аналоги витамина d, способы его получения, промежуточное соединение, фармацевтическая композиция

Формула изобретения

1. Аналоги витамина D формулы I



где X - водород, гидрокси или защищенный гидрокси;

R¹ и R² - водород, метил или этил;

Q - С₃-С₆гидрокарбилен, где гидрокарбилен означает бирадикал, полученный после удаления двух атомов водорода из прямого или разветвленного, насыщенного или ненасыщенного углеводорода, в котором одна любая СН₂-группа может быть необязательно заменена на атом кислорода или карбонильную группу, таким образом, что атом углерода (С-22), непосредственно связанный с С-20, представляет собой sp²- или sp³-гибридизированный атом углерода, т. е. связан с двумя или тремя другими атомами; и в котором другая из СН₂-групп может быть заменена на фенилен и Q может быть необязательно замещен одной или несколькими гидрокси- или С₁-С₄-алкоксигруппами.

2. Диастереоизомер соединения по п. 1 в чистом виде или смесь диастереоизомеров соединения по п. 1.

3. Соединение по п. 1, представляющее собой

a) 1(S), 3(R)-дигидрокси-20-(4-метил-1-пентил)-9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е), 10(19), 17(20)(Z)-тетраен,

b) 1(S), 3(R)-дигидрокси-20-(4-гидрокси-4-метил-1-пентил)-9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е), 10(19), 17(20)(Z)-тетраен,

c) 1(S), 3(R)-дигидрокси-20-(4-гидрокси-4-метил-1-пентил)-9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е), 10(19), 17(20)(Е)-тетраен,

d) 1(S), 3(R)-дигидрокси-20-(1,5-дигидрокси-5-этил-2-гептин-1-ил)-9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е), 10(19), 17(20)Z-тетраен, оба 22-изомера,

e) 1(S), 3(R)-дигидрокси-20-(1-этокси-5-этил-5-гидрокси-2-гептин-1-ил)-9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е), 10(19), 17(20)Z-тетраен, оба 22-изомера,

f) 1(S), 3(R)-дигидрокси-20-(5-этил-5-гидрокси-гепта-1(Е), 3(Е)-диен-1-ил)-9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е), 10(19), 17(20)Z-тетраен,

g) 1(S), 3(R)-дигидрокси-20-[3-(2-гидрокси-2-пропил)-феноксиметил] -9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е), 10(19), 17(20)Z-тетраен,

h) 1(S), 3(R)-дигидрокси-20[(3-этил-3-гидрокси-6-гексил)оксиметил] -9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е), 10(19), 17(20)Z-тетраен,

i) 1(S), 3(R)-дигидрокси-20-(1,5-дигидрокси-5-этил-1-гептил)-9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е), 10(19), 17(20)Z-тетраен, оба 22-изомера.

4. Способ получения соединения формулы I по п. 1, в котором а) боковую цепь, прикрепленную к С-20 (или ее защищенную спиртом форму), в соединении I получают из 1(S), 3(R)-бис(трет-бутилдиметилсилилокси)-20-формил-9,10-секопрегна-5(Е), 7(Е), 10(19), 17(20)(Z)-тетраена или из 1(S), 3(R)-бис-(трет-бутилдиметилсилилокси)-20-формил-9,10-секопрегна-5(Е), 7(Е), 10(19), 17(20)(Е)-тетраена, или их соответствующих 5(Z)-изомеров, либо (i) в результате реакции с солью лития билдинг-блока боковой цепи HCC(CH₂)_nCR₂-OPG (PG= защитная группа), где n= 0, 1 или 2, R - метил или этил, а PG - триметилсилил, полученного реакцией с бутиллитием, в растворителе, либо (ii) в результате реакции с реактивом Гриньяра ВrМg (CH₂)_nC(R)O-Si(СН₃)₃, где n= 2, 3 или 4, а R - метил или этил, в растворителе, и b) соединение с вышеописанной стадии (а) необязательно (i) отделяют от диастереоизомеров, (ii) подвергают триплет-сенсибилизированной фотоизомеризации в 5(Z)изомер, (iii) алкилируют по 22-гидроксигруппе C₁-С₃ алкил-бромидом или -иодидом в присутствии основания и катализатора межфазного переноса в растворителе, и (iv) удаляют силильную группу.

5. Способ получения соединения формулы I по п. 1, в котором а) боковую цепь, прикрепленную к С-20, получают из 1(S), 3(R)-бис-(трет-бутилдиметилсилилокси)-20-формил-9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е), 10(19), 17(20)(Z)-тетраена или его соответствующего 17(20)(Е)-изомера взаимодействием с реагентом типа Виттига (C₆H₅)₃Р= СН-СН= СН-СООR, где R - метил или этил, в растворителе, и b) соединение с вышеописанной стадии (а) подвергают взаимодействию с металоорганическим реагентом R¹Li (R¹= метил или этил), с последующим удалением силильной группы.

6. Способ получения соединения формулы I по п. 1, в котором боковую цепь, прикрепленную в С-20 в соединении I, получают из 1(S), 3(R)-бис-(трет-бутилдиметилсилилокси)-20-формил-9,10-секопрегна-5(Е), 7(Е), 10(19), 17(20)(Z)-тетраена или 1(S), 3(R)-бис-(трет-бутилдиметилсилилокси)-20-формил-9,10-секопрегна-5(Е), 7(Е), 10(19), 17(20)(Е)-тетраена, или их соответствующих 5(Z)-изомеров, в результате a) восстановления 20-СНО группы до соответствующей 20-СН₂ОН группы и либо b) алкилирования 20-СН₂ОН группы билдинг-блоком боковой цепи Наl-(СН₂)_n-СR₂-OSi(СН₃)₃, где Hal - Сl, Вr или I, n= 2, 3 или 4, a R - метил или этил, в присутствии основания и катализатора межфазного переноса в растворителе, либо c) превращение гидроксигруппы соединения 20-СН₂ОН с вышеописанной стадии (а) в отщепляемую группу, а именно, либо (i) в низший алканоат, такой как пивалат, в результате взаимодействия с пивалоилхлоридом, пиридином и 4-диметиламинопиридином в дихлорметане; этот низший алканоат подвергают взаимодействию с реактивом Гриньяра HalMg(CH₂)_nCR₂X, где Hal= Сl, Вr или I, n= 2, 3 или 4, а R - метил или этил, Х - Н или OSi(СН₃)₃, в присутствии Li₂CuCl₄ в тетрагидрофуране с последующим удалением, в случае, если X - OSi(СН₃)₃, силильной группы боковой цепи частичным десилилированием с помощью пиридиний-п-толуол-сульфоната в этаноле, либо (ii) в хлорид или бромид в результате реакции с N-хлорсукцинимидом или N-бромсукцинимидом и диметилсульфидом в дихлорметане; этот хлорид или бромид подвергают взаимодействию с 3-(2-окси-2-пропил)-фенолятом натрия в N, N-диметилформамиде, и d) (i) триплет-сенсибилизированной фотоизомеризации соединения с вышеописанных стадий (b) или (с), и (ii) десилилирования указанного соединения с помощью тетра-н-бутиламмоний фторида.

7. Промежуточное соединение для синтеза соединений формулы I и его аналогов, представляющее собой

a) 1(S), 3(R)-бис-(трет-бутилдиметилсилилокси)-20-формил-9,10-секопрегна-5(Е), 7(Е), 10(19), 17(20)(Z)-тетраен и соответствующий 5(Z) изомер,

b) 1(S), 3(R)-бис-(трет-бутилдиметилсилилокси)-20-формил-9,10-секопрегна-5(Е), 7(Е), 10(19), 17(20)(Е)-тетраен и соответствующий 5(Z) изомер,

c) 1(S), 3(R)-бис-(трет-бутилдиметилсилилокси)-20-гидроксиметил-9,10-секопрегна-5(Е), 7(Е), 10(19), 17(20)(Z)-тетраен и соответствующий 5(Z) изомер,

d) 1(S), 3(R)-бис-(трет-бутилдиметилсилилокси)-20-гидроксиметил-9,10-секопрегна-5(Е), 7(Е), 10(19), 17(20)(Е)-тетраен и соответствующий 5(Z) изомер.

8. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью по ингибированию пролиферации опухолевых клеток, содержащая эффективное количество одного или нескольких соединений по пп. 1-3 вместе с фармацевтически приемлемыми, нетоксичными носителями и/или вспомогательными агентами.

9. Фармацевтическая композиция по п. 8 в виде лекарственной единицы, содержащей от 0,1 млн^-1 до 0,1 мас. % лекарственной единицы соединения формулы I.

Описание изобретения к патенту

Данное изобретение относится к неизвестному до настоящего времени классу соединений, проявляющих сильную активность в индуцировании дифференциации и ингибировании нежелательной пролиферации некоторых клеток, включая клетки кожи и раковые клетки, а также иммуномодулирующее и противовоспалительное действие, к фармацевтическим препаратам, содержащим эти соединения, к лекарственным формам таких препаратов и к их применению при лечении и/или профилактике заболеваний, характеризуемых аномальной дифференциацией и/или пролиферацией клеток, таких как, например, псориаз и другие нарушения кератинизации, ВИЧ-ассоциированные дерматозы, заживление ран, рак, включая рак кожи, заболеваний или нарушений иммунной системы, таких как реакция "хозяин против трансплантата" и "трансплантат против хозяина", отторжение трансплантата и аутоиммунные заболевания, такие как дискоидная и системная красная волчанка, сахарный диабет и хронические дерматозы аутоиммунного типа, например склеродермия и обыкновенная пузырчатка, воспалительных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, а также ряда других болезненных состояний, включая гиперпаратиреоидизм, особенно вторичный гиперпаратиреоидизм, ассоциированный с почечной недостаточностью, ухудшение познавательной способности или старческая деменция (болезнь Альцгеймера) и другие нейродегенеративные заболевания, гипертензия, акне, алопеция, атрофия кожи, например, вызываемая стероидами атрофия кожи, старение кожи, включая старение под воздействием света, и к их применению для стимулирования остеогенеза и лечения/профилактики остеопороза и остеомаляции.

Соединения в соответствии с данным изобретением составляют новый класс аналогов витамина D, представленых общей формулой I:



где Х - водород, гидрокси или защищенный гидрокси; R¹ и R² - водород, метил или этил, либо R¹ и R² вместе с атомом углерода, несущим группу X, могут образовывать С₃-С₅ карбоциклическое кольцо; Q - С₃-С₆гидрокарбилен, где гидрокарбилен означает бирадикал, полученный после удаления двух атомов водорода из прямого или разветвленного, предельного или непредельного углеводорода, в котором одна из любых СН₂-групп может быть необязательно замещена атомом кислорода или карбонильной группой, таким образом, чтобы атом углерода (С-22), непосредственно связанный с С-20, представлял собой гибридизированный атом углерода sp² или sp³, т.е. связанный с двумя или тремя другими атомами; и в котором другая из СН₂-групп может быть замещена фениленом, и где Q может необязательно быть замещен одной или несколькими гидрокси- или С₁-С₄-алкоксигруппами.

Примеры соединений формулы I в порядке иллюстрации, но не ограничения, включают горизонтальные позиции в Таблице 1, где для удобства группу Q рассматривают как составленную из сегментов Qa-Qf, при этом все пропуски подразумевают прямую связь, таким образом, что Qa непосредственно связана с С-20, a R¹ имеет такие же значения, как и R², если не указано иначе. Таким образом, сегменты внутри Q, такие как метилен, метен (в парах смежных атомов, т. е. атомов углерода, соединенных двойными связями), метин (в соприкасающихся парах смежных атомов, т.е. атомов углерода, соединенных тройными связями), фенилен (иллюстрируемый м-фениленом), алкилиден (иллюстрируемый 1,1-пропилиденом), гидроксиметилен, алкоксиметилен (иллюстрируемый этоксиметиленом), кето и окса могут быть объединены с получением боковых цепей, фактически идентичных (за исключением 17,20-двойной связи) цепям, известным из различных активных аналогов витамина D.

Соединения в соответствии с данным изобретением могут иметь несколько диастереоизомерных форм (например, Е- или Z-конфигурацию 17,20-двойной связи, а также любой некольцевой двойной связи, присутствующей в группе Q; R- и S-конфигурации, если в Q присутствует гидроксигруппа, алкоксигруппа или разветвляющий атом). Настоящее изобретение включает все эти диастереоизомеры в чистом виде, а также их смеси. Кроме того, также предусматриваются пролекарства I, в которых одна или несколько гидроксигрупп замаскированы в виде групп, которые могут быть вновь превращены в гидроксигруппы in vivo.

Соединения формулы I могут быть получены в кристаллическом виде либо непосредственно путем концентрации из органического растворителя, либо путем кристаллизации или перекристаллизации из органического растворителя или смеси указанного растворителя и сорастворителя, который может быть органическим или неорганическим, таким как вода. Кристаллы могут быть выделены в практически свободном от растворителя виде или в виде сольвата, такого как гидрат. Данное изобретение включает все кристаллические модификации и формы, а также их смеси.

Был описан ряд аналогов витамина D, проявляющих некоторую степень селективности в благоприятствовании индуцирующей дифференциацию клеток/ингибирующей пролиферацию клеток активности in vitro по сравнению с воздействием на метаболизм кальция in vivo, что измеряется по повышенной концентрации кальция в сыворотке и/или повышенном выделении кальция с мочой), которое ограничивает безопасно вводимую дозу таким неблагоприятным воздействием. Один из первых таких аналогов, кальципотриол (INN) или кальципотрен (USAN), был разработан на основе такой селективности и теперь признан во всем мире как эффективное и безопасное лекарственное средство для местного лечения псориаза.

Исследование с другим аналогом, выбранным на этой основе, подтверждает то мнение, что систематически вводимые аналоги витамина D могут ингибировать пролиферацию раковых клеток молочной железы in vivo при субтоксических дозах (Colston, K.W. et al., Biochem. Pharmacol., 44, 2273-2280 (1992)).

Было описано многообещающее иммунодепрессивное действие аналогов витамина D (Binderup, L., Biochem Pharmacol., 43, 1885-1892 (1992)). Так, серия 20-этимерных аналогов витамина D была идентифицирована в качестве сильных ингибиторов активации Т-лимфоцитов in vitro (Binderup, L. et al., Biochem. Pharmacol. , 42, 1569-1575 (1991)). Два из этих аналогов, МС 1288 и КН 1060, при систематическом введении обнаружили иммунодепрессивное действие in vivo на экспериментальных животных моделях. Дополнительное или синергическое действие наблюдалось в сочетании с небольшой дозой циклоспорина А. КН 1060, применяемый отдельно или в сочетании с циклоспорином А, также проявил способность предотвращать аутоиммунную деструкцию трансплантированных островков у мышей с диабетом, не являющимся диабетом "тучных" (Bouillon, R. et al., In: Vitamin D, Proceedings of the Ninth Workshop on Vitamin D, Orlando, Florida, Walter de Gruyter, Berlin, 1994, p. 551-552). MC 1288 оказался способным продлевать жизнь сердечных трансплантатов и трансплантатов тонкого кишечника у крыс (Johnsson, С. et al. In: Vitamin D, Proceedings of the Ninth Workshop on Vitamin D, Orlando, Florida, Walter de Gruyter, Berlin, 1994, p. 549-550). Однако во всех этих исследованиях дозы аналогов, вызывающие существенную иммунодепрессию, также индуцируют повышение уровня кальция в сыворотке. Поэтому имеется насущная потребность в новых сильнодействующих аналогах, обладающих приемлемым сочетанием пролонгированной лечебной активности и минимального токсического действия.

В данном изобретении предлагается не описанная до настоящего времени серия аналогов витамина D, отличающаяся наличием двойной связи между С-17 и С-20.

21-Нор-17(20)-еновые аналоги витамина D описаны в ЕР 0717034, однако единственные, ранее описанные аналоги витамина D с двойной связью С-17,20 и сохраненной С-21 метилгруппой представляют собой аналоги с тройной связью С-22,23 (WO 94/01398). Соединения в соответствии с данным изобретением расширяют диапазон типов боковых цепей, обеспечивая более полный выбор боковых цепей, ранее известных по аналогам витамина D существующего уровня техники.

Было обнаружено, что эти соединения обладают исключительно высокой иммунодепрессивной активностью наряду с высокой активностью по ингибированию пролиферации опухолевых клеток.

В данном описании использованы следующие стандартные сокращения:

18С6 = 18-Краун-6

AIBN = 2,2"-азобисизобутиронитрил

b.p. = температура кипения

Вu = н-бутил

Вu^t = трет-бутил

DIBAH = диизобутилалюминийгидрид

DMAP = 4-диметиламинопиридин

DMF = N,N-диметилформамид

DMR = реактив Десса-Мартина = 1,1,1-триацетокси-1,1-дигидро-1,2-бенз-йодоксол-3(1Н)-он

Et = этил

Эфир = диэтиловый эфир

Fg = функциональная группа

LDA = литий диизопропиламид

Lg = отщепляемая группа

Me = метил

m.р. = температура плавления

РСС = пиридиний хлорхромат

РDС = пиридиний дихромат

Ph = фенил

PPTS = пиридиний п-толуолсульфонат

Рy = пиридин

r.o.s. = "остаток последовательности"

ТВАВr = тетра-н-бутиламмоний бромид

TBAF = тетра-н-бутиламмоний фторид

ТВАОН = гидроокись тетра-н-бутиламмония

TBAHSО₄ = кислая сернокислая соль тетра-н-бутиламмония

TBS = трет-бутилдиметилсилил

Tf = трифторметансульфонил

TFA = трифторуксусная кислота

THF = тетрагидрофуран

ТНР = тетрагидро-4Н-пиран-2-ил

TMS = триметилсилил

Тоl = толуол

Тs = 4-толуолсульфонил

Как показано в Таблице 1, соединения формулы I могут быть получены при помощи общих способов, изображенных на Схемах 1 и 3. На Схеме 1 альдегид 1а, являющийся билдинг-блоком ядра витамина D, превращают в ключевое промежуточное соединение, тип II (Схема 2), через промежуточные соединения 2, 3 или 4.

На Схеме 2 показан способ получения каждого типа соединения II, т.е. IIа, IIb, IIc, IId и IIе из соединений 2, 3 и 4. В Таблице 2 и препаративных примерах 1-6, 10, 18, 31 и 34 синтез некоторых соединений типов IIа, IIb и IIc описан более подробно.

На Схеме 3 синтез соединений I из ключевых промежуточных соединений II (а-е) описан в общем виде. Более подробные описания синтеза предпочтительных соединений I, перечисленных в Таблице 1, приведены в "Способах синтеза 1-7" и далее в "Препаративных примерах" (Таблица 3) и Примерах (Таблица 4).

Соединения II вначале подвергают взаимодействию с билдинг-блоками боковой цепи Fg-Z-W с получением промежуточных соединений J-Q_p-Z-W. Fg - реакционноспособная функциональная группа, тип которой указан в "Способах синтеза 1-7"; Z - связывающая группа, которая вместе с Q_p образует остаток боковой цепи, который может быть либо идентичным Q в соединении I, либо альтернативно может представлять собой остаток, который может быть превращен в Q на любой последующей стадии синтеза; Q_р - часть Q, которая может быть идентична либо Qa, либо Qa, Qb, либо Qa, Qb, Qc в зависимости от конкретного способа синтеза, либо Q_p может быть подобным же образом превращена в Qa, либо Qa, Qb, либо Qa, Qb, Qc далее во время синтеза; W - либо идентичен группе CX(R¹)(R²) в соединении I, либо может быть подобным образом превращен в нее далее во время синтеза.

Остальные стадии синтеза включают описываемые ниже операции 1-4, в дальнейшем называемые "остаток последовательности", сокращенно "r.o.s.", эти операции могут быть выполнены в любом желаемом порядке, в соответствии с требованиями в отношении синтеза каждого конкретного получаемого Соединения I:

1. Необязательная конверсия группы Q_p-Z в Q.

2. Необязательная конверсия группы W в C(R¹)(R²)(X).

3. Необязательная конверсия группы N_E/N_CD в группу N_z посредством

a) триплет-сенсибилизированной фотоизомеризации триеновой структуры витамина D (5E в 5Z) или

b) удаления силила, окисления до кетона и реакции сочетания Хорнера с билдинг-блоком 5 А-кольца Схемы 3 (см., например, WO 94/14766).

4. Превращение группы N_Z в группу М путем удаления силильных защитных групп ядра витамина D.

Способы синтеза 1-7

Способы, представленные на Схемах 4-9, основаны на методиках, описанных для получения аналогов витамина D, имеющих 17,20-одинарную связь с конфигурацией либо "20-нормальная", либо "20-эпи" вместо 17,20-двойной связи соединений в соответствии с данным изобретением.

Приведены ссылки на известные способы, в которых описаны детали экспериментов.

Используются следующие определения:

R³ = C₁-C₅алкил; Y = галоген. Другие символы и сокращения имеют вышеуказанные значения.

Рефераты материалов и постеры, представленные на Десятом семинаре по витамину D, Страсбург, Франция - 24-29 мая 1997 г., упоминаемые в данной заявке, опубликованы:

a) Bretting, С. et al., pp. 77-78;

b) Calverley, M. et al., pp. 30-51;

c) Hansen, К. et al., pp. 87-88;

d) von Daehne, W. et al., pp. 81-82

in Vitamin D: Chemistry, Biology and Clinical Applications of the Steroid Hormone (Editors Norman, A.W., Bouillon, R.; Thomasset, M.), University of California, Riverside, 1997.

Данные соединения предназначены для применения в фармацевтических композициях, которые могут быть использованы для местного или системного лечения вышеописанных заболеваний людей и животных.

Данные соединения могут применяться в сочетании с другими фармацевтическими препаратами или способами лечебного воздействия. При лечении псориаза данные соединения могут быть использованы в сочетании, например, со стероидами или другими видами лечения, например светом или УФ-светом либо PUVA-лечением (пероральное введение псоралена и последующее воздействие длинноволновым ультрафиолетовым светом). При лечении рака данные соединения могут быть использованы в сочетании с другими противораковыми лекарственными препаратами или видами лечения, такими как лучевая терапия. В целях профилактики отторжения трансплантата и реакции "трансплантат против хозяина" данные соединения могут быть преимущественно использованы в сочетании с другими иммунодепрессивными/иммунорегулирующими лекарственными препаратами или видами лечения, например с циклоспорином А.

Необходимое количество соединения формулы I (в дальнейшем называемого "активным ингредиентом") для получения терапевтического эффекта зависит, разумеется, от конкретного соединения, способа введения и млекопитающего, подвергаемого лечению. Соединения в соответствии с данным изобретением могут быть введены парентеральным, интраартикулярным, энтеральным или местным способом. Они хорошо абсорбируются при энтеральном введении, которое является предпочтительным способом введения при лечении системных нарушений. При лечении дерматологических заболеваний, таких как псориаз, или глазных болезней предпочтительными являются местные или энтеральные формы.

Несмотря на то, что активный ингредиент может быть введен отдельно как сырой химический продукт, предпочтительно его введение в виде фармацевтического состава. В подходящем случае активный ингредиент составляет от 0,1 части на млн до 0,1 мас.% состава.

Таким образом, составы в соответствии с данным изобретением для лечения как животных, так и людей, включают активный ингредиент в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем и, необязательно, с другими лечебными ингредиентами (ингредиентом). Носители (носитель) должны быть "приемлемы" в смысле совместимости с другими ингредиентами состава и невредными для его реципиента.

Составы включают таковые, например, в виде, пригодном для перорального, офтальмологического, ректального, парентерального (включая подкожное, внутримышечное и внутривенное), трансдермального, интраартикулярного и местного, назального или трансбукального введения.

Термин "лекарственная единица" подразумевает единичную, т.е. разовую дозу, которая может быть введена пациенту и которая может быть легко обработана и упакована, оставаясь при этом в виде физически и химически устойчивой единичной дозы, включающей либо активный материал как таковой, либо его смесь с твердыми или жидкими фармацевтическими наполнителями или носителями.

Удобно, чтобы составы были представлены в виде единичной (разовой) лекарственной формы и могут быть получены любым способом, хорошо известным в фармации. Все способы включают стадию соединения активного ингредиента с носителем, составляющим один или несколько дополнительных ингредиентов. В целом составы получают посредством получения равномерного и однородного сочетания активного ингредиента с жидким носителем или тонкоизмельченным твердым носителем, либо с тем и другим, а затем при необходимости формования продукта в желаемом виде.

Составы в соответствии с данным изобретением, пригодные для перорального введения, могут иметь вид отдельных единиц, таких как капсулы, саше, таблетки или пастилки, каждая из которых содержит заранее установленное количество активного ингредиента; порошка или гранул; раствора или суспензии водной или безводной жидкости; эмульсии "масло-вводе" или "вода-в-масле". Активный ингредиент также может быть введен в виде болюса, электуария или пасты.

Составы для ректального введения могут быть в виде суппозитория, включающего активный ингредиент и носитель, либо в виде клизмы.

Составы, пригодные для парентерального введения, в удобном виде включают стерильный масляный или водный препарат активного ингредиента, предпочтительно изотонический с кровью реципиента. Трансдермальные составы могут быть в виде пластыря.

Составы, пригодные для интраартикулярного или офтальмологического введения, могут иметь вид стерильного водного препарата активного ингредиента, который может находиться в микрокристаллическом виде, например в виде водной микрокристаллической суспензии. Липосомальные составы или биоразрушаемые полимерные системы также могут быть использованы для введения активного ингредиента как при интраартикулярном, так и при офтальмологическом способе введения.

Составы, пригодные для местного или офтальмологического введения, включают жидкие или полужидкие препараты, такие как линименты, лосьоны, гели, аппликации, эмульсии "масло-в-воде" или "вода-в-масле", такие как кремы, мази или пасты; либо растворы или суспензии, такие как капли.

Составы, предназначенные для введения в нос или щечный карман, включают порошок, саморазбрызгивающиеся и разбрызгиваемые составы, такие как аэрозоли и распылители.

Помимо вышеуказанных ингредиентов составы в соответствии с данным изобретением могут включать один или несколько дополнительных ингредиентов, таких как разбавители, связывающие вещества, консерванты и т.д.

Композиции могут также содержать другие терапевтически активные соединения, обычно применяемые для лечения вышеупомянутых патологических состояний, такие как другие иммунодепрессанты при лечении иммунологических заболеваний, или стероиды при лечении дерматологических заболеваний.

Данное изобретение также относится к способу лечения пациентов, страдающих от одного из вышеуказанных патологических состояний, включающему введение пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества одного или нескольких соединений формулы I, отдельно или в сочетании с одним или несколькими другими терапевтически активными соединениями, обычно применяемыми при лечении указанных патологических состояний. Лечение данными соединениями и/или другими терапевтически активными соединениями может быть одновременным или с интервалами.

При системном лечении вводят суточные дозы от 0,001-2 мкг на килограмм массы тела, предпочтительно от 0,002-0,3 мкг/кг массы тела млекопитающего, например 0,003-0,2 мкг/кг соединения формулы I, что обычно соответствует суточной дозе для взрослого человека от 0,2 до 15 мкг. При местном лечении дерматологических заболеваний наносят мази, кремы или лосьоны, содержащие от 0,1-500 мкг/г, предпочтительно, от 0,1-100 мкг/г, соединения формулы I. При местном применении в офтальмологии наносят мази, капли или гели, содержащие от 0,1-500 мкг/г, предпочтительно от 0,1-100 мкг/г соединения формулы I. Пероральные композиции изготавливают предпочтительно в виде таблеток, капсул или капель, содержащих от 0,05-50 мкг, предпочтительно от 0,1-25 мкг соединения формулы I на лекарственную единицу.

Данное изобретение далее проиллюстрировано следующими неограничивающими Общими методиками, Препаративными примерами и Примерами.

Общие методики, Препаративные примеры и Примеры

Проиллюстрированные соединения I приведены в Таблице 4, промежуточные соединения общей формулы II приведены в Таблице 2, а другие промежуточные соединения приведены в Таблице 3.

Общие указания

Тетрагидрофуран сушат над натрием/бензофеноном. Реакции обычно проводят в атмосфере аргона, если не указано иначе.

В стандартной процедуре обработки органический слой отделяют, промывают водой и насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом магния и упаривают в вакууме, получая продукт, который очищают хроматографией или кристаллизацией.

Относительно ¹Н ядерных магнитно-резонансных спектров (300 МГц) и ¹³С ЯМР (NMK) (75,6 МГц) приведены величины химических сдвигов () (в частях на млн) (ppm), для растворов дейтериохлороформа относительно внутреннего стандарта - тетраметилсилана (=0,00) или хлороформа (=7,25), или дейтериохлороформа (=76,81 для ¹³С ЯМР). Приведена величина мультиплета, определенного (дублет (d), триплет (t), квартет (q)) или не определенного (m), приблизительно в средней точке, если не указан интервал (s = синглет, b = широкий).

Общая методика 1

Фотоизомеризация

Раствор соответствующего соединения (N=N_E) (0,28 ммоль), антрацена (0,1 г) и триэтиламина (0,20 мл, 1,4 ммоль) в дихлорметане (16 мл) в 25-мл круглодонной колбе из стекла Пирекс облучают приблизительно при 10^oС ультрафиолетовым светом от ультрафиолетовой лампы высокого давления, тип TQ760Z2 (Hanau), мощностью 700 Вт, в течение 30 минут (15 минут при количестве соединения 0,08 ммоль) при перемешивании. Реакционную смесь выпаривают в вакууме, а остаток обрабатывают петролейным эфиром (22 мл) и фильтруют. Фильтрат концентрируют и очищают хроматографией, получая соединение, где N=N_Z.

Вариант: Общая методика 1а

Следуют Общей методике 1 за исключением того, что вместо антрацена применяют 9-ацетилантрацен и облучение проводят в течение 45 минут лампой TQ150Z2 (Hanau) вместо лампы и времени, используемых в Общей методике 1.

Вариант: Общая методика 1b

Следуют Общей методике 1, за исключением того, что вместо антрацена применяют 9-ацетилантрацен (25 мг), вместо дихлорметана применяют толуол (20 мл) и облучение проводят 500-Вт лампой в течение 10 минут (5 минут при количестве соединения 0,05 ммоль) вместо 700-Вт лампы в течение 30 минут.

Общая методика 2

Снятие защиты с применением HF

К перемешиваемому раствору соответствующего силилзащищенного соединения (0,25 ммоль) в этилацетате (1,5 мл) добавляют ацетонитрил (6 мл), а затем 5% раствор фтористоводородной кислоты в ацетонитриле-Н₂О 7:1 (2,0 мл). После перемешивания еще в течение 45-60 минут добавляют 1 М гидрокарбонат калия (10 мл) и реакционную смесь подвергают стандартной обработке (этилацетат). Остаток очищают хроматографией (элюент: 30% пентана в этилацетате), получая желаемое соединение 1.

Общая методика 3

Снятие защиты с применением тетра-н-бутиламмоний фторида

К раствору соответствующего силилзащищенного соединения (0,18 ммоль) в тетрагидрофуране (4,5 мл) добавляют тригидрат тетра-н-бутиламмоний фторида (0,29 г, 0,9 ммоль) и смесь нагревают с обратным холодильником в течение часа при перемешивании. После добавления 0,2 М двууглекислого натрия (5 мл) смесь подвергают стандартной обработке (этилацетат). Остаток очищают хроматографией (элюент: 30% пентана в этилацетате), получая желаемое соединение I.

Общая методика 4

(ср. Способ 4)

Реакция соединения IIа с билдинг-блоком, образующим ацетиленовую боковую цепь

К раствору соответствующего билдинг-блока, образующего ацетиленовую боковую цепь (3,0 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (5 мл), охлажденному до -78^oС и перемешиваемому в атмосфере аргона, по каплям в течение 2 минут добавляют раствор н-бутиллития (1,6 М в гексане, 1,5 мл). Перемешивание продолжают при -78^oС в течение 15 минут, а затем при 20^oС в течение еще 15 минут. Смесь вновь охлаждают до -78^oС и по каплям в течение 4 минут добавляют раствор соответствующего альдегида, соединение IIа, (1,5 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (5 мл), после этого перемешивание продолжают при -78^oС в течение 30 минут. Реакционную смесь подвергают стандартной обработке с простым эфиром, получая сырой продукт, содержащий изомерные 22-гидроксисоединения А (менее полярные) и В (более полярные). Их разделяют хроматографией (смесь этилацетата и петролейного эфира в качестве элюента) с получением чистых соединений.

Общая методика 5

(ср. Способ 4)

Алкилирование ацетиленового С-22-гидроксисоединения (R³=H) до соответствующего соединения, где R³=C₁-C₅

К раствору соответствующего 22-гидроксисоединения (R³=H) (0,5 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (5 мл) добавляют при перемешивании при 20^oС в атмосфере аргона 20% суспензию гидрида калия в минеральном масле (0,2 мл), а затем алкилирующий агент, R³Y (1,5 ммоль). Затем в течение 5 минут добавляют раствор 18-крауна-6 (0,13 г) в безводном тетрагидрофуране (2 мл). Перемешивание при 20^oС продолжают в течение двух часов, после чего реакционную смесь подвергают стандартной обработке с простым эфиром. Сырой продукт очищают хроматографией (смесь простого эфира и петролейного эфира в качестве элюента), получая желаемое алкоксисоединение.

Препаративный пример 1

Соединения 201 и 202

К раствору 1(S),3(R)-ди(трет-бутилдиметилсилилокси)-20(S)-формил-9,10-секопрегна-5(Е), 7(Е), 10(19),16-тетраена (W. von Daehne et al., постер на X Семинаре по витамину D, Страсбург, 1997 г., WO 98/24762) (3; N=N_E, 20S-изомер) (2,28 г, 4 ммоль) в дихлорметане (20 мл) добавляют при перемешивании тетра-н-бутиламмоний бромид (258 мг, 0,8 ммоль), а затем 2 н. водную гидроокись натрия (10 мл). После перемешивания при комнатной температуре в течение 40 минут смесь разбавляют дихлорметаном (20 мл) и водой (30 мл). Органическую фазу отделяют и водный слой экстрагируют дихлорметаном (40 мл). Соединенные органические экстракты промывают водой (425 мл) и рассолом (25 мл), сушат над сульфатом магния и выпаривают в вакууме, получая смесь соединений 201 (Z-форма) и 202 (Е-форма) в соответствующем молярном соотношении, составляющем 95: 5. Разделение двух соединений осуществляют хроматографией на силикагеле (элюент: 2,5-5% эфир в петролейном эфире), получая менее полярный Z-изомер 201 и более полярный Е-изомер 202, оба в виде бесцветных кристаллов (из эфира-метанола).

Соединение 201

¹H NMR 0.06 (m, 12H), 0.85 (s, 9H), 0.90 (s, 9H), 0.95 (s, 3H), 1.70 (bs, 3H), 1.50-2,70 (m, 14H), 2.87 (m, 1H), 4.23 (m, 1H), 4.53 (m, 1H), 4.96 (m, 1H), 4.99 (m, 1Н), 5.92 (d, 1H), 6.43 (d, 1H), 10.2 (s, 1H).

М.р. 113-114^oС

Анал. подсч. для С₃₄Н₅₈О₃Si₂: С 71,52, Н 10,24. Найдено: С 71,51, Н 10,19.

UV (EtOH, нм): _max 265 ( 35900)

IR (KBr) 1665, 1620 см^-1

Соединение 202

¹H NMR 0.06 (m, 12H), 0.83 (s, 3H), 0.84 (s, 9H), 0.89 (s, 9H), 1.80 (bs, 3H), 1.50-2.0 (m, 8H), 2.23 (dd, 1H), 2.33 (m, 2H), 2.57 (dd, 1H), 2.88 (m, 2H), 3.09 (dd, 1H), 4.22 (m, 1H), 4.53 (m, 1H), 4.96 (m, 1H), 4.99 (m, 1H), 5.91 (d, 1H), 6.44 (d, 1H), 9.99 (s, 1H).

M.p. 109-110^oC

Анал. подсч. для С₃₄Н₅₈О₃Si₂ + 570.3925, найдено 570.39

UV (EtOH, нм): _max 268 ( 37500)

IR (KBr) 1670, 1620 см^-1

Препаративный пример 2

Соединения 201 и 202

Замещая 1(S), 3(R)-ди(трет-бутилдиметилсилилокси)-20(R)-формил-9-10-секопрегна-5(Е), 7(Е), 10(19), 16-тетраен (W. von Daehne et al., постер на X Семинаре по витамину D, Страсбург, 1997 г., WO 98/24762) (3; N=N_E, 29R-изомер) на соответствующий 203-изомер в методике Препаративного примера 1, получают аналогичную смесь соединений 201 и 202 (приблизительное молярное соотношение 95:5).

Препаративный пример 3

Соединения 211 и 212

Цианид калия (7,0 г) (токсичный) перемешивают в охлаждаемом льдом растворе 1(S), 3(R)-ди(трет-бутилдиметилсилилокси)-20-оксо-9,10-секопрегна-5(Е), 7(Е), 10(19)-триена; 1b (N=N_E) (К.Hansen et al., in: Vitamin D: Gene Regulation, Structure-Function Analysis and Clinical Application; Norman, A.W., Bouillon, R. , Thomasset, M., Eds.; de Gruyter, Berlin, 1991, pp. 161-162) (3,0 г) в смеси этанола (30 мл) и уксусной кислоты (15 мл) в течение 30 минут. После перемешивания в течение 21 часа при комнатной температуре смесь фильтруют. К фильтрату добавляют воду (45 мл), а осадок собирают и сушат в вакууме. Осадок растворяют в безводном пиридине (5 мл) и при 0^oС добавляют хлорокись фосфора (1,3 г). После перемешивания в течение 22 часов при комнатной температуре реакционную смесь распределяют между водой (150 мл) и эфиром (150 мл). Органическую фазу промывают водой (150 мл) и рассолом (100 мл), сушат сульфатом магния и выпаривают досуха в вакууме. В результате хроматографии на силикагеле дихлорметаном/петролейным эфиром 2:1 получают разделенные продукты, соединение 211 (Е-форма) и соединение 212 (Z-форма) в соотношении приблизительно 3:1.

Соединение 211

¹³С NMR 169.7, 153.3, 140.1, 136.5, 121.0, 120.0, 117.6, 106.7, 99.8, 69.9, 67.0, 55.9, 48.8, 43.7, 36.4, 36.2, 32.7, 28.2, 25.6, 25.6, 22.9, 22.5, 18.0, 17.9, 15.8, 15.3, -5.0, -5.1, -5.1.

Соединение 212

¹³C NMR 170.4, 153.3, 140.6, 136.3, 121.1, 119.2, 117.3, 106.8, 97.2, 70.0, 67.0, 55.5, 48.4, 43.7, 36.5, 35.2, 30.5, 28.4, 25.6, 25.6, 22.9, 22.0, 18.0, 17.9, 17.8, 16,7, -5.0, -5.1, -5.1.

Препаративный пример 4

Соединение 202

Раствор соединения 211 (50 мг) в толуоле (2 мл) охлаждают до -78^oС и добавляют раствор диизобутилалюминийгидрида (83 мкл, 20% в гексане). После перемешивания при -78^oС в течение 30 минут и при комнатной температуре в течение 27 часов смесь перемешивают с насыщенным водным хлоридом аммония (4 мл) в течение 30 минут. Смесь экстрагируют этилацетатом (50 мл). Органическую фазу промывают водой (20 мл) и рассолом (20 мл), сушат над сульфатом магния и выпаривают досуха в вакууме. В результате хроматографии на силикагеле с эфиром/петролейным эфиром 1:10 получают целевое соединение.

¹³С NMR 193.4, 171.9, 153.3, 140.6, 136.3, 127.9, 121.1, 117.5, 106.7, 70.0, 67.0, 54.6, 49.8, 43.7, 36.5, 36.4, 28.3, 28.2, 25.7, 25.6, 23.0, 18.0, 17.9, 15.4, 10.0, -5.0, -5.1, -5.1.

Препаративный пример 5

Соединение 203

К перемешиваемому раствору соединения 201 (366 мг, 0,64 ммоль) в тетрагидрофуране (3 мл) последовательно добавляют при 0^oС 0,4 М раствор гептагидрата хлорида церия (III) в метаноле (1,6 мл), метанола (3 мл) и боргидрида натрия (60,8 мг, 1,6 ммоль). После перемешивания при 0^oС в течение 40 минут реакционную смесь разбавляют этилацетатом (40 мл) и добавляют воду (15 мл). Органическую фазу отделяют, промывают водой (10 мл) и рассолом (10 мл), сушат над сульфатом магния и выпаривают в вакууме. Остаточное масло очищают хроматографией на силикагеле (элюент: 5% этилацетат в петролейном эфире), получая целевое соединение в виде бесцветного масла.

¹H NMR 0.05 (m, 12H), 0.75 (s, 3H), 0.85 (s, 9H), 0.89 (s, 9H), 1.69 (bs, 3H), 2.46-0.60 (m, 14H), 2.56 (dd, 1H), 2.84 (dd, 1H), 3.95 (d, 1H), 4.22 (m, 1Н), 4.34 (d, 1H), 4.53 (m, 1Н), 4.94 (m, 1H), 4.98 (m, 1Н), 5.87 (d, 1H), 6.44 (d, 1H).

Препаративный пример 6

Соединение 204

Замещая соединение 202 на соединение 201 в методике Препаративного примера 5, получают изомерное соединение 204.

¹H NMR 6.44 (d, 1H), 5.86 (d, 1H), 4.98 (m, 1H), 4.94 (m, 1Н), 4.53 (m, 1Н), 4.22 (m, 1Н), 4.04 (s, 2H), 2.84 (m, 1Н), 2.56 (dd, 1H), 2.60-0.60 (m, 14H), 1.79 (bs, 3H), 0.89 (s, 9H), 0.85 (s, 9H), 0.75 (s, 3H), 0.05 (m, 12H).

Препаративный пример 7

Соединения 301 и 302

Перемешиваемый раствор соединения 201 (17,1 мг, 0,03 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (2 мл) охлаждают до -78^oС и при помощи шприца добавляют 1,6 М бутиллитий в гексане (0,04 ммоль). После перемешивания при -78^oС еще в течение 20 минут реакцию гасят несколькими каплями воды и нагревают до комнатной температуры. Реакционную смесь разбавляют эфиром (20 мл), промывают водой (45 мл), сушат над сульфатом магния и выпаривают в вакууме, получая смесь соединений 301 (менее полярный, изомер А) и 302 (более полярный, изомер В) в молярном соотношении, составляющем приблизительно 1:2. Два изомера могут быть разделены хроматографией на силикагеле (элюент: 10% эфир в петролейном эфире).

Соединение 301

¹H NMR 0.05 (m, 12H), 0.80 (s, 3H), 0.85 (s, 9H), 0.89 (s, 9H), 1.55 (bs, 3H), 2.45-0.62 (m, 23H), 2.57 (m, 1Н), 2.85 (m, 1H), 4.22 (m, 1Н), 4.53 (m, 1Н), 4.70 (m, 1Н), 4.94 (m, 1Н), 4.98 (m, 1Н), 5.87 (d, 1H), 6.44 (d, 1H).

Соединение 302

¹H NMR 0.05 (m, 12H), 0.73 (s, 3H), 0.85 (s, 9H), 0.89 (s, 9H), 1.55 (bs, 3H), 2.45-0.62 (m, 23H), 2.57 (m, 1Н), 2.85 (m, 1Н), 4.22 (m, 1Н), 4.53 (m, 1Н), 4.70 (m, 1Н), 4.94 (m, 1Н), 4.98 (m, 1Н), 5.87 (d, 1H), 6.44 (d, 1H).

Препаративный пример 8

Соединение 401

Способ: Общая методика 1

Исходный материал: Соединение 301

Препаративный пример 9

Соединение 402

Способ: Общая методика 1

Исходный материал: Соединение 302

Препаративный пример 10

Соединение 205

К раствору пиридина (0,2 мл), 4-диметиламинопиридина (15 мг) и соединения 203 (0,070 г, 0,12 ммоль) в безводном дихлорметане (2 мл) с температурой, поддерживаемой около 5^oС, добавляют одной порцией хлорангидрид пивалоиловой кислоты (0,060 г, 0,5 ммоль). После перемешивания при этой же температуре в течение 1 часа реакционную смесь гасят водой и распределяют между эфиром и 5% раствором двууглекислого натрия. Органический слой отделяют, промывают насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом магния и упаривают в вакууме, получая масло. В результате очистки хроматографией на силикагеле (15 г) (Элюент: 5% эфир в петролейном эфире) получают целевое соединение в виде пены.

¹³С NMR 178.6, 153.4, 150.4, 142.0, 135.7, 121.4, 120.3, 116.8, 106.5, 70.0, 67.0, 64.8, 56.3, 47.3, 43.8, 38.6, 38.0, 36.4, 30.1, 28.4, 27.0, 25.7, 25.6, 23.4, 22.7, 18.1, 18.1, 18.0, 17.9, -5.0, -5.1, -5.1.

Препаративный пример 11

Соединение 303

К раствору реактива Гриньяра, полученного из магния (1,1 атомных эквивалентов) и билдинг-блока боковой цепи 3-метил-1-бромбутана (0,300 г, 2 ммоль), в безводном тетрагидрофуране (3 мл) с температурой, поддерживаемой около 5^oС, при помощи шприца добавляют литий тетрахлоркупрат (1 мл 0,1 М раствора в безводном тетрагидрофуране), а затем соединение 205 (0,055 г, 0,083 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (2 мл). После перемешивания при той же температуре в течение 16 часов реакционную смесь гасят водой и распределяют между эфиром и насыщенным раствором хлористого аммония. Органический слой отделяют, промывают насыщенным раствором хлористого натрия, сушат над безводным сульфатом магния и упаривают в вакууме, получая масло. В результате очистки хроматографией на силикагеле (15 г) (элюент: 2% эфир в петролейном эфире) получают целевое соединение в виде масла.

¹³С NMR 153.5, 142.8, 142.8, 135.3, 126.0, 121.5, 116.4, 106.4, 70.1, 67.1, 56.7, 46.9, 43.8, 39.3, 38.3, 36.4, 34.2, 29.9, 28.6, 27.8, 26.8, 25.7, 25.6, 23.6, 22.9, 22.5, 22.4, 19.8, 18.1, 17.9, 17.7, -4.9, -5.1.

Препаративный пример 12

Соединение 403

Способ: Общая методика 1a

Исходный материал: Соединение 303

Элюент для хроматографии: 2% эфир в петролейном эфире.

Препаративный пример 13

Соединения 304 и 305

Способ: Общая методика 4

Исходный материал: Соединение 201

Билдинг-блок ацетиленовой боковой цепи: 3-этил-3-(тетрагидро-4Н-пиран-2-ил-окси)-5-гексин (WO 93/19044)

Элюент для хроматографии: 0-10% этилацетат в петролейном эфире.

Соединение 304 (изомер 22А)

¹H NMR 6.42 (d, 1H), 5.86 (d, 1H), 5.44 (m, 1H), 4.98 (m, 1H), 4.94 (m, 1Н), 4.81 (m, 1Н), 4.53 (m, 1Н), 4.21 (m, 1H), 3.96 (m, 1H), 3.44 (m, 1Н), 2.83 (m, 1H), 2.56 (dd, 1H), 2.46 (m, 2H), 1.70 (bs, 3H), 2.42-1.37 (m, 24H), 0.89 (s, 9H), 0.84 (s, 9H), 0.93-0.80 (t, 6H), 0.80 (s, 3H), 0.05 (m, 12H).

Соединение 305 (изомер 22В)

¹H NMR 6.42 (d, 1H), 5.86 (d, 1H), 5.49 (m, 1Н), 4.98 (m, 1Н), 4.94 (m, 1Н), 4.80 (m, 1Н), 4.52 (m, 1Н), 4.21 (m, 1Н), 3.95 (m, 1Н), 3.43 (m, 1Н), 2.83 (m, 1Н), 2.56 (dd, 1H), 2.46 (m, 2H), 1.72 (bs, 3H), 2.41-1.36 (m, 24H), 0.89 (s, 9H), 0.84 (m, 9H), 0.93-0.80 (t, 6H), 0.75 (s, 3H), 0.05 (m, 12H).

Препаративный пример 14

Соединение 404

Способ: Общая методика 1

Исходный материал: Соединение 304

Элюент для хроматографии: 0-5% этилацетат в петролейном эфире.

¹³С NMR 148.1, 147.4, 139.5, 135.4, 125.1, 122.7, 118.3, 111.1, 93.0, 82.4, 81.8, 79.9, 71.9, 67.3, 62.8, 61.8, 56.3, 46.9, 45.9, 44.6, 38.8, 32.0, 30.3, 28.4, 28.3, 26.8, 25.7, 25.6, 25.3, 23.4, 22.7, 20.1, 18.0, 17.9, 13.8, 7.7, 7.6, -4.9, -5.0, -5.3.

Препаративный пример 15

Соединение 405

Способ: Общая методика 1

Исходный материал: Соединение 305

Элюент для хроматографии: 0-5% этилацетат в петролейном эфире.

¹³С NMR 148.6, 148.1, 139.5, 135.4, 124.8, 122.8, 118.4, 111.1, 93.0, 82.4, 81.6, 79.8, 72.0, 67.3, 62.8, 61.3, 56.3, 47.0, 45.9, 44.6, 38.3, 32.0, 30.4, 28.4, 28.3, 26.7, 25.7, 25.6, 25.3, 23.3, 22.7, 20.1, 18.3, 18.0, 17.9, 14.5, 7.7, 7.6, -4.9, -5.0, -5.3.

Препаративный пример 16

Соединение 406

Способ: Общая методика 5

Исходный материал: Соединение 404

Алкилирующий агент: этилбромид

Элюент для хроматографии: 0-2,5% этилацетат в петролейном эфире.

¹³С NMR 148.1, 147.6, 139.6, 135.4, 124.4, 122.8, 118.4, 111.2, 93.1, 93.0, 82.3, 80.3, 80.0, 72.0, 68.6, 67.3, 63.0, 62.9, 56.4, 46.9, 45.9, 44.6, 38.9, 32.1, 30.2, 28.5, 28.4, 28.3, 26.8, 25.7, 25.6, 25.4, 23.4, 22.7, 20.2, 20.2, 18.0, 17.9, 17.7, 15.1, 14.1, 7.7, 7.6, -4.8, -4.9, -5.0, -5.3.

Препаративный пример 17

Соединение 407

Способ: Общая методика 5

Исходный материал: Соединение 405

Алкилирующий агент: этилбромид

Элюент для хроматографии: 0-2,5% этилацетат в петролейном эфире.

¹³С NMR 148.5, 148.1, 139.7, 135.3, 123.9, 122.8, 118.3, 111.2, 93.0, 82.5, 80.2, 79.9, 72.0, 67.9, 67.3, 62.9, 62.8, 56.3, 47.0, 45.9, 44.6, 38.0, 32.0, 30.4, 28.5, 28.4, 26.7, 25.7, 25.6, 25.3, 23.4, 22.7, 20.1, 18.3, 18.0, 17.9, 17.7, 15.2, 14.9, 7.7, 7.6, -4.9, -5.0, -5.3.

Препаративный пример 18

Соединение 206

Замещая соединение 203 соединением 204 в методике препаративного примера 10, получают изомерное соединение 206 в виде пены.

¹³С NMR 178.5, 153.4, 148.5, 142.1, 135.6, 121.4, 120.2, 116.7, 106.5, 70.0, 67.2, 67.0, 55.9, 47.4, 43.8, 38.7, 37.4, 36.4, 28.7, 28.5, 27.1, 25.7, 25.6, 23.4, 22.9, 18.1, 17.9, 16.4, 15.3, -4.9, -5.0, -5.1, -5.1.

Препаративный пример 19

Соединение 308

Замещая 3-метил-1-бромбутан на 1-бром-3-метил-3-триметилсилилоксибутан в методике препаративного примера 11, получают соединение 308.

Препаративный пример 20

Соединение 309

Замещая соединение 205 на соединение 206 в методике препаративного примера 19, получают соединение 309.

Препаративный пример 21

Соединение 408

К раствору соединения 308 (1 ммоль) в тетрагидрофуране (5 мл) и этиловом спирте (10 мл) добавляют пиридиния п-толуолсульфонат (30 мг) и смесь перемешивают в течение 1 часа при 25^oС в атмосфере аргона. После стандартной обработки (этилацетат с дополнительной экстракцией водным бикарбонатом натрия) остаточный сырой продукт очищают хроматографией 30% эфиром в петролейном эфире в качестве элюента, получая соединение 408.

¹³С NMR 153.4, 143.3, 142.7, 135.3, 125.5, 121.5, 116.5, 106.4, 70.9, 70.0, 67.0, 56.7, 46.9, 44.0, 43.7, 38.3, 36.4, 34.2, 29.9, 29.0, 28.9, 28.5, 25.7, 25.6, 23.8, 23.6, 22.9, 19.7, 18.1, 17.9, -5.0, -5.1.

Препаративный пример 22

Соединение 409

Замещая соединение 308 соединением 309 в методике препаративного примера 21, получают соединение 409.

¹H NMR 6.44 (d, 1H), 5.85 (d, 1H), 4.98 (bs, 1H), 4.93 (bs, 1H), 4.54 (m, 1H), 4.21 (m, 1H), 2.83 (dd, 1H), 2.58 (dd, 1H), 2.4-1.10 (m, 20H), 1.68 (bs, 3H), 1.21 (bs, 6H), 0.89 (s, 9H), 0.86 (s, 9H), 0.77 (s, 3H), 0.05 (bs, 12H).

Препаративный пример 23

Соединение 508

Способ: Общая методика 1

Исходный материал: Соединение 408

Препаративный пример 24

Соединение 509

Способ: Общая методика 1

Исходный материал: Соединение 409

Препаративный пример 25

3-этил-3-триметилсилилокси-5-гексин

К раствору 3-этил-3-гидрокси-5-гексина (12,6 г) (WO 93/19044), триэтиламина (67 мл) и 4-диметиламинопиридина (0,47 г) в дихлорметане (150 мл) добавляют при перемешивании при 0^oС триметилхлорсилан (38 мл) в течение 10 минут. Перемешивание продолжают при 0^oС в течение 15 минут и при 25^oС в течение 45 минут. Реакционную смесь подвергают стандартной обработке и сырой продукт очищают перегонкой в вакууме, получая целевое соединение в виде масла, температура кипения 83-85^oС/25 мм рт. столба.

¹³С NMR 81.6, 77.9, 69.7, 31.4, 28.9, 7.9, 2.3.

Препаративный пример 26

Соединения 310 (изомер 22А) и 311 (изомер 22В)

Способ: Общая методика 4

Исходный материал: Соединение 201

Билдинг-блок ацетиленовой боковой цепи: 3-этил-3-триметилсилилокси-5-гексин

Элюент для хроматографии: 2,5% этилацетат в петролейном эфире.

Соединение 310 (изомер 22А)

¹³С NMR 153.4, 147.3, 141.9, 135.7, 125.2, 121.3, 116.8, 106.5, 82.6, 81.7, 78.1, 70.0, 67.0, 61.8, 56.4, 47,1, 43.7, 38.7, 36.4, 31.5, 30.3, 29.3, 28.4, 25.7, 25.6, 23.4, 22.8, 18.2, 18.1, 17.9, 13.9, 7.9, 2.3, -5.0, -5.1.

Соединение 311 (изомер 22В)

¹³C NMR 153.4, 148.5, 141.9, 135.7, 124.9, 121.3, 116.8, 106.5, 82.6, 81.7, 78.1, 70.0, 67.0, 61.4, 56.4, 47.1, 43.8, 38.2, 36.4, 31.5, 30.3, 29.3, 28.4, 25.7, 25.6, 23.4, 22.7, 18.4, 18.1, 17.9, 14.5, 7.9, 2.3, -5.0, -5.1, -5.1.

Препаративный пример 27

Соединение 410 (изомер 22А)

Способ: Общая методика 1b

Исходный материал: Соединение 310

Элюент для хроматографии: 2,5-5% эфир в петролейном эфире.

¹³С NMR 148.1, 147.5, 139.6, 135.4, 125.1, 122.8, 118.3, 111.2, 82.6, 81.8, 78.1, 72.0, 67.3, 61.9, 56.3, 47.0, 45.9, 44.6, 38.8, 31.5, 30.3, 29.3, 28.3, 25.7, 25.6, 23.4, 22.8, 18.1, 18.0, 18.0, 13.9, 7.9, 2.3, -4.9, -5.0, -5.3.

Препаративный пример 28

Соединение 411 (изомер 22В)

Способ: Общая методика 1b

Исходный материал: Соединение 311

Элюент для хроматографии: 0-10% эфир в петролейном эфире.

¹³С NMR 148.7, 148.1, 139.6, 135.4, 124.8, 122.8, 118.3, 111.1, 82.6, 81.6, 78.1, 71.9, 67.3, 61.4, 56.3, 47.0, 45.9, 44.6, 38.3, 31.5, 30.4, 29.2, 28.3, 25.7, 25.6, 23.3, 22.6, 18.3, 18.0, 17.9, 14.5, 7.9, 2.3, -4.9, -5.0, -5.3.

Препаративный пример 29

Соединение 510 (изомер 22А)

Способ: Общая методика 5

Исходный материал: Соединение 410

Алкилирующий агент: этилбромид

Элюент для хроматографии: 0-6% эфир в петролейном эфире.

¹³С NMR 148.1, 147.6, 139.7, 135.3, 124.3, 122.8, 118.3, 111.1, 82.5, 80.4, 78.2, 72.0, 68.6, 67.3, 63.0, 56.3, 46.9, 45.9, 44.6, 38.9, 31.6, 31.6, 30.1, 29.4, 28.3, 25.7, 25.6, 23.4, 22.7, 18.0, 17.9, 17.7, 15.1, 14.2, 7.9, 2.3, -4.9, -5.0, -5.3.

Препаративный пример 30

Соединение 511 (изомер 22В)

Способ: Общая методика 5

Исходный материал: Соединение 411

Алкилирующий агент: этилбромид

Элюент для хроматографии: 0-2% эфир в петролейном эфире.

¹³С NMR 148.5, 148.0, 139.7, 135.3, 123.9, 122.8, 118.3, 111.2, 82.7, 80.2, 78.2, 72.0, 68.0, 67.3, 62.9, 56.3, 47.0, 45.9, 44.6, 38.0, 31.6, 30.4, 29.2, 28.3, 25.7, 25.6, 23.4, 22.7, 18.3, 18.0, 17.9, 15.2, 14.9, 7.9, 2.3, -4.9, -5.0, -5.3.

Препаративный пример 31

Соединение 207

Способ: Общая методика 1b

Исходный материал: Соединение 201

Элюент для хроматографии: 0-10% эфир в петролейном эфире.

¹³С NMR 190.9, 174.0, 148.1, 138.2, 136.2, 130.0, 122.5, 119.2, 111.1, 71.8, 67.3, 56.0, 48.8, 45.8, 44.6, 40.4, 32.4, 28.1, 25.6, 25.6, 23.3, 22.4, 19.5, 18.0, 17.9, 11.8, -4.9, -5.0, -5.2.

Препаративный пример 32

Соединение 312

Раствор соединения 207 (0,144 г, 0,25 ммоль) и 3-(метоксикарбонил)-2-пропенил-1-идентрифенилфосфорана в безводном толуоле (3 мл) нагревают при 100^oС в течение 18 часов. После упаривания в вакууме остаток очищают хроматографией, элюент: 0-2,5% эфир в петролейном эфире, получая целевое соединение в виде масла.

¹³С NMR 167.7, 157.5, 148.1, 146.3, 140.6, 139.3, 135.6, 124.2, 122.7, 118.6, 118.0, 111.1, 71.9, 67.3, 56.3, 51.2, 48.0, 45.8, 44.6, 39.1, 31.8, 28.3, 25.7, 25.6, 23.4, 22.7, 18.0, 18.0, 15.6, -4.9, -5.0, -5.3.

Препаративный пример 33

Соединение 412

К перемешиваемому раствору соединения 312 (20 мг, 0,031 ммоль) в тетрагидрафуране (2 мл), охлажденному до -78^oС, добавляют свежеприготовленный 1,16 М раствор этиллития в эфире (0,08 мл, 0,093 ммоль). Перемешивание при -78^oС продолжают в течение часа, после чего добавляют воду (15 мл). Реакционную смесь подвергают стандартной обработке (эфир), получая сырой продукт, очищаемый хроматографией, элюент: 0-5% эфир в петролейном эфире, с получением целевого соединения в виде масла.

¹H NMR 6.81 (d, 1H), 6.3-6.0 (m, 4H), 5.61 (d, 1H), 5.18 (bs, 1H), 4.87 (bs, 1H), 4.36 (m, 1Н), 4.18 (m, 1Н), 2.80 (bd, 1H), 2.5-0.9 (m, 17H), 1.72 (bs, 1H), 1.57 (bq, 4H), 0.90 (bt, 6H), 0.88 (bs, 18H), 0.83 (s, 3H), 0.06 (bs, 12H).

Препаративный пример 34

Соединение 208

К раствору N-хлоросукцинимида (21 мг) в безводном дихлорметане (1,5 мл) в течение 5 минут при 0^oС и перемешивании добавляют раствор диметилсульфида (12,2 мкл) в безводном дихлорметане (0,9 мл). Перемешивание продолжают в течение 10 минут при 0^oС и в течение 20 минут при -20^oС. К реакционной смеси в течение 5 минут при -20^oС добавляют раствор соединения 203 (77 мг, 0,134 ммоль) в безводном дихлорметане (2,0 мл). Перемешивание продолжают в течение 45 минут при температуре от -20^oС до -30^oС. Обработка: реакционную смесь распределяют между этилацетатом (20 мл) и водой (20 мл). Водную фазу экстрагируют другой порцией этилацетата (15 мл) и соединенные органические фазы экстрагируют водой (20 мл) и насыщенным водным раствором хлористого натрия (10 мл), сушат сульфатом натрия и выпаривают при 0-10^oС в вакууме; все жидкости, используемые при этой обработке, охлаждены льдом. Сырое соединение 208 используют без дальнейшей очистки на следующей стадии (Препаративный пример 35).

Препаративный пример 35

Соединение 313

К раствору 3-(2-гидрокси-2-пропил)-фенола (46 мг, 0,30 ммоль) (WO 91/15475) в безводном диметилформамиде (3 мл) добавляют 50% дисперсию гидрида натрия в масле (15 мг) и смесь перемешивают при 20^oС в течение 90 минут. После этого ее добавляют к сырому соединению 208 препаративного примера 34 и смесь перемешивают при 20^oС в течение 3 часов, после чего ее подвергают стандартной обработке (этилацетат). В результате очистки хроматографией на силикагеле (элюент: 0-20% эфир в петролейном эфире) получают целевое соединение в виде масла.

¹H NMR 159.2, 153.4, 150.7, 150.5, 142.0, 135.6, 129.0, 121.4, 121.2, 116.8, 116.5, 112.1, 111.3, 106.6, 72.4, 70.1, 68.3, 67.0, 56.2, 47.4, 43.8, 38.1, 36.4, 31.5, 30.2, 28.4, 25.7, 25.6, 23.4, 22.7, 18.6, 18.3, 18.1, 17.9, -5.0, -5.1.

Препаративный пример 36

Соединение 413

Способ: Общая методика 1

Исходный материал: Соединение 313

Элюент для хроматографии: 0-10% эфир в петролейном эфире.

¹H NMR 7.25 (m, 1H), 7.09 (m, 1H), 7.04 (m, 1Н), 6.81 (m, 1H), 6.21 (d, 1H), 6.06 (d, 1H), 5.18 (bd, 1H), 4.87 (bd, 1H), 4.65 (d, 1H), 4.36 (d, 1H), 4.35 (m, 1H), 4.19 (m, 1H), 2.78 (bd, 1H), 2.5-0.9 (m, 15H), 1.74 (bt, 3H), 1.57 (s, 6H), 0.87 (s, 18H), 0.78 (s, 3H), 0.05 (bs, 12H).

Препаративный пример 37

Соединение 314

К раствору соединения 203 (80 мг, 0,140 ммоль) в безводном тетрагидрофуране добавляют при перемешивании и 20^oС в атмосфере аргона 20% суспензию гидрида калия в минеральном масле (54 мкл), а затем 6-бром-3-этил-3-триметилсилилоксигексан (WO 89/10351) (111 мкл). Через 5 минут добавляют 18-краун-6 (39 мг) и перемешивание при 20^oС продолжают в течение полутора часов, после чего реакционную смесь подвергают стандартной обработке (эфир). Сырой продукт очищают хроматографией (0-5% эфира в петролейном эфире в качестве элюента), получая целевое соединение в виде масла.

¹³С NMR 153.4, 148.5, 142.4, 135.5, 123.0, 121.4, 116.7, 106.5, 78.5, 70.7, 70.5, 70.0, 67.0, 56.3, 47.2, 43.8, 38.2, 36.4, 34.8, 31.2, 30.0, 28.4, 25.7, 25.6, 24.0, 23.5, 22.8, 18.2, 18.2, 18.1, 17.9, 8.0, 2.5, -5.0, -5.1.

Препаративный пример 38

Соединение 414

Способ: Общая методика 1, за исключением того, что на следующей стадии (Пример 14) используют сырой продукт без предварительной очистки хроматографией.

Исходный материал: Соединение 314

¹H NMR 6.22 (d, 1H), 6.05 (d, 1H), 5.18 (m, 1H), 4.86 (m, 1H), 4.36 (m, 1H), 4.18 (m, 1H), 4.10 (d, 1H), 3.85 (d, 1H), 3.37 (t, 2H), 2.78 (d, 1H), 2.44 (dd, 1H), 2.4-2.1 (m, 5H), 1.9-1.4 (m, 8H), 1.63 (s, 3H), 1.45 (q, 4H), 0.9-0.7 (m, 4H), 0.87 (d, 18H), 0.81 (t, 6H), 0.74 (s, 3H), 0.08 (s, 9H), 0.06 (s, 12H).

Препаративный пример 39

Соединение 315 и Соединение 316

Раствор 6-бром-3-этил-3-триметилсилилоксигексана (WO 89/10351) (1,375 г, 4,9 ммоль) в безводном тетрагирофуране (5 мл) в течение 5 минут по каплям добавляют к опилкам магния (118 мг, 4,9 мг-экв.) (предварительно перемешанным в "безводных" условиях в течение 20 часов в атмосфере аргона) в эфире (1 мл) при перемешивании в атмосфере аргона при 20^oС. Перемешивание продолжают при кипячении с обратным холодильником (масляная баня, 75^oС) в течение полутора часов, чтобы закончить образование реактива Гриньяра, и 1,0 мл еще теплого раствора (40-50^oС) отбирают при помощи шприца. Его добавляют к раствору соединения 201 (171 мг, 0,30 ммоль) в тетрагидрафуране (2 мл), перемешивая в атмосфере аргона при 0-5^oС. Перемешивание продолжают в течение 40 минут при 20^oС, после чего реакционную смесь при перемешивании выливают в смесь эфира (25 мл) и воды (25 мл), содержащую хлорид аммония (2,5 г). Реакционную смесь подвергают стандартной обработке (эфир), получая сырой продукт, содержащий изомерные 22-гидроксисоединения: А (менее полярное) и В (более полярное). Их разделяют хроматографией (0-10% эфир в петролейном эфире в качестве элюента), получая чистое целевое соединение.

Соединение 315 (изомер 22А)

¹³С NMR 153.5, 146.4, 142.1, 135.6, 128.0, 121.4, 116.7, 106.5, 78.7, 70.7, 70.0, 67.0, 56.8, 47.0, 43.8, 39.6, 38.5, 36.4, 35.9, 31.4, 30.9, 30.4, 28.4, 25.7, 25.6, 23.5, 22.9, 20.2, 18.4, 18.1, 17.9, 13.0, 8.0, 2.5, -5.0, -5.1.

Соединение 316 (изомер 22В)

¹³С NMR 153.4, 148.2, 142.1, 135.7, 127.5, 121.4, 116.9, 106.5, 78.6, 70.0, 70.0, 67.0, 56.6, 46.9, 43.8, 38.5, 38.5, 36.4, 35.1, 31.3, 31.0, 30.3, 28.5, 25.7, 25.6, 23.5, 22.8, 20.3, 18.9, 18.1, 17.9, 12.9, 8.1, 8.0, 2.5, -5.0, -5.1.

Препаративный пример 40

Соединение 415 (изомер 22А)

Способ: Общая методика 1

Исходный материал: Соединение 315

Элюент для хроматографии: 0-10% эфир в петролейном эфире.

Препаративный пример 41

Соединение 416 (изомер 22В)

Способ: Общая методика 1

Исходный материал: Соединение 316

Элюент для хроматографии: 0-10% эфир в петролейном эфире.

Препаративный пример 42

Соединение 317

Раствор соединения 207 (0,25 ммоль) и циклопропилкарбонилметилентрифенилфосфорана (0,5 ммоль) в безводном толуоле (3 мл) нагревают при 100^oС в течение 18 часов. После упаривания в вакууме остаток очищают хроматографией, элюент: 0-2,5% эфир в петролейном эфире, получая целевое соединение в виде масла.

Препаративный пример 43

Соединение 417

К перемешиваемому раствору соединения 317 (0,3 ммоль) в тетрагидрофуране (1 мл) добавляют при 0^oС 0,4 М гептагидрат хлорида церия (III) в метаноле (1 мл), метанол (1 мл) и боргидрид натрия (60 мг, 1,6 ммоль). После перемешивания при 0^oС в течение 40 минут реакционную смесь разбавляют этилацетатом (40 мл) и добавляют воду (15 мл). Органическую фазу отделяют, промывают водой (10 мл) и рассолом (10 мл), сушат над сульфатом магния и выпаривают в вакууме. Остаточное масло очищают хроматографией на силикагеле (элюент: 5% этилацетат в петролейном эфире), получая целевое соединение в виде смеси эпимеров по месту расположения гидроксила в боковой цепи, которое используют как таковое на следующей стадии (Пример 17).

Пример 1

1(S), 3(R)-дигидрокси-20-(1-гидрокси-1-пентил-)-9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е),10(19),17(20)(Z)-тетраен, изомер 22А

Соединение 101

Способ: Общая методика 2 или 3

Исходный материал: Соединение 401

Пример 2

1(S),3(R)-дигидрокси-20-(1-гидрокси-1-пентил)-9,10-секопрегна-5(Z),7(Е), 10(19),17(20)(Z)-тетраен, изомер 22В

Соединение 102

Способ: Общая методика 2 или 3

Исходный материал: Соединение 402

Пример 3

1(S), 3(R)-дигидрокси-20-(4-метил-1-пентил)-9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е), 10(19),11(20)(Z)-тетраен

Соединение 103

Способ: Общая методика 2

Исходный материал: Соединение 403

¹H NMR 6.37 (d, 1H), 6.04 (d, 1H), 5.34 (bs, 1H), 5.01 (bs, 1H), 4.44 (m, 1Н), 4.23 (m, 1Н), 2.80 (dd, 1H), 2.61 (dd, 1H), 1.56 (bs, 3H), 1.10-2.35 (m, 22H), 0.87 (d, 6H), 0.73 (s, 3H).

Пример 4

1(S), 3(R)-дигидрокси-20-(1,5-дигидрокси-5-этил-2-гептин-1-ил)-9,10-секопрегна-5(Z),7(Е),10(19),17(20)Z-тетраен, изомер 22А

Соединение 104

Способ: Общая методика 3

Исходный материал: Соединение 410

Элюент для хроматографии: 50-100% этилацетат в петролейном эфире.

¹³С NMR 149.8, 147.5, 141.5, 136.2, 127.5, 124.7, 119.6, 112.1, 83.5, 82.4, 75.3, 71.5, 67.4, 62.4, 58.0, 46.2, 43.7, 40.5, 32.0, 31.2, 29.7, 29.5, 24.8, 24.2, 18.3, 14.5, 8.1.

Пример 5

1(S), 3(R)-дигидрокси-20-(1,5-дигидрокси-5-этил-2-гептин-1-ил)-9,10-секопрегна-5(Z),7(Е),10(19),17(20)Z-тетраен, изомер 22В

Соединение 105

Способ: Общая методика 3

Исходный материал: Соединение 411

Способ очистки: кристаллизация из эфира.

Температура плавления 161-175^oС

¹H NMR 6.34 (d, 1H), 6.05 (d, 1H), 5.51 (bs, 1H), 5.33 (bs, 1H), 4.99 (bs, 1H), 4.43 (bs, 1H), 4.22 (bs, 1H), 2.79 (d, 1H), 2.59 (dd, 1H), 2.37 (d, 2H), 2.35-1.0 (m, 17H), 1.71 (s, 3H), 1.55 (bq, 4H), 0.86 (bt, 6H), 0.76 (s, 3H).

Пример 6

1(S), 3(R)-дигидрокси-20-(1-этокси-5-этил-5-(тетрагидро-4Н-пиран-2-ил)окси-2-гептин-1-ил)-9,10-секопрегна-5(Z), 7(Е), 10(19), 17(20)Z-тетраен, изомер 22А

Соединение 106

Способ: Общая методика 3

Исходный материал: Соединение 406

¹³С NMR 147.6, 147.6, 141.9, 133.6, 124.7, 117.8, 111.9, 93.2, 82.6, 80.5, 80.2, 70.8, 68.8, 66.8, 63.3, 63.0, 56.6, 47.2, 45.2, 42.9, 39.0, 32.3, 30.3, 28.7, 28.6, 27.0, 25.6, 23.8, 23.1, 20.3, 17.9, 15.3, 14.4, 7.9, 7.8.

Пример 7

1(S), 3(R)-дигидрокси-20-(1-этокси-5-этил-5-(тетрагидро-4Н-пиран-2-ил)окси-2-гептин-1-ил)-9,10-секопрегна-5(Z), 7(E), 10(19), 17(20)Z-тетраен, изомер 22В

Соединение 107

Способ: Общая методика 3

Исходный материал: Соединение 407

¹³С NMR 148.4, 147.6, 142.0, 133.5, 124.8, 124.3, 117.7, 111.9, 93.2, 82.8, 80.3, 80.1, 70.8, 68.1, 66.8, 63.1, 63.0, 56.4, 47.3, 45.3, 42.9, 38.1, 32.2, 30.5, 28.7, 28.6, 26.9, 25.5, 23.7, 23.0, 20.3, 18.5, 15.4, 15.1, 7.9, 7.8.

Пример 8

1(S), 3(R)-дигидрокси-20-(4-гидрокси-4-метил-1-пентил)-9,10-секопрегна-5(Z),7(Е),10(19),17(20)(Z)-тетраен

Соединение 108

Способ: Общая методика 2 или 3

Исходный материал: Соединение 508

¹³С NMR 147.6, 143.4, 142.8, 133.1, 125.7, 125.0, 117.3, 111.9, 70.8, 66.9, 56.8, 47.1, 45.3, 44.2, 42.9, 38.5, 34.4, 30.1, 29.3, 29.2, 28.9, 24.0, 23.9, 23.1, 19.9, 17.8.

Пример 9

1(S), 3(R)-дигидрокси-20-(4-гидрокси-4-метил-1-пентил)-9,10-секопрегна-5(Z),7(Е),10(19),17(20)(Е)-тетраен

Соединение 109

Способ: Общая методика 2 или 3

Исходный материал: Соединение 509

¹H NMR 6.37 (bd, 1H), 6.04 (bd, 1H), 5.34 (bs, 1H), 5.02 (bs, 1H), 4.44 (bm, 1H), 4.23 (bm, 1H), 2.80 (bd, 1H), 2.60 (m, 2H), 2.4-1.0 (m, 21Н), 1.70 (bs, 3H), 1.21 (s, 6H), 0.73 (s, 3H).

Пример 10

1(S), 3(R)-дигидрокси-20-(1-этокси-5-этил-5-гидрокси-2-гептин-1-ил)-9,10-секопрегна-5(Z),7(Е),10(19),17(20)Z-тетраен, изомер 22А

Соединение 110

Способ: Общая методика 3

Исходный материал: Соединение 510

Элюент для хроматографии: 50-100% этилацетат в петролейном эфире.

¹³С NMR 148.1, 147.6, 141.8, 133.6, 124.7, 124.5, 117.8, 111.9, 82.1, 81.6, 74.0, 70.8, 68.8, 66.8, 63.4, 56.6, 47.2, 45.3, 42.9, 39.1, 30.8, 30.3, 29.9, 28.7, 23.7, 23.1, 17.9, 15.3, 14.3, 7.9.

Пример 11

1(S), 3(R)-дигидрокси-20-(1-этокси-5-этил-5-гидрокси-2-гептин-1-ил)-9,10-секопрегна-5(Z),7(Е),10(19),17(20)Z-тетраен, изомер 22В

Соединение 111

Способ: Общая методика 3

Исходный материал: Соединение 511

Элюент для хроматографии: 0-100% этилацетат в петролейном эфире.

¹³С NMR 148.8, 147.6, 141.8, 133.5, 124.7, 124.0, 117.7, 111.9, 81.9, 81.8, 74.0, 70.8, 68.0, 66.8, 63.2, 56.4, 47.3, 45.2, 42.9, 38.1, 30.8, 30.5, 29.7, 28.7, 23.7, 23.0, 18.6, 15.4, 15.1, 7.9.

Пример 12

1(S), 3(R)-дигидрокси-20(5-этил-5-гидрокси-гепта-1(Е), 3(Е)-диен-1-ил)-9,10-секопрегна-5(Z),7(Е),10(19),17(20)Z-тетраен

Соединение 112

Способ: Общая методика 3

Исходный материал: Соединение 412

Элюент для хроматографии: 25-50% этилацетат в петролейном эфире.

¹H NMR 6.81 (d, 1H), 6.37 (d, 1H), 6.28 (dd, 1H), 6.12 (dd, 1H), 6.08 (bd, 1H), 5.63 (d, 1H), 5.34 (bs, 1H), 5.01 (bs, 1H), 4.44 (m, 1Н), 4.24 (m, 1Н), 2.80 (bd, 1H), 2.60 (dd, 1H), 2.5-0.90 (m, 16H), 1.74 (bs, 3H), 1.58 (bq, 4H), 0.90 (t, 6H), 0.82 (s, 3H).

Пример 13

1(S), 3(R)-дигидрокси-20-[3-(2-гидрокси-2-пропил)-феноксиметил] -9,10-секопрегна-5(Z),7(Е),10(19),17(20)Z-тетраен

Соединение 113

Способ: Общая методика 3

Исходный материал: Соединение 413

Элюент для хроматографии: 50-100% этилацетат в петролейном эфире.

¹H NMR 7.24 (m, 1Н), 7.10 (m, 1Н), 7.04 (m, 1Н), 6.80 (m, 1Н), 6.39 (d, 1H), 6.06 (d, 1H), 5.34 (bs, 1H), 5.01 (bs, 1H), 4.66 (d, 1H), 4.44 (m, 1Н), 4.37 (d, 1H), 4.23 (m, 1H), 2.79 (bd, 1H), 2.60 (dd, 1H), 2.4-0.9 (m, 16H), 1.75 (bs, 3H), 1.58 (s, 6H), 0.80 (s, 3H).

Пример 14

1(S), 3(R)-дигидрокси-20-[(3-этил-3-гидрокси-6-гексил)-оксиметил]-9,10-секопрегна-5(Z),7(E),10(19),17(20)Z-тетраен

Соединение 114

Способ: Общая методика 3

Исходный материал: Соединение 414

Элюент для хроматографии: 50-100% этилацетат в петролейном эфире.

¹³С NMR 148.8, 147.6, 142.3, 133.4, 124.8, 122.9, 117.6, 111.9, 74.1, 70.8, 70.8, 66.8, 56.4, 47.3, 45.3, 42.9, 38.4, 35.4, 31.0, 30.1, 28.8, 23.9, 23.7, 23.0, 18.4, 7.9.

Пример 15

1(S), 3(R)-дигидрокси-20-(1,5-дигидрокси-5-этил-1-гептил)-9,10-секопрегна-5(Z),7(Е),10(19),17(20)Z-тетраен, изомер 22А

Соединение 115

Способ: Общая методика 3

Исходный материал: Соединение 415

Элюент для хроматографии: 50-100% этилацетат в петролейном эфире.

Пример 16

1(S), 3(R)-дигидрокси-20-(1,5-дигидрокси-5-этил-1-гептил)-9,10-секопрегна-5(Z),7(Е),10(19),17(20)Z-тетраен, изомер 22 В

Соединение 116

Способ: Общая методика 3

Исходный материал: Соединение 416

Элюент для хроматографии: 50-100% этилацетат в петролейном эфире.

Пример 17

1(S), 3(R)-дигидрокси-20-(3-циклопропил-3-гидроксипроп-1(Е)-ен-1-ил)-9,10-секопрегна-5(Z),7(Е),10(19),17(20)(Z)-тетраен

Соединение 117

Способ: Общая методика 3

Исходный материал: Соединение 417

Элюент для хроматографии: 50-100% этилацетат в петролейном эфире.

Пример 18

Капсулы, содержащие Соединение 105

Соединение 105 растворяют в арахисовом масле до конечной концентрации, составляющей 1 мкг Соединения 105 на 1 мл масла. 10 весовых частей желатина, 5 весовых частей глицерина, 0,08 весовых частей сорбата калия и 14 весовых частей дистиллированной воды смешивают вместе при нагревании и формуют в мягкие желатиновые капсулы. Затем каждую из них заполняют 100 мкл Соединения 105 в масляном растворе таким образом, чтобы каждая капсула содержала 0,1 мкг Соединения 105.

Пример 19

Дерматологический крем, содержащий Соединение 108

В 1 г миндального масла растворяют 0,05 мг Соединения 108. К этому раствору добавляют 40 г минерального масла и 20 г самоэмульгирующегося пчелиного воска. Смесь нагревают до разжижения. После добавления 40 мл горячей воды смесь хорошо перемешивают. Полученный крем содержит приблизительно 0,5 мкг Соединения 108 на грамм крема.

Данные испытаний на активность в ингибировании пролиферации раковых клеток

Авторами настоящей заявки проведены испытания по измерению активности соединений согласно настоящему изобретению в ингибировании пролиферации раковых клеток в сравнении с соединениями, описанными в заявке ЕР-А-717034.

Для испытаний использовали соединения согласно примерам 21 и 28 заявки ЕР-А-717034 (далее обозначаемой ЕР 034), представляющие собой 17Z- и 17Е-изомеры 21-нор-17(20)дегидрокальцитриола, обозначенные как МС 2251 и МС 2248 соответственно. Из соединений согласно настоящему изобретению использовали аналоги вышеуказанных соединений по ЕР 034, содержащие углерод 21 и, таким образом, имеющие полную структуру кальцитриола, а именно 17Z-17(20)дегидрокальцитриол (VD 2839) и 17Е-17(20)дегидрокальцитриол (МС 2129). Все соединения непосредственно применялись в одних и тех же испытаниях.

В первом прямом сравнении измеряли эффективность, с которой соединения ингибируют рост (пролиферацию) линии клеток рака молочной железы человека MCF-7, что представляет собой подробно описанный и релевантный тест, обычно используемый для оценки аналогов витамина D [1-15]. В качестве эталонного (контрольного) соединения применяли гормон витамина D природного происхождения - кальцитриол (1,25-дигидрокси-витамин D₃). Результаты выражены в Таблице 5 в виде относительной эффективности при расчете значений в молярном выражении (незначительные различия в молекулярных массах не оказывали существенного влияния на расчет).

Как можно видеть из Таблицы 5, соединение МС 2251 в 5 раз более эффективно, чем кальцитриол. Это согласуется с данными ЕР 034 (в квадратных скобках), согласно которым указанное соединение в 3-5 раз более эффективно, чем кальцитриол, в тесте на дифференциацию раковых клеток (HL-60). Хотя тест на дифференциацию клеток в меньшей степени релевантен в отношении клинической ситуации, чем тест на ингибирование пролиферации, однако в целом эти два теста дополняют друг друга. Данные по тесту на ингибирование пролиферации для соединения МС 2248 показывают, что оно менее эффективно, чем МС 2251, и даже менее эффективно, чем кальцитриол.

В то же время данные для соединений согласно настоящему изобретению показывают, что они в 30 или в 20 раз более эффективны в указанном тесте с пролиферацией клеток MCF-7, чем соответствующие соединения ЕР 034, и от 2 до 150 раз более чем кальцитриол.

Та же тенденция наблюдается в другом тесте с пролиферацией клеток, а именно линии клеток кожи НаСаТ, в качестве модели антипсориатического действия (описан в работе [16] сотрудников фирмы-заявителя Leo Pharmaceuticals). Соединения VD 2839 и МС 2129 оказались соответственно в 57 и 3 раза более эффективны, чем кальцитриол, тогда как вышеназванные соединения ЕР 034 всего в 6 и 0,6 раза эффективнее кальцитриола соответственно.

Далее, в заявке W0 94/01398, принадлежащей тому же заявителю, что и настоящая заявка (т. е. фирме Leo Pharmaceuticals), описаны соединения с тройной связью между атомами углерода 22 и 23. Наиболее эффективным соединением среди соединений заявки W0 94/01398 является СВ 1174. Для этого соединения имеются данные испытаний на пролиферацию раковых клеток U937. Наиболее близким аналогом указанного соединения из числа соединений согласно настоящему изобретению является соединение СВ 1608 (соединение по примеру 11). Для этого соединения имеются данные по результатам теста с MCF-7, которые сопоставимы с таковыми для соединения VD 2839, и, кроме того, для него доступны данные для сравнения в тесте с U937. Хотя в этом тесте эффективность соединения согласно настоящему изобретению составляет лишь половину от таковой для соединения известного уровня техники, его кальцемическое влияние (выражающееся в повышенном выделении кальция с мочой у крыс, получавших дозы соединений в течение 7 дней) оказывается существенно меньшим. Если оценить из указанных тестов "терапевтическое отношение", то можно видеть, что СВ 1608 имеет более благоприятную селективность в данном отношении (Таблица 6).

Описанные тесты и их релевантность подробно изложены в работе [17], выполненной сотрудниками фирмы заявителя.

Таким образом, соединения по настоящему изобретению обладают активностью по ингибированию пролиферации и имеют в этом отношении существенные преимущества по сравнению с соединениями известного уровня техники.