способ получения аллергена жидкого листериозного листерина для внутрикожной пробы
Классы МПК: | A61K39/35 аллергены |
Автор(ы): | Егшатян Т.И., Тюменцева И.С., Афанасьев Е.Н. |
Патентообладатель(и): | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт |
Приоритеты: |
подача заявки:
2001-06-13 публикация патента:
27.05.2003 |
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для диагностики листериоза. Сущностью способа является получение аллергена листериозного для внутрикожной пробы путем наращивания культуры вакцинного штамма АУФ, инактивации, лиофильного высушивания, с проведением гидролиза 1% раствором уксусной кислоты на водяной бане в течение 6 часов при температуре 100
1oС, затем в холодильнике в течение 18
1 часов. Техническим результатом является повышение специфичности и специфической активности препарата и возможность его промышленного получения.


Формула изобретения
Способ получения аллергена листериозного для внутрикожной пробы, отличающийся тем, что наращивают культуру вакцинного штамма АУФ, инактивируют автоклавированием при 1,5 атм в течение 1 ч, лиофильно высушивают, обезжиривают эфиром и хлороформом, проводят гидролиз 1% раствором уксусной кислоты на водяной бане в течение 6 ч при 100

Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к препаратам для диагностирования физиологического состояния организма посредством постановки внутрикожной пробы, а именно для диагностики листериоза у людей и животных. Известен способ приготовления аллергена, заключающийся в инактивации полученной двухсуточной культуры листерий прогреванием при 100oС. Антиген из убитых нагреванием культур вызывал сильные реакции, как у иммунизированных, так и у контрольных животных и обладал неспецифическими свойствами, что является недостатком этого способа (1). Известен способ получения аллергена, основанный на получении суточной агаровой культуры листерий, которую дважды промывали фосфатно-буферным физиологическим раствором (рН 7,4), в виде густой взвеси (до млрд. микробных клеток в 1 мл) подвергали ежедневному замораживанию и оттаиванию в течение 30 дней. После этого взвесь прогревали в течение 1,5 ч при 100oС на водяной бане, затем центрифугировали до полной прозрачности надосадочной жидкости. Затем надосадочную жидкость прогревали в течение часа в тех же условиях, после этого в различных разведениях (1:100; 1:500; 1:1000; 1:10000) испытывали как аллерген на здоровых и инфицированных кроликах. Для внутрикожных проб было принято разведение 1:1000, которое в дозе 0,1 мл вызывало у 4-х из 5 пораженных кроликов гиперемию до 7-12 мм в диаметре через 24-48 часов и не вызывало никакой реакции у 4 здоровых кроликов (2). Недостатком этого способа является длительность процесса получения препарата и то, что он может быть применен только в научных целях, а не для промышленного производства препарата. Целью изобретения является повышение эффективности получения препарата - аллергена листериозного для диагностики листериоза у людей и животных. Сущность изобретения заключается в том, что в способе получения жидкого аллергена листериозного, основанном на наращивании бакмассы и ее инактивации, проводят слабый гидролиз инактивированной бакмассы листериозного микроба после термической денатурации балластных белков. Существенным отличительным признаком является следующее действие в способе получения аллергена жидкого листериозного - листерина для внутрикожной пробы: слабый гидролиз инактивированной и обезжиренной бакмассы листериозного микроба после термической денатурации балластных белков с последующей фильтрацией с корректировкой рН. Этот отличительный признак необходим и достаточен для достижения технического результата заявляемого изобретения - ускорения процесса получения аллергена листериозного жидкого - листерина и возможность промышленного получения его. Это достигнуто благодаря проведенным исследованиям по производству аллергенного препарата, изучению свойств препарата, постановке аллергической пробы на морских свинках. Бакмассу листериозного микроба наращивали, лиофильно высушивали, инактивировали с последующим обезжириванием эфиром и хлороформом, проводили гидролиз обезжиренной бакмассы 1,0%-ным раствором уксусной кислоты, причем гидролиз шел при 100oС на водяной бане в течение 6 ч и продолжался в холодильнике в течение 18




1. Егорова А. П. Мартынин М.Я., Малышев А.Н. Диагностическое значение внутрикожной аллергической пробы при листериозе. //ЖМЭИ. 1970 - 2. С.62. 2. Егорова А. П. Мартынин М.Я., Малышев А.Н. Диагностическое значение внутрикожной аллергической пробы при листериозе. //ЖМЭИ. 1970 - 2. С.63 (прототип). 3. Тропина Т. Д. , Хашимова П.Р., Кондратьева Л.А. Изучение антигенов листерий и выделенных из них белковых фракций. //ЖМЭИ. - 1988 - 9. С.16-19.