способ получения сухого пробиотического препарата
Классы МПК: | A61K35/74 бактерии C12N1/02 выделение микроорганизмов из питательных сред |
Автор(ы): | Зинченко В.Б., Нахабин И.М., Падерин Ю.П., Перелыгин В.В., Похиленко В.Д. |
Патентообладатель(и): | Государственный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии |
Приоритеты: |
подача заявки:
1991-12-05 публикация патента:
20.08.1996 |
Использование: медицина, ветеринария, пробиотик, лечение дисбактериозов. Сущность изобретения: штамм энтеробактерий, например Bifidobacterium globosum БФ-4 или Streptococcus falcium ВГНКИ - 27, выращивают в жидкой питательной среде на основе ферментативного гидролизата казеина в течение 12-15 ч. Нативную культуральную жидкость охлаждают до температуры 15-20oC и концентрируют в 10-15 раз. Полученную концентрированную биомассу отмывают 2,5-3,5%-ным раствором сахарозы или лактозы и обезвоживают при температуре минус 25- минус 35oС. При этом концентрирование нативной культуральной жидкости проводят методом ультрафильтрации на полых волокнах или микрофильтрацией на плоских мембранах, или сепарированием в полупериодическом режиме работы. 3 з.п.ф-лы, 3 табл.
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3
Формула изобретения
1. Способ получения сухого пробиотического препарата путем выращивания культур энтеробактерий в жидкой питательной среде на основе ферментативного гидролизата казеина и сублимационного обезвоживания, отличающийся тем, что охлажденную до 15 20°С нативную культуральную жидкость концентрируют в 10-15 раз, затем полученную концентрированную биомассу отмывают 2,5-3,5%-ным раствором сахарозы или лактозы, а обезвоживание ведут при температуре минус 25- минус 35°С. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что концентрирование нативной культуральной жидкости проводят методом ультрафильтрации на полых волокнах с размером пор 15 000 Да в ламинарном потоке при перепаде давления 1,9 МПа и средней производительности по фильтрату 30 л/ч. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что концентрирование нативной культуральной жидкости проводят методом микрофильтрации на плоских мембранах с размером пор не более 3 мкм. 4. Способ по п.1, отличающийся тем,что концентрирование нативной культуральной жидкости проводят методом сепарирования в полупериодическом режиме работы при скорости вращения вала 9700 об/мин, расходе культуральной жидкости 40 л/ч и периодичности выгрузки 50 мин.Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к области медицины и ветеринарии, в частности к получению пробиотических препаратов для лечения и профилактики дисбактериозов, вызванных нарушением естественного баланса кишечной микрофлоры различной этиологии. Известно, что основным производственным путем получения медицинских препаратов на основе энтеробактерий (B.bifidum, Lb.acidohillum, Lb.plantarum, E. coli и др) является использование сублимационного метода обезвоживания взвеси живых микроорганизмов из культуральной жидкости. Одним из серьезных недостатков существующей технологии является длительность процесса обезвоживания препарата (60-65 и более часов) и достаточно высокий уровень брака (вспучивание, ухудшение показателей по активности, растворимости и т.д.). Указанное обстоятельство во многом объясняется свойствами нативных культуральных жидкостей с питательной средой на основе гидролизата казеина, в частности низкими значениями их эвтектических температур (минус 30-40oC), что в значительной степени сдерживает интенсификацию процесса. Цель изобретения сокращение длительности сублимационного обезвоживания и улучшения качества сухого препарата. Поставленная цель достигается следующим образом. Штаммы энтеробактерий (например, Bifidumbacterium globosum БФ-4, Streptococus falcium ВГНКИ-27) выращивают в ферментационных аппаратах в жидкой питательной среде на основе ферментативного гидролизата казеина в течение 12-15 ч. Культуральную жидкость (КЖ) захолаживают до температуры 15-20oC, концентрируют (микро- или ультрафильтрация, сепарирование) в 10-15 раз (по объему), отмывают от питательной среды замещающей жидкостью (ЗЭ), представляющей собой 2,5-3,5% раствор сахарозы или лактозы. Отмывку осуществляют путем разбавления концентрата замещающей жидкостью в соотношении 1:1 и повторного концентрирования до объема исходной суспензии. Отмывку проводят не менее двух раз. Отмытую концентрированную суспензию (КС) высушивают сублимационным способом в неразбавленном виде (или предварительно разводят ЗЖ до требуемой концентрации клеток) при температуре греющих поверхностей, обеспечивающих температуру препарата в период сублимации свободной влаги минус 25-35oC. ПРИМЕР 1. Культуру штамма Bifidobacterium globosum БФ-4 засевают в ферментационный аппарат с жидкой питательной средой, приготовленной на основе ферментативного гидролизата казеина и инкубируют при температуре 37![способ получения сухого пробиотического препарата, патент № 2065305](/images/patents/407/2065011/177.gif)
средняя производительность по фильтрату около 30 л/ч). Полученную КС замораживают до температуры минус 30oC и высушивают в течение 26-35 ч (табл. 1). Титр жизнеспособных клеток в образцах СБМ независимо от вида емкостей для высушивания (поддоны, флаконы) составляет от 600 до 2000 млрд. КОЕ/г (табл. 2). ПРИМЕР 3. Культуру штамма Bifidobacterium globosum БФ-4 получают как в примере 1, с тем отличием, что длительность инкубирования культуры составляет 15 ч, а титр жизнеспособных клеток в КЖ-8 млрд. КОЕ/мл. КЖ сгущают на сепараторе типа в 15 раз при полупериодическом режиме работы (скорость вращения вала 9700 об/мин, расход суспензии 40 л/ч, периодичность выгрузки 50 мин). Полученную КС отмывают 2,5% раствором лактозы, замораживают как в примере 1 и высушивают в установке ТГ-15 при максимальной загрузке (15 л) в течение 35 ч (табл. 1). ПРИМЕР 4. Культуру Streptococcus falcium штамм ВГНКИ 27 выращивают в жидкой питательной среде на основе ферментативного гидролизата казеина при температуре 37
![способ получения сухого пробиотического препарата, патент № 2065305](/images/patents/407/2065011/177.gif)
Класс C12N1/02 выделение микроорганизмов из питательных сред