аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты и содержащие его фармацевтические композиции

Формула изобретения

1. Аморфная форма 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, имеющая следующие характеристики:

(a) изображение пика рентгеновской дифракции, включающего широкий ореол на 2 примерно 17°; и

(b) термограмму дифференциальной сканирующей калориметрии, не имеющую пика эндотермы около 164° для кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты.

2. Аморфная форма по п.1, имеющая время удержания высокоэффективной жидкостной хроматографии около 21 мин в следующих условиях:

(i) температура около 45°С,

(ii) скорость потока около 1 мл/мин,

(iii) длина волны определения около 280 нм,

(iv) колонка 150 мм × 4,6 мм YMC Pack® ODS-AM, содержащая частицы размером 3 мкм,

(v) первая подвижная фаза, включающая раствор ацетата аммония с рН около 3,8, ацетонитрил и диоксан в молярном соотношении около 80:52:68, и

(vii) вторая подвижная фаза, включающая раствор ацетата аммония с рН около 3,8, ацетонитрил и диоксан в молярном соотношении около 20:34:46.

3. Аморфная форма по п.1 или 2, которая является по меньшей мере в 3 раза более растворимой в растворяющем растворителе, чем кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2- метилпропионовой кислоты.

4. Аморфная форма по п.1 или 2, которая является по меньшей мере в 3,5 раза более растворимой в растворяющем растворителе, включающем лаурилсульфат натрия, чем кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты.

5. Аморфная форма 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, охарактеризованная в п.1 или 2, которая может быть получена выпариванием спирта из жидкого образца, включающего кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты и указанный спирт.

6. Аморфная форма по п.5 или 6, где указанным спиртом является этанол, метанол или изопропанол.

7. Аморфная форма по п.5 или 6, где указанный спирт выпаривают при температуре от около 25 до около 50°С.

8. Аморфная форма по одному из пп.5-7, где указанный образец дополнительно содержит бутилированный гидроксианизол или бутилированный гидрокситолуол.

9. Аморфная форма 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, охарактеризованная в п.1 или 2, которая может быть получена осаждением указанной аморфной формы из жидкого образца с использованием осаждающего растворителя, причем указанный жидкий образец включает кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты и растворяющий растворитель.

10. Аморфная форма по п.9, где указанный растворяющий растворитель включает спирт или простой эфир, выбранные из этанола, метанола, изопропанола и простого диэтилового эфира.

11. Аморфная форма по п.9 или 10, где указанным осаждающим растворителем является вода или алкан.

12. Аморфная форма по одному из пп.9-11, где осаждение проводят при температуре около 50°С или ниже.

13. Аморфная форма по п.12, где указанная температура составляет около 5°С.

14. Аморфная форма 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, охарактеризованная в п.1 или 2, которая может быть получена измельчением кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты.

15. Аморфная форма по п.14, где 20 пики рентгеновского дифракционного изображения образцов, включающих указанный кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, уменьшаются в интенсивности с течением времени, пока указанный кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты измельчают.

16. Аморфная форма по п.14, где термограмма дифференциальной сканирующей калориметрии указанной аморфной формы не имеет пика эндотермы около 164°С.

17. Форма 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, охарактеризованная в п.1 или 2, имеющая изображение рентгеновской дифракции, выбираемое из группы, состоящей из фиг.3А и фиг.3В, или термограмму дифференциальной сканирующей калориметрии, выбранную из группы, состоящей из фиг.5 и 6.

18. Фармацевтическая композиция, обладающая иммуносупрессивной, против отторжения, противогрибковой, противовоспалительной, противоопухолевой и антипролиферативной активностью и включающая аморфную форму 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты по п.1 или 2 и фармацевтически приемлемый носитель.

19. Фармацевтическая композиция, обладающая иммуносупрессивной, против отторжения, противогрибковой, противовоспалительной, противоопухолевой и антипролиферативной активностью и включающая:

(i) аморфную форму 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты по п.1 или 2,

(ii) комплексон металлов,

(iii) регулятор рН,

(iv) поверхностно-активное вещество,

(v) по меньшей мере один наполнитель,

(vi) связующее,

(vii) дезинтегрант, и

(viii) смазывающее вещество.

20. Композиция по п.19, где указанным комплексоном металлов является этилендиаминтетрауксусная кислота, яблочная кислота или фумаровая кислота.

21. Композиция по п.19 или 20, где указанный регулятор рН включает лимонную кислоту, аскорбиновую кислоту, фумаровую кислоту или яблочную кислоту.

22. Композиция по одному из пп.19-21, где указанное поверхностно-активное вещество включает соединение, включающее полисорбат, соединение, включающее сложный эфир сорбитана, полоксамер или лаурилсульфат натрия.

23. Композиция по одному из пп.19-22, где указанным наполнителем является безводная лактоза, микрокристаллическая целлюлоза, маннит, фосфат кальция, пептизированный крахмал или сахароза.

24. Композиция по одному из пп.19-23, где указанное связующее включает повидон, гидроксипропилметилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу или желатин.

25. Композиция по одному из пп.19-24, где указанный дезинтегрант включает кроскармеллозу натрия, крахмал, гликолят натриевого крахмала, пептизированный крахмал или кросповидон.

26. Композиция по одному из пп.19-25, где указанное смазывающее вещество включает стеарат магния, стеариновую кислоту или стеарилфумарат натрия.

27. Композиция по одному из пп.19-26, где указанные компоненты перемешивают или гранулируют в сухом виде и прессуют в форму, подходящую для введения млекопитающему.

28. Композиция по п.27, где указанной вводимой формой является таблетка или каплета.

29. Композиция по одному из пп.19-26, где указанные компоненты добавляют к капсуле или жидкой суспензии, подходящей для введения млекопитающему.

30. Способ получения фармацевтической композиции, включающей аморфную форму 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты по п.1 или 2, включающий стадии:

(a) объединения (i) аморфной формы 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, (ii) этилендиаминтетрауксусной кислоты и (iii) лимонной кислоты;

(b) объединения лаурилсульфата натрия, первой части безводной лактозы, повидона и первой части кроскармеллозы натрия;

(c) объединения продукта (b) с продуктом (а);

(а) объединения второй части безводной лактозы и второй части кроскармеллозы натрия с продуктом (с);

(e) перемешивания продукта (d), и

(f) объединения продукта (е) со стеаратом магния.

31. Способ по п.30, где продукт стадии (b) пропускают через сито.

32. Применение аморфной формы 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты по п.1 или 2 в получении лекарственного средства для лечения или ингибирования отторжения трансплантата, заболевания «трансплантат против хозяина», аутоиммунных заболеваний, солидных опухолей или гиперпролиферативных сосудистых заболеваний.

33. Измельченная аморфная форма 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, охарактеризованная в п.1 или 2, которая может быть получена измельчением аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты в вихревой мельнице.

34. Измельченная аморфная форма по п.33, где указанной вихревой мельницей является мельница Trost, гидроэнергетическая мельница МС или спиральная вихревая мельница Alpine AS.

Описание изобретения к патенту

Предшествующий уровень техники

Настоящее изобретение относится к новой растворимой форме 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты.

Кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты (CCI-779) имеет низкую растворимость, которая ведет к низкому растворению твердой кристаллической формы, обычно пероральных твердых лекарственных форм, включающих таблетки, в физиологически приемлемых растворителях.

Сообщалось, что растворение и абсорбция 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты было улучшено посредством получения твердых дисперсий с системами носителей с использованием методики совместного осаждения, распылительной сушки, применения наночастиц и способов мокрой грануляции. Однако, хотя из области техники известно, что рапамицин может быть в кристаллической или аморфной форме, аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты никогда не был ранее получен, выделен или охарактеризован.

Так как 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты является терапевтически активным соединением, желательно получить аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, который имел бы улучшенную растворимость, скорость растворения и биодоступность.

Сущность изобретения

В одном аспекте настоящее изобретение относится к аморфному 42-эфиру рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты. Аморфная форма проявляет повышенную растворимость по сравнению с кристаллической формой и является, следовательно, применимой для множества целей, включая применение в фармацевтических композициях.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу получения аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты.

В следующем аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к наборам, содержащим аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты.

Другие аспекты и преимущества настоящего изобретения описаны в следующем подробном описании его предпочтительных вариантов осуществления.

Краткое описание чертежей

Фиг.1A-1D представляют собой рентгеновские дифракционные изображения (XRD) кристаллического и аморфного измельченного в шаровой мельнице 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты. Фиг.1A представляет собой XRD изображение кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты. Фиг.1B-D представляют собой XRD изображения измельченного в шаровой мельнице 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного после измельчения в течение 20 минут, 40 минут и 60 минут.

Фиг.2 представляет собой график, сравнивающий скорость растворения таблеток, содержащих аморфный и кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты в 0,4% растворе лаурилсульфата натрия (SLS). Таблетки, содержащие аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, представлены квадратами, и таблетки, содержащие кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, представлены треугольниками.

Фиг.3A-B представляет собой XRD изображение аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты. Фиг.3А является XRD изображением аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного выпариванием. Фиг.3B представляет собой XRD изображение аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного осаждением.

Фиг.4 представляет собой термограмму дифференцирующей сканирующей калориметрии (DSC) кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты.

Фиг.5 представляет собой DSC термограмму аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного выпариванием.

Фиг.6 представляет собой DSC термограмму аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного осаждением.

Фиг.7 представляет собой DSC термограмму аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного измельчением в шаровой мельнице в течение 60 минут.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к аморфному 42-эфиру рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты. Аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты выделяли и характеризовали высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ), рентгеновской дифракцией (XRD) и дифференциальной сканирующей калориметрией (DSC).

Аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты по настоящему изобретению лишен недостатков кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты. Аморфная форма является по меньшей мере в 3 раза более растворимой, чем кристаллическая форма.

Из нижеследующего описания будут видны дополнительные преимущества аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты и способы его получения и применения.

I. Определения

Термин "растворяющий растворитель" обозначает растворитель, который способен растворять твердое вещество. В рамках настоящего описания растворяющий растворитель включает любой растворитель, который способен растворять аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты или комбинацию аморфного и кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты.

Термин "осаждение" предназначен для описания процесса, посредством которого твердую форму соединения осаждают из раствора, содержащего растворенное соединение. В рамках настоящего описания осаждение обозначает осаждение аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты из раствора 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты в растворяющем растворителе.

Термин "осаждающий растворитель" обозначает растворитель, который способен осаждать соединение, растворенное в растворе. В рамках настоящего описания осаждающий растворитель обозначает растворитель, который осаждает аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты из растворяющего растворителя. Осаждающие растворители могут включать растворители, которые могут смешиваться с растворяющим растворителем, содержащим растворенное соединение. Альтернативно, осаждающий растворитель может включать растворитель, который является несмешиваемым с растворяющим растворителем, содержащим растворенное соединение. В одном варианте осуществления изобретения осаждающим растворителем является вода. В другом варианте осуществления изобретения осаждающим растворителем является алкан. Одним примером подходящего алкана является н-гептан. Однако могут быть выбраны другие подходящие алканы или комбинации любого из вышеупомянутых отдельных осаждающих растворителей.

Термин "выпаривание" обозначает процесс, посредством которого твердую форму соединения образуют выпариванием растворителя из раствора.

Термин "измельчение" обозначает процесс, посредством которого твердую форму соединения измельчают с использованием методик, известных специалисту в данной области техники, включающих методики, указанные в R.W. Lee et al., Particle Size Reduction in "Water Insoluble Drug Formulation", Rong Liu, Ed., Interpharm Press Co., Denver, CO: 473-392 (2000). В рамках настоящего описания измельчение обозначает процесс измельчения кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты для получения аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты с использованием аппаратуры, известной в данной области техники, включая, среди прочего, измельчающий сосуд. Однако тип измельчающего аппарата не является ограничением настоящего изобретения.

Термин "комнатная температура" обозначает температуру от около 23 до около 25°C. Однако специалисту в данной области техники понятно, что специфическая комнатная температура может варьировать в зависимости от условий, используемых во время образования аморфной формы и окружающих условий.

Термин "стабильный" в рамках настоящего описания относится к соединению, которое разлагается менее чем на около 10% в течение продолжительных периодов времени. В одном варианте осуществления изобретения термин стабильный относится к соединению, которое разлагается на менее чем около 6%. В другом варианте осуществления изобретения термин стабильный относится к соединению, которое разлагается менее чем на около 3%. В следующем варианте осуществления изобретения термин стабильный относится к соединению, которое разлагается на менее чем около 0,7%. В еще одном варианте осуществления изобретения термин стабильный относится к соединению, которое разлагается менее чем на около 0,4%.

Термин "продолжительный период времени" в рамках настоящего описания относится к периоду по меньшей мере 1 или 2 недели, во время которых соединения по изобретению являются стабильными. Предпочтительно, соединения по изобретению являются стабильными в течение от около 6 до около 12 месяцев. Однако специалист в данной области техники способен определить период времени, в течение которого соединения по изобретению являются стабильными.

II. Способы получения аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты

В одном аспекте настоящее изобретение относится к способам для получения аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты. Обычно, аморфную форму получают из кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты. Такие процессы среди других методик включают выпаривание, осаждение и измельчение. Однако определенные процессы, используемые для получения аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, не являются ограничением в настоящем изобретении.

(A) Выпаривание

В соответствии с настоящим изобретением, аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты может быть получен выпариванием растворяющего растворителя из раствора, содержащего 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты и растворяющего растворителя.

Кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты смешивают с растворяющим растворителем для образования раствора, содержащего кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты. Растворяющий растворитель является обычно спиртом или простым эфиром и может быть обезвожен или может содержать воду. Например, подходящие спирты включают этанол, метанол и изопропанол. В одном особенно предпочтительном варианте осуществления изобретения растворяющим растворителем является этанол. В другом особенно предпочтительном варианте осуществления изобретения растворяющим растворителем является диэтиловый эфир.

Другие компоненты необязательно добавляют к раствору, содержащему растворяющий растворитель и кристаллическую форму перед выпариванием, такие как соединения, которые предотвращают разложение 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты. Например, антиоксиданты и стабилизаторы могут быть добавлены к раствору, содержащему растворяющий растворитель и кристаллическую форму. В одном варианте осуществления изобретения антиоксиданты, которые могут быть добавлены к раствору, включают среди прочего бутилированный гидроксианизол и бутилированный гидрокситолуол. В другом варианте осуществления изобретения стабилизаторы, которые могут быть добавлены к раствору, включают этилендиаминуксусную кислоту, аскорбилпальмитат и витамин E.

После добавления кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, и необязательных других соединений к растворяющему растворителю раствор перемешивают в течение по меньшей мере около 1 минуты. Обычно раствор перемешивают в течение от около 1 минуты до около 2 часов. Специалист в данной области техники легко сможет определить тип используемого смешивания, а также период времени, требуемый для смешивания растворяющего растворителя с кристаллическим 42-эфиром рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты.

Растворяющий растворитель выпаривают из раствора при температурах, которые не способствуют разложению аморфной или кристаллической форм, или при более низких. Специалист в данной области техники может определить температуру, необходимую для выпаривания, на основании свойств растворяющего растворителя. В одном варианте осуществления изобретения растворяющий растворитель выпаривают при температуре по меньшей мере около 20°C. В следующем варианте осуществления изобретения растворяющий растворитель выпаривают при температуре от около 25 до около 50°C. В другом варианте осуществления изобретения растворяющий растворитель выпаривают при температуре от около 25 до около 30°C.

Вакуум также может быть использован для облегчения выпаривания растворяющего растворителя. Вакуум, имеющий давление менее чем около 1 атмосферы (атм), используют в настоящем изобретении для выпаривания растворяющего растворителя. Альтернативно, растворяющий растворитель выпаривают из раствора при атмосферном давлении около 1 атм. В одном варианте осуществления изобретения выпаривание проводят с использованием давления менее чем около 1 атм. В другом варианте осуществления изобретения выпаривание проводят с использованием давления, полученного ротационным выпаривателем и включает вакуум около 0,02 атм.

Вакуум может поддерживаться в течение коротких или более длительных периодов времени с целью удаления нежелательных летучих соединений, включая захваченные или остаточные растворяющий растворитель или воду. Специалист в данной области техники легко сможет определить количество времени, требуемое для выпаривания захваченных или остаточных растворяющего растворителя или воды. В одном варианте осуществления изобретения вакуум поддерживают в течение по меньшей мере 8 часов. В другом варианте осуществления изобретения вакуум поддерживают в течение от около 8 часов до около 7 дней.

Аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты получают выпариванием спирта из жидкого образца, содержащего кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты и спирт.

(B) Осаждение

В альтернативном варианте осуществления изобретения аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты получают осаждением. Особенно, аморфную форму осаждают добавлением осаждающего растворителя к раствору, содержащему кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, и растворяющего растворителя.

Кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты растворяют в растворяющем растворителе. В одном варианте осуществления изобретения растворяющим растворителем является спирт или простой эфир. В следующем варианте осуществления изобретения растворяющим растворителем является спирт. Таким спиртом может быть дегидратированный спирт или он может содержать воду. Подходящие растворители могут включать этанол, метанол и изопропанол. В одном особенно предпочтительном варианте осуществления изобретения растворяющим растворителем является этанол. В другом варианте осуществления изобретения растворяющим растворителем может быть простой эфир. В одном особенно предпочтительном варианте осуществления изобретения простым эфиром является диэтиловый эфир.

После добавления кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты к растворяющему растворителю раствор перемешивают в течение по меньшей мере около 1 минуты. Обычно, раствор смешивают в течение от около 1 минуты до около 2 часов. Специалист в данной области техники легко сможет определить используемый тип смешивания, а также период времени, требуемый для смешивания растворяющего растворителя с кристаллическим 42-эфиром рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты.

После подходящего периода времени аморфную форму осаждают из раствора с использованием осаждающего растворителя. Аморфная форма является обычно нерастворимой в смеси растворяющего растворителя/осаждающего растворителя при температуре, используемой во время осаждения.

Специалист в данной области техники сможет определить осаждающий растворитель, необходимый для осаждения аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты из растворяющего растворителя в зависимости от определенной температуры, давления и используемого растворяющего растворителя(ей). Однако любой из вышеупомянутых осаждающих растворителей может быть использован в настоящем изобретении.

Таким образом, аморфную форму осаждают из образца при температуре, которая позволяет осаждать аморфную форму или при более низкой. Специалист в данной области техники будет способен определить определенную температуру, требуемую для облегчения осаждения аморфной формы, принимая во внимание определенные используемые растворяющий растворитель и осаждающий растворитель. В одном варианте осуществления изобретения осаждение проводят при температуре около 50°C или ниже. В другом варианте осуществления изобретения осаждение проводят при температуре при или ниже около комнатной температуры. В следующем варианте осуществления изобретения осаждение проводят при температуре около 5°C.

По получении аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты он может быть выделен с использованием методик, известных специалисту в данной области техники и включающих фильтрацию, декантацию, центрифугирование и хроматографию, среди остальных. Обычно, фильтрацию используют для выделения осажденного аморфного образца.

После осаждения может быть использован вакуум для удаления остаточных или захваченных летучих соединений, включая остаточные, или захваченный растворяющий растворитель или воду. Вакуум, имеющий давление менее чем около 1 атмосферы (атм), может быть использован в настоящем изобретении. Предпочтительно, используют вакуум от около 0,2 до около 0,8 атм.

Такой вакуум может поддерживаться в течение коротких или более длительных периодов времени. Специалист в данной области техники будет способен легко определить количество времени, требуемое для выпаривания любого остаточного или захваченного растворяющего растворителя или воды. В одном варианте осуществления изобретения вакуум поддерживают в течение по меньшей мере около 8 часов. В другом варианте осуществления изобретения вакуум поддерживают в течение по меньшей мере около 2 дней. В следующем варианте осуществления изобретения вакуум поддерживают в течение от около 2 дней до около 7 дней.

Вакуум могут поддерживать при температуре для поддержания удаления любого остаточного или захваченного растворяющего растворителя или воды. В одном варианте осуществления изобретения может быть использована температура около комнатной температуры. В другом варианте осуществления изобретения может быть использована температура от около 5°C до около 25°C.

Аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, следовательно, получают осаждением аморфной формы из жидкого образца с использованием осаждающего растворителя, где жидкий образец содержит кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты и растворяющий растворитель.

(C) Измельчение

В еще одном аспекте аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты может быть получен измельчением кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты.

Некоторые приборы могут быть использованы для измельчения кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты и могут быть выбраны специалистом в данной области техники. Такие приборы могут включать измельчающие сосуды, шаровые мельницы и гидроэнергетические мельницы, среди остальных. Специалист в данной области техники может определить подходящие измельчающие приборы и условия для применения в настоящем изобретении. Однако применение определенного измельчающего прибора не является ограничением по настоящему изобретению.

Обычно кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты помещают в измельчающий сосуд и кристаллическую форму измельчают. Количество времени измельчения будет зависеть от количества кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, помещенного в измельчающий сосуд и определенного используемого измельчающего сосуда. Без связи с теорией авторы изобретения обнаружили, что когда процесс измельчения прогрессирует во времени, количество аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты увеличивается. В одном варианте осуществления изобретения кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты может быть измельчен в течение по меньшей мере около 20 минут. В другом варианте осуществления изобретения кристаллическую форму измельчают в течение по меньшей мере около 40 минут. В следующем варианте осуществления изобретения кристаллическую форму измельчают в течение по меньшей мере около 60 минут.

Аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты может быть получен измельчением кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты.

III. Определение характеристик аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты

Определение характеристик аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты и его отличия от кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты выполняли с использованием методик, известных специалисту в данной области техники. Особенно, подтверждение того, что 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты присутствует после выпаривания, осаждения или измельчения может быть проведено с использованием методик, включая температуру плавления, инфракрасную спектроскопию (ИК), спектроскопию ядерного магнитного резонанса (ЯМР), масс-спектральный анализ (МС), анализ топливных газов, комбинационную спектроскопию, элементный анализ и хроматографию, включая высокоэффективную жидкостную хроматографию.

Аморфная природа 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты может также быть подтверждена с использованием методик, используемых в данной области техники и включающих дифференциальную сканирующую калориметрию (DSC) и рентгеновскую дифракцию (XRD).

(A) Идентификация с использованием спектроскопии

ВЭЖХ может быть использована для верификации, что продукт, полученный выпариванием, осаждением или измельчением, как указано выше, является 42-эфиром рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты. Особенно, ВЭЖХ хроматограмма аморфного образца должна быть сходной с ВЭЖХ хроматограммой кристаллической формы. Желательно, ВЭЖХ хроматограмма аморфной формы является идентичной ВЭЖХ хроматограмме кристаллической формы.

ВЭЖХ хроматограмма аморфной формы может также содержать дополнительные пики, которые соответствуют примесям, которые могут быть легко определены специалистом в данной области техники. Однако специалисту в данной области техники понятно, что присутствие примесей не вмешивается в идентификацию аморфной формы.

Множество условий ВЭЖХ используют для получения ВЭЖХ хроматограммы, и они могут быть легко определены специалистом в данной области техники и не являются ограничением настоящего изобретения. Такие условия ВЭЖХ включают вариации в температуре колонки, скорости тока, длины волны определения, типа колонки, размера колонки и подвижной фазы, среди других. В одном варианте осуществления изобретения условия ВЭЖХ включают температуру около 45°C, скорость тока около 1,0 миллилитра (мл)/минуту, длину волны определения около 280 нанометров (нм) и колонку обратной фазы 150 миллиметров (мм) · 4,6 мм YMC Pack® ODS-AM, содержащей 3 микрон (мкм) ODS частицы. Множество подвижных фаз может также быть использовано в настоящем изобретении для получения ВЭЖХ хроматограммы аморфной формы. В одном варианте осуществления изобретения подвижная фаза включает раствор ацетата аммония, ацетонитрил, диоксан или их комбинацию. В одном варианте осуществления изобретения подвижная фаза включает раствор, содержащий раствор ацетата аммония при pH около 3,8, ацетонитрил и диоксан в молярном соотношении около 80:52:68. В другом варианте осуществления изобретения подвижная фаза включает раствор, имеющий раствор ацетата аммония при pH около 3,8, ацетонитрил и диоксан в молярном соотношении около 20:34:46. Комбинации вышеуказанных подвижных фаз также могут быть использованы.

Таким образом получают ВЭЖХ хроматограмму для аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты и сравнивают с известной ВЭЖХ хроматограммой кристаллической формы. Обычно, кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты имеет время удержания около 21 минуты с использованием условий, указанных выше.

С использованием условий ВЭЖХ, как указано выше, получали ВЭЖХ хроматограмму аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты. Для аморфной формы получали время удержания около 21 минуты. ВЭЖХ хроматограмму аморфной формы затем сравнивали с ВЭЖХ кристаллической формы с использованием таких же условий ВЭЖХ. В настоящем изобретении время удержания для аморфной формы было идентичным времени удержания около 21 минуты для кристаллической формы.

После подтверждения того, что 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты присутствовал после выпаривания, осаждения или измельчения, его аморфную природу подтверждали с использованием XRD и DSC.

(B) Идентификация с использованием рентгеновской дифракции

Методику рентгеновской дифракции (XRD) использовали для отличения аморфных форм от кристаллических форм. Как известно специалисту в данной области техники, кристаллические соединения дают XRD изображения, содержащие острые пики. Аморфные соединения, однако, обычно дают XRD изображения, содержащие широкие и плохо определяемые пики. Обычно порошковые методики XRD дифракции используют для идентификации аморфных соединений.

Таким образом XRD использовали в настоящем изобретении для того, чтобы отличить аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты от кристаллической формы. Порошковое XRD изображение кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты получали в настоящем изобретении, но также было легко доступно специалисту в данной области техники. См. изображение и/или данные XRD для кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты на фиг.1A. Как известно специалисту в данной области техники, типичное порошковое XRD изображение кристаллической формы содержит несколько острых пиков варьирующей интенсивности на около 8°, около 9°, около 11°, около 15°, около 16°, около 18°, около 19° и около 20°.

Изображение порошкового XRD аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученное, как описано в настоящем описании, следовательно, получают с использованием рентгеновских кристаллографических методик, известных специалисту в данной области техники. В одном варианте осуществления изобретения XRD изображение аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты включает один широкий пик или ореол. В другом варианте осуществления изобретения, XRD изображение аморфной формы содержит один широкий ореол. В следующем варианте осуществления изобретения XRD изображение аморфной формы содержит один широкий ореол на 2 около 17°.

Другие пики также могут присутствовать в XRD изображении аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты и соответствуют примесям в образце. Другие пики обычно соответствуют минимальным количествам кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, все еще присутствующим в образце.

Помимо охарактеризовывания аморфной формы, XRD используют для мониторинга образования аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты. Обычно образцы получают на различных стадиях во время выпаривания, осаждения и измельчения и из них получают XRD изображения. В одном варианте осуществления изобретения образцы забирают на различных стадиях во время измельчения и получают их XRD изображения. В другом варианте осуществления изобретения образцы в растворяющем растворителе забирают с различными интервалами, твердое вещество аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты осаждают и получают его дифракционные XRD изображения. В следующем варианте осуществления изобретения образцы в растворяющем растворителе забирают с различными интервалами, растворяющий растворитель выпаривают и получают дифракционное XRD изображение аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты.

Авторы изобретения обнаружили, что 2 пики XRD изображений образцов, полученных после измельчения кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, уменьшаются по интенсивности с течением времени, когда кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты измельчают.

(C) Идентификация с использованием дифференциальной сканирующей калориметрии

Методики дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) также используют для отличения аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты от кристаллической формы. Специалист в данной области техники легко сможет определить условия, необходимые для получения DSC термограммы. Множество DSC термографов являются доступными специалистам в данной области техники и включают ТА дифференциальный сканирующий калориметр, сухой газообразный азот в качестве продувочного газа и увеличение температуры со скоростью 5°C/мин, среди других приборов и условий.

DSC термограмма кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты известна специалисту в данной области техники и характеризуется четкой эндотермой плавления около 164°C, таким образом иллюстрируя кристаллическую природу соединения. DSC термограмма кристаллической формы также может включать пики, которые соответствуют продуктам разложения и включают эндотермы от около 173° до около 178°C.

DSC термограммы аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного в соответствии с настоящим изобретением выпариванием, осаждением и измельчением, не имеют пика эндотермы около 164°C, который присутствует в XRD изображении для кристаллической формы. Отсутствие этого пика подтверждает аморфную природу образца. DSC термограмма аморфной формы, полученной выпариванием и осаждением, также может включать эндотермы разложения около 43°C, 105°C, 173°C и 176-177°C. Без связи с теорией эндотерма 43°C соответствует остаточному растворяющему растворителю, обычно этанолу и/или воде.

DSC термограмма аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного осаждением, также включает экзотерму около 109°C.

DSC термограмма аморфной формы, полученной измельчением, может включать эндотермы около 52°C, 105°C, 155°C и 173-177°C и экзотерму около 127°C. Без связи с теорией авторы изобретения определили, что эндотермы 176-177° соответствуют продукту разложения. Авторы изобретения также определили, что при прогрессировании измельчения температура плавления аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, соответствующая эндотерме 164°C, сдвигается к 155°C.

В одном варианте осуществления изобретения может быть получен аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, имеющий изображение пика рентгеновской дифракции, содержащее широкий ореол на 2 около 17°, термограмму дифференциальной сканирующей калориметрии, не имеющую пика эндотермы около 164° для кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, и хроматограмму высокоэффективной жидкостной хроматографии, характерную для 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты.

IV. Растворимость аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты

Аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученный в соответствии с настоящим изобретением, имеет несколько преимуществ над кристаллической формой. В одном аспекте аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты имеет более высокую растворимость, чем кристаллическая форма.

Твердый 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, в кристаллической или аморфной форме, добавляли к растворяющим растворителям для растворения. В одном варианте осуществления изобретения аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты получали в виде твердого вещества выпариванием, осаждением или измельчением, как отмечено выше, и необязательно прессовали через сито для дальнейшего уменьшения размера частиц твердого вещества.

Как известно специалисту в данной области техники, измельчение также может быть использовано для мелкого измельчения или уменьшения размера частиц твердого вещества. Аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты может быть измельчен с использованием методик, известных специалисту в данной области техники. Специалист в данной области техники легко сможет выбрать прибор для измельчения, включая, среди прочего, вихревые мельницы. Примеры вихревых мельниц, известных в данной области техники, включают среди прочего мельницы Trost , энергетические мельницы MC Fluid® и спиральные вихревые мельницы Alpine AS.

Растворимость аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты может быть измерена растворением отдельных образцов кристаллической и аморфной форм в растворяющем растворителе. Растворимость таких образцов затем можно сравнить. Множество растворителей может быть использовано для определения растворимости аморфной формы и они могут быть выбраны специалистом в данной области техники. В одном варианте осуществления изобретения растворитель растворяет один или оба из аморфного и кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты. В следующем варианте осуществления изобретения растворителем является вода. В другом варианте осуществления изобретения растворителем является раствор, содержащий воду и лимонную кислоту. В еще одном варианте осуществления изобретения растворителем является раствор, содержащий воду, лимонную кислоту и этилендиаминтетрауксусную кислоту (ЭДТУ) или лаурилсульфат натрия (SLS). В еще одном варианте осуществления изобретения растворитель представляет собой 0,005 M раствор воды и лимонной кислоты, доведенный до рН около 4,6. В еще одном варианте осуществления изобретения растворителем является цитратный буфер, содержащий ЭДТУ, необязательно доведенный до рН около 4,6. В другом варианте осуществления изобретения растворителем является цитратный буфер, содержащий 0,2% SLS.

Растворимость аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты может также быть увеличена путем увеличения периодов времени смешивания кристаллической формы в растворяющем растворителе или путем измельчения такого же. Специалист в данной области техники в состоянии определить количество времени, требуемое для облегчения растворения аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты в растворяющем растворителе. В одном варианте осуществления изобретения аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты растворяли в растворителе в течение по меньшей мере около 0,5 часа. В другом варианте осуществления изобретения аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты растворяли в растворителе в течение от около 0,5 часа до около 72 часов. В следующем варианте осуществления изобретения аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты растворяли в растворителе в течение от около 24 до около 48 часов.

Образцы аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты могут также быть прессованы в таблетки, как обсуждается детально ниже. Такие таблетки, содержащие то же самое, показывают большую скорость растворения, чем таблетки, содержащие кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты (фиг.1). В одном варианте осуществления изобретения таблетки, содержащие аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, являются примерно в 1,5 раза более растворимыми, чем таблетки, содержащие кристаллическую форму.

Обычно аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты является стабильным при температуре до около 5°C.

V. Композиции, содержащие аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты

Композиции, содержащие аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, также могут быть получены в соответствии с настоящим изобретением. Такие композиции получают смешиванием аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты и фармацевтически приемлемого носителя.

Композиции, описанные в настоящем описании, содержащие аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, могут быть составлены в любой форме, подходящей для желаемого пути доставки с использованием фармацевтически эффективного количества аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты. Например, композиции по изобретению могут быть доставлены таким путем, как пероральный, кожный, чрескожный, интрабронхиальный, интраназальный, внутривенный, внутримышечный, подкожный, внутрибрюшинный, интраназальный, вагинальный, ректальный, сублингвальный, интракраниальный, эпидуральный, интратрахеальный или путем замедленного высвобождения. Предпочтительно, доставка является пероральной.

Пероральная лекарственная таблетированная композиция по настоящему изобретению также может быть использована для получения пероральных таблеток, содержащих производные аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, включая, но, не ограничиваясь ими, сложные эфиры, карбаматы, сульфаты, простые эфиры, оксимы, карбонаты и подобные, которые известны специалисту в данной области техники.

Фармацевтически эффективное количество аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты может варьировать в зависимости от конкретного соединения(й), типа доставки, тяжести состояния, подвергаемого лечению, и любых других активных ингредиентов, используемых в композиции. Режим дозирования также может быть установлен для обеспечения оптимального терапевтического ответа. В сутки могут быть доставлены несколько разделенных доз, например в виде отдельных доз от 2 до 4 раз в сутки, или может быть доставлена одна доза. Доза может, однако, быть пропорционально снижена или увеличена в зависимости от терапевтической ситуации. В одном варианте осуществления изобретения доставку осуществляют на ежедневном, недельном или месячном основании. В другом варианте осуществления изобретения доставкой является ежедневная доставка. Однако суточные дозы могут быть снижены или увеличены в зависимости от периодичности доставки.

Аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты может быть смешан с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями или эксципиентами, включая, без ограничения, твердые и жидкие носители, которые являются совместимыми с композициями по настоящему изобретению. Такие носители включают среди прочего добавки, сиропы, эликсиры, разбавители, вяжущие вещества, смазывающие вещества, поверхностно-активные вещества, гранулирующие агенты, дезинтегрирующие агенты, смягчающие вещества, комплексоны металлов, регуляторы pH, поверхностно-активные вещества, наполнители, дезинтегрирующие агенты и их комбинации. В одном варианте осуществления изобретения аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты смешивают с комплексонами металлов, регуляторами pH, поверхностно-активными веществами, наполнителями, дезинтегрирующими агентами, смазывающими веществами и вяжущими веществами.

Добавки могут включать, без ограничения, ароматизирующие агенты, красители, консерванты и дополнительные антиоксиданты, которые могут включать витамин E, аскорбиновую кислоту, бутилированный гидрокситолуол (BHT) и бутилированный гидроксианизол (BHA).

Вяжущие вещества могут включать, без ограничения, целлюлозу, метилцеллюлозу, гидроксиметилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу кальция, карбоксиметилцеллюлозу натрия, гидроксипропилцеллюлозу, фталат гидроксипропилметилцеллюлозы, микрокристаллическую целлюлозу, некристаллическую целлюлозу, полипропилпирролидон, поливинилпирролидон (повидон, PVP), желатин, аравийскую камедь и гуммиарабик, полиэтиленгликоли, крахмал, сахара, такие как сахароза, каолин, декстроза и лактоза, холестерин, трагакант, стеариновую кислоту, желатин, казеин, лецитин (фосфатиды), цетостеариловый спирт, цетиловый спирт, воск цетиловых эфиров, декстраты, декстрин, глицерилмоноолеат, глицерилмоностеарат, глицирилпальмитостеарат, алкиловые эфиры полиоксиэтилена, полиоксиэтиленовые производные касторового масла, полиоксиэтиленстеараты, поливиниловый спирт и желатин, среди остальных. В одном варианте осуществления изобретения вяжущим веществом является повидон, гидроксипропилметилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза или желатин. В другом варианте осуществления изобретения вяжущим веществом является повидон.

Смазывающие вещества могут включать, среди прочего, стеарат магния, светлую безводную кремниевую кислоту, тальк, стеариновую кислоту, лаурилсульфат натрия и стеарилфумарат натрия. В одном варианте осуществления изобретения смазывающим веществом является стеарат магния, стеариновая кислота или стеарилфумарат натрия. В другом варианте осуществления изобретения смазывающим веществом является стеарат магния.

Гранулирующие агенты могут включать, среди прочего, без ограничения, диоксид кремния, микрокристаллическую целлюлозу, крахмал, карбонат кальция, пектин, кросповидон и полипласдон.

Дезинтегрирующие агенты или дезинтегранты могут включать, среди прочего, кроскармеллозу натрия, крахмал, карбоксиметилцеллюлозу, замещенную гидроксипропилцеллюлозу, бикарбонат натрия, фосфат кальция, цитрат кальция, гликолат крахмала натрия, пептизированный крахмал или кросповидон. В одном варианте осуществления изобретения дезинтегрантом является кроскармеллоза натрия.

Смягчающие вещества могут включать, без ограничения, стеариловый спирт, норковый жир, цетиловый спирт, олеиловый спирт, изопропиллаурат, полиэтиленгликоль, оливковое масло, вазелиновое масло, пальмитиновую кислоту, олеиновую кислоту и миристилмиристат.

Поверхностно-активные вещества могут включать полисорбаты, сложные эфиры сорбитана, полоксамер или лаурилсульфат натрия. В одном варианте осуществления изобретения поверхностно-активным веществом является лаурилсульфат натрия.

Комплексоны металлов могут включать физиологически приемлемые хелатообразующие агенты, включая этилендиаминтетрауксусную кислоту, яблочную кислоту или фумаровую кислоту. В одном варианте осуществления изобретения комплексоном металлов является этилендиаминтетрауксусная кислота.

Регуляторы pH могут также быть использованы для регуляции pH раствора, содержащего 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты от около 4 до около 6. В одном варианте осуществления изобретения pH раствора, содержащего 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, доводили до pH около 4,6. Регуляторы рН могут включать физиологически приемлемые агенты, включая лимонную кислоту, аскорбиновую кислоту, фумаровую кислоту или яблочную кислоту и их соли. В одном варианте осуществления изобретения регулятором рН является лимонная кислота.

Наполнители, которые могут быть использованы в соответствии с настоящим изобретением, включают безводную лактозу, микрокристаллическую целлюлозу, маннит, фосфат кальция, пептизированный крахмал или сахарозу. В одном варианте осуществления изобретения наполнителем является безводная лактоза. В другом варианте осуществления изобретения наполнителем является микрокристаллическая целлюлоза.

В одном варианте осуществления изобретения композиции, содержащие аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, доставляют перорально посредством таблетки, каплеты или капсулы, микрокапсул, дисперсного порошка, гранул, суспензии, сиропа, эликсира и аэрозоля. Желательно, когда композиции, содержащие аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, доставляют перорально, доставка осуществляется посредством таблеток, капсул, заполненных твердым веществом или жидкостью.

В другом варианте осуществления изобретения композиции, содержащие аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, могут быть доставлены внутривенно, внутримышечно, подкожно, парентерально и внутрибрюшинно в форме стерильных инъекционных растворов, суспензий, дисперсий и порошков, которые являются жидкими настолько, что легко могут выходить из шприца. Такие инъекционные композиции являются стерильными и стабильными в условиях производства и хранения, и свободными от загрязняющего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы.

В следующем варианте осуществления изобретения композиции, содержащие аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, могут быть доставлены ректально в форме обычного суппозитория.

В другом варианте осуществления изобретения композиции, содержащие аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, могут быть доставлены вагинально в форме обычного суппозитория, крема, геля, кольца или покрытого оболочкой внутриматочного устройства (IUD).

В еще одном варианте осуществления изобретения композиции, содержащие аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, могут быть доставлены интраназально или интрабронхиально в форме аэрозоля.

Также композиции по настоящему изобретению, содержащие аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, могут быть совместно введены с одним или более другими агентами, включая химиотерапевтические агенты против отторжения.

Требования к дозировке аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты могут варьировать в зависимости от тяжести симптомов и конкретного пациента, получающего лечение. Специалист в данной области техники легко сможет определить требуемое количество аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты. В одном варианте осуществления изобретения вводят от около 0,5 до около 75 мг. В следующем варианте осуществления изобретения вводят от около 1 до около 25 мг. В другом варианте осуществления изобретения вводят от около 0,5 до около 10 мг, особенно когда используют в комбинации с другим агентом. В еще одном варианте осуществления изобретения вводят от около 2 до около 5 мг. В еще одном варианте осуществления изобретения вводят от около 5 до около 15 мг.

Лечение может быть начато с доз аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты меньших, чем требуемые для получения желаемого эффекта и обычно меньших, чем оптимальная доза аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты. После этого доза может быть увеличена до достижения оптимального эффекта в данных обстоятельствах. Предписанные дозы определяются лечащим врачом на основании опыта, касающегося пациента, получающего лечение. В общем, композиции по изобретению наиболее предпочтительно вводят в концентрации, которая обычно дает эффективные результаты без каких-либо вредных или пагубных побочных эффектов.

VI. Способы получения вводимых композиций, содержащих аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты

В одном аспекте настоящее изобретение включает способы получения фармацевтической композиции, содержащей аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты. Композицию можно вводить млекопитающему несколькими различными путями, как указано выше, и желательно вводят перорально в твердой или жидкой форме.

Твердые формы, включая таблетки, капсулы и каплеты, содержащие аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, могут быть образованы смешиванием аморфной формы с одним или более компонентами, описанными выше. В одном варианте осуществления изобретения компоненты композиции смешивают сухим или влажным смешиванием. В другом варианте осуществления изобретения компоненты гранулируют сухим способом. В следующем варианте осуществления изобретения компоненты суспендируют или растворяют в жидкости и добавляют к форме, подходящей для введения млекопитающему.

Жидкие формы, содержащие аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, могут быть образованы растворением или суспендированием аморфной формы в жидкости, подходящей для введения млекопитающему.

В одном варианте осуществления изобретения способы получения фармацевтической композиции, содержащей аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, включают смешивание аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, комплексона металлов, регулятора pH, поверхностно-активного вещества, наполнителя, вяжущего вещества, дезинтегранта и смазывающего вещества.

В другом варианте осуществления изобретения способы получения фармацевтической композиции, содержащей аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, включают смешивание аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, комплексона металлов, регулятора pH, поверхностно-активного вещества, первой части по меньшей мере одного наполнителя, вяжущего агента, первой части дезинтегранта, второй части по меньшей мере одного наполнителя, второй части дезинтегранта и смазывающего агента.

В следующем варианте осуществления изобретения способы получения фармацевтической композиции, содержащей аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, включают смешивание аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, этилендиаминтетрауксусной кислоты, лимонной кислоты, лаурилсульфата натрия, безводной лактозы, повидона, кроскармеллозы натрия и стеарата магния.

В еще одном варианте осуществления изобретения способы получения фармацевтической композиции, содержащей аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, включают смешивание аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, этилендиаминтетрауксусной кислоты, лимонной кислоты, лаурилсульфата натрия, первой части безводной лактозы, повидона, первой части кроскармеллозы натрия, второй части безводной лактозы, второй части кроскармеллозы натрия и стеарата магния.

В еще одном варианте осуществления изобретения способы получения фармацевтической композиции, содержащей аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, включают стадии (a) смешивания аморфной формы 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, комплексона металлов и регулятора pH; (b) смешивания поверхностно-активного вещества, первой части по меньшей мере одного наполнителя, связующего и первой части дезинтегранта; (c) смешивания продукта (b) с продуктом (a); (d) смешивания второй части по меньшей мере одного наполнителя и второй части дезинтегранта с продуктом (c); (e) перемешивания продукта (d); и (f) смешивания продукта (e) со смазывающим агентом. Продукт стадии (b) может необязательно быть пропущен через устройство для удаления больших комков, например сито.

В еще одном следующем варианте осуществления изобретения способы получения фармацевтической композиции, содержащей аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, включают стадии (a) смешивания аморфной формы 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, этилендиаминтетрауксусной кислоты и лимонной кислоты; (b) смешивания лаурилсульфата натрия, первой части безводной лактозы, повидона и первой части кроскармеллозы натрия; (c) смешивания продукта (b) с продуктом (a), (d) смешивания второй части безводной лактозы и второй части кроскармеллозы натрия с продуктом (c); (e) перемешивания продукта (d); и (f) смешивания продукта (e) со стеаратом магния.

Настоящее изобретение также относится к наборам или упаковкам фармацевтических композиций, созданных для применения в настоящем изобретении. Наборы по настоящему изобретению могут включать аморфную форму 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты и носитель, подходящий для введения млекопитающему, как обсуждалось выше.

VII. Способы применения аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты

Аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты может быть использован в лечении или профилактике множества состояний, известных специалисту в данной области техники, про которые известно, что указанная кристаллическая форма лечит или предотвращает их.

Аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты может, следовательно, обладать иммуносупрессивной, против отторжения, противогрибковой, противовоспалительной, противоопухолевой и антипролиферативной активностями.

Аморфная форма, следовательно, может быть использована для лечения или ингибирования отторжения трансплантата, включая почку, сердце, печень, легкое, костный мозг, поджелудочную железу, роговицу, тонкий кишечник, кожные аллотрансплантаты и ксенотрансплантаты сердечных клапанов. Аморфная форма также может быть использована для лечения или ингибирования аллергического энцефаломиелита, артрита и гиперпролиферативных сосудистых расстройств, включая рестеноз, атеросклероз и сердечные воспалительные заболевания. T-клеточный лейкоз/лимфома взрослых, заболевание «трансплантат против хозяина», воспаление глаз и грибковые инфекции также можно лечить с использованием аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты. Аморфная форма также может быть использована для лечения или ингибирования солидных опухолей, включая саркомы и карциномы, включая астроцитомы, рак предстательной железы, рак молочной железы, мелкоклеточный рак легких и рак яичника. Аутоиммунные заболевания, включая волчанку, ревматоидный артрит, сахарный диабет, миастению и рассеянный склероз, также могут быть излечены или предотвращены с применением аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного в соответствии с настоящим изобретением. Кроме того, воспалительные заболевания, включая псориаз, дерматит, экзему, себорею, воспалительные заболевания кишечника, легочное воспаление, включая астму, хронические обструктивные заболевания легких, эмфизему, острый респираторный дистресс синдром, бронхит и увеит глаз могут быть излечены или ингибированы с использованием аморфной формы 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты.

Соответствующие схемы приема могут быть легко определены на основании информации, представленной в настоящем описании.

Следующие примеры приведены для иллюстрации изобретения и не ограничивают его рамки. Специалист в данной области техники должен принимать во внимание, что хотя в следующих примерах описаны специфические реагенты и условия, могут быть сделаны модификации, которые не выходят за рамки изобретения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1

Способы получения аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты

А. Способ получения аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты выпариванием с использованием бутилированного гидрокситолуола и бутилированного гидроксианизола

Кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты (0,5 г), бутилированный гидрокситолуол (BHT) (0,063 г) и бутилированный гидроксианизол (BHA) (0,125 г) растворяли в обезвоженном этаноле (15 мл). Спирт выпаривали при пониженном давлении с использованием ротационного выпаривателя и при постоянной температуре от около 25 до около 30°C с использованием водяной бани. Выпаренное твердое вещество (партия A1) держали в течение ночи в вакууме для удаления остаточного этанола.

Высушенное вещество затем пропускали через #80 сито и анализировали с использованием рентгеновской дифракции (XRD) и дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC).

B. Способ получения аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты выпариванием

Кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты (0,5 г) растворяли в обезвоженном этаноле (2 мл). Затем спирт выпаривали при пониженной температуре с использованием ротационного выпаривателя при постоянной температуре от около 25 до около 30°C с использованием водяной бани. Выпаренные вещества выдерживали при пониженном давлении в течение ночи для удаления остаточного этанола.

Высушенное вещество (партия B1) затем пропускали через #80 сито и анализировали с использованием XRD и DSC.

С. Способы получения аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты

Варьирующие количества кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты растворяли в варьирующихся количествах этанола, как указано в таблице 1. Полученные растворы затем держали при комнатной температуре (партии C1-C3) или охлаждали до температуры ниже комнатной температуры (партии C4 и C5) с использованием ледяной воды при температуре около 0°C в течение около 40 минут. Добавляли воду к каждому из этих растворов, и твердые вещества осаждали из растворов. Осажденные твердые вещества собирали фильтрацией и сушили при пониженном давлении при комнатной температуре в течение от около 2 до около 7 дней.

Таблица 1
Партия №	Размер партии (г)	Температура	Объем этанола (мл)	Объем воды (мл)	Выход (%)
C1	0,20	Комнатная температура	4	20	75
C2	1,00	Комнатная температура	6	100	Не определяли
C3	1,00	Комнатная температура	6	40	82
C4	4,50	8°C	25	150	94
C5	20,0	9°C	90	200	90

D. Способ получения аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты измельчением

Кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты (1,416 г) измельчали в мешальной мельнице Retsch® (Тип MM2) с 25 мл измельчающим резервуаром и двумя шариками из нержавеющей стали, имеющими диаметры 12 мм со скоростью мельницы 40 оборотов в минуту (об/мин). Измельченные образцы забирали для анализов XRD и DSC на 20 (партия D1), 40 (партия D2) и 60 минут (партия D3).

Пример 2

Измельчение аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты

Измельчение аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты (15,0 г) проводили с использованием мельницы Trost (вихревая мельница) при входном давлении азота около 40 фунтов на квадратный дюйм (psi), скоростью подачи около 1 г/мин для получения измельченного аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты (10,3 г).

Пример 3

Спектральный анализ аморфного 42-эфира рапацимина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты

Получали ВЭЖХ хроматограммы образцов аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученных выпариванием, осаждением и измельчением, как указано в примере 1.

Условия ВЭЖХ включали температуру колонки около 45°C, скорость тока около 1,0 мл/мм, длину волны определения около 280 нанометров (нм), колонку 150 миллиметров (мм) · 4,6 мм YMC Pack ODS-AM, содержащую 3 мкм частицы, первую подвижную фазу, содержащую раствор ацетата аммония с рН около 3,8, ацетонитрил и диоксан в молярном соотношении около 80:52:68, и вторую подвижную фазу, содержащую раствор ацетата аммония при рН около 3,8, ацетонитрил и диоксан в молярном соотношении около 20:34:46.

ВЭЖХ хроматограммы аморфных образцов сравнивали с ВЭЖХ хроматограммой образца вещества кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты с использованием таких же вышеуказанных условий. Время удержания около 21 мин наблюдали для вещества аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты.

Пример 4

Характеристика аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты

XRD изображение и DSC термограммы получали для кристаллического и аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты. XRD изображения получали в соответствии с настоящим изобретением с использованием коммерчески доступного прибора рентгеновской дифракции Philipps® Expert BW-3040. DSC термограммы получали в соответствии с настоящим изобретением с использованием коммерчески доступного дифференциального сканирующего калориметра.

A. Рентгеновская дифракция (XRD)

(i) Кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты

XRD изображение кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты получали, и оно отражало характерные пики в XRD изображении на 2 на около 8°, около 9°, около 11°, около 15°, около 16°, около 17°, около 18° и около 20° (фиг.1A).

(ii) Аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты

XRD изображение аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного выпариванием и осаждением, показало, что характерные кристаллические пики для кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, также не присутствовали в изображении рентгеновской дифракции для аморфной формы.

В особенности, XRD изображение аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного выпариванием растворителя (партия A1) или осаждением (партия C1), показало широкий пик на 2 на около 17° (фиг.3А и 3B).

Кроме того, XRD изображения аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного измельчением (партии D1-D3), показали заметное снижение характерных кристаллических пиков с увеличением времени измельчения (фиг.1B-1D и таблица 2). Особенно, при увеличении времени измельчения, пики, соответствующие кристаллическому 42-эфиру рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, исчезали, таким образом иллюстрируя образование аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты.

Таблица 2
Партия	Пики рентгеновской дифракции при 26 (°)
Кристаллический	7,8, 9,0, 9,8, 10,1, 11,0, 11,3, 12,7, 13,3, 14,8, 15,2, 16,0, 17,2, 17,6, 18,1, 18,3, 19,0, 19,8, 21,1, 21,8, 22,1, 23,5, 25,0, 25,6, 26,6, 27,1 и 28,5
D1	7,8, 8,8, 9,7, 10,0, 10,8, 11,3, 12,5, 13,3, 15,0, 15,5, 16,2, 17,2, 18,2, 19,1, 19,9, 21,1, 22,0, 22,2, 23,6, 25,0, 26,7, 27,3 и 28,8
D2	7,8, 9,0, 9,3, 10,8, 11,2, 12,8, 13,2, 15,0, 15,3, 16,0, 17,6, 18,2, 19,9, 21,1 и 24,9
D3	8,0, 9,1, 11,2, 12,8, 13,7, 15,4 и 16,5
A1	17
C1	17

В. Дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC)

(i) Кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты

DSC термограмма кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты характеризовалась острой эндотермой плавления при 163,98°C, такая эндотерма показывает кристаллическую природу 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты (фиг.4). DSC термограмма также включает эндотерму продукта разложения при 178,25°C.

(ii) Аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученный выпариванием

DSC термограмма аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного методом выпаривания этанола (партия B1), показала широкую эндотерму при 43,30°C. Без связи с теорией авторы изобретения предположили, что такая широкая эндотерма при 43,30°C была, видимо, из-за остаточного этанола и воды (фиг.5). DSC термограмма также показала небольшую эндотерму при 105,18°C. Возможные эндотермы продуктов разложения в DSC термограмме при 173,24°C и 176,50°C также наблюдали.

Характерная эндотерма плавления при 163,98°C для кристаллической формы не присутствовала в DSC термограмме для аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, что таким образом указывает на присутствие аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты.

(iii) Аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученный осаждением

DSC термограмма аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного осаждением (партия C1), показала широкую эндотерму около 43,30°C, видимо, из-за остаточного этанола и воды (фиг.6), как указано выше. DSC термограмма также показала небольшую эндотерму 105,18°C. Также наблюдали возможные эндотермы продуктов разложения в DSC термограмме 173,24°C и 176,50°C.

Характерная эндотерма плавления 163,98°C для кристаллической формы не присутствовала в этой DSC термограмме, что, таким образом, указывает на присутствие аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты.

(IV) Аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученный измельчением

DSC термограмма аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного измельчением в течение 60 минут (партия D3), показала сниженную интенсивность и сдвиг кристаллической эндотермы с 163,98°C до 155,17°C. Такой сдвиг, следовательно, показывает значительное снижение кристалличности образца (фиг.7).

Пример 5

Растворимость аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты

A. Растворимость в буфере

Определяли растворимость аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты (партия C4) и измельченного кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты в растворе лимонной кислоты.

Отдельные образцы, содержащие аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты (партия C3) (9,1 мг) и измельченный кристаллический 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты (41,0 мг), добавляли в сцинтилляционные флаконы, содержащие 10 г (0,005 M) раствора лимонной кислоты, содержащего 0,001% ЭДТУ. Растворы смешивали и поддерживали при комнатной температуре и pH около 4,6. Затем флаконы встряхивали на ротационном смесителе в течение 24 часов.

Образцы (2 мл) и аморфного и кристаллического растворов отбирали с выбранными временными интервалами (0, 0,5, 3, 5 и 24 ч), фильтровали через 0,2 мкм фильтр и анализировали при комнатной температуре с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) (таблица 1). Растворимость образцов рассчитывали с использованием данных, представленных в ВЭЖХ хроматограмме и методик, используемых специалистами в данной области техники и представленных в таблице 3.

Растворимость аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты рассчитывали в течение периода 24 часа и обнаружили, что она составляет около 1,88 нг/мл при 25°C, что в 3 раза выше, чем для кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты. Ввиду этого растворение аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты является, следовательно, более быстрым, чем растворение измельченной кристаллической формы.

Таблица 3
Время (часы)	Растворимость (мкг/мл)
	Аморфная партия C3	Кристаллический
0	0	0
0,5	0,66	0,26
3	0,77	0,29
5	0,79	0,23
24	1,88	0,61

B. Растворимость в растворе поверхностно-активного вещества

Определяли растворимость аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты (партия C4) и измельченного кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты в растворе поверхностно-активного вещества.

0,005 M раствор лимонной кислоты, содержащий 0,2% лаурилсульфата натрия и 0,001% ЭДТУ кальциевой соли, доводили до pH около 4,73.

Отдельные образцы, содержащие аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты (партия C4) (60 мг) и измельченного кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты (60 мг), добавляли в сцинтилляционные сосуды, содержащие 10 г раствора лимонной кислоты/SLS. Затем растворы смешивали, поддерживали при комнатной температуре и встряхивали на ротационном смесителе в течение от около 24 до около 48 часов.

Образцы (2 мл) и аморфного, и кристаллического растворов забирали на 24 ч и 48 ч, фильтровали через 0,2 мкм фильтр и анализировали при комнатной температуре с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) (таблица 4). Растворимости образцов затем рассчитывали с использованием данных, полученных в ВЭЖХ хроматограмме и методик, используемых специалистами в данной области техники, и представлены в таблице 4.

Таблица 4
Продукт	Растворимость (мг/мл)
	24 час	48 час
Аморфный (партия C4)	2,17	2,24
Измельченный кристаллический	0,64	0,64

Растворимость аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты в растворе поверхностно-активного вещества SLS в течение периода 24 часа рассчитывали как составляющую около 2,17 мг/мл при 25°C, которая примерно в 3,5 раза выше, чем таковая для кристаллического 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты.

Ввиду этого растворение аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты в растворе поверхностно-активного вещества также является более быстрым, чем растворение измельченной кристаллической формы.

Пример 6

Стабильность аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты

Стабильность аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты определяли при различных температурах в течение определенных периодов времени.

Приблизительно 200 мг образцов аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного выпариванием (партия A1) или осаждением (партия C4), добавляли в стеклянные флаконы для ВЭЖХ, флаконы накрывали бумагой Kirn Wipes (Fisher Scientific) и бумагой Kim Wipes , привязанной к горлышку флаконов с использованием проволоки.

Образцы аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного выпариванием, и аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного осаждением, затем помещали в более крупные сцинтилляционные флаконы, содержащие около 1 г безводного влагопоглотителя сульфата кальция. Наружные сцинтилляционные флаконы закрывали, герметизировали парафином и помещали в устойчивые камеры. Одну устойчивую камеру поддерживали при температуре около 5°C при около 10-20% относительной влажности (ОВ), и другую устойчивую камеру поддерживали при температуре около 40°C при около 75% ОВ.

Образцы аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного осаждением, затем помещали в 4 мл флаконы из полиэтилена высокой плотности (HDPE), содержащие около 2 г безводного влагопоглотителя сульфата кальция. HDPE флаконы герметизировали с использованием вводимых теплом пробок и закрывали с использованием пластиковых крышек. Один флакон помещали в устойчивую камеру при около 5°С, один флакон помещали в устойчивую камеру при около комнатной температуре и третий флакон помещали в устойчивую камеру при около 40°С при ОВ около 75%.

Образцы образцов аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного выпариванием, забирали через 1 и 2 недели и анализировали с помощью ВЭЖХ (таблица 5). Образцы образцов аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного осаждением, забирали через 1 неделю и анализировали с помощью ВЭЖХ (таблица 6).

Таблица 5
Исходно	Сила=98,33%, общие прим.=0,46%, SLI=0,19%
	5°С			40°С/75% ОВ
	Сила (%)	Общие прим. (%)	SLI* (%)	Сила (%)	Общие прим. (%)	SLI* (%)
1 неделя	95,20	5,07	3,91	94,16	5,15	3,93
2 недели	92,56	4,42	3,74	90,55	4,60	3,72
SLI = главная примесь

Таблица 6
Состояние	Время	Сила (%)	Общие прим. (%)	SLI (%)	SECO (%)
	исходно	97,93	0,41	0,20	ND
КТ	1 неделя	97,49	0,37	0,12	ND
5°С	1 неделя	98,71	0,44	0,15	ND
40°С/75% ОВ	1 неделя	91,36	0,70	0,32	0,04
SLI = главная примесь

ND = не определялся

SECO = рапамицин с раскрытым лактонным кольцом

Такие данные иллюстрируют, что аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученный осаждением и выпариванием, является стабильным.

Пример 7

Получение таблеток, содержащих аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты

Этилендиаминтетрауксусную кислоту (0,008 г), безводную лимонную кислоту (0,021 г) и смесь аморфного 42-эфира рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, полученного осаждением (партия A1), смешивали геометрически на бумаге для образования предварительно смешанной смеси. SLS (2,841 г), безводную лактозу (17,356 г), повидон (16,521 г) и около 75% смеси, содержащей микрокристаллическую целлюлозу (MCC) PH 112, NF (35,049 г) и кроскармеллозу натрия (3,165 г), пропускали через #20 сито. Такую просеянную смесь затем объединяли с предварительно смешанной смесью, содержащей аморфный 42-эфир рапамицина и 3-гидрокси-2-(гидроксиметил)-2-метилпропионовой кислоты, и переносили в V-смеситель. Смесь оставшихся 25% MCC и кроскармеллозы натрия добавляли в V-смеситель и перемешивали в течение 5 минут. Добавляли стеарат магния (0,397 г) к перемешанной смеси и перемешивали в течение дополнительных 2 минут.

Окончательную смесь прессовали в 625 мг таблетки (твердость 14-17 килопонд (кп)) с использованием 0,25Ч0,71" инструментов в форме каплеты на таблетировочной машине B2 Stokes .

ВЭЖХ каждого образца получали, как отмечено выше, с использованием температуры около 45°C, скорости потока около 1,0 мл/минуту, длины волны определения около 280 нм, колонки обратной фазы 150 мм Ч 4,6 мм YMC Pack® ODS-AM, содержащей 3 мкм частицы ODS, первую подвижную фазу раствора ацетата аммония при pH около 3,8, ацетонитрила и диоксана в молярном соотношении около 80:52:68, и вторую подвижную фазу раствора ацетата аммония при pH около 3,8, ацетонитрила и диоксана в молярном соотношении около 20:34:46. Наблюдали пик времени удержания около 21 минуты.

Все публикации, цитируемые в настоящем описании, включены в настоящее описание в виде ссылки. Хотя изобретение было описано со ссылкой на особенно предпочтительный вариант осуществления изобретения, необходимо принимать во внимание, что могут быть внесены модификации без отклонения от сущности изобретения. Такие модификации входят в рамки приложенной формулы изобретения.