производные метиленоксиндола, способ их получения и фармацевтическая композиция

Формула изобретения

1. Производные метиленоксиндола общей формулы



где R представляет собой группу



где R₄ водород, гидрокси-, С₁ С₆- алкокси-, С₂ С₆-аканоилокси-, карбокси-, нитрогруппу или группу NHR₇, в которой R₇ является водородом или С₁

С₆-алкилом;

R₅- водород, (С₁ С₆)-алкил или галоген;

R₆- водород или С₁ С₆-алкил;

n 0,1 или 2;

R₁ водород, С₁ С₆-алкил или С₂ - С₆-алканоил;

R₂ водород, С₁ С₆-алкил, галоген, цианогруппа, карбокси, нитрогруппа или группа NHR₇, в которой R₇ имеет указанные выше значения;

R₃ водород, С₁ С₆-алкил или С₂ - С₆-алканоил,

причем в случае, когда R₂ водород, С₁ С₆-алкил, галоген или цианогруппа, тогда R₃ водород, R и n имеют определенные выше значения и по крайней мере один из заместителей R₄, R₅ и R₆ отличен от водорода; в случае, когда R присоединен в положении 3 индольного кольца, n 0 и R₃ и R₆ каждый представляет собой водород или СН₃, тогда по крайней мере один из R₂, R₄ и R₅ отличен от водорода; в случае, когда R присоединен в положении 2 индольного кольца, n 0 и R₂, R₃, R₄ и R₅ каждый представляет собой водород, тогда R₆ отличен от метила, и в случае, когда R присоединен в положении 2 индольного кольца, n 0, R₂ СН₃ в положении 3 индольного кольца, R₃ СН и R₄ и R₅ представляют собой водород, тогда R₆ отличен от водорода или метила,

и его фармацевтически приемлемые соли.

2. Соединение по п.1, в котором R имеет значения, определенные в п.1, R₄ представляет собой гидрокси, амино-, нитро- или карбоксигруппу, и R₅ и R₆ являются водородом, R₁ представляет собой водород или С₁ С₆-алкил, n0 или 1, R₂ представляет собой водород, карбокси-, амино или нитрогруппу, R₃ представляет собой водород, или их фармацевтически приемлемые соли.

3. Соединение по п.1, в котором R имеет значения, определенные в п.1, R₄ представляет собой гидрокси-, амино- или карбоксигруппу, R₅ и R₆ представляет собой водород, n 0 или 1, R₁ водород, R₂ представляет собой водород, амино-или карбоксигруппу, R₃-водород, и его фармацевтически приемлемые соли.

4. Соединение, выбранное из группы 5-гидрокси-3-[(3"-индолил) метилен] -2-оксиндол, 3-[(5"-карбокси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол, 3-[(5"-амино-3"-индолил)метилен] -2-оксиндол, 5-карбокси-3-[(3"-индолил)метилен]-2-оксиндол, 5-амино-3-[(3"-индолил)метилен]-2-оксиндол, 5-гидрокси-3-[(5"-гидрокси- 3"-индолил)метилен] -2- оксиндол, 5-гидрокси-3-[(7"-гидрокси-3"-индолил)метилен] -2-оксиндол, 5-амино-3-[(5"-гидрокси3"-индолил) метилен]-2-оксиндол, 5-гидрокси-3-[(5"-амино-3"-индолил) метилен]-2-оксиндол, 5-карбокси-3-[(5"-гидрокси-3"индолил) метилен]-2-оксиндол, 5-гидрокси-3-[(5"-карбокси- 3"-индолил)метилен] -2-оксиндол, 5-амино-3[(7"-гидрокси-3"-индолил) метилен]-2-оксиндол, 5-карбокси-3-[(7"-гидрокси -3"-индолил) метилен]-2-оксиндол, 5-метокси-3-[(5"-метокси-3"-индолил)метилен]-2- оксиндол, 5-ацетокси-3-[(5"-ацетокси- 3"-индолил) метилен]-2-оксиндол, 3-[(5"-карбокси-3"-индолил)метилен] -2-оксиндол, 3-[(5"-амино-3"-индолил) метилен]-2-оксиндол, 3-[(5"-нитро-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол, или их фармацевтически приемлемые соли.

5. Способ получения соединения формулы I, или его фармацевтически приемлемой соли, отличающийся тем, что осуществляют концентрацию альдегида общей формулы II



где R₁, R₂, R₃ и n имеют значения, определенные в п.1,

с соединением общей формулы III



где R₄, R₅ и R₆ имеют значения, определенные в п.1,

с последующей в случае необходимости простой диэтерификацией полученного продукта, где одна или более из групп -OR₁ представляет собой С₁ С₆-алкокси, с получением соединения формулы I, где одна или более из групп OR₁ гидрокси, и/или последующим ацилированием полученного продукта, где одна или более из групп OR₁ и/или R₄ гидрокси, с получением соединения формулы I, где одна или более из групп -OR₁ и/или R₄-алканоилокси.

6. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей тирозинкиназу активностью, содержащая активное вещество и фармацевтически приемлемый наполнитель, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества содержит соединением формулы I по п.1 или его фармацевтически приемлемую соль в эффективном количестве.

7. Фармацевтическая композиция по п.6, отличающаяся тем, что она содержит в качестве активного вещества соединение, выбранное из 3-[(1"-метил-3" -индолил]-2-оксиндола, 3-[(3"-индолил) метилен]-1-метилл-2-оксиндола и их фармацевтически приемлемых солей.

8. Соединение или его соль по п.1 обладающее ингибирующей тирозинкиназу активностью.

9. Соединение или его соль по п.1, обладающее антипролиферативной активностью.

10. Соединение или его соль по п.1, обладающее противораковой активностью или активностью при лечении заболевания коронарной артерии.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к новым производным 3-метилен-2-оксиндола, к способу их получения, к фармацевтическим композициям, содержащим эти соединения и к использованию их в качестве терапевтических средств.

Из предшествующего уровня техники известны некоторые метилен-оксиндольные производные. Например, в WO-A-91/13055 описываются производные метилен-оксиндола, ингибирующие тирозинкиназу. В JP-A-3213847 описано использование метиленоксиндольных производных в качестве материалов для фотографии, при этом нет никаких указаний на наличие у них биологической активности. В публикации [an. J.Chem. Vol. 46, N 13, стр. 2189-2198 (1968) сообщается об испытании производных метилен-оксиндола против роста Bacillus subtilis, а в публикации Chem. Ber. Vol. 102 (4), 1347-1356 (1969) описывается синтез некоторых оксиндол производных 2- и 3-индола, однако не раскрывается никакая биологическая активность, которой обладали бы эти соединения.

Изобретение представляет соединения, имеющие следующую общую формулу (I)



где R представляет собой группу



в которой

R₄ представляет собой водород, гидрокси, (С₁-С₆)-алкокси-(С₂-С₆)-алканоилокси-

карбокси-, нитро-, или NHR₇-группу, в которой R₇ является водородом или (С₁-C₆)-алкилом;

R₅ представляет собой водород, (С₁-С₆)-алкил или галоген; и

R₆ представляет собой водород или (С₁ С₆)алкил;

n равен нулю, 1 или 2;

R₁ представляет собой водород, (С₁-С₆)-алкил, или (С₂-С₆)алканоил;

R₂ представляет собой водород, (С₁-С₆)-алкил, галоген, цианогруппу, карбоксил, нитро- или -NHR₇-группу, в которой R₇ имеет значения, указанные выше;

R₃ представляет собой водород, (С₁-С₆)-алкил или (С₂-C₆) алканоил; и их фармацевтически приемлемые соли; и в которых,

(i) когда в одно и то же время R₂ представляет собой водород, (С₁-С₆)алкил, галоген или цианогруппу, и R₃ является водородом, R₁ и n имеют значения, указанные выше, тогда по крайней мере один из R₄,R₅ и R₆ является иным, чем водород;

(ii) когда R связан с положением 3 индольного кольца, n=0 и R₃ и R₆ каждый представляет водород или CH₃, тогда по крайней мере один из R₂, R₄ и R₅ является отличным от водорода;

(iii) когда R связан с положением 2 индольного кольца, n=0 и R₂, R₃, R₄ и R₅ каждый представляет водород, тогда R₆ отличен от метила; и

(iv) когда R связан с положением 2 индольного кольца, n=0, R₂ представляет СН₃ в положении 3 индольного кольца, R₃ представляет СН₃, и R₄ и R₅ водород, тогда R₆ отличен от водорода или СН₃.

В соединениях изобретения каждый из заместителей R, -OR₁ и R₂ может независимо находиться или в бензольной, или в пиррольной части конденсированной системы колец, образующих индол.

Изобретение включает в свой объем все возможные изомеры, стереоизомеры, в частности Z и Е изомеры, и их смеси, метаболиты и предшественников метаболитов или биопредшественников (иначе известных как пролекарства) соединений формулы (I).

Предпочтительно, когда заместитель R связан с индольным звеном в положении 2 и 3, в особенности в положении 3.

Когда n равен 2, каждая из групп -OR₁ может быть одинаковой с другой или отличной от нее.

Предпочтительно, когда заместитель -OR₁ присоединен в положении 4,5,6 или 7, в особенности в положении 5 или 7.

Предпочтительно, когда заместитель R₂ связан с бензольным кольцом, в частности в положении 5.

Конечно, только один из заместителей R, -OR₁ и R₂ может быть связан с индольной системой колец в одном и том же положении.

Предпочтительно, чтобы заместитель R₄ находился в положении 4 или 5, в особенности в положении 5.

Когда R₄ представляет собой карбоксил, нитрогруппу или группу -NHR₇, в которой R₇ имеет установленные выше значения, предпочтительно, чтобы R₂ не имел такого же значения. Напротив, когда R₂ представляет собой карбоксил, нитрогруппу или группу -NHR₇, в которой R₇ имеет установленные выше значения, предпочтительно, чтобы заместитель R₄ был иным, чем карбоксильная группа, нитрогруппа или группа -NHR₇.

Алкильные группы и алкильные части алканоильных групп могут представлять собой прямые или разветвленные алкильные цепи. Предпочтительно, когда (С₁-C₆)-алкильная группа является (С₁-C₄)-алкильной группой, например, метилом, этилом, пропилом, изопропилом, бутилом, втор-бутилом или трет-бутилом, в особенности, метилом или этилом. Алканоильная группа (С₂-C₆) является предпочтительно (С₂-С₄)алканоильной группой, в частности, ацетилом, пропионилом или бутирилом. Галоген предпочтительно представляет собой хлор, бром или фтор, в особенности бром.

Фармацевтически приемлемые соли соединений изобретения включают соли, образовавшиеся при соединении с неорганической кислотой, например, с азотной, соляной, бромистоводородной, серной, хлорной и фосфорной кислотами, или с органической кислотой, например, с уксусной, пропионовой, гликолевой, молочной, щавелевой, малоновой, яблочной, малеиновой, винной, лимонной, бензойной, коричной, миндальной и салициловой кислотами, и соли с неорганическими основаниями, например, с основаниями щелочных металлов, особенно, натрия или калия, или с основаниями щелочно-земельных металлов, особенно, кальция или магния, или с органическими основаниями, например, с алкиламинами, предпочтительно с триэтиламином.

Как установлено выше, изобретение включает в свой объем также фармацевтически приемлемых био-предшественников (иначе известных как пролекарства) соединений формулы (I), т.е. соединения, которые имеют формулу, отличную от приведенной выше формулы (I), но которые, тем не менее, при введении в человеческий организм превращаются прямо или косвенно in vivo в соединение формулы (I). Предпочтительными соединениями изобретения являются соединения формулы (I), в которых R является таким, как установлено выше, R₄ представляет собой окси-, амино-, нитроили карбокси-группу, а R₅ и R₆ являются водородами, R₁ представляет собой водород или (С₁-C₆)алкил, n равен нулю или 1, R₂ представляет собой водород, карбокси-, амино- или нитро-группу, R₃ является водородом, и их фармацевтически приемлемые соли.

Более предпочтительными соединениями изобретения являются соединения формулы (I), в которых

R имеет установленные выше значения, R₄ представляет собой окси-, амино- или карбокси-группу, R₅ и R₆ являются водородами, n равен 0, или 1; R₁ представляет собой водород, R₂ представляет собой водород, амино- или карбокси-группу, R₃ является водородом, и их фармацевтически приемлемые соли.

Примерами характерных соединений изобретения являются следующие соединения, которые соответственно могут быть или Z- или Е-диастереоизомерами, или Z, Е-смесями упомянутых диастереоизомеров:

5-окси-3-[(3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

3-[(5"-карбокси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

3-[(5"-амино-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

5-карбокси-3-[(3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

5-амино-3-[(3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

5-окси-3-[(5"-окси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

5-окси-3-[(7"-окси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

3-[(5",7"-диокси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

5-амино-3-[(5"-окси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

5-окси-3-[(5"-амино-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

5-карбокси-3-[(5"-окси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

5-окси-3-[(5"-карбокси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

5-амино-3-[(7"-окси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

5-карбокси-3-[(7"-окси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

и в соответствующих случаях их фармацевтически приемлемые соли.

Соединения изобретения и их фармацевтически приемлемые соли могут быть получены по способу, заключающемуся в конденсации альдегида формулы (II)



где R₁, R₂, R₃ и n имеют установленные выше значения с соединением формулы (III)



в которой R₄, R₅ и R₆ имеют значения, установленные выше: и, если требуется, в превращении соединения формулы (I) в другое соединение формулы (I), и/или, если требуется, в превращении соединения формулы (I) в его фармацевтически приемлемую соль, и/или, если требуется, в превращении соли в свободное соединение, и/или, если требуется, в разделении смеси изомеров соединения формулы (I) на отдельные изомеры. Каждый из заместителей R₂, -OR₁ и -CHO в соединении формулы (II) может независимо находиться или в бензольной, или в пиррольной части индольного кольца.

Взаимодействие соединения формулы (II) с соединением формулы (III) является процессом, который аналогичен процессам, которые могут быть осуществлены в соответствии с известными методами, такими, какие описаны ниже, предпочтительно в присутствии основного катализатора, например, пиридина, пиперидина, диметиламина или подходящего гидроксида или алкоксида щелочного металла.

Например, реакция соединения формулы (II) с соединением формулы (III) может быть выполнена в условиях реакции Кновенагеля, как это описано, например, в G. Toncs, Organic Reactions , 204 (1967). Подходящим катализатором являются органические основания, такие, как пиридин, пиперидин или диэтиламин. Конденсация может быть выполнена в инертном органическом растворителе, например, в пиридине, этаноле, метаноле, бензоле или диоксане, при температурах, лежащих в области от 0 до 100^oС.

Предпочтительно осуществлять реакцию в теплом этанольном растворе в присутствии пиперидина в качестве катализатора.

Соединение формулы (I) может быть превращено в другое соединение формулы (I) в соответствии с известными методами. Например, деэтерификация соединения формулы (I), в котором один или более заместителей R₁ представляют собой (С₁-С₆)-алкилы, с целью получения соединения формулы (I), в котором один или более заместителей R₁ являются водородом, может быть выполнена методами, хорошо известными в органической химии. В случае простого метилового эфира фенола отщепление может быть выполнено, например, с трибромидом бора, как описано в I.F.N.Mc Omic, Tetrahedron 2289 (1968). Рекомендуется использовать 1 моль трибромида бора на каждую эфирную группу вместе с молярным избытком реагента на каждую группу, содержащую, возможно, азотистое основание или кислород. Реакция может быть выполнена в инертном органическом растворителе, таком, как метиленхлорид, пентан или бензол, в инертной атмосфере, например, азота, при температурах, лежащих в области от -70^oС до комнатной температуры.

Ацилирование соединения формулы (I), в которой один или более -OR₁ и/или R₄ являются оксигруппами, с целью получения соответствующего соединения формулы (I), в котором один или более -OR₁ и/или R₄ являются (С₂-С₆)-алканоилоксигруппами, может быть осуществлено взаимодействием с реактивным производным подходящей карбоновой кислоты, таким, как ангидрид или галоиндангидрид, в присутствии щелочного агента, при температурах, лежащих в области от 0 до 50^oС. Предпочтительно выполнять ацилирование взаимодействием с соответствующим ангидридом в присутствии органического основания, такого, как пиридин.

Необязательное получение соли соединения формулы (I), так же, как и конверсия соли в свободное соединение, и разделение смеси изомеров на отдельные изомеры, может быть выполнено обычными методами.

Например, разделение смеси геометрических изомеров, например, -изомеров, может быть выполнено фракционной кристаллизацией из подходящего растворителя или хроматографией или колоночной хроматографией, или жидкостной хроматографией с высоким давлением.

Соединения формулы (II) могут быть получены в соответствии с известными способами из соединений формулы (IV)



Например, производные 3-формилиндола формулы (II) могут быть получены из соединения формулы (IV) методом формилирования с N-метилформанилидом формулы (IV) методом формилирования с N-метилформанилидом и хлорангидридом фосфорной кислоты в соответствии с хорошо известным способом Вильсмайера-Хаака (см. обзор в W. G.Jackson et al. I. Am. Chem. Soc. 533). Когда занимается положение 3, образуются производные 2-формилиндола.

Соединения формулы (III) и (IV) являются известными, или могут быть получены известными методами из известных соединений.

Фармакология

Соединения изобретения обладают специфическим ингибирующим действием на тирозинкиназу. Следовательно, они могут быть полезны при лечении рака и других паталогических состояний, связанных с разрастаниями, например, для ингибирования развития атеросклеротических бляшек, у млекопитающих, включая человека.

Типичными терапевтическими показаниями, соответствующими последнему случаю применения, являются реокклюзия, следующая за пластической операцией на коронарных сосудах, и при общем ослаблении заболевания коронарной артерии.

Последние исследования на молекулярном уровне опухолевых перерождений идентифицировали семейство генов, соответствующих плану онкогенов, чья искаженная экспрессия вызывает онкогенез. Например, RNA онковирусов обладает такой онкогенной последовательностью, чья экспрессия определяет опухолевую конверсию инфицированных клеток. Некоторые из таких онкогеннозакодированных протеинов, такие, как рр60^V-Src, р70^gag-ges, р130^gag-fps и р70^gag-fgr, показывают активность протеина тирозинкиназы, т.е. они катализируют переход -фосфата из аденозинтрифосфата (АТР) в остатки тирозина в субстрате протеина. В нормальных клетках активность тирозинкиназы показывают некоторые рецепторы фактора роста, например, рецепторы для PDGF, EGF, a-TGF и инсулина. Связывание фактора роста (GF) активирует рецептор тирозинкиназы для аутофосфорилирования и для осуществления фосфорилирования близкорасположенных молекул на тирозине.

Поэтому полагают, что фосфорилирование этих рецепторов тирозинкиназы играет важную роль в сигнальной трансдукции и что основной функцией активности тирозинкиназы в нормальных клетках является регулирование роста клетки. Пертурбация этой активности онкогенными тирозинкиназами, которые или перепроизведены, и/или показывают измененную специфичность субстрата, может вызвать потерю контроля роста и/или опухолевое разрастание. Соответственно специфический ингибитор тирозинкиназ может быть полезен при исследовании механизма канцерогенеза, разрастания клетки и дифференциаций, и он может быть действенным для предупреждения и химиотерапии рака и других паталогических разросшихся образований.

Специфическая протеиновая активность тирозинкиназы соединений изобретения показана в описанных ниже опытах.

Очистка V-abl-киназы

Используют энзим тирозинкиназы p95^v-abl Абельсона (Abelson), который получают и выделяют следующим образом: 1 л культуры НВ-130 клеток в LB-среде, дополненной ампициллином, выращивают при 30^oС, как описано в Wang et al. J. Biol. Chem. 64 (1985). Экспрессию v-abl-протеина индуцируют сдвигом температуры до 42^oС в течение 3-4 ч. Бактериальные клетки собирают на лед, центрифугируют и замораживают в жидком азоте. Клеточный осадок лизируют, как описано в Ferguson et al. J. Biol. Chem. 3652 (1985), и в Biochem J. 321 (1989). Коротко, бактериальные протеины удаляют дифференциальной солюбилизацией с дексихолятом натрия, NaCl и -октилглюкопиранозидом на различных стадиях. Нерастворимый v-abl-протеин солюбилизируют 2М KSCN, и подвергают диализу против 100 объемов 50 мМ Трис-HCl, рН 7,5, 1 мМ ЭДТК и 0,1 мМ дитиотреитола (буфер А). Растворимые протеины разделяют хроматографически на анионообменной колонке, набитой Мono-Q, в системе f.p.l.c. Активность v-abl элюируют с линейным градиентом КСl (0-1 М буфера А). Активные фракции объединяют, готовят 50%-ную композицию с глицерином, и хранят небольшими аликвотами при -20^oС.

Проверка фосфолилирования основных протеинов миелина

Проверка in vitro основного протеина миелина в качестве субстрата выполняют следующим образом: фосфорилирование протеина осуществляют, выдерживая в термостате 40 нг очищенной v-abl-киназы, 1,5Ci[-³²p] АТР, 10 М холодного АТР, 56 М основного протеина миелина в 50 мкл 25 мМ Трис-HCl, рН 8,0, содержащее 10 мМ MgCl₂, 0,1 мМ дитиотреитола (буфер киназы) при 22^oС. Реакцию останавливают путем добавления равных объемов буфера для электрофореза двойной концентрации Laemmli [U. K. Laemmli, Nature (London) 680 (1970). Образцы снова кипятят в течение 3 мин, и разделяют в SDS-PAGE (15% акриламид). Гели сушат и выдерживают на пленках для авторадиографии в течение 15-30 мин при -70^oС. Полосы локализируют авторадиографией, вырезают из геля и считают в жидкостном сцинтилляционном счетчике.

Проверка аутофосфорилирования

Для проверки аутофосфорилирования, v-abl-киназу иммуноосаждают антителами антифосфотирозина, и образующийся иммуннокомплекс анализируют в 50 мкл буфера киназы в присутствии 10 мкМ АТР и 10Ci[-³²p] -АТР. После 15-мин выдержки при комнатной температуре реакцию останавливают кипящим Laemmli-буфером. Образцы снова кипятят в течение 3 мин и разделяют в SDS-PAGE (8% акриламида). Гели сушат и выдерживают на пленках для авторадиографии до 3 ч при -70^oС. Полосы локализируют авторадиографией, вырезают и считают как описано выше.

Ниже соединение, представляющее изобретение, сравнивается с соответствующим негидроксилированным аналогом, который охватывается общей формулой заявки на патент ВОИС 91/13055. Сравнение показывает, что введение гидроксильной группы существенно усиливает ингибиторную активность при аутофосфорилировании, в то время как действенность по отношению к экзогенным субстратам возрастает только немного.

Проверка фосфорилирования основного протеина миелина, IC₅₀ (мкM) (мМ)

5-окси-3-[(3"-индолил)метилен]-2-оксиндол 0,4

3-[(3"-индолил)метилен]-2-оксиндол 0,6

Проверка аутофосфорилирования, IС₅₀ (мкМ) (мМ)

5-окси-3-[(3"-индолил)метилен]-2-оксиндол 0,4

3-[(3"-индолил)метилен]-2-оксиндол 10

Ввиду их высокой активности и низкой токсичности, соединения изобретения можно безопасно применять в медицине. Например, найдено, что острая токсичность (IС₅₀) соединений изобретения для мышей, определенная путем разового введения возрастающих доз и измеренная на седьмой день после обработки, является незначительной.

Соединения изобретения могут вводиться в различных лекарственных формах, например, при оральном введении в виде таблеток, капсул, таблеток, покрытых сахаром или пленкой, жидких растворов или суспензий, при ректальном введении

в виде суппозитория, при парентеральном введении в виде внутримышечных или внутривенных инъекций или вливаний, или локально.

Дозировка зависит от возраста, веса, состояния пациента и способа введения, например, дозировка, принятая для взрослого человека, при оральном введении, может составлять от 10 до 150-200 мг на дозу при приеме 1-5 раз в день. Конечно, схема приема лекарства может быть отрегулирована таким образом, чтобы получить оптимальный терапевтический отклик.

Изобретение включает в себя фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (I), или его фармацевтически приемлемую соль, в соединении с фармацевтически приемлемым наполнителем (который может быть носителем или разбавителем).

Целью изобретения является также применение соединения формулы (I), определение которой дано выше, или его фармацевтически приемлемой соли, для производства лекарственного препарата для использования в качестве ингибитора тирозинкиназы, в частности как противоракового средства или средства, препятствующего разрастанию (антипролиферативного). Фармацевтические композиции, содержащее соединения изобретения, обычно получают традиционными методами и назначают в фармацевтически подходящей форме.

Например, твердые оральные формы могут содержать, наряду с активным соединением, разбавители, например, лактозу, глюкозу, сахарозу, целлюлозу, кукурузный или картофельный крахмал, связывающие вещества, например, двуокись кремния, тальк, стеариновую кислоту, стеарат магния или кальция, и/или полиэтиленгликоли, связующие вещества, например, крахмалы, аравийскую камедь, желатин, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу или поливинилпирролидон, дезагрегирующие вещества, например, крахмал, альгиновую кислоту, альгинаты или крахмал гликолят натрия, смеси, бурно выделяющие газы, подслащивающие вещества, смачиватели, такие как лецитин, полисорбаты, лаурилсульфаты и вообще нетоксические и фармакологически неактивные вещества, которые используются в технологии приготовления лекарственных средств. Упомянутые фармацевтические препараты могут быть получены известным способом, например, посредством смешения, гранулирования, таблетирования, способами, включающими нанесение сахарного и пленочного покрытия. Жидкая дисперсия для орального применения может быть, например, сиропом, эмульсией или суспензией.

Сироп может содержать такой носитель, как, например, сахароза, или сахароза с глицерином и/или маннитом, и/или сорбитом.

Суспензии и эмульсии могут содержать такие носители, как, например, натуральная камедь, агар, альгинат натрия, пектин, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза или поливиниловый спирт.

Суспензии или растворы для внутримышечных инъекций могут содержать, вместе с активным соединением, фармацевтически приемлемый носитель, например, стирильную воду, оливковое масло, этилолеат, гликоли, например, пропиленгликоль, и, если желательно, подходящее количество хлористоводородного лидокаина.

Растворы для внутривенных инъекций или вливаний могут содержать такие носители, как, напримеp, стерильная вода, или предпочтительно они могут быть в виде стерильных, водных, изотонических солевых растворов.

Суппозитории могут содержать, вместе с активным соединением, фармацевтически приемлемый носитель, например, масло какао, полиэтиленгликоль, поверхностноактивный сложный эфир полиоксиэтиленсорбитана и жирной кислоты, или лецитин.

Композиции для локального применения, например, кремы, лосьоны или пасты, могут быть получены смешением активного ингредиента с обычным маслянистым или эмульсифицирующим инертным наполнителем.

Еще одной целью изобретения является комбинированный способ лечения рака млекопитающих, включая человека, при необходимости такого лечения, причем упомянутый способ включает введение: 1) соединения формулы (I), или его фармацевтически приемлемой соли, и 2) дополнительного противоопухолевого средства, в достаточном количестве и почти вместе в течение времени, достаточного для получения полезного лечебного эффекта.

Целью изобретения является также предложить продукты, содержащие соединение формулы (I), или его фармацевтически приемлемую соль, и дополнительное противоопухолевое средство как комбинированный препарат для одновременного, раздельного или последующего применения при антираковой терапии. Термин "противоопухолевое средство" означает, что он охватывает как одно лекарственное средство, так и "коктейли", т.е. смесь таких лекарственных средств, соответствующих клинической практике.

Противоопухолевыми средствами, которые могут входить в состав препаратов, содержащих соединение изобретения, или, напротив, могут назначаться при комбинированном способе лечения, являются, например, доксорубицин, дауномицин, эпирубицин, идарубицин, этопозид, флюкроурацил, мефалан, циклофосфамид, блеомицин, винбластин и митомицин, или смесь двух или более этих соединений.

Соединения изобретения могут, следовательно, использоваться при лечении для уменьшения интенсивности рака. Они могут назначаться пациенту, страдающему излечимой формой рака, с противоопухолевым средством, например, с гликозидом антрациклина, таким, как доксорубицин, дауномицин, эпирубицин или идарубицин, как упоминалось выше, вместе с антипролиферативным средством. Соединение изобретения и противоопухолевое средство, такое, как гликозид антрациклина, могут назначаться для улучшения состояния пациента, имеющего лейкемию, такую, как миелобластную лейкемию, лимфому, саркому, нейтробластому, опухоль Вильмса, или злокачественное образование мочевого пузыря, молочной железы, легкого или щитовидной железы.

Пример 1. 5-Окси-3-[(3"-индолил)метилен]-2-оксиндол [1, R как определен, n=0, R₂=R₃=R₅=R₆=H, R₄=5-OH]

Раствор 3-индолкарбоксальдегида (145 мг, 1 ммол), 5-окси-2-оксиндола (149 мг, 1 ммол) и пиперидина (60 мг, 0,7 ммол) в абсолютном этаноле (10 мл) нагревают в течение 3 ч при 60^oС в атмосфере азота. Затем реакционную смесь охлаждают и выпаривают в вакууме досуха. Остаток подвергают колоночной хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента метиленхлорид с 4% этанола. Таким образом получают чистое соединение, названное в заголовке, с 60% выходов (166 мг). По другому способу реакционную смесь концентрируют в вакууме, и затем охлаждают до 0-5^oС, осадок отфильтровывают, остаток промывают охлажденным льдом этанолом и, наконец, высушивают в вакууме. Более чистые соединения получают последующей кристаллизацией из этанола.

С₁₇H₁₂N₂O₂ содержит, С 79,89, Н 4,38, N 10,14

найдено, С 73,51, Н 4,21, N 9,92

Масс-спектр m/z: 276.

ИКС см^-1 (КВr): 3600-2500 (NH, OH), 1650 (CO), 1600, 1580, 1530, 1480 (С=С).

Т.пл. 293^oС (с разлож.).

В соответствии с вышеописанной методикой могут быть получены следующие соединения:

5-карбокси-3-[(3-индолил)метилен]-2-оксиндол,

5-амино-3-[(3-индолил)метилен]-2-оксиндол,

5-окси-3-[(5"-окси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

Масс-спектр m/z: 282,

ИКС см^-1 (КВr): 3600-2600 (NH, OH)- 1655 (CO), 1605, 1585, 1535 (С=С),

5-окси-3-[(7"-окси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

3-[(5-7"-диокси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

5-амино-3-[(5"-окси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

5-окси-3-[(5"-амино-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

5-карбокси-3-[(5"-окси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

5-окси-3-[(5"-карбокси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

5-амино-3-[(7"-окси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

5-карбокси-3-[(7"-окси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

5-метокси-3-[(5"-метокси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

5-ацетокси-3-[(5"-ацетокси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

3-[(5"-карбокси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

C₁₈H₁₂N₂O₃ содержит, С 71,04, Н 3,98, N 9,21

найдено, С 70,83, Н 4,6, N 8,85.

Масс-спектр m/z: 304.

Т.пл. >330^oС (разл.).

ИКС см^-1 (КВr) 3600-3000 (NН), 3000-2100 (OH), 1710 (СO), 1640, 1620, 1600, 1550 (аром):

3-[(5"-амино-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

С₁₇H₁₃N₃O содержит, С 74,14, Н 4,71, N 15,26

найдено, С 73,88, Н 4,51, N 14,91

Масс-спектр m/z: 275.

Т.пл. 250^oС (с разлож.).

ИКС см^-1 (КВr): 3300, 2380 (NH), 1670 (CO), 1600, 1510 (С=С),

3-[(5"-нитро-3"-индолил)метилен]-оксиндол,

С₁₇H₁₁N₃O₃ содержит, С 66,88, Н 3,63, N 13,76

найдено, С 66,58, Н 3,74, N 13,64

Масс-спектр m/z: 305.

Т.пл. >350^oС

ИКС см^-1 (КВr): 3350, 3230 (NH), 1680 (СО), 1620, 1605,

1580 (С=С), 1530, 1340 (NO₂),

3-[(1"-метил-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол,

С₁₈H₁₄N₂O содержит, С 78,81, Н 5,14, N 10,21,

найдено, С 78,42, Н 5,17, N 10,00,

Масс-спектр m/z: 274.

Т.пл. 230^oС (с разлож.)

ИКС см^-1 (КВr): 3300-2000 (NH), 1680 (CO), 1610, 1600, 1570, 1500 (C=C),

3-[(3"-индолил)метилен]-1-метилен-2-оксиндол,

C₁₈H₁₄N₂O содержит, С 78,81, Н 5,14, N 10,21

найдено, С 78,61, Н 5,16, N 10,23,

Масс-спектр m/z: 274.

Т.пл. 274^oС

ИКС см^-1 (КВr): 3220 (NH), 1676 (CO), 1605, 1500, 1490 (С=С).

Пример 2. 5-Окси-3-[(5"-окси-3-индолил)метилен]-2-оксиндол

[1, R имеет установленное выше значение, n=1, R₁=R₂=R₃=R₅=R₆=H, R₄=5-OH]

Исходным материалом для деэтерификации в этом примере является 5-метокси-3-[(5"-метокси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол, который может быть получен в соответствии с методикой, описанной в примере 1.

К перемешиваемому раствору 5-метокси-3-[(5"-метокси-3"-индолил)метилен] -2-оксиндола (310 мг, 1 ммол) в безводном дихлорметане (10 мл) при -78^oС, в атмосфере азота, в течение 10 мин, добавляют 1,0 М раствор трехбромистого бора в дихлорметане (3 мл, 3 ммол). Образовавшуюся смесь перемешивают еще в течение 1 ч при -78^oС, и затем позволяют нагреваться до комнатной температуры. После перемешивания в течение 1,5 ч при 20-25^oС смесь охлаждают до -10^oС и затем гасят добавлением по каплям воды 910 мл) в течение 10 мин. После добавления этилацетата органический слой отделяют, промывают водой, сушат над Na₂SO₄ и упаривают в вакууме досуха. Остаток кристаллизуют из этанола, и получают, таким образом, 198 мг чистого соединения, названного в заголовке (выход 70%).

С₁₇H₁₂N₂O₃ содержит, С 72,33, Н 4,29, N 6,38

найдено, С 71,22, Н 4,07, N 6,29

Масс-спектр m/z: 282.

ИКС см_-1 (КВr): 3600-2600 (NH, OH), 1655 (CO), 1605, 1585, 1535 (C=C).

В соответствии с вышеописанной процедурой и принимая за исходные соединения соответствующие простые метиловые эфиры, можно получить гидроксильные соединения, упомянутые в примере 1.

Пример 3. 5-Ацетокси-3-[(5"-ацетокси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол

[1, R имеет установленное выше значение, n=1, R₁=Ас, R₄=5-0 Ас, R₂=R₃= R₅=R₆=H]

Исходным материалом для ацилирования в этом примере является 5-окси-3-[(5"-окси-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол, который может быть получен в соответствии с процедурами, описанными в примерах 1 и 2.

К охлажденному раствору 5-окси-3-[(5"-окси-3"-индолил)-метилен]-2-оксиндола (282 мг, 1 ммол) в сухом пиридине (0,5 мл) добавляют ангидрид уксусной кислоты (306 мг, 3 ммол), смесь выдерживают при 0-5 ^oС в течение ночи. После этого смесь концентрируют в вакууме, остаток растворяют в дихлорметане, органический слой промывают водой и затем упаривают при уменьшенном давлении. Сырой продукт кристаллизуют из смеси хлороформ-метанол, и получают чистое соединение, названное в заголовке, с 80%-ным выходом (301 мг).

С₂₁H₁₆N₂H₅ содержит, С 67,02, Н 4,29, N 7,44

найдено, С 66,91, Н 4,05, N 7,29

Масс-спектр m/z: 376.

ИКС см_-1 (КВr): 3600-3200 (NH), 1750 (OH₃СOO), 1650 (СONH), 1600, 1580, 1530 (С=C).

В соответствии с процедурой, описанной выше, гидроксильные соединения, получение в примерах 1 и 2, могут быть превращены в соответствующие (С₂-С₆)-алканоилоксипроизводные.

Пример 4. 5-Нитро-3-индолальдегид

[11, n=0, R₂=5-NO₂= R₂=H]

Смесь N-метилформанилида (176 мг, 1,3 ммол) и хлорангидрида фосфорной кислоты (199 мг, 1,3 ммол) перемешивают в течение 15 мин при 20 25^oС в атмосфере азота, затем добавляют раствор 5-нитроиндола (162 мг, 1 ммол) в 1,2-дихлорэтане (5 мл), и смесь нагревают при температуре кипения с обратным холодильником в течение 3 ч. После охлаждения смесь выливают в ледяную воду, осадок отфильтровывают и промывают водой. После этого остаток хроматографируют на силикагеле, используя в качестве элюента бензо/л

С₉H₆N₂O₃ содержит, С 56,85, Н 3,18, N 14,73

найдено, С 56,79, Н 3,01, N 14,51

Масс-спектр m/z: 190.

ИКС см^-1 (КВr): 3140, 3090 (NH), 1650 (CO), 1511, 1345 (NO₂)

Эти промежуточные нитросоединения, кроме того, что они приводят к конечным продуктам формулы (I) с группой R₂=NO₂, могут также дать начало конечным продуктам с группой R₂=NH₂, которые возможно получить из первых восстановлением.

Аналогичным образом можно получить следующие соединения, содержащие защитную группу, которые, после удаления защитной группы на соответствующей стадии синтеза, также дают в результате продукт формулы (I) со свободной карбоксильной (R₂=СООН) и свободной гидроксильной группой (R₂=OH) соответственно: 3-карбометокси-3-индолальдегид и 3-метокси-3-индолальдегид.

Пример 5. Получают следующие таблетки, каждая из которых весит 0,150 г и содержит 25 мг активного соединения:

Состав (на 10000 таблеток):

5-окси-3-[(3"-индолил)метилен]-2-оксиндол 250 г

лактоза 800 г

кукурузный крахмал 415 г

порошок талька 30 г

стеарат магния 5 г

Смешивают 5-окси-3-[(3"-индолил)метилен]-2-оксиндол, лактозу, и половину кукурузного крахмала, смесь затем просеивают через сито с размером отверстий 0,5 мм. Кукурузный крахмал (10 г) суспендирут в теплой воде (90 мл), полученную пасту используют для гранулирования порошка. Гранулят сушат, измельчают на сите с размером пор 1,4 мм, затем добавляют оставшееся количество крахмала, тальк и стеарат магния, тщательно перемешивают и перерабатывают в таблетки.

Пример 6. Готовят капсулы, каждая из которых содержит дозу 0,200 г, в том числе 20 мг активного вещества.

Состав для 500 капсул:

3-[(5"-амино-3"-индолил)метилен]-2-оксиндол 10 г

лактоза 80 г

кукурузный крахмал 5 г

стеарат магния 5 г

Эту формулировку инкапсулируют в твердые желатиновые капсулы, состоящие из двух частей, и дозируют по 0,200 г в каждую капсулу.