способ изготовления вакцины против ящура
Классы МПК: | A61K39/135 вирус ящура A61P31/12 противовирусные средства |
Автор(ы): | Самуйленко Анатолий Яковлевич (RU), Еремец Владимир Иванович (RU), Зенов Николай Иванович (RU), Литенкова Ирина Юрьевна (RU), Мельник Николай Васильевич (RU), Красуткин Сергей Николаевич (RU), Сорокина Ольга Филипповна (RU), Маслов Евгений Витальевич (RU), Калинин Павел Игоревич (RU) |
Патентообладатель(и): | Федеральное государственное унитарное предприятие "Щелковский биокомбинат" (RU) |
Приоритеты: |
подача заявки:
2013-03-06 публикация патента:
20.07.2014 |
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при изготовлении вакцины против ящура. Способ изготовления вакцины против ящура включает культивирование вирусного антигена в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36-37 °С, очистку вирусной суспензии от балластных примесей, инактивацию, концентрирование полученного антигена вируса ящура и соединение концентрата антигена с адъювантом, при этом очистку вирусной суспензии от балластных примесей проводят добавлением производных полигуанидинов в конечной концентрации 0,005-0,01% или смеси хлороформа и производных полигуанидинов, взятых в весовых соотношениях (40-160):1, соответственно, в конечной концентрации 0,4-0,8. В качестве производных полигуанидинов используют дигидрохлорид 1,12-дигуанидиногексана, или дигидрохлорид бис(3-гуанидинопропил)пиперазина, или дигидрохлорид 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина, или дигидрохлорид 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида. Изобретение обеспечивает повышение уровня очистки вирусной суспензии от балластных примесей и повышение иммуногенности целевого продукта. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.,16 пр.
Формула изобретения
1. Способ изготовления вакцины против ящура, включающий культивирование вирусного антигена в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36-37 °С, очистку вирусной суспензии от балластных примесей, инактивацию, концентрирование полученного антигена вируса ящура и соединение концентрата антигена с адъювантом, отличающийся тем, что очистку вирусной суспензии от балластных примесей проводят добавлением производных полигуанидинов в конечной концентрации 0,005-0,01% или смеси хлороформа и производных полигуанидинов, взятых в весовых соотношениях (40-160):1, соответственно, в конечной концентрации 0,4-0,8%.
2. Способ изготовления вакцины против ящура по п.1, отличающийся тем, что в качестве производных полигуанидинов используют дигидрохлорид 1,12-дигуанидиногексана, или дигидрохлорид бис(3-гуанидинопропил)пиперазина, или дигидрохлорид 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина, или дигидрохлорид 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида.
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при изготовлении вакцины против ящура.
Известен способ изготовления вакцины против ящура типа О, включающий культивирование вирусного антигена в суспензионной культуре клеток ВНК-21 в течение 10-15 часов при 36-37 °С, причем культивирование прекращают при достижении количества мертвых клеток 90-95%, после чего вирус ящура подвергают инактивации, очищают от балластных примесей, концентрируют полученный антиген и соединяют концентрат антигена с адъювантом. Вакцина, полученная данным способом, содержит авирулентный и очищенный антигенный материал в виде иммуногенных компонентов (146S+75S) вируса ящура типа О, гель гидроокиси алюминия, сапонин и поддерживающую среду (патент РФ № 2212895, МПК А61К 39/135, C12N 7/00, 27.09.2003).
Недостатком известного способа изготовления вакцины является негарантированный уровень полученного антигенного материала в связи с оценкой его количества методом определения (1465+758)-компонентов, т.к. капсид вируса 75S как неполная структура антигена склонен к разрушению до капсомеров 12S при температурных колебаниях и других физико-химических факторах.
Известен также способ изготовления вакцины против ящура, включающий культивирование вирусного антигена в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36-37 °С, очистку вирусной суспензии от балластных примесей, инактивацию, концентрирование полученного антигена вируса ящура и соединение концентрата антигена с адъювантом, причем начиная с 6-8 часов культивирования вирусного антигена через каждые 2 часа определяют процент мертвых клеток, и при достижении его уровня 95% и выше осуществляют дальнейшее культивирование в течение 2-8 часов в зависимости от типа вируса (патент РФ № 2332233, МПК А61К 39/135. Бюл. № 24, 27.08.2008).
Однако в известном способе недостаточно эффективно проводится очистка вирусной суспензии от балластных примесей, что ведет к снижению иммуногенности целевого продукта.
Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа изготовления вакцины против ящура, позволяющего повысить уровень очистки вирусной суспензии от балластных примесей и иммуногенность целевого продукта.
Поставленная задача решается в способе изготовления вакцины против ящура, включающем культивирование вирусного антигена в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36-37 °С, очистку вирусной суспензии от балластных примесей, инактивацию, концентрирование полученного антигена вируса ящура и соединение концентрата антигена с адъювантом тем, что очистку вирусной суспензии от балластных примесей проводят добавлением производных полигуанидинов в конечной концентрации 0,005-0,01% или смеси хлороформа и производных полигуанидинов, взятых в весовых соотношениях (40-160):1, соответственно, в конечной концентрации 0,4-0,8%.
Поставленная задача также решается в способе изготовления вакцины против ящура тем, что в качестве производных полигуанидинов используют дигидрохлорид 1,12-дигуанидиногексана, или дигидрохлорид бис(3-гуанидинопропил)пиперазина, или дигидрохлорид 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина, или дигидрохлорида 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида.
Известны производные полигуанидинов, в частности дигидрохлорида 1,12-дигуанидиногексана, дигидрохлорида бис(3-гуанидинопропил)пиперазина, дигидрохлорида 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина, дигидрохлорида 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида, используемые в качестве как антитуберкулезные, противовирусные, фунгицидные, противоплесневые и антитрипаносомные препараты (Патент РФ «Производные полигуанидинов» № 2230734, МПК С07С 279/02, 2004).
В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения, содержащие режимы в способе изготовления вакцины против ящура, аналогичные заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию «новизна».
Все режимы способа осуществимы в лабораторных и промышленных условиях, направлены на решение реальной технической задачи, т.е. предложение «промышленно применимо».
В задачу создания изобретения входило разработать способ технического процесса промышленного производства изготовления вакцины против ящура с учетом современных факторов. Нами впервые установлено, что очистка вирусной суспензии от балластных примесей при получении вакцины против ящура проводят добавлением производных полигуанидинов к вирусной суспензии при определенных режимах.
Пример 1. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 № 550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.
Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 1,12-дигуанидиногексана) до конечной концентрации 0,01% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.
Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 1465-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 1465-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.
Полученную вакцину 1 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.
Пример 2. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 № 550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.
Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид бис(3-гуанидинопропил)пиперазина) до конечной концентрации 0,01% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.
Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 1465-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 1468-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.
Полученную вакцину 2 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.
Пример 3. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 № 550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.
Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорида 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина) до конечной концентрации 0,005% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.
Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 1465-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 1465-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.
Полученную вакцину 3 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.
Пример 4. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 № 550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.
Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорида 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида) до конечной концентрации 0,005% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.
Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 1465-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 1465-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.
Полученную вакцину 4 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.
Пример 5. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 7 часов.
Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 1,12-дигуанидиногексана) до конечной концентрации 0,005% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.
Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 1465-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 1465-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.
Полученную вакцину 5 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.
Пример 6. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 8 часов.
Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид бис(3-гуанидинопропил)пиперазина) до конечной концентрации 0,005% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.
Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.
Полученную вакцину 6 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.
Пример 7. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 7 часов.
Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорида 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина) до конечной концентрации 0,01% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.
Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.
Полученную вакцину 7 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.
Пример 8. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 8 часов.
Затем в биореактор добавляют производные полигуанидинов (в частности, дигидрохлорида 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида) до конечной концентрации 0,01% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления производных полигуанидинов и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.
Осадок, содержащий фрагменты клеток и производные полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.
Полученную вакцину 8 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.
Пример 9. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 № 550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.
Затем в биореактор добавляют смесь хлороформа и производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 1,12-дигуанидиногексана), взятых в весовых соотношениях 40:1, соответственно, до конечной концентрации 0,4% в реакционной среде и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.
Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.
Полученную вакцину 9 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.
Пример 10. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 № 550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки.
При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.
Затем в биореактор добавляют смесь хлороформа и производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 1,12-дигуанидиногексана), взятых в весовых соотношениях 160:1, соответственно, до конечной концентрации 0,8% в реакционной среде и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.
Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.
Полученную вакцину 10 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.
Пример 11. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 № 550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.
Затем в биореактор добавляют смесь хлороформа и производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид бис(3-гуанидинопропил)пиперазина), взятых в весовых соотношениях 40:1 до конечной концентрации 0,4% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.
Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.
Полученную вакцину 11 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.
Пример 12. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура А 22 № 550, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 2 часов.
Затем в биореактор добавляют смеси производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид бис(3-гуанидинопропил)пиперазина) и хлороформа, взятых в весовых соотношениях 160:1 до конечной концентрации 0,8% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.
Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.
Полученную вакцину 12 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.
Пример 13. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 7 часов.
Затем в биореактор добавляют смесь хлороформа и производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина), взятых в весовых соотношениях 40:1 до конечной концентрации 0,4% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.
Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.
Полученную вакцину 13 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.
Пример 14. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 37 °С. Через 8 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 8 часов.
Затем в биореактор добавляют смесь хлороформа и производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 3,6-диоксаоктан-1,8-дигуанидина), взятых в весовых соотношениях 160:1 до конечной концентрации 0,8% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 4 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.
Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.
Полученную вакцину 14 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.
Пример 15. Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 7 часов.
Затем в биореактор добавляют смесь хлороформа и производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида), взятых в весовых соотношениях 40:1 до конечной концентрации 0,4% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.
Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.
Полученную вакцину 15 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.
Пример 16.
Для изготовления моновалентной вакцины используют вирус ящура 01 Manisa, который культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 при температуре 36 °С. Через 6 часов культивирования осуществляют отбор проб через каждые 2 часа и подсчитывают живые и мертвые клетки. При достижении количества мертвых клеток более 95% отбор проб прекращают, а культивирование осуществляют еще в течение 8 часов.
Затем в биореактор добавляют смесь хлороформа и производных полигуанидинов (в частности, дигидрохлорид 4,9-диоксадодекан-1,2-дибигуанида), взятых в весовых соотношениях 160:1 до конечной концентрации 0,8% и передают вирусную суспензию в сборник с температурой 8 °С. После накопления необходимого количества вирусную суспензию подвергают сепарированию. Очистка вирусной суспензии путем добавления смеси производных полигуанидинов и хлороформа и последующее сепарирование позволяют максимально избавиться от фрагментов клеток и балластных белков, являющихся реактогенными факторами.
Осадок, содержащий фрагменты клеток и смесь хлороформа и производных полигуанидинов, отбрасывают, а осветленную вирусную суспензию отправляют на инактивацию. Инактивацию осуществляют путем добавления при перемешивании димера этиленимина до концентрации 0,04% и температуры до 30 °С. Необходимое содержание 146S-компонента в вакцинальной дозе вакцины получают путем концентрирования антигена на геле гидроокиси алюминия. Конечная концентрация 146S-компонента вируса ящура должна быть, по меньшей мере, 0,8 мкг/мл. Добавляют сапонин в качестве адъюванта.
Полученную вакцину 16 расфасовывают и проверяют на стерильность, авирулентность, безвредность, иммуногенную активность.
Качество вакцин 1-16, полученных согласно примерам 1-16, проводилось в сравнении с прототипом, данные приведены в таблице.
Таким образом, заявленный способ изготовления вакцины против ящура позволяет повысить в 1,3-1,7 раз уровень очистки вирусной суспензии от балластных примесей и в 1,3-1,5 раз повысить иммуногенность целевого продукта.
Группа | Содержание балластного белка (мг/мл) | Содержание ИмД 50 | Микробная контаминация (% случаев) |
Вакцина 1 | 0,61 | 16 | - |
Вакцина 2 | 0,56 | 18 | - |
Вакцина 3 | 0,52 | 16 | - |
Вакцина 4 | 0,60 | 16 | - |
Вакцина 5 | 0,54 | 18 | - |
Вакцина 6 | 0,52 | 16 | - |
Вакцина 7 | 0,58 | 18 | - |
Вакцина 8 | 0,56 | 18 | - |
Вакцина 9 | 0,60 | 16 | - |
Вакцина 10 | 0,54 | 16 | - |
Вакцина 11 | 0,54 | 16 | - |
Вакцина 12 | 0,60 | 18 | - |
Вакцина 13 | 0,58 | 18 | - |
Вакцина 14 | 0,61 | 16 | - |
Вакцина 15 | 0,58 | 16 | - |
Вакцина 16 | 0,56 | 16 | - |
Прототип (очистка хлороформом) | 0,89 | 12 | 100 |
Класс A61P31/12 противовирусные средства