Использование в данном контексте различного количества значащих цифр для различных цифровых значений не ограничивает использование слова «приблизительно» для расширения конкретного цифрового значения. Таким образом, в общем случае, использование слова «приблизительно» расширяет пределы числового значения. Интервал числовых значений также означает непрерывный интервал, включающий каждое значение между минимальным и максимальным значениями плюс более широкое значение, обозначенное словом «приблизительно». Таким образом, интервалы значений, указанные в данном контексте, используются для сокращенного описания интервала для каждого отдельного значения, если не указано иное, и каждое отдельное значение включено в описание, как если бы это было указано отдельно для каждого значения.

Использование термина «изобретение» или «настоящее изобретение» не ограничивает пункты формулы изобретения и любое описание или аргумент, связанный с использованием терминов «изобретение» и « настоящее изобретение», применим к каждому пункту формулы изобретения. Термины «изобретение» и «настоящее изобретение» используют отдельно только для краткости изложения и эти термины ни в коем случае не ограничивают любой пункт формулы изобретения.

Другие варианты осуществления заявленного изобретения описаны в данном контексте, включая наилучшие способы осуществления изобретения. Различные варианты осуществления представляются очевидными специалистам при прочтении данного описания. Авторы изобретения считают, что специалисты в данной области могут использовать такие варианты соответствующим образом и применить их на практике по модифицированным методикам в отличие от описанных в данном контексте. Соответственно настоящее изобретение включает все модификации и эквиваленты предмета, заявленного в данном описании, и определенного в прилагаемой формуле изобретения в соответствии с правовыми нормами. Более того, любые комбинации вышеописанных элементов во всех возможных вариантах включены в объем настоящего изобретения, если не указано иное, или иным способом не указано в контексте.

Следует понимать, что любые интервалы, соотношения и интервалы соотношений, указанные для данных в данном контексте, представляют собой дополнительные варианты осуществления настоящего изобретения и включены в данное описание. В описание включены интервалы, включающие или не включающие конечные верхние и/или нижние пределы значений. Соответственно, для специалиста в данной области, представляется очевидным, что конкретные интервалы, соотношения или интервалы соотношений точно соответствуют приведенным в данном контексте данным.

Использование множественного и единственного числа в данном контексте подразумевает использование как множественного, так и единственного числа, если не указано иное, или иным способом не указано в контексте.

Все описанные в данном контексте способы можно осуществлять любым пригодным методом, если не указано иное, и иными способами, не указанными в контексте. Применение любого или всех примеров или ограничивающих терминов (например, таких как «предпочтительно», «предпочтительный»), описанных в данном описании, представлены только для иллюстрации изобретения и не ограничивают объем формулы изобретения.