производные изоксазола в качестве модуляторов 11-бета-гидроксистероиддегидрогеназы 1 типа

Формула изобретения

1. Соединение формулы (I)



или его фармацевтически приемлемая соль, где:

X-Y является N-O или O-N;

R¹ независимо выбирают из группы, включающей галоген и C_1-4алкил;

или два заместителя R¹ вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, образуют 6-членный ароматический цикл;

R² независимо выбирают из группы, включающей гидрокси-C_1-8алкил;

а равно 1, и

каждый из m и n независимо равен 0, 1 или 2;

при условии, что данное соединение не выбирают из группы, включающей:

1-[(5-фенил-4-изоксазолил)карбонил]пиперидин;

5-фенил-4-(пирролидин-1-илкарбонил)изоксазол;

5-(4-фторфенил)-4-(пирролидин-1-илкарбонил)изоксазол;

5-(4-хлорфенил)-4-(пирролидин-1-илкарбонил)изоксазол;

5-(4-бромфенил)-4-(пирролидин-1-илкарбонил)изоксазол;

5-(4-метилфенил)-4-(пирролидин-1-илкарбонил)изоксазол;

2-(1-{[5-(4-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-(1-{[5-(2-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3R)-1-{[3-(4-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3R)-1-{[5-(4-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

3-(1-{[5-(4-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пентан-3-ол; и

3-(1-{[3-(4-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пентан-3-ол.

2. Соединение по п.1, где R¹ представляет собой F, Cl или метил, или где два заместителя R¹, вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, образуют 6-членный ароматический цикл.

3. Соединение по п.1, где R² представляет собой 1-гидроксиэтил, 2-гидроксиэтил или 1-гидрокси-1-метилэтил.

4. Соединение по п.1, которое выбирают из:

2-(1-{[5-(2-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-((3R)-1-{[5-(2-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-((3S)-1-{[5-(2-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-(1-{[5-(3-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-((3S)-1-{[5-(4-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-((3R)-1-{[5-(2-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-((3S)-1-{[5-(2-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-((3S)-1-{[5-(3-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-((3R)-1-{[5-(4-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-((3S)-1-{[5-(4-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-(1-{[5-(2-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-2-ил)этанола;

2-(1-{[5-(3-хлор-2-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-(1-{[5-(3,4-диметилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-((3R)-1-{[5-(3,4-диметилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-((3S)-1-{[5-(3,4-диметилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-((3R)-1-{[5-(2,4-диметилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-((3S)-1-{[5-(2,4-диметилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-((3R)-1-{[5-(2-фторфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-((3R)-1-{[5-(4-фторфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-((3S)-1-{[5-(4-фторфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-((3R)-1-{[5-(1-нафтил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-((3S)-1-{[3-(2-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-((3R)-1-{[3-(2-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-((3R)-1-{[3-(2-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-((3S)-1-{[3-(2-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

2-((3R)-1-{[3-(2,4-диметилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола;

1-(1-{[3-(2-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)этанола и

2-((3S)-1-{[3-(2,4-диметилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ола.

5. Соединение по любому из пп.1-4 для применения в получении лекарственного средства, обладающего ингибирующей активностью в отношении 11 -гидроксистероиддегидрогеназы 1 типа.

6. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении 11 -гидроксистероиддегидрогеназы 1 типа, содержащая соединение по любому из пп.1-4 в качестве активного ингредиента, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент.

7. Соединение по любому из пп.1-4 для применения при лечении или предупреждении глаукомы.

8. Применение соединения по любому из пп.1-4 для получения лекарственного средства для лечения или предупреждения глаукомы.

9. Способ лечения или предупреждения глаукомы, включающий введение субъекту, являющемуся человеком, который нуждается в таком лечении, эффективного количества соединения по любому из пп.1-4.

Описание изобретения к патенту

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новым производным изоксазола формулы (I), которые являются модуляторами 11 -гидроксистероиддегидрогеназы 1 типа (11 -HSD1) и могут использоваться для лечения медицинских состояний, связанных с активностью 11 -HSD1. Изобретение относится также к фармацевтическим композициям, содержащим данные изобретения, к применению данных соединений при получении лекарственного средства для лечения глаукомы, а также к способу получения данных соединений.

Уровень техники

Глаукома, гетерогенная группа заболеваний, в которой первичная открытоугольная глаукома (POAG) является наиболее распространенной, представляет собой основную причину необратимой потери зрения, ответственной за 14% слепоты в мировом масштабе. Она характеризуется оптической невропатией с соответствующей потерей визуальной области, связанной с рядом факторов риска, включая повышенное внутриглазное давление (IOP), которое можно лечить и контролировать. IOP регулируется тонким равновесием между выработкой внутриглазной жидкости (АН) мерцательным эпителием и оттоком через трабекулярную сеть (ТМ), канал Шлемма и пути увеосклерального оттока. Этот процесс можно регулировать при помощи кортикостероидов, поскольку у одной трети нормального народонаселения, принимающего местные кортикостероиды, развивается умеренное повышение IOP, тогда как, фактически, у всех пациентов с POAG развивается повышенное IOP после местной терапии кортикостероидами [Armaly, Arch. Ophthalmol. 1963, 70, 483-491; Armaly, Arch. Ophthalmol. 1963, 70, 492-499; Becker, Invest. Ophthalmol. 1965, 4, 198-205; Armaly, Arch. Ophthalmol. 1967, 77, 747-751].

Кроме того, у пациентов, страдающих синдромом Кушинга, развивается повышенное IOP [Sayegh et al., Ophtalmic Res. 1975, 7, 390-394]. Занятость и активация рецепторов стероидных гормонов регулируется гидроксистероидными дегидрогеназами (HSDs), которые переводят стероидные гормоны в их неактивные метаболиты [по поводу недавнего обзора смотри Nobel et al., Eur. J. Biochem. 2001, 268 , 4113-4125]. Существует множество классов HSDs, среди которых 11 -гидроксистероиддегидрогеназы (11 -HSD1) катализируют взаимопревращение активных глюкокортикоидов (таких как кортизол и кортикостерон), и их инертных форм (таких как кортизон и 11-дегидрокортикостерон). Изоформная 11 -гидроксистероиддегидрогеназа 1 типа (11 -HSD1), активирующая превращение кортизона в кортизол, вырабатывается, помимо прочего, в печени, жировой ткани, мозгу, легких и другой глюкокортикоидной ткани и является потенциальной мишенью для терапии, направленной на многочисленные нарушения, которые можно улучшить за счет снижения глюкокортикоидного действия, такие как диабет, ожирение и возрастная когнитивная дисфункция [Seckl et al., Endocrinology 2001, 142, 1371-1376].

Интересно, что в предварительном неконтролируемом исследовании на здоровых добровольцах было показано, что неселективный ингибитор 11 -HSD1/11 -HSD2 карбеноксолон (СВХ) снижает внутриглазное давление (IOP) на 20% при пероральном введении [Rauz et al., Invest. Ophtalmol. Vis. Sci. 2001, 42, 2037-2042]. Аналогичным образом, в плацебо-контролируемом исследовании пациентов с окулярной гипертензией перорально вводимый СВХ вызывал 10%-ное снижение IOP [Rauz et al., Q. J. Med. 2003, 96, 481-490]. Исследования экспрессии тканей показали наличие в клетках мерцательного эпителия человека 11 -HSD1, но не 11 -HSD2. Эта преобладающая экспрессия 11 -HSD1 в тканях глаза подтверждается избыточными уровнями кортизола по сравнению с кортизоном при АН как у здоровых людей, так и у пациентов, тогда как в моче наблюдался противоположный эффект, что отражает активность 11 -HSD1 в почках. При совместном рассмотрении данные результаты позволяют предположить, что селективное ингибирование 11 -HSD1 в глазе может быть действенным подходом к снижению уже повышенного IOP и, следовательно, к лечению глаукомы [US 6548053, смотри также Walker et al., постер Р3-698 на конференции Эндокринного общества, 12-15 июня, Сан Диего].

Местное применение к глазу представляет собой предпочтительный способ фармакологического вмешательства при глазных заболеваниях, поскольку это приводит к высоким концентрациям активного соединения на требуемом участке воздействия, снижая в то же самое время риск системных побочных эффектов. В качестве предпочтительного состава для глаукомных лекарственных средств общепринятыми являются водные растворы.

Из предшествующего уровня техники известно несколько замещенных соединений изоксазола. В WO 01/29015 описаны производные изоксазола с повышенной селективностью по отношению к _1а адренергическим рецепторам для применения при лечении обструктивных синдромов нижних мочевыводящих путей. В WO 2007/114124 описаны замещенные производные изоксазола в качестве ингибиторов 11 -HSD1 для лечения ожирения.

Однако ранее не было показано, что замещенные соединения изоксазола подходят для местного применения для глаз при лечении глаукомы.

Описание изобретения

Неожиданно было найдено, что соединения изоксазола формулы (I), являющиеся эффективными и селективными ингибиторами 11 -HSD1, обладают физиологическими свойствами, которые делают их особенно подходящими для местного применения для глаз при лечении глаукомы.

В первом аспекте данное изобретение относится к соединению формулы (I)

или к его фармацевтически приемлемой соли, сольвату, гидрату, геометрическому изомеру, таутомеру, оптическому изомеру или N-оксиду, где:

X-Y является N-O или O-N;

R¹ независимо выбирают из группы, включающей галоген, циано, CF₃, OCF ₃, С_1-4алкил, гидрокси-С_1-4алкил, С_1-4алкокси-С_1-4алкил и С_1-4 алкокси;

или два заместителя R¹ вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, образуют 5- или 6-членный ароматический или неароматический цикл, который необязательно содержит один или более гетероатомов, выбранных из О и N, и который необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из группы, включающей галоген, циано, CF₃, OCF ₃, С_1-4алкил, гидрокси-С_1-4алкил, С_1-4алкокси-С_1-4алкил и С_1-4 алкокси;

R² независимо выбирают из группы, включающей С_1-8алкил, гидрокси-С_1-8 алкил, С_1-8алкокси-С_1-8алкил, С_1-8 алкокси, гидрокси-С_1-8алкокси, С_1-8алкокси-С _1-8алкокси, С_3-8циклоалкил, гидрокси-С_3-8 циклоалкил, С_1-8алкокси-С_3-8циклоалкил, С_3-8циклоалкокси, гидрокси-С_3-8циклоалкокси и С_1-8алкокси-С_3-8циклоалкокси;

а равно 0, 1 или 2, и

каждый из m и n независимо равен 0, 1 или 2;

при условии, что данное соединение не выбирают из группы, включающей:

1-[(5-фенил-4-изоксазолил)карбонил]пиперидин;

5-фенил-4-(пирролидин-1-илкарбонил)изоксазол;

5-(4-фторфенил)-4-(пирролидин-1-илкарбонил)изоксазол;

5-(4-хлорфенил)-4-(пирролидин-1-илкарбонил)изоксазол;

5-(4-бромфенил)-4-(пирролидин-1-илкарбонил)изоксазол;

5-(4-метилфенил)-4-(пирролидин-1-илкарбонил)изоксазол;

5-(4-метоксифенил)-4-(пирролидин-1-илкарбонил)изоксазол;

4-{[2-(метоксиметил)пирролидин-1-ил]карбонил}-5-(4-метилфенил)изоксазол;

4-{[(2S)-2-(метоксиметил)пирролидин-1-ил]карбонил}-5-(4-метилфенил)изоксазол;

4-{[(2R)-2-(метоксиметил)пирролидин-1-ил]карбонил}-5-(4-метилфенил)изоксазол;

5-(2-хлорфенил)-4-{[2-(метоксиметил)пирролидин-1-ил]карбонил}изоксазол;

5-(2-хлорфенил)-4-{[(2S)-2-(метоксиметил)пирролидин-1-ил]карбонил}изоксазол;

5-(2-хлорфенил)-4-{[(2R)-2-(метоксиметил)пирролидин-1-ил]карбонил}изоксазол;

4-{[(2S)-2-(метоксиметил)пирролидин-1-ил]карбонил}-5-[4-(трифторметил)фенил]изоксазол;

4-{[(2R)-2-(метоксиметил)пирролидин-1-ил]карбонил}-5-[4-(трифторметил)фенил]изоксазол;

5-(4-хлорфенил)-4-{[2-(изопропил)пирролидин-1-ил]карбонил}изоксазол;

2-(1-{[5-(4-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-(1-{[5-(2-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-[1-({5-[4-(трифторметил)фенил]изоксазол-4-ил}карбонил)пиперидин-3-ил]пропан-2-ол;

2-((3R)-1-{[3-(4-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3R)-1-{[5-(4-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3R)-1-{[3-(4-метоксифенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3R)-1-{[3-(3-хлор-4-метоксифенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

3-(1-{[5-(4-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пентан-3-ол;

3-(1-{[3-(4-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пентан-3-ол;

3,5-диметил-1-{[5-(4-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин;

1-{[5-(2-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}-3,5-диметилпиперидин;

3,5-диметил-1-({5-[4-(трифторметил)фенил]изоксазол-4-ил}карбонил)пиперидин;

5-этил-2-метил-1-{[5-(4-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин;

1-{[5-(2-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}-5-этил-2-метилпиперидин; и

5-этил-2-метил-1-({5-(4-трифторметил)фенил]изоксазол-4-ил}карбонил)пиперидин.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения R¹ представляет собой галоген или С_1-4алкил, или два заместителя R¹ вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, образуют 5- или 6-членный цикл. В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения R¹ представляет собой F, Cl или метил, или два заместителя R ¹ вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, образуют 6-членный ароматический цикл.

В следующем предпочтительном варианте осуществления изобретения гетероциклическое кольцо, содержащее заместитель(ли) R², представляет собой пиперидиновый цикл. Следовательно, а предпочтительно равно 1.

В еще одном предпочтительном варианте осуществления изобретения пиперидиновый цикл замещен одним заместителем R ². Следовательно, n предпочтительно равно 1.

В еще одном предпочтительном варианте осуществления изобретения R² представляет собой гидрокси-С_1-8алкил или С_1-8алкокси-С_1-8алкокси. В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения R² представляет собой 1-гидроксиэтил, 2-гидроксиэтил или 1-гидрокси-1-метилэтил.

Конкретными предпочтительными соединениями согласно данному изобретению являются соединения, выбранные из группы, включающей:

2-(1-{[5-(2-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3R)-1-{[5-(2-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3S)-1-{[5-(2-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-(1-{[5-(3-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3S)-1-{[5-(4-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3R)-1-{[5-(2-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3S)-1-{[5-(2-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3S)-1-{[5-(3-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3R)-1-{[5-(4-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3S)-1-{[5-(4-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-(1-{[5-(2-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-2-ил)этанол;

2-(1-{[5-(3-хлор-2-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-(1-{[5-(3,4-диметилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3R)-1-{[5-(3,4-диметилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3S)-1-{[5-(3,4-диметилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3R)-1-{[5-(2,4-диметилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3S)-1-{[5-(2,4-диметилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3R)-1-{[5-(2-фторфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3R)-1-{[5-(4-фторфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3S)-1-{[5-(4-фторфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3R)-1-{[5-(1-нафтил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3S)-1-{[3-(2-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3R)-1-{[3-(2-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3R)-1-{[3-(2-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3S)-1-{[3-(2-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

2-((3R)-1-{[3-(2,4-диметилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол;

1-(1-{[3-(2-хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)этанол; и

2-((3S)-1-{[3-(2,4-диметилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол.

Следующий аспект изобретения представляет собой соединение формулы (I) для применения в терапии. Определенные выше соединения являются эффективными и селективными ингибиторами 11 -HSD1. В качестве таковых они применимы для лечения или предупреждения глаукомы. Таким образом, изобретение включает соединения формулы (I) для применения при лечении или предупреждении глаукомы.

В следующем аспекте изобретение включает применение соединений формулы (I) для получения лекарственного средства для лечения или предупреждения глаукомы.

В еще одном аспекте изобретение включает способ лечения или предупреждения глаукомы, включающий введение человеку, нуждающемуся в подобном лечении, эффективного количества соединения формулы (I).

В еще одном аспекте изобретение представляет фармацевтическую композицию, содержащую соединение формулы (I) в качестве активного ингредиента, в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем. Указанная фармацевтическая композиция применима для лечения или предупреждения глаукомы.

Описанные здесь в общих чертах способы включают способы, в которых определяют, что субъект нуждается в конкретном установленном лечении. Установление субъекта, нуждающегося в подобном лечении, может быть основано на мнении субъекта или профессионала в области здравоохранения и может быть субъективным (например, мнение) или объективным (например, определяемым при помощи теста или метода диагностики).

Определения

На протяжении описания и прилагаемой формулы изобретения будут использованы следующие определения.

Если не установлено или не указано иначе, термин «С_1-8-алкил» означает линейную или разветвленную алкильную группу, содержащую от 1 до 8 атомов углерода. Примеры указанного С_1-8-алкила включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил и линейный и разветвленный пентил, гексил, гептил и октил. В качестве частей интервала «С_1-8алкила» рассматриваются все его подгруппы, такие как С_1-7алкил, С_1-6алкил, С_1-5алкил, С_1-4алкил, С_1-3алкил, С_1-2алкил, С_2-8алкил, С_2-7алкил, С_2-6алкил, С_2-5алкил, С_2-4алкил, С_2-3алкил, С_3-8алкил, С_3-7алкил и так далее.

Если не установлено или не указано иначе, термин «гидрокси-С_1-8-алкил» означает линейную или разветвленную С_1-8-алкильную группу, в которой атом водорода замещен ОН. Примеры указанного гидрокси-С_1-8алкила включают гидроксиметил, 2-гидроксиэтил, 2-гидроксипропил, 2-гидрокси-2-метилпропил и 1-гидрокси-1-метилэтил.

Если не установлено или не указано иначе, термин «С_1-8алкокси» означает линейную или разветвленную С_1-8алкильную группу, связанную с остатком молекулы через атом кислорода. Примеры указанного С_1-8алкокси включают метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, изобутокси, втор-бутокси, трет-бутокси и линейные и разветвленные пентилокси, гексилокси, гептилокси и октилокси. В качестве частей интервала «С_1-8алкокси» рассматриваются все его подгруппы, такие как С_1-7алкокси, С_1-6 алкокси, С_1-5алкокси, С_1-4алкокси, С _1-3алкокси, С_1-2алкокси, С_2-8алкокси, С_2-7алкокси, С_2-6алкокси, С_2-5 алкокси, С_2-4алкокси, С_2-3алкокси, С _3-8алкокси, С_3-7алкокси и так далее.

Если не установлено или не указано иначе, термин «С _1-8алкокси-С_1-8алкил» означает линейную или разветвленную С_1-8алкильную группу, в которой атом водорода замещен линейной или разветвленной С_1-8 алкоксигруппой. Примеры указанного С_1-8алкокси-С _1-8алкила включают метоксиметил, 1-метоксиэтил, 2-метоксиэтил и 2-этоксиэтил.

Если не установлено или не указано иначе, термин «гидрокси-С_1-8алкокси» означает линейную или разветвленную С_1-8алкоксильную группу, в которой атом водорода замещен ОН. Примеры указанного гидрокси-С _1-8алкокси включают гидроксиметокси, 2-гидроксиэтокси и 2-гидроксипропокси.

Если не установлено или не указано иначе, термин «С_1-8алкокси-С_1-8 алкокси» означает линейную или разветвленную С_1-8 алкоксигруппу, в которой атом водорода замещен линейной или разветвленной С_1-8алкоксигруппой. Примеры указанного С_1-8 алкокси-С_1-8алкокси включают метоксиметокси, 2-метоксиэтокси и 3-метоксипропокси.

Если не установлено или не указано иначе, термин «С_3-8циклоалкил» означает моноциклическую насыщенную углеводородную кольцевую систему, содержащую от 3 до 8 атомов углерода. Примеры С_3-8 циклоалкила включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и циклооктил. В качестве частей интервала «С _3-8циклоалкила» рассматриваются все его подгруппы, такие как С_3-7циклоалкил, С_3-6циклоалкил, С_3-5циклоалкил, С_3-4циклоалкил, С_4-8 циклоалкил, С_4-7циклоалкил, С_4-6циклоалкил, С_4-5циклоалкил, С_5-8циклоалкил, С_5-7 циклоалкил, С_6-8циклоалкил и С_6-7циклоалкил.

Если не установлено или не указано иначе, термин «гидрокси-С_3-8циклоалкил» означает С _3-8циклоалкильную группу, в которой атом водорода замещен ОН. Примеры указанного гидрокси-С_3-8циклоалкила включают 3-гидроксициклопентил и 4-гидроксициклогексил.

Если не установлено или не указано иначе, термин «С _1-8алкокси-С_3-8циклоалкил» означает С _3-8циклоалкильную группу, в которой атом водорода замещен линейной или разветвленной С_1-8алкоксигруппой. Примеры указанного С_1-8алкокси-С_3-8циклоалкила включают 3-метоксициклопентил и 4-метоксициклогексил.

Если не установлено или не указано иначе, термин «С _3-8циклоалкокси» означает С_3-8циклоалкильную группу, связанную с остатком молекулы через атом кислорода. Примеры указанного С_3-8циклоалкилокси включают циклопропилокси, циклопентилокси и циклогексилокси.

Если не установлено или не указано иначе, термин «гидрокси-С_3-8циклоалкилокси» означает С_3-8циклоалкилоксигруппу, в которой атом водорода замещен ОН. Примеры указанного гидрокси-С_3-8 циклоалкилокси включают 3-гидроксициклопентилокси и 4-гидроксициклогексилокси.

Если не установлено или не указано иначе, термин «С_1-8алкокси-С_3-8циклоалкилокси» означает С_3-8циклоалкилоксигруппу, в которой атом водорода замещен линейной или разветвленной С_1-8алкоксигруппой. Примеры указанного С_1-8алкокси-С_3-8циклоалкилокси включают 3-метоксициклопентилокси и 4-метоксициклогексилокси.

Когда два описанных здесь заместителя R ¹, вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, образуют 5- или 6-членный ароматический или неароматический цикл, указанный цикл может необязательно содержать один или более гетероатомов, выбранных из О и N. Примеры подобных двухвалентных заместителей R¹ включают -СН=СН-СН=СН-, -О-СН₂-О (метилендиокси) и -О-СН₂-СН₂О- (этилендиокси).

«Галоген» относится к фтору, хлору, брому или йоду.

«Гидрокси» относится к радикалу -ОН.

«Циано» относится к радикалу -CN.

«CF₃» относится к трифторметильному радикалу.

«OCF₃» относится к трифторметокси радикалу.

«Необязательный» или «необязательно» означает, что описанное впоследствии событие или обстоятельство может, но не должно произойти, и что описание включает случаи, в которых данное событие или обстоятельство происходит, и случаи, в которых оно не происходит.

«Фармацевтически приемлемый» означает применимость при получении фармацевтической композиции, которая, в общем, является безопасной, нетоксичной и ни биологически, ни каким-либо иным образом нежелательной, и применимой для фармацевтического применения для человека.

«Лечение», как использовано здесь, включает профилактику названного нарушения или состояния, или улучшение, или устранение нарушения, как только оно установлено.

«Эффективное количество» относится к количеству соединения, которое оказывает терапевтический эффект (например, лечит, регулирует, улучшает, предупреждает, задерживает начало или уменьшает риск развития заболевания, нарушения или состояния или его симптомы) у подлежащего лечению субъекта. Терапевтический эффект может быть объективным (то есть определяемым при помощи какого-нибудь теста или маркера) или субъективным (то есть субъект дает указание или ощущение какого-либо эффекта).

«Пролекарства» относятся к соединениям, которые можно превратить в биологически активное соединение изобретения в физиологических условиях или путем сольволиза. Пролекарство может быть неактивным при введении нуждающемуся в этом субъекту, но превращается in vivo в активное соединение изобретения. Пролекарства обычно быстро превращаются in vivo в исходное соединение изобретения, например, путем гидролиза. Соединение пролекарства обычно имеет преимущества в смысле растворимости, совместимости с тканями или замедленного высвобождения в организме млекопитающего (см. Silverman, R.B., The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action, 2^nd Ed., Elsevier Academic Press (2004), pp. 498-549). Пролекарства на основе соединений изобретения можно получить, модифицируя функциональные группы, такие как гидроксигруппы, присутствующие в соединении изобретения таким образом, что данные модификации расщепляются либо путем обычной манипуляции, либо in vivo, с образованием исходного соединения изобретения. Примеры пролекарств включают, но не ограничиваются ацетатными, формиатными или сукцинатными производными гидроксильных функциональных групп.

На протяжении описания и прилагаемой формулы изобретения данная химическая формула или название будут также включать все формы их солей, гидратов, сольватов, N-оксидов и пролекарств. Кроме того, данная химическая формула или название будут также включать все их таутомерные и стереоизомерные формы. Стереоизомеры включают энантиомеры и диастереомеры. Энантиомеры могут присутствовать в виде своих чистых форм или в виде рацемических (равных) или неравных смесей двух энантиомеров. Диастереомеры могут присутствовать в виде своих чистых форм или в виде смесей диастереомеров. Кроме того, диастереомеры включают геометрические изомеры, которые могут присутствовать в виде своих чистых цис- или транс-форм или в виде их смесей.

Соединения формулы (I) можно применять как таковые или, где это уместно, в виде их фармакологически приемлемых солей (солей присоединения кислоты или основания). Подразумевается, что упомянутые ниже фармакологически приемлемые соли присоединения включают терапевтически активные формы соли присоединения нетоксичной кислоты и основания, которые способны образовывать данные соединения. Соединения, обладающие основными свойствами, можно превратить в их фармакологически приемлемые соли присоединения кислоты, обрабатывая форму основания соответствующей кислотой. Типичные кислоты включают неорганические кислоты, такие как хлористый водород, бромистый водород, иодистый водород, серная кислота, фосфорная кислота и органические кислоты, такие как муравьиная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, гидроксиуксусная кислота, молочная кислота, пировиноградная кислота, гликолевая кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, щавелевая кислота, бензолсульфокислота, толуолсульфокислота, метансульфокислота, трифторуксусная кислота, фумаровая кислота, янтарная кислота, яблочная кислота, винная кислота, лимонная кислота, салициловая кислота, п-аминосалициловая кислота, памовая кислота, бензойная кислота, аскорбиновая кислота и так далее. Типичные соли присоединения основания представляют собой соли натрия, калия, кальция и соли с фармацевтически приемлемыми аминами, например, такими как аммиак, алкиламины, бензатин и аминокислоты, например, такие как аргинин и лизин. Использованный здесь термин соль присоединения также включает сольваты, которые способны образовывать соединения и их соли, например, такие как гидраты, алкоголяты и так далее.

Композиции

Для клинического применения на основе соединений изобретения можно составить фармацевтические композиции для глазного введения. Понятно, что соединения данного изобретения можно вводить вместе с физиологически приемлемым носителем, эксципиентом или разбавителем.

Получение фармакологической композиции, содержащей растворенные, диспергированные или суспендированные в ней активные ингредиенты, хорошо известно в данной области. Обычно подобные композиции получают в виде стерильных композиций для инстилляции (глазные капли) либо в виде жидких растворов или суспензий, водных или неводных, однако можно приготовить твердые формы, подходящие для получения раствора, дисперсии или суспензий в жидкости перед применением. Препарат может быть также эмульгирован.

Активный ингредиент можно смешать с эксципиентами, которые являются фармацевтически приемлемыми и совместимыми с активным ингредиентом, и взятыми в количествах, подходящих для использования в описанных здесь терапевтических способах. При желании, данные композиции могут содержать вспомогательные вещества, такие как смачивающие или эмульгирующие вещества, рН буферирующие вещества и так далее, повышающие эффективность активного ингредиента.

Фармацевтически приемлемые носители хорошо известны в данной области. Примерами жидких носителей являются стерильные водные растворы, не содержащие веществ, помимо активных ингредиентов и воды, или содержащие буферный раствор, такой как фосфат натрия при значении физиологического рН, физиологический раствор соли или и тот, и другой, такой как раствор соли с фосфатным буфером. Еще одни водные носители могут включать более одной буферной соли, а также такие соли, как хлориды натрия и калия, декстрозу, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль и другие растворенные вещества.

Жидкие композиции могут также содержать жидкие фазы, помимо воды, и за ее исключением. Примерами подобных дополнительных жидких фаз являются глицерин, растительные масла, органические сложные эфиры и эмульсии воды в масле.

Предпочтительно фармацевтическая композиция содержит одно или более веществ, применимых в качестве солюбилизатора, эмульгатора, и/или усилители проникновения. Подобные вещества, хорошо известные в данной области, включают, например, вещества, продаваемые под названием Cremophor® (BASF). Примером является Cremophor® RH 40 (полиоксоловое касторовое масло; CAS № 61788-85-0).

Получение соединений изобретения

Соединения приведенной выше формулы (I) можно получить по аналогии со стандартными способами. Получение промежуточных соединений и соединений в соответствии с примерами настоящего изобретения, в частности, можно прояснить при помощи следующих схем 1 и 2. Определения переменных параметров в структурах на приведенных здесь схемах соответствуют переменным параметрам в соответствующих положениях в описанных здесь формулах.

Исходя из соответствующего ацетофенона (II), метиловый эфир 5-(фенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (V) можно легко получить в несколько синтетических стадий. После гидролиза сложного эфира карбоновую кислоту (VI) активируют обработкой TBTU или переводят в соответствующий хлорангидрид кислоты и дают возможность взаимодействовать с соответствующим циклическим амином (VII), что приводит к образованию требуемого соединения формулы (I). Это в общих чертах представлено на схеме 1.

Схема 1

где R¹-R², а, n и m определены в формуле (I).

На схеме 2 показано получение изомерных соединений изоксазола формулы (I). Исходя из соответствующего замещенного бензальдегида (VII), этиловый эфир 3-(фенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (XI) получают в три стадии. Затем соединения формулы (I) легко получаются при гидролизе сложного эфира (XI) и конденсации полученной кислоты (XII) с соответствующим циклическим амином (VII) в присутствии TBTU в качестве активирующего агента или путем превращения кислоты в соответствующий хлорангидрид кислоты.

Схема 2

где R¹-R², а, n и m определены в формуле (I).

Необходимые исходные вещества для получения соединений формулы (I) являются либо коммерчески доступными, либо их можно получить способами, которые известны в данной области.

Описанные далее в экспериментальной части способы можно осуществить для получения соединения изобретения в форме свободного основания либо в виде соли присоединения кислоты. Фармацевтически приемлемую соль присоединения кислоты можно получить, растворяя свободное основание в подходящем органическом растворителе и обрабатывая данный раствор кислотой, в соответствии со стандартными методиками получения солей присоединения кислоты из основных соединений. Примеры кислот, образующих соли присоединения, упомянуты выше.

Соединения формулы (I) могут обладать одним или более хиральными атомами углерода, и, следовательно, они могут быть получены в виде оптических изомеров, например, в виде чистого энантиомера, или в виде смеси энантиомеров (рацемата) или в виде смеси, содержащей диастереомеры. Разделение смесей оптических изомеров для получения чистых энантиомеров хорошо известно в данной области и может быть осуществлено, например, дробной кристаллизацией солей с оптически активными (хиральными) кислотами или при помощи хроматографического разделения на хиральных колонках.

Реагенты, используемые в описанных здесь способах синтеза, могут включать, например, растворители, реагенты, катализаторы и реагенты для введения и снятия защитных групп. Примерами защитных групп являются трет-бутоксикарбонильная (Вос), бензильная и тритильная (трифенилметильная). Описанные выше способы могут также включать стадии, либо перед, либо после конкретно описанных здесь стадий, для введения или снятия подходящих защитных групп, чтобы сделать синтез соединений окончательно возможным. Кроме того, для получения требуемых соединений различные стадии синтеза можно осуществить в порядке чередования. Синтетические химические превращения и методологии защитных групп (защита и снятие защиты), применимые при синтезе подходящих соединений, известны в данной области и включают, например, синтетические химические превращения и методологии, описанные у R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3^rd Ed., John Wiley and Sons (1999); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); and L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995) и в их последующих изданиях.

Были использованы следующие сокращения:

DMA-ДМФА	Диметилацеталь диметилформамида
EtOAc	Этилацетат
ESI	Ионизация электроспреем
Час	Часы
HPLC	Высокоэффективная жидкостная хроматография
HRMS	Масс-спектрометрия высокого разрешения
LCMS	Хроматомасс-спектрометрия
M	Молярный
MeCN	Ацетонитрил
MeOH	Метанол
Мин	Минуты
MC	Масс-спектрометрия
NCS	N-хлорсукцинимид
NEt3	Триэтиламин
TBTU	Тетрафторборат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония
THF	Тетрагидрофуран

Приведение списка химических групп в любом определении описанного здесь переменного параметра включает определения этого переменного параметра в виде какой-либо одной группы или сочетания перечисленных групп. Приведение описанного здесь варианта осуществления включает этот вариант осуществления в виде какого-либо одного варианта осуществления или в виде сочетания с любыми другими вариантами осуществления или их частями.

Теперь данное изобретение будет дополнительно иллюстрировано следующими неограничивающими примерами. Приведенные далее конкретные примеры следует истолковывать лишь как иллюстративные и не ограничивающие оставшуюся часть описания каким бы то ни было образом. Предполагается, что, исходя из приведенного здесь описания, специалист в данной области сможет использовать настоящее изобретение в его наиболее полной степени, без дополнительного уточнения. Все цитированные здесь ссылки и публикации включены посредством ссылки во всей ее полноте.

Примеры и промежуточные соединения

Экспериментальные методы

Все реагенты имели промышленное качество и использовались без дополнительной очистки, если не указано иначе. Во всех остальных случаях использовали растворители ч.д.а., если не указано иначе. Препаративную ВЭЖХ/МС осуществляли в системе Waters/Micromass Platform ZQ, а препаративную ВЭЖХ/УФ осуществляли на аппарате Гилсона в соответствии с деталями эксперимента, подробно описанными в примерах. Аналитическую ВЭЖХ/МС осуществляли с использованием селективного детектора для хроматомасс-спектрометра (MSD) серии Agilent 1100/1200 (Single Quadrupole) (1946A/1946C/1956C/6110), снабженного электроспреевым интерфейсом. Препаративную флэш-хроматографию осуществляли на силикагеле 60 фирмы Merck (230-400 меш). Реакции под микроволновым облучением проводили при помощи Personal Chemistry Smith Creator или Personal Chemistry Smith Optimizer с использованием сосудов Smith Process на 0,5-2 мл или на 2-5 мл, снабженных алюминиевыми крышками и перегородками. Масс-спектры высокого разрешения (HRMS) получали на Agilent MSD-TOF, соединенном с системой Agilent 1100 ВЭЖХ. Во время анализа калибровку проверяли при помощи двух масс и автоматически корректировали при необходимости. Спектры получали положительным электроспреевым методом. Полученный массовый интервал представляет собой m/z 100-1100. Использовали профильное детектирование массовых пиков. Соединения называли с использованием ACD Name 6.0.

ПРОМЕЖУТОЧНОЕ СОЕДИНЕНИЕ 1

5-(2-Метилфенил)изоксазол-4-карбоновая кислота

Стадия 1: Метил 3-(2-метилфенил)-3-оксопропаноат

2-Метилацетофенон (20 г, 149 ммоль) растворяли в толуоле (20 мл) и медленно прибавляли к перемешиваемой суспензии NaH (7,16 г, 298 ммоль) и диметилкарбоната (14,8 г, 164 ммоль) в толуоле (примерно 150 мл) при комнатной температуре. Контроль за ходом реакции осуществляли методом LCMS. После расходования исходного ацетофенона добавляли МеОН (примерно 10 мл) приблизительно в течение 10 минут при перемешивании, после чего добавляли приблизительно 50 мл колотого льда. Смесь разбавляли CH₂Cl₂ и подкисляли водной HCl (9-12М). Органическую фазу отделяли, а водную фазу экстрагировали CH₂Cl₂. Объединенные органические фазы сушили (Na₂SO₄) и выпаривали растворитель, получая 27,2 г указанного в заголовке соединения (чистота >95%). МС m/z 193 [m+1].

Стадия 2. Метил (2Z)-3-(диметиламино)-2-(2-метилбензоил)акрилат

Метил 3-(2-метилфенил)-3-оксопропаноат (27,1 г, 141 ммоль) растворяли в толуоле (100 мл). Прибавляли ДМА-ДМФА (17,6 г, 148,0 ммоль) и перемешивали реакционную смесь при 70°С. После расходования исходного соединения (мониторинг методом LCMS) реакционной смеси давали остыть до комнатной температуры и выпаривали растворитель, получая 34,1 г указанного в заголовке соединения (чистота >95%), которое использовали на следующей стадии. МС m/z 248 [m+1].

Стадия 3. Метил 5-(2-метилфенил)изоксазол-4-карбоксилат

Метил (2Z)-3-(диметиламино)-2-(2-метилбензоил)акрилат (34,0 г, 138 ммоль) и гидрохлорид гидроксиламина (10,1 г, 145 ммоль) растворяли в МеОН (150 мл) и перемешивали полученный раствор при комнатной температуре. Контроль за ходом реакции осуществляли методом ВЭЖХ. Спустя 18 ч 90% растворителя выпаривали и растворяли остаток в CH₂Cl₂, промывали водой и сушили (Na₂SO₄). Растворитель выпаривали, получая 28,5 г (чистота >95%) указанного в заголовке соединения. МС m/z 218 [m+1].

Стадия 4. 5-(2-Метилфенил)изоксазол-4-карбоновая кислота

Метил 5-(2-метилфенил)изоксазол-4-карбоксилат (8,00 г, 36,8 ммоль) растворяли в НОАс (40 мл). Прибавляли HCl (конц.) при перемешивании при комнатной температуре до появления помутнения (примерно 40 мл). Реакционную смесь перемешивали при 70°С и осуществляли контроль методом ВЭЖХ. Спустя 18 ч реакционной смеси давали остыть до комнатной температуры, разбавляли водой (100 мл) и экстрагировали CH₂Cl₂ (2×50 мл). Объединенные органические фазы промывали водой (50 мл). Органическую фазу нейтрализовывали К₂СО₃ и экстрагировали водным раствором К₂СО₃ (3×100 мл). Объединенные щелочные водные фазы промывали CH₂Cl₂ (примерно 50 мл), подкисляли водной HCl (конц.) и экстрагировали CH₂Cl₂ (3×100 мл). Объединенные органические фазы сушили (Na₂SO ₄) и выпаривали растворитель, получая 6,51 г твердого вещества бежевого цвета (чистота >98%). МС m/z 204 [m+1].

ПРОМЕЖУТОЧНОЕ СОЕДИНЕНИЕ 2-12

Исходя из соответствующим образом замещенного ацетофенона, получали промежуточные соединения 2-12 по методике, описанной в общих чертах для промежуточного соединения 1.

Промежуточное соединение	[R1]m	МС m/z [m+1].
2	3-Me	204
3	4-Me	204
4	2-C1	224
5	3-C1	224
6	4-C1	224
7	2-Me, 3-Cl	238
8	3,4-ди-Me	218
9	2,4-ди-Me	218
10	2-F	208
11	4-F	208
12	2,3-CH=CH-CH=CH-	240

ПРОМЕЖУТОЧНОЕ СОЕДИНЕНИЕ 13

3-(2,4-Диметилфенил)изоксазол-4-карбоновая кислота

Стадия 1: Оксим 2,4-диметилбензальдегида

Раствор 2,4-диметилбензальдегида (10,0 г; 74,5 ммоль), гидрохлорида гидроксиламина (7,73 г; 111 ммоль) и пиридина (10 мл) в МеОН (75 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель выпаривали и растворяли сырую смесь в CH₂Cl₂ (150 мл), промывали водой (4×25 мл) и сушили (Na₂SO₄). Растворитель выпаривали, получая 10,1 г прозрачного масла, которое затвердевало при комнатной температуре и было использовано на следующей стадии. МС m/z 150 [m+1].

Стадия 2: 2,4-Диметил-N-гидроксибензолкарбоксимидоилхлорид

К перемешиваемому раствору оксима 2,4-диметилбензальдегида (6,12 г, 41,1 ммоль) в ДМФА (100 мл) прибавляли раствор N-хлорсукцинимида (6,30 г, 47,2 ммоль) в ДМФА в виде небольших порций в течение 90 мин при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи, а затем разбавляли диэтиловым эфиром и промывали ледяной водой и сушили (MgSO₄). Растворитель выпаривали, получая 6,92 г указанного в заголовке соединения в виде масла желтого цвета. МС m/z 184 [m+1].

Стадия 3. Этил 3-(2,4-диметилфенил)изоксазол-4-карбоксилат

К охлажденному льдом раствору этил-3-(диметиламино)акрилата (1,56 г, 10,9 ммоль) в диэтиловом эфире (30 мл) прибавляли триметиламин (1,52 мл, 10,9 ммоль), затем прибавляли по каплям (в течение 1 ч) 2,4-диметил-N-гидроксибензолкарбоксимидоилхлорид (2,012 г, 10,96 ммоль), растворенный в диэтиловом эфире (15 мл). Выпадал белый осадок, и прибавляли еще диэтилового эфира (50 мл). Баню со льдом убирали и оставляли реакционную смесь перемешиваться при 22°С в течение ночи. Твердое вещество удаляли фильтрованием, а органическую фазу промывали 5%-ным водным раствором НОАс (3×), сушили (MgSO₄) и выпаривали растворитель, получая 2,54 г указанного в заголовке соединения. МС m/z 246 [m+1].

Стадия 4. 3-(2,4-Диметилфенил)изоксазол-4-карбоновая кислота

Раствор этил 3-(2,4-диметилфенил)изоксазол-4-карбоксилата (890 мг, 3,63 ммоль) в НОАс (10 мл) и 12М водный HCl (5 мл) нагревали при 110°С в течение 70 мин в реакторе с микроволновым облучением. Реакционную смесь концентрировали примерно до половины объема и разбавляли толуолом. Водную фазу удаляли, а органическую фазу экстрагировали 1М водным раствором HCl. Объединенные водные фазы экстрагировали толуолом, а органические фазы объединяли и концентрировали. Остаток очищали флэш-хроматографией (CH₂Cl₂ /MeOH 9:1), получая 723 мг указанного в заголовке соединения в виде масла коричневого цвета. МС m/z 224 [m+1].

ПРОМЕЖУТОЧНОЕ СОЕДИНЕНИЕ 14-16

Исходя из соответствующим образом замещенного бензальдегида, получали промежуточные соединения 14-16 по методике, описанной в общих чертах для промежуточного соединения 13.

Промежуточное соединение	[R1]m	МС m/z [m+1]
14	2-Me	204
15	2-C1	224
16	4-Me	204

ПРОМЕЖУТОЧНОЕ СОЕДИНЕНИЕ 17

Гидрохлорид 2-[(3S)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола

Раствор этил (S)-пиперидин-3-карбоксилата (25,0 г, 159 ммоль) в CH₂Cl₂ (25 мл) прибавляли по каплям к перемешиваемому раствору ди-трет-бутилдикарбоната (36,5 г, 167 ммоль) в CH₂Cl₂ (150 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи. Сырую смесь промывали насыщенным водным раствором NaHCO₃, а затем перемешивали в течение 90 мин с 10%-ным раствором NH₃ (примерно 30 мл). Органическую фазу отделяли, сушили (Na₂SO₄) и выпаривали растворитель, получая 39,7 г 1-трет-бутил 3-этил (3S)-пиперидин-1,3-дикарбоксилата в виде прозрачного масла, которое затвердевало при стоянии.

Раствор 1-трет-бутил 3-этил (3S)-пиперидин-1,3-дикарбоксилата (16,0 г, 62,2 ммоль) в сухом ТГФ (100 мл) прибавляли по каплям в течение 1 ч к перемешиваемому раствору MeMgBr в смеси ТГФ/толуол (100 мл, 1,4М, 140 ммоль). Реакционную смесь выдерживали при температуре ниже 25°С при помощи охлаждения льдом. Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи и гасили, прибавляя по каплям воду (примерно 5 мл), затем водный HCl (6М) до кислой реакции по рН-индикаторной бумаге. Органическую фазу отделяли и выпаривали растворитель. Остаток растворяли в CH₂ Cl₂, промывали водой (примерно 50 мл) и сушили (Na ₂SO₄), а растворитель выпаривали, получая 14,7 г масла бледно-желтого цвета. Сырой продукт растворяли в смеси EtOAc/HCl (г) (100 мл; получено барботированием HCl (г) в EtOAc) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель выпаривали, а сырой остаток растворяли в CH₂Cl ₂ (100 мл) и перемешивали в течение 5 мин. Растворитель выпаривали (повторяли еще раз) и нагревали сырой остаток до 50°С в вакууме в течение 3 ч. Сырой остаток растирали в диэтиловом эфире, что приводило к образованию белых кристаллов, которые фильтровали и сушили, получая 6,41 г указанного в заголовке соединения. МС m/z 144 [m+1].

ПРОМЕЖУТОЧНОЕ СОЕДИНЕНИЕ 18

Гидрохлорид 2-[(3R)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола

Указанное в заголовке соединение получали из этил (R)-пиперидин-3-карбоксилата (25,0 г, 159 ммоль) и ди-трет-бутилдикарбоната (36,5 г, 167 ммоль), как описано в методике для промежуточного соединения 17, получая 6,88 г продукта в виде твердого вещества белого цвета. МС m/z 144 [m+1].

ПРОМЕЖУТОЧНОЕ СОЕДИНЕНИЕ 19

Гидрохлорид 2-[пиперидин-3-ил]пропан-2-ола

Указанное в заголовке соединение получали из этилпиперидин-3-карбоксилата (6,837 г, 47,75 ммоль) и ди-трет-бутилдикарбоната (10,42 г, 47,75 ммоль), как описано в методике для промежуточного соединения 17, получая 4,85 г продукта в виде твердого вещества белого цвета. МС m/z 144 [m+1].

ПРОМЕЖУТОЧНОЕ СОЕДИНЕНИЕ 20

1-[Пиперидин-3-ил]этан-1-ол

Смесь 1-(пиридин-3-ил)этанола (249 мг, 2,03 ммоль), формиата аммония (557 мг, 8,83 ммоль) и Pd/C (10%, 65,5 мг) в EtOH (15 мл) нагревали до 110°С в течение 20 мин в реакторе с микроволновым облучением. Прибавляли дополнительное количество формиата аммония (412 мг, 6,53 ммоль) и нагревали реакционную смесь до 110°С в течение 20 мин. Реакционную смесь фильтровали и выпаривали растворитель, получая 165 мг указанного в заголовке соединения. МС m/z 130 [m+1].

ПРИМЕР 1

2-(1-{[5-(2-Метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

Раствор 5-(2-метилфенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 1; 103 мг, 0,51 ммоль) и TBTU (195 мг, 0,607 ммоль) в CH₂Cl₂ (5 мл) прибавляли к смеси гидрохлорида 2-пиперидин-3-илпропан-2-ола (промежуточное соединение 19; 116 мг, 0,645 ммоль) и триэтиламина (0,142 мл, 1,01 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Смесь разбавляли диэтиловым эфиром, промывали насыщенным водным раствором NaHCO ₃, 5%-ным водным раствором НОАс, а затем сушили (MgSO ₄). Растворитель выпаривали, а остаток очищали флэш-хроматографией (диэтиловый эфир/петролейный эфир/МеОН 70:25:5), получая 145 мг указанного в заголовке соединения.

HRMS (ESI+) вычислено для C₁₉H₂₄N₂O ₃ 328,1786, найдено 328,1784.

ПРИМЕР 2

2-((3R)-1-{[5-(2-Метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

Раствор 5-(2-метилфенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 1; 102 мг, 0,507 ммоль) и TBTU (196 мг, 0,611 ммоль) в CH₂Cl₂ (5 мл) прибавляли к смеси гидрохлорида 2-[(3R)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 18; 84,1 мг, 0,471 ммоль) и триэтиламина (0,142 мл, 1,01 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл). Смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре, а затем разбавляли EtOAc, промывали водным раствором NaHCO₃, 5%-ным водным раствором НОАс и сушили (MgSO₄). Растворитель выпаривали, а остаток очищали флэш-хроматографией (диэтиловый эфир/петролейный эфир/МеОН 60:35:5), получая 101 мг указанного в заголовке соединения.

HRMS (ESI+) вычислено для C₁₉H ₂₄N₂O₃ 328,1786, найдено 328,1790.

ПРИМЕР 3

2-((3S)-1-{[5-(2-Метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

Раствор 5-(2-метилфенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 1; 64,0 мг, 0,36 ммоль) и TBTU (101 мг, 0,315 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл) прибавляли к смеси гидрохлорида 2-[(3S)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 17; 54,1 мг, 0,379 ммоль) и триэтиламина (0,048 мл, 0,341 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Сырой продукт очищали препаративной ВЭЖХ (Xterra C18, 10 мМ NH₄HCO₃ (рН 10)-CH₃CN) (5-30% MeCN), получая 23 мг указанного в заголовке соединения.

HRMS (ESI+) вычислено для C₁₉H₂₄N₂O₃ 328,1786, найдено 328,1788.

ПРИМЕР 4

2-(1-{[5-(3-Метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

Раствор 5-(3-метилфенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 2; 112 мг, 0,551 ммоль) и TBTU (194 мг, 0,607 ммоль) в CH₂Cl₂ (5 мл) прибавляли к смеси гидрохлорида 2-пиперидин-3-илпропан-2-ола (промежуточное соединение 19; 136 мг, 0,757 ммоль) и триэтиламина (0,196 мл, 1,41 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, разбавляли диэтиловым эфиром, промывали насыщ. водн. раствором NaHCO₃, 5%-ным водным раствором НОАс, а затем сушили (MgSO₄). Растворитель выпаривали, а остаток очищали флэш-хроматографией (диэтиловый эфир/петролейный эфир/МеОН 70:25:5), получая 174 мг указанного в заголовке соединения.

HRMS (ESI+) вычислено для C₁₉H₂₄N₂O₃ 328,1786, найдено 328,1785.

ПРИМЕР 5

2-((3S)-1-{[5-(4-Метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

К раствору 5-(4-метилфенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 3; 1,10 г, 5,41 ммоль) в SOCl ₂ (8 мл) прибавляли ДМФА (3 капли). Смесь нагревали до 110°С в течение 30 мин, а затем концентрировали в вакууме. К раствору гидрохлорида 2-[(3S)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 17; 0,973 г, 5,41 ммоль) и триэтиламина (1,49 мл, 11,8 ммоль) в CH₂Cl₂ (20 мл) при -20°С прибавляли холодный (-20°С) раствор хлорангидрида кислоты в CH₂Cl₂ (20 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин, а затем разбавляли CH₂Cl₂ . Смесь промывали 0,5М водным раствором HCl (3×15 мл), сушили (Na₂SO₄) и выпаривали растворитель, получая прозрачный сироп/масло. Этот сироп растворяли в диэтиловом эфире и выпаривали растворитель при комнатной температуре. Твердую часть растирали в диэтиловом эфире, что приводило к получению 750 мг указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета.

HRMS (ESI+) вычислено для C ₁₉H₂₄N₂O₃ 328,1786, найдено 328,1797.

ПРИМЕР 6

2-((3R)-1-{[5-(2-Хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

Раствор 5-(2-хлорфенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 4; 148 мг, 0,664 ммоль) и TBTU (264 мг, 0,822 ммоль) в CH₂Cl₂ (10 мл) прибавляли к смеси гидрохлорида 2-[(3R)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 18; 169 мг, 0,940 ммоль) и NEt ₃ (236 мкл, 172 мг, 1,70 ммоль) в CH₂Cl ₂ (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Растворитель выпаривали, а остаток очищали флэш-хроматографией (петролейный эфир/EtOAc (1:1, 1-6% МеОН)), получая 179 мг указанного в заголовке соединения.

HRMS (ESI+) вычислено для C₁₈H₂₁ClN ₂O₃ 348,1241, найдено 348,1247.

ПРИМЕР 7

2-((3S)-1-{[5-(2-Хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

Смесь 5-(2-хлорфенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 4; 149 мг, 0,666 ммоль) и TBTU (246 мг, 0,766 ммоль) в CH₂Cl₂ (5 мл) прибавляли к раствору гидрохлорида 2-[(3S)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 17; 147 мг, 0,818 ммоль) и NEt₃ (190 мкл, 1,34 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин и разбавляли EtOAc, промывали насыщенным водным раствором NaHCO₃, насыщенным раствором соли и сушили (MgSO₄). Растворитель выпаривали, а остаток очищали флэш-хроматографией (петролейный эфир/EtOAc 1:1, градиент 1-6% МеОН), получая 23,1 мг указанного в заголовке соединения.

HRMS (ESI+) вычислено для C ₁₈H₂₁ClN₂O₃ 348,1241, найдено 348,1249.

ПРИМЕР 8

2-((3S)-1-{[5-(3-Хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

Раствор 5-(3-хлорфенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 5; 67 мг, 0,30 ммоль) и TBTU (100 мг, 0,312 ммоль) в CH₂Cl₂ (5 мл) прибавляли к смеси гидрохлорида 2-[(3S)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 17; 57 мг, 0,32 ммоль) и NEt₃ (120 мкл, 1,34 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Растворитель выпаривали, а остаток очищали препаративной ВЭЖХ (Xterra C18, 10 мМ NH₄HCO₃ (рН 10)-CH ₃CN (5-30% MeCN), получая 12 мг указанного в заголовке соединения.

HRMS (ESI+) вычислено для C ₁₈H₂₁ClN₂O₃ 348,1241, найдено 348,1244.

ПРИМЕР 9

2-((3R)-1-{[5-(4-Хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

Раствор 5-(4-хлорфенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 6; 117 мг, 0,524 ммоль) и TBTU (195,7 мг, 0,609 ммоль) в CH₂Cl₂ (5 мл) прибавляли к смеси гидрохлорида 2-[(3R)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 18; 107 мг, 0,595 ммоль) и триэтиламина (150 мкл, 1,05 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Смесь разбавляли диэтиловым эфиром, промывали насыщенным водным раствором NaHCO₃, 5%-ным водным раствором НОАс и сушили (MgSO₄). Растворитель выпаривали, а остаток очищали флэш-хроматографией (диэтиловый эфир/петролейный эфир/МеОН 70:25:5), получая 120 мг указанного в заголовке соединения.

HRMS (ESI+) вычислено для C₁₈H₂₁ClN ₂O₃ 348,1241, найдено 348,1247.

ПРИМЕР 10

2-((3S)-1-{[5-(4-Хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

Раствор 5-(3-хлорфенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 6; 57 мг, 0,30 ммоль) и TBTU (80 мг, 0,249 ммоль) в CH₂Cl₂ (5 мл) прибавляли к смеси гидрохлорида 2-[(3S)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 17; 147 мг, 0,818 ммоль) и NEt₃ (120 мкл, 1,34 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Растворитель выпаривали, а остаток очищали препаративной ВЭЖХ (Xterra C18, 10 мМ NH₄HCO₃ (рН 10)-CH ₃CN) (5-30% MeCN), получая 19 мг указанного в заголовке соединения.

HRMS (ESI+) вычислено для C ₁₈H₂₁ClN₂O₃ 348,1241, найдено 348,1245.

ПРИМЕР 11

2-(1-{[5-(2-Хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-2-ил)этанол

К раствору 5-(2-хлорфенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 4; 120 мг, 0,54 ммоль) и TBTU (206 мг, 0,642 ммоль) в CH₂Cl₂ (6 мл) прибавляли 2-(2-гидроксиэтил)пиперидин (203 мг, 1,57 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Смесь разбавляли диэтиловым эфиром, промывали насыщенным водным раствором NaHCO ₃, 5%-ным водным раствором НОАс, а затем сушили (MgSO ₄). Растворитель выпаривали, а остаток очищали флэш-хроматографией (диэтиловый эфир/петролейный эфир/МеОН 70:25:5), получая 5 мг указанного в заголовке соединения.

HRMS (ESI+) вычислено для C₁₇H₁₉ClN₂O ₃ 334,1048, найдено 334,1081.

ПРИМЕР 12

2-(1-{[5-(3-Хлор-2-метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

Раствор 5-(3-хлор-2-метилфенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 7; 95,5 мг, 0,402 ммоль) и TBTU (147 мг, 0,458 ммоль) в CH₂Cl₂ (6 мл) прибавляли к смеси гидрохлорида 2-пиперидин-3-илпропан-2-ола (промежуточное соединение 19; 84,0 мг, 0,467 ммоль) и триэтиламина (0,112 мл, 0,80 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Смесь разбавляли диэтиловым эфиром, промывали насыщенным водным раствором NaHCO₃, 5%-ным водным раствором НОАс, а затем сушили (MgSO₄). Растворитель выпаривали, а остаток очищали флэш-хроматографией (диэтиловый эфир/петролейный эфир/МеОН 70:25:5), получая 63 мг указанного в заголовке соединения.

HRMS (ESI+) вычислено для C₁₉H₂₃ ClN₂O₃ 362,1397, найдено 362,1392.

ПРИМЕР 13

2-(1-{[5-(3,4-Диметилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

Раствор 5-(3,4-диметилфенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 8; 56,0 мг, 0,26 ммоль) и TBTU (103 мг, 0,321 ммоль) в CH₂Cl₂ (6 мл) прибавляли к смеси 2-пиперидин-3-илпропан-2-ола (промежуточное соединение 19; 52,2 мг, 0,290 ммоль) и триэтиламина (0,072 мл, 0,52 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь разбавляли диэтиловым эфиром, промывали насыщ. водн. раствором NaHCO₃, 5%-ным водным раствором НОАс, сушили (MgSO₄), а затем концентрировали. Остаток очищали флэш-хроматографией (диэтиловый эфир/петролейный эфир/МеОН 70:25:5), получая 46 мг указанного в заголовке соединения.

HRMS (ESI+) вычислено для C₂₀H ₂₆N₂O₃ 342,1943, найдено 342,1941.

ПРИМЕР 14

2-((3R)-1-{[5-(3,4-Диметилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

Раствор 5-(3,4-диметилфенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 8; 139 мг, 0,642 ммоль) и TBTU (245 мг, 0,766 ммоль) в CH₂Cl₂ (6 мл) прибавляли к смеси 2-[(3R)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 18; 140 мг, 0,779 ммоль) и триэтиламина (0,225 мл, 1,6 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, разбавляли диэтиловым эфиром, промывали насыщенным водным раствором NaHCO₃, 5%-ным водным раствором НОАс, сушили (MgSO₄) и концентрировали. Остаток очищали флэш-хроматографией (диэтиловый эфир/петролейный эфир/МеОН 70:25:5), получая 202 мг указанного в заголовке соединения.

HRMS (ESI+) вычислено для C₂₀H ₂₆N₂O₃ 342,1943, найдено 342,1946.

ПРИМЕР 15

2-((3S)-1-{[5-(3,4-Диметилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

Раствор 5-(3,4-диметилфенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 8; 68,0 мг, 0,31 ммоль) и TBTU (101 мг, 0,315 ммоль) в CH₂Cl₂ (62 мл) прибавляли к смеси гидрохлорида 2-[(3S)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 17; 54 мг, 0,30 ммоль) и триэтиламина (120 мкл, 1,34 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Сырой продукт очищали препаративной ВЭЖХ (Xterra C18, 10 мМ NH ₄HCO₃ (рН 10)-CH₃CN) (5-30% MeCN), получая 9 мг указанного в заголовке соединения.

HRMS (ESI+) вычислено для C₂₀H₂₆N₂ O₃ 342,1943, найдено 342,1949.

ПРИМЕР 16

2-((3R)-1-{[5-(2,4-Диметилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

Раствор 5-(2,4-диметилфенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 9; 104 мг, 0,478 ммоль) и TBTU (166 мг, 0,517 ммоль) в CH₂Cl₂ (6 мл) прибавляли к смеси 2-[(3R)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 18; 92,5 мг, 0,515 ммоль) и триэтиламина (133 мкл, 97 мг, 0,96 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель выпаривали, а остаток очищали флэш-хроматографией (диэтиловый эфир/петролейный эфир/МеОН 70:26:4), получая 105 мг указанного в заголовке соединения.

HRMS (ESI+) вычислено для C₂₀H ₂₆N₂O₃ 342,1943, найдено 342,1945.

ПРИМЕР 17

2-((3S)-1-{[5-(2,4-Диметилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

К раствору 5-(2,4-диметилфенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 9; 1,00 г, 4,60 ммоль) в SOCl ₂ (8 мл) прибавляли ДМФА (3 капли) и нагревали смесь до 110°С в течение 30 мин, а затем концентрировали в вакууме. К раствору гидрохлорида 2-[(3S)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 17; 0,827 г, 4,60 ммоль) и триэтиламина (1,3 мл, 9,2 ммоль) в CH₂Cl₂ (10 мл) при -70°С прибавляли холодный (-20°С) раствор хлорангидрида кислоты в CH₂Cl₂ (20 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре, разбавляли CH ₂Cl₂ и промывали 0,5М водным HCl (3×15 мл), а затем сушили (Na₂SO₄). Растворитель выпаривали, получая прозрачный сироп/масло. Этот сироп растворяли в диэтиловом эфире и выпаривали растворитель при комнатной температуре. Твердую часть растирали в диэтиловом эфире, что приводило к получению 1,32 г указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества бежевого цвета.

HRMS (ESI+) вычислено для C ₂₀H₂₆N₂O₃ 342,1943, найдено 342,1951.

ПРИМЕР 18

2-((3R)-1-{[5-(2-Фторфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

Раствор 5-(2-фторфенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 10; 81,6 мг, 0,394 ммоль) и TBTU (132 мг, 0,411 ммоль) в CH₂Cl₂ (6 мл) прибавляли к смеси гидрохлорида 2-[(3R)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 18; 73,4 мг, 0,408 ммоль) и триэтиламина (0,1 мл, 0,719 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Смесь разбавляли диэтиловым эфиром, промывали насыщенным водным раствором NaHCO₃, 5%-ным водн. раствором НОАс, а затем сушили (MgSO₄). Растворитель выпаривали, а остаток очищали флэш-хроматографией (диэтиловый эфир/петролейный эфир/МеОН 70:25:5), получая 49 мг указанного в заголовке соединения.

HRMS (ESI+) вычислено для C₁₈H₂₁ FN₂O₃ 332,1536, найдено 332,1543.

ПРИМЕР 19

2-((3R)-1-{[5-(4-Фторфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

Раствор 5-(4-фторфенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 11; 116,0 мг, 0,560 ммоль) и TBTU (195 мг, 0,607 ммоль) в CH₂Cl₂ (6 мл) прибавляли к смеси гидрохлорида 2-[(3R)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 18; 107,0 мг, 0,595 ммоль) и триэтиламина (0,083 мл, 0,600 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, а затем разбавляли диэтиловым эфиром. Органическую фазу промывали насыщенным водным раствором NaHCO₃, 5%-ным водным раствором НОАс, а затем сушили (MgSO₄). Растворитель выпаривали, а остаток очищали флэш-хроматографией (диэтиловый эфир/петролейный эфир/МеОН 70:25:5), получая 174 мг указанного в заголовке соединения.

HRMS (ESI+) вычислено для C₁₈H₂₁FN₂O₃ 332,1536, найдено 332,1527.

ПРИМЕР 20

2-((3S)-1-{[5-(4-Фторфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

Раствор 5-(4-фторфенил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 11; 52,0 мг, 0,301 ммоль) и TBTU (101 мг, 0,315 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл) прибавляли к смеси гидрохлорида 2-[(3S)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 17; 54,1 мг, 0,301 ммоль) и триэтиламина (0,048 мл, 0,3 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Сырой продукт очищали препаративной ВЭЖХ (Xterra C18, 10 мМ NH ₄HCO₃ (рН 10)-CH₃CN) (5-30% MeCN), получая 24 мг указанного в заголовке соединения.

HRMS (ESI+) вычислено для C₁₈H₂₁FN ₂O₃ 332,1536, найдено 332,1534.

ПРИМЕР 21

2-((3R)-1-{[5-(1-Нафтил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

Раствор 5-(1-нафтил)изоксазол-4-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 12; 101 мг, 0,424 ммоль) и TBTU (140 мг, 0,436 ммоль) в CH₂Cl₂ (6 мл) прибавляли к смеси гидрохлорида 2-[(3R)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 18; 80,1 мг, 0,446 ммоль) и триэтиламина (118 мкл, 0,85 ммоль) в CH₂Cl₂ (2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, а затем разбавляли диэтиловым эфиром. Органическую фазу промывали насыщ. водн. раствором NaHCO₃, 5%-ным водн. раствором НОАс и сушили (MgSO₄). Растворитель выпаривали, а остаток очищали флэш-хроматографией (диэтиловый эфир/петролейный эфир/МеОН 70:25:5), получая 44 мг указанного в заголовке соединения.

HRMS (ESI+) вычислено для C₂₂H ₂₄N₂O₃ 364,1787, найдено 364,1781.

ПРИМЕР 22

2-((3S)-1-{[3-(2-Метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

3-(2-Метилфенил)изоксазол-4-карбоновую кислоту (промежуточное соединение 14; 137 мг, 0,674 ммоль) и TBTU (221 мг, 0,688 ммоль), растворенные в CH₂Cl ₂ (4 мл), прибавляли к раствору гидрохлорида 2-[(3S)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 17; 121 мг, 0,673 ммоль) и NEt ₃ (189 мкл, 1,35 ммоль) в CH₂Cl₂ (4 мл). Смесь перемешивали при 22°С в течение 90 мин, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (петролейный эфир/EtOAc/МеОН, градиент 6:4:0 48:48:4), получая 47 мг указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества серого цвета.

HRMS (ESI+) вычислено для C₁₉H₂₄N₂ O₃ 328,1787, найдено 328,1788.

ПРИМЕР 23

2-((3R)-1-{[3-(2-Метилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

3-(2-Метилфенил)изоксазол-4-карбоновую кислоту (промежуточное соединение 14; 92,0 мг, 0,452 ммоль) и TBTU (145 мг, 0,452 ммоль), растворенные в CH₂Cl ₂ (5 мл), прибавляли к раствору гидрохлорида 2-[(3R)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 18; 97,5 мг, 0,545 ммоль) и NEt ₃ (126 мкл, 0,935 ммоль) в CH₂Cl₂ (4 мл). Смесь перемешивали при 22°С в течение 90 мин, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (петролейный эфир/EtOAc/МеОН, градиент 6:4:0 48:48:4), получая 81 мг указанного в заголовке соединения в виде пены белого цвета.

HRMS (ESI+) вычислено для C₁₉H₂₄N₂O₃ 328,1787, найдено 328,1786.

ПРИМЕР 24

2-((3R)-1-{[3-(2-Хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

3-(2-Хлорфенил)изоксазол-4-карбоновую кислоту (промежуточное соединение 15; 795 мг, 3,56 ммоль), растворенную в SOCl₂ (10 мл), нагревали при 110°С в течение 20 мин в реакторе с микроволновым облучением. Смесь концентрировали в вакууме, растворяли в CH₂Cl₂ (5 мл) и прибавляли к раствору гидрохлорида 2-[(3R)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 18; 630 мг, 3,51 ммоль) и NEt₃ (1,24 мл, 8,90 ммоль) в CH₂Cl₂ (20 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин и разбавляли CH₂Cl₂ (20 мл). Органическую фазу промывали 5%-ным водным раствором НОАс, насыщенным раствором соли и сушили (MgSO₄). В результате выпаривания растворителя и растирания сырого остатка в толуоле получали 977 мг указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета.

HRMS (ESI+) вычислено для C₁₈H ₂₁ClN₂O₃ 348,1241, найдено 348,1240.

ПРИМЕР 25

2-((3S)-1-{[3-(2-Хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

3-(2-Хлорфенил)изоксазол-4-карбоновую кислоту (промежуточное соединение 15; 1,00 г, 4,48 ммоль), растворенную в SOCl₂ (10 мл), нагревали при 110°С в течение 20 мин в реакторе с микроволновым облучением. Смесь концентрировали в вакууме, растворяли в CH₂Cl₂ (5 мл) и прибавляли к раствору гидрохлорида 2-[(3S)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 17; 807 мг, 4,49 ммоль) и NEt₃ (1,56 мл, 11,2 ммоль) в CH₂Cl₂ (20 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. Смесь разбавляли CH₂Cl₂ (20 мл) и промывали 5%-ным водн. раствором НОАс, насыщенным раствором соли и сушили (MgSO₄). В результате выпаривания растворителя и растирания сырого остатка в толуоле получали 1,32 г указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета.

HRMS (ESI+) вычислено для C₁₈H ₂₁ClN₂O₃ 348,1241, найдено 348,1242.

ПРИМЕР 26

1-(1-{[3-(2-Хлорфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)этанол

3-(2-Хлорфенил)изоксазол-4-карбоновую кислоту (промежуточное соединение 15; 149 мг, 0,666 ммоль), растворенную в SOCl₂ (3 мл), нагревали при 120°С в течение 15 мин в реакторе с микроволновым облучением. Смесь концентрировали в вакууме, растворяли в CH₂Cl₂ (5 мл) и прибавляли к раствору 1-(пиперидин-3-ил]этан-1-ола (промежуточное соединение 20; 130 мг, 0,785 ммоль) и NEt₃ (0,228 мл, 1,64 ммоль) в CH₂Cl₂ (4 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. Смесь разбавляли CH₂Cl₂ (20 мл), промывали 1М водным раствором HCl и насыщенным раствором соли, а затем сушили (MgSO₄). Смесь очищали флэш-хроматографией (CH₂Cl₂/МеОН, градиент 98:2 94:6), получая 99,1 мг прозрачного масла указанного в заголовке соединения в виде смеси 4 диастереомеров.

HRMS (ESI+) вычислено для C₁₇H₁₉ClN₂ O₃ 334,1084, найдено 334,1085.

ПРИМЕР 27

2-((3R)-1-{[3-(2,4-Диметилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

3-(2,4-Диметилфенил)изоксазол-4-карбоновую кислоту (промежуточное соединение 13; 135 мг, 0,621 ммоль), растворенную в SOCl₂ (2 мл), нагревали при 110°С в течение 30 мин в микроволновом реакторе. Смесь концентрировали в вакууме, растворяли в CH₂Cl₂ (5 мл) и прибавляли к раствору гидрохлорида 2-[(3R)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 18; 112 мг, 0,623 ммоль)) и NEt₃ (0,173 мл, 1,24 ммоль) в CH₂Cl₂ (4 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин, а затем разбавляли диэтиловым эфиром. Органическую фазу промывали 1М водным раствором HCl, насыщенным раствором соли, а затем сушили (MgSO₄). Остаток кристаллизовали из смеси диэтиловый эфир/петролейный эфир, получая 152 мг указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества белого цвета.

HRMS (ESI+) вычислено для C₂₀H₂₆N₂ O₃ 342,1943, найдено 342,1947.

ПРИМЕР 28

2-((3S)-1-{[3-(2,4-Диметилфенил)изоксазол-4-ил]карбонил}пиперидин-3-ил)пропан-2-ол

3-(2,4-Диметилфенил)изоксазол-4-карбоновую кислоту (промежуточное соединение 13; 115 мг, 0,529 ммоль), растворенную в SOCl₂ (2 мл), нагревали при 110°С в течение 20 мин в реакторе с микроволновым облучением. Смесь концентрировали в вакууме, растворяли в CH₂Cl₂ (5 мл) и прибавляли к раствору гидрохлорида 2-[(3S)-пиперидин-3-ил]пропан-2-ола (промежуточное соединение 17; 105 мг, 0,584 ммоль)) и триэтиламина (0,173 мл, 1,24 ммоль) в CH₂Cl₂ (4 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин, а затем разбавляли диэтиловым эфиром. Органическую фазу промывали 1М водным раствором HCl, насыщенным раствором соли, а затем сушили (MgSO₄). Остаток кристаллизовали из смеси диэтиловый эфир/петролейный эфир, получая 111 мг указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества бежевого цвета.

HRMS (ESI+) вычислено для C₂₀H₂₆ N₂O₃ 342,1943, найдено 342,1949.

БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

Сцинтилляционный анализ сближения

(1,2(n)-³Н)-Кортизон получали от Amersham Pharmacia Biotech. Противокортизольное моноклональное мышиное антитело, клон 6D6.7 получали от Immunotech, гранулы для сцинтилляционного анализа сближения (SPA), покрытые моноклональными мышиными антителами получали от Amersham Pharmacia Biotech. Тетранатриевую соль НАДФН предоставлял Calbiochem, а глюкоза-6-фосфат (G-6-P) предоставляла Sigma. Фермент человеческой 11 -гидроксистероидной дегидрогеназы 1 типа (11 -HSD1) экспрессировали в Pichia pastoris. 18- -Глицирретиновую кислоту (GA) получали от Sigma. Серийные разбавления соединений растворяли в ДМСО (1 мМ) и разбавляли 50 мМ Tris-HCl, рН 7,2, содержащим 1 мМ ЭДТУ. Мультиплицирование планшетов проводили на Wallac Quadra. Количество продукта [ ³Н]-кортизола, связанного с гранулами, определяли на микропланшетном жидкостном сцинтилляционном счетчике Top Count от Packard.

Ферментный анализ 11 -HSD1 осуществляли в 96-луночных микротитровальных планшетах (Packard Optiplate) при общем объеме лунки 220 мкл и содержании 30 мМ Tris-HCl, рН 7,2 с 1 мМ ЭДТУ, субстратной смеси тритиевого кортизона/НАДФН (175 нМ/181 мкМ), G-6-P (1 нМ) и ингибиторов в серийных разбавлениях. Реакции инициировали добавлением 11 -HSD1 человека либо в виде клеточного гомогената в Pichia pastoris, либо в виде микросом, полученных из Pichia pastoris. После смешивания планшеты встряхивали в течение от 30 до 45 минут при комнатной температуре. Реакции останавливали при помощи 10 мкл 1 мМ стоп-раствора GA. После этого прибавляли моноклональное мышиное антитело (10 мкл 4 мкМ), затем 100 мкл SPA гранул (суспендированных согласно инструкциям производителя). Осуществляли соответствующие контрольные опыты, пренебрегая тем, что 11 -HSD1 получает значение неспецифического связывания (NBS). Планшеты покрывали пластиковой пленкой и инкубировали во встряхивающем аппарате в течение 30 минут при комнатной температуре перед подсчетом. Количество [³Н]-кортизола, связанного с гранулами, определяли на микропланшетном жидкостном сцинтилляционном счетчике. Расчет значений K_i для ингибиторов осуществляли с использованием Activity Base. Значение K_i рассчитывали из IC₅₀, а значение K_i рассчитывали при помощи уравнения Ченга-Пруссова (при обратимом ингибировании, которое подчиняется уравнению Михаелиса-Ментен): K_i =IC₅₀(1+[S]/K_m) [Cheng, Y. C.; Prushoff, W. H. Biochem. Pharmacol. 1973, 22, 3099-3108]. IC₅₀ определяли экспериментально в опыте, в котором снижение оборота превращения кортизона в кортизол зависит от потенциала ингибирования каждого соединения.

Значения K_i соединений примеров 1-28 для 11 -HSD1 обычно находились в интервале от около 5 нМ до около 600 нМ.

НТМ-клеточный анализ

Генный продукт MYOC, миоцилин, экпрессируется во многих глазных тканях, включая трабекулярную сеть (ТМ) и ресничное тело (структуры глаза, участвующие в регулировании внутриглазного давления). Мутации MYOC гена связывали с повышенным внутриглазным давлением и некоторыми формами открытоугольной глаукомы. Данный белок индуцируется глюкокортикоидами и предполагается, что он участвует в регулировании сопротивления оттоку внутриглазной жидкости (см. Nguen T.D. et al. (1998) J. Biol. Chem. 273, 6341-6350, Tamm E.R. (2002) Prog Retin Eye Res. 21, 395-428). Кроме того, 11 -гидроксистероидная дегидрогеназа 1 типа (11 -HSD1) представляет собой фермент, ответственный за внутриклеточное превращение неактивного глюкокортикоидного кортизона в активный стероидный гормон кортизол.

Первичные клеточные культуры трабекулярной сети человека (НТМ) выделяли из эксплантатов, полученных из банков человеческих глаз, и использовали в экспериментах двух различных типов. В случае зависимых от дозы опытов клетки инкубировали в течение 24 часов при серийном разбавлении тестируемых соединений (от 10 мкМ до 565 пМ в клеточной среде, содержащей 100 нМ кортизона). Контрольные опыты представляли собой только среду (отрицательный контроль) и 100 нМ кортизон (положительный контроль). Концентрации кортизола в собранных средах определяли при помощи набора реагентов Cortisol-EIA Kit, а из кривых «конечная доза-отклик» вычисляли IC₅₀, составлявшую 3-30 нМ.

Проводили длительные опыты, чтобы выяснить, можно ли коррелировать экспрессию MYIC и генов 11 -HSD1 с концентрацией кортизола. Опыты продолжались три недели и начинались с 7-дневного инкубационного периода с кортизоном, за которым следовало 7-дневное инкубирование с соединением в присутствии кортизона. Чтобы выяснить, длится ли влияние соединения в течение от одного и до трех дней, его убирали из среды и добавляли только кортизон. Культуральную среду собирали для анализа на кортизол и готовили клеточные лизаты для анализа экспрессии генов на 7, 14, 15 и 17 день. В качестве контроля опытом на всех стадиях была только среда (отрицательный контроль) и 100 нМ кортизон (положительный контроль). Замену среды проводили каждый третий день. Концентрации кортизола в собранных средах определяли при помощи набора реагентов Cortisol-EIA Kit. После 17-дневной обработки из клеточных лизатов экстрагировали РНК и измеряли экспрессию гена при помощи сравнительно количественной и полимеразной цепной реакции TaqMan в режиме реального времени. В качестве контроля использовали 18S РНК и -актин. Концентрации РНК нормализовывались до контрольных, чтобы избежать различий вследствие клеточной плотности.

По сравнению с положительными контрольными опытами 7-дневная обработка ингибитором плюс кортизон приводила к предотвращению образования кортизола на 98%. Интересно отметить, что через один и три дня после удаления ингибитора выработка кортизола оставалась низкой и оставалась примерно на уровне 20% и 50% от соответствующих им контрольных опытов. Аналогичным образом ингибитор влиял на MYOC и гены 11 -HSD1. Было обнаружено 2-10-кратное регулирование MYOC гена спустя 7-14 дней после обработки кортизоном. С другой стороны, в клетках, обработанных в течение 7 дней только кортизоном, и еще в течение 7 дней ингибитором плюс кортизон, повышающая регуляция гена прекращалась и оставалась примерно на том же уровне экспрессии, как и после первой недели обработки кортизоном. Через день после удаления ингибитора экспрессия MYOC возвращалась примерно к 40% от контрольного опыта, а через три дня после повышающей регуляции она достигала 70% от контрольного опыта с кортизоном. В тех же условиях экспрессия гена 11 -HSD1 повышалась в 2-5 раз и удаление ингибитора постепенно возвращало повышающую регуляцию, достигнутую при помощи кортизона.

В заключение широкое влияние соединений данного изобретения на ингибирование выработки кортизола коррелирует с влиянием на экспрессию генных продуктов, связанных с повышенным внутриглазным давлением, и демонстрирует свое продолжительное влияние на фармакологически релевантные клетки трабекулярной сети.

Инструмент скринига проницаемости роговицы

Некоторое количество описанных здесь соединений тестировали на их проникновение в глаз после местного введения в глаза свиньям in vitro в качестве вспомогательного средства при определении их потенциала в качестве кандидатов в лекарственные препараты для глаз. Свежие глаза брали у животных, которых умерщвляли в течение утра каждого дня экспериментального периода. Глаза переносили в пробирки Фалькона на 50 мл, в которых содержалась +37°С BSS, чтобы дать возможность эндотелию роговицы стать метаболически активным. Перед местным введением тестируемого соединения глаза помещали во влажную камеру, чтобы избежать излишнего пересыхания глаза во время более длительного инкубирования.

Свиные глаза подвергали действию раствора или суспензии соединения в фосфатном буфере. В качестве эксципиента состава обычно использовали Cremophor® RH40 (полиоксоловое касторовое масло, BASF). Для каждого состава использовали три промежутка времени инкубирования. Для каждой временной точки использовали шесть глаз. Перед введением глаза промывали BSS, затем использовали 50 мкл фосфатного буфера, чтобы увлажнить поверхность роговицы. Для начала инкубирования использовали одну каплю (20 мкл) состава. В конце инкубационного периода в роговице делали отверстие при помощи 30G канюли и внутриглазную жидкость (АН) извлекали и переносили в пластмассовые пробирки. Образцы внутриглазной жидкости хранили при -18°С до анализа.

Для тестируемых соединений найденная концентрация АН находилась в интервале 0,001-6 мкМ после 10 мин воздействия. Классификацию соединений в качестве инструмента скрининга впоследствии осуществляли с использованием соотношения концентрации соединения в АН_{20 мин}/IC ₅₀.

Было найдено, что данное соотношение находится в интервале 30-400 для тестируемых соединений.

В результате было показано, что соединения, описанные согласно изобретению, способны проникать в глаз после местного введения в свиные глаза in vitro.