способ диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота

Формула изобретения

Способ диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота, включающий исследование сыворотки крови с антигеном в реакции иммунодиффузии, отличающийся тем, что в качестве антигена используют О-ПС М-антиген, приготовленный из вакцинного штамма В.melitensis Rev-1.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к диагностике инфекционных заболеваний.

Известен способ диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота с помощью реакции иммунодиффузии (РИД) с О-полисахаридным антигеном (О-ПС), который готовится из вакцинного штамма B.abortus 19 [1].

Применительно к бруцеллезу мелкого рогатого скота эта реакция недостаточно чувствительна, что объясняется гетерогенностью антигена к возбудителю инфекции B.melitensis [2].

Задачей изобретения является повышение эффективности диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота путем использования в РИД гомологичного антигена, изготовленного из вакцинного штамма В.melitensis Rev-1.

Сравнительное изучение антигенов A-(abortus) и М-(melitensis) проводилось в экспериментальных и производственных условиях.

Предлагаемый способ диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота (РИД с О-ПС антигеном) повышает чувствительность метода в 2-2,5 раза.

Пример 1. Испытание активности антигенов -А и -М в РИД проводилось в эксперименте по проверке иммунитета у овец, привитых по различным схемам вакциной из штамма В.abortus 19:

- первая группа (9 овцематок). Первично прививали подкожно в дозе 40 млрд.м.к. и через 12 месяцев реиммунизировали конъюнктивально в дозе 4 млрд.м.к.;

- вторая группа (9 овцематок). Первично и повторно с интервалом в 12 месяцев прививали подкожно в дозе 40 млрд.м.к.;

- третья группа (9 овцематок). Первично и повторно с интервалом в 12 месяцев животных прививали конъюнктивально в дозе 4 млрд.м.к.;

- четвертая группа (9 овцематок). Прививали подкожно в дозе 40 млрд.м.к.;

- пятая группа (8 овцематок). Прививали конъюнктивально в дозе 4 млрд.м.к.;

- шестая группа (5 овцематок). Интактные животные служили контролем. Их одновременно с подопытными овцематками (первая, вторая и третья группах через 50 дней после ревакцинации и четвертая и пятая группах по истечении 13 месяцев после первичной прививки) инфицировали подкожно в области локтевого сустава двухсуточной культурой вирулентного штамма B.melitensis H-102 в десятикратной инфицирующей дозе (1 млн.м.к.).

Результаты опыта, отраженные в таблице 1, показывают избирательную чувствительность диагностикумов в зависимости от их антигенной структуры.

Таблица 1 Результаты сравнительного изучения активности О-ПС бруцеллезных антигенов -А и -М в РИД на овцах, иммунизированных вакциной из штамма 19, в экспериментальных условиях
№ группы	Характеристика групп (схема иммунизации)	Исследовано животных	Реагировало положительно в РИД
			до заражения				после заражения (х)
			всего	в т.ч.			всего	в т.ч.
				А+М	А	М		А+М	А	М
1	Подкожно + конъюнктивально 40+4 млрд м.к.	9	1	-	1	-	7	2	-	5
2	Подкожно + подкожно 40+40 млрд м.к.	9	6	-	6	-	5	3	1	1
3	Конъюнктивально + конъюнктивально 40+4 млрд м.к.	9	-	-	-	-	7	2	-	5
4	Подкожно 40 млрд м.к.	9	-	-	-	-	3	2	-	1
5	Конъюнктивально 4 млрд м.к.	8	-	-	-	-	6	5	-	1
Итого (подопытные животные, abortus + melitensis)		44	7	-		-	28	14	1	13
6	Контроль (невакцинированные) melitensis	5	-	-	-	-	3	2	-	1
Примечание: антиген А - изготовлен из штамма B.abortus 19 антиген М - изготовлен из штамма B.melitensis Rev-1 х - на 30-й день после заражения шт. B.melitensis

Так, у овец, на 50-й день после ревакцинации вакциной из штамма B.abortus 19, РИД с антигеном -А была установлена в семи случаях при отрицательных показаниях с антигеном -М.

И, наоборот, на 30-й день после заражения B.melitensis преимущество было явно за антигеном -М. Так, всего реагировало положительно с обоими антигенами 31 проба, из них только с антигеном -М - 14, а с антигеном -А лишь две пробы или в 7 раз меньше.

Таким образом, экспериментальным путем была доказана видоспецифичность антигенов -А и -М, проявленная в перекрестных реакциях иммунодиффузии.

К тому же в вышеописанном опыте (таблица 2) из 18 животных с подтвержденным бруцеллоносительством в РИД реагировало 13 (72,2%). Из них только с антигеном -А реагировало одно животное (7,7%), а с антигеном -М 31,0%, то есть в четыре раза больше.

Таблица 2 Результаты сравнительного изучения активности О-ПС бруцеллезных антигенов -А и -М в РИД на овцах, иммунизированных вакциной из штамма 19, с подтвержденным бруцеллоносительством после искусственного заражения B.melitensis
№ п/п	Характеристика групп	Количество животных	Реагировало положительно в РИД
			всего		в т.ч.
					А+М		А		М
			кол-во	%	кол-во	%	кол-во	%	кол-во	%
1	Вакцинированные и ревакцинированные	13	10	76,9	6	60,0	1	7,7	3	23,1
2	Неиммунизированные	5	3	60,0	2	66,6	-	-	1	20,0
	Итого	18	13	72,2	8	61,5	1	7,7	4	31,0

Следовательно, при бактериологическом исследовании также была установлена видоспецифичность бруцеллезных антигенов -А и -М в РИД.

Пример 2. Сравнительное изучение чувствительности антигенов -А и -М в РИД было продолжено в производственных условиях в двух хозяйствах, благополучных по бруцеллезу мелкого рогатого скота. В первом хозяйстве овцы были вакцинированы и через 12 месяцев ревакцинированы вакциной из штамма Rev-1 (B.melitensis), а во втором - по той же схеме вакциной из штамма 19 (B.abortus). Исследование овец в обоих хозяйствах проводили через 4 месяца после ревакцинации.

В данном опыте (таблица 3) четко прослеживается связь результатов с видоспецифичностью антигена.

Так, в первом хозяйстве только на антиген -А реагировало 8,3%, а на антиген -М - 66,6%. Во втором хозяйстве, где овец прививали вакциной из штамма 19 (B.abortus), соотношение показателей было обратным: только на антиген -А в РИД реагировало положительно 16,6%, а антиген -М не выявил дополнительно ни одного животного.

Таблица 3 Результаты сравнительного изучения активности О-ПС бруцеллезных антигенов -А и -М в РИД в производственных условиях
№ п/п	Вакцинный штамм	Количество исследованных животных	Реагировало положительно в РИД
			всего		в т.ч.
					А+М		А		М
			голов	%	голов	%	голов	%	голов	%
1	Rev-1 + Rev-1 (B.melitensis)	200	12	6,0	3	25,0	1	8,3	8	66,6
2	19+19 (B.abortus)	98	6	6,1	5	83,3	1	16,6	-	-

Таким образом, и в производственных условиях была подтверждена ранее выявленная экспериментальным путем определенная видоспецифичность бруцеллезных антигенов -А и -М в РИД.

Пример 3. В данном опыте проводились исследования на бруцеллез сывороток крови от овец и крупного рогатого скота из неблагополучных по бруцеллезу хозяйств Республики Тыва.

Результаты сравнительного изучения антигенов -А и -М показали не только их выраженную видоспецифичность (таблица 4), но и явное преимущество по чувствительности антигена -М.

При исследовании 21 пробы сывороток крови от овец в РИД с обоими антигенами реагировало 4 пробы. Только с антигеном -А во всех пробах был получен отрицательный результат. Только с антигеном -М реагировало 14 проб. Причем из 3 убитых овец, которые реагировали только на антиген -М, в двух случаях выделен возбудитель бруцеллеза B.melitensis.

Таблица 4 Результаты исследования сывороток крови от животных из неблагополучных по бруцеллезу пунктов в РИД с разными антигенами
№ п/п	Вид животных	Количество сывороток	Реагировало положительно в РИД
			всего	в т.ч. только с антигеном
				А+М	-А	-М
1	Овцы	21	18	4	-	14
2	Крупный рогатый скот	50	41	36	3	2

При исследовании 50 проб сывороток крови от крупного рогатого скота в РИД с обоими антигенами реагировала 41 проба. Только с антигеном -А реагировало 3 пробы, а с антигеном -М - 2 пробы.

Таким образом, включение в комплекс стандартного бруцеллезного О-ПС антигена РИД М-компонента значительно повышает чувствительность этой реакции при диагностике бруцеллеза у мелкого рогатого скота, вызываемого возбудителем B.melitensis.

Учитывая выявленную в эксперименте и производственных условиях четко проявляемую видоспецифичность антигенов в РИД, является целесообразным применение для диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота в этой реакции О-ПС М-антигена, родственного возбудителю этого заболевания (B.melitensis).

Предлагаемый способ диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота (РИД с О-ПС антигеном) значительно повышает чувствительность метода при включении в технологию изготовления О-ПС антигена вакцинного штамма B.melitensis Rev-1 в 2-2,5 раза.

Литература

1. Филиппенко М.Л. Способ получения антигена для дифференциальной диагностики вакцинированных и больных бруцеллезом животных / М.Л.Филиппенко, Е.А.Киселев, В.М.Чекишев, Ш.Р.Файзрахманов // Патент №2035188. - 1995.

2. Аракелян П.К. Значение РИД при диагностике бруцеллеза овец / П.К.Аракелян, И.А.Косилов, С.К.Димов, Е.Б.Барабанова, В.М.Чекишев // Ветеринария. - 2004. - №8. - С.20-25.