лекарственный препарат для лечения сахарного диабета на основе экзенатида и даларгина, применение и способ лечения

Формула изобретения

1. Комбинация для лечения сахарного диабета у млекопитающего, нуждающегося в этом, характеризующаяся тем, что она содержит эффективное количество экзенатида и эффективное количество даларгина.

2. Способ лечения сахарного диабета, характеризующийся тем, что млекопитающему, нуждающемуся в этом, вводят комбинацию, содержащую эффективное количество экзенатида и эффективное количество даларгина.

3. Способ по п.2, характеризующийся тем, что эффективное количество экзенатида составляет от 0,03 до 7,5 мкг/кг массы тела млекопитающего.

4. Способ по п.2, характеризующийся тем, что эффективное количество даларгина составляет от 0,14 до 14,3 мкг/кг массы тела млекопитающего.

5. Способ по п.2, характеризующийся тем, что комбинацию вводят парентерально.

6. Способ по п.2, отличающийся тем, что млекопитающим является человек.

7. Применение комбинации, содержащей эффективное количество экзенатида и эффективное количество даларгина, для производства лекарственного средства для лечения сахарного диабета у млекопитающего, нуждающегося в этом.

8. Лекарственное средство для лечения сахарного диабета у млекопитающего, нуждающегося в этом, характеризующееся тем, что оно содержит комбинацию экзенатида и даларгина в эффективных количествах.

9. Лекарственный препарат для лечения сахарного диабета у млекопитающего, нуждающегося в этом, характеризующийся тем, что он представляет собой дозированную форму лекарственного средства, содержащего комбинацию экзенатида и даларгина в эффективных количествах в смеси с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем.

10. Лекарственный препарат по п.9, характеризующийся тем, что эффективное количество экзенатида в однократной дозе составляет от 2 до 100 мкг.

11. Лекарственный препарат по п.9, характеризующийся тем, что эффективное количество даларгина в однократной дозе составляет от 10 до 1000 мкг.

12. Лекарственный препарат по п.9, характеризующийся тем, что фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем является вода для инъекций.

13. Способ приготовления лекарственного препарата для лечения сахарного диабета у млекопитающего, нуждающегося в этом, характеризующийся тем, что экзенатид и даларгин в эффективных количествах смешивают с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем и эту смесь помещают в пригодную для применения дозированную форму.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к области медицины, в частности к эндокринологии, а именно к лекарственным препаратам для лечения сахарного диабета.

Сахарный диабет представляет собой группу метаболических заболеваний, характеризующихся патологически повышенными уровнями глюкозы в крови, которые возникают вследствие дефектов в секреции инсулина, действии инсулина, или обоих дефектов. Число больных сахарным диабетом в мире в конце 1999 года составляло 120-140 млн. человек, и это число может удвоиться к 2025 году. Diabetus mellitus. WHO information. Fact Sheet № 138, Reviewed November (1999). Диагностическим критерием сахарного диабета является повышение концентрации глюкозы в плазме венозной и капиллярной крови натощак >7,8 ммоль/л или в цельной венозной или капиллярной крови >6,7 ммоль/л; через 2 ч после нагрузки 75 г глюкозы уровень глюкозы в плазме венозной крови >11,1 ммоль/л (200 мг/100 мл) и в плазме капиллярной крови >12,2 ммоль/л (220 мг/100 мл); в цельной венозной крови >10,0 (180 мг/100 мл) и в цельной капиллярной крови >11,1 ммоль/л (200 мг/100 мл). Главная цель лечения сахарного диабета заключается в поддержании нормального уровня глюкозы в крови. Для этой цели используются различные лекарственные средства, например сульфонилмочевины, метформин, и инсулин. Экзенатид является одним из лекарственных средств, эффективность лечения которым сахарного диабета, как инсулинозависимого, так и инсулинонезависимого, является доказанной в клинических испытаниях на людях.

Экзенатид представляет собой полипептид, известный также под названием экзендин-4 (exendin-4), способ выделения которого из яда ящерицы Heloderma suspectum и аминокислотная последовательность HGEGTFTSDL SKQMEEEAVR LFIEWLKNGG PSSGAPPPS, впервые были опубликованы в апреле 1992. Eng, J. et al., Isolation and Characterization of Exendin-4, an Exendin-3 Analogue, from Heloderma suspectum Venom. J. Biol. Chem., Vol.267. Issue 11. 7402-7405. Apr. 1992.

Патент США № 5424286, дата приоритета 24 мая 1993 года, пункт формулы 6, раскрывает применение экзенатида (экзендина-4) для стимуляции выделения инсулина с эффективностью большей, чем эндогенный гормон GLP-1. В описании изобретения указано, что экзенатид полезен для лечения сахарного диабета 2 типа (инсулинонезависимого) и сахарного диабета I типа (инсулинозависимого).

В дальнейшем были обнаружены другие терапевтические эффекты экзенатида. Заявка US 2005043238 описывает применение экзенатида для снижения веса. Международная публикация WO 9805351 и патент US 6858576 раскрывают применение экзенатида для снижения моторики и замедления опорожнения желудка в терапевтических и диагностических целях. Публикации US 2005037958, US 6703359, WO 9940788 раскрывают инотропное и диуретическое действие экзенатида. Международные публикации WO 3061362, WO 2004052390 и заявка US 2004266678 описывают применение экзенатида для лечения заболевания поликистоза яичника. Международная публикация WO 2004056317 и заявка US 2004209803 раскрывает применение экзенатида для лечения и профилактики нефропатии. Публикация WO 2004056313 раскрывает применение экзенатида для профилактики и лечения сердечной аритмии. Публикация WO 2004035623 описывает стабилизированные соединения экзенатида. Публикация WO 2004016747 раскрывает применение экзенатида для дифференцировки клеток костного мозга. Публикация WO 0073331 и заявка US 2004023871 раскрывают применение экзендина и его агонистов для лечения сахарного диабета у беременных. Заявка US 2003087821 раскрывает новые применения экзендина, агонистов экзендина. Публикация WO 0151078 и заявка US 2003036504 раскрывают применение экзенатида для модуляции уровня триглицерида и лечения дисплипидемии. Публикация WO 0054148 и патент RU 2247575 раскрывают применение экзенатида для подавления глюкагона. Публикация WO 0009666 раскрывает применение экзенатида для дифференциации не инсулинопроизводящих клеток в инсулинопроизводящие. Патент ЕР 1419783 раскрывает новые применения экзендина. Публикация WO 9907404 раскрывают применение экзенатида, агонистов и антагонистов экзенатида для воздействия на центральную нервную систему. Публикация WO 9830231 и заявка US 2002137666 раскрывают применение экзенатида и его агонистов для снижения всасывания пищи.

Основным применением экзенатида является лечение сахарного диабета, как инсулинонезависимого, так и инсулинозависимого. Однако его применение имеет ряд существенных недостатков, таких как необходимость частого применения в виде инъекций (несколько раз в день каждый день), наличие ряда побочных эффектов, обусловленных происхождением экзенатида из яда ядовитой ящерицы, высокая стоимость экзенатида. Побочными эффектами лечения экзенатидом являются, например, индивидуальная непереносимость и тошнота. Кроме того, терапевтическая эффективность экзенатида ограничена его высокой токсичностью, и достижение эффективного снижения (нормализации) глюкозы в крови, первая и главная цель лечения сахарного диабета, ограничивается невозможностью использования высоких токсических доз экзенатида, поэтому существует необходимость создания новых препаратов экзенатида, имеющих большую эффективность, без побочных эффектов экзенатида, и имеющих меньшую стоимость. Существуют два основных подхода для решения этой проблемы.

Первый подход связан с получением и применением новых пептидов-аналогов экзенатида и модифицированных экзенатидов. Публикация WO 3099314, заявки AU 20033239910, JP 2004506838 описывают новые агонисты экзенатида (экзендина). Публикация WO 0066629 и патент CN 1372570 описывают модифицированный экзендин и агонисты экзендина. В публикации WO 0041546 и патенте CN 1284755 описаны новые соединения агонистов экзендина. Заявка US 2004242853 описывает новые пептидные аналоги Glp-1 и экзенатида. Публикация WO 02090388 и заявка US 2004142866 описывают новые производные инсулинотропного пептида экзендин-4 (экзенатид). Заявка US 2004092443 описывает экзендин и агонисты экзендина пролонгированного действия. Заявка US 2004106547 описывает новые пептид-агонисты с активностью GLP-1 и экзенатида. Публикация WO 03011892 описывает новые аналоги пептида GLP-1 и экзенатида. Заявка US 2003087820 описывает новые лекарственные соединения агонистов экзендина. Патент CN 1381271 описывает новый аналог экзенатида. Публикация WO 0216430 и заявка US 2002115605 описывают новый аналог экзенатида с действием на головной мозг. Патент ЕР 1196444 описывает новые пептиды, аналоги экзенатида для снижения уровня глюкозы в крови. Патент EA3922 описывает новые инсулинотропные пептиды пролонгированного действия, аналоги экзенатида. Патент ЕР 1076066 описывает новые пептиды для снижения уровня глюкозы в крови, аналоги экзенатида. Патент US 6767887 описывает новые аналоги экзенатида для лечения сахарного диабета. Патент ЕР 1056775 описывает новые производные экзенатида. Заявка KR 2000016389 описывает новые аналоги экзенатида. Публикации WO 9925728, WO 9925727 описывают новые соединения агонистов экзенатида. Патент DE 19637230 описывают новые разновидности экзенатида для лечения диабета.

Второй подход связан с открытием и использованием новых фармацевтических комбинаций экзенатида с другим активным компонентом в составе одной фармацевтической композиции с целью увеличения эффективности лечения, снижения эффективной дозы экзенатида и, вследствие этого, уменьшения побочных эффектов, связанных с необходимостью применения больших доз экзенатида, и уменьшения стоимости лечения. Публикация WO 2005000222 раскрывает новые способы и композиции для улучшения доставки пептидов и протеинов через слизистую, в том числе экзенатида. Заявка US 2004266692 раскрывает новые фармацевтические композиции экзендина. Публикация WO 2004050115 и заявка US 2004180824 раскрывают применение экзенатида для лечения в комбинации с тиазолидиндионами. Патент RU 2242244 раскрывает применение композиций экзенатида для лечения сахарного диабета, замедления опорожнения желудка или снижения потребления пищи. Патент СА 2389462 раскрывает новые композиции экзенатида для профилактики диабета.

Нами было установлено, что совместное введение млекопитающим экзенатида и олигопептида даларгина, имеющего аминокислотную последовательность - тирозил-2-аланил-глицил-фенилаланил-лейцил-аргинин, решает поставленную задачу создания лекарственного препарата, обладающего повышенной эффективностью лечения при одновременном снижении побочных эффектов, что является целью настоящего изобретения.

Даларгин в указанной комбинации потенциирует терапевтические эффекты экзенатида, т.е. желаемый терапевтический эффект достигается с меньшими количествами экзенатида, и, вследствие этого, указанная комбинация снижает побочные эффекты, связанные с применением больших доз экзенатида, а также снижает стоимость лекарственного препарата. Более того, указанная комбинация позволяет достичь большего абсолютного терапевтического эффекта, чем тот, что можно достичь, используя только экзенатид, так как достижение этого большего эффекта ограничено токсичностью экзенатида и возможно только с использованием больших, чем фармакологически приемлемые, токсических доз экзенатида. Таким образом, с использованием указанной комбинации достигаются лучшие результаты в поддержании нормального уровня глюкозы в крови, чем те, что могут быть достигнуты с использованием одного экзенатида. На сегодняшний день неизвестно использование даларгина в комбинации с экзенатидом.

Из уровня техники неизвестно использование даларгина в качестве средства снижения патологически повышенных уровней глюкозы крови, что является первой и главной целью при лечении сахарного диабета. Основные известные свойства даларгина связаны с его эффективностью как протектора, защищающего клетки организма от поражения в неблагоприятных условиях, в том числе, при различных заболеваниях. Известно применение даларгина для лечения осложнений диабета. Патент RU 2270025 описывает применение даларгина для лечения диабетической ретинопатии. Патент RU 2144831 раскрывает применение даларгина для лечения пациента с синдромом диабетической стопы. Понятно, что лечение осложнений сахарного диабета не тождественно лечению диабета и ставит своей целью лечение пораженных вследствие наличия диабета органов и тканей, в то время как лечение сахарного диабета заключается, в первую очередь, в достижении наилучшего контроля уровня глюкозы в крови. Таким образом, известное из уровня техники применение даларгина для лечения диабетической ретинопатии и диабетической стопы не является основанием утверждать, что даларгин может применяться или когда-либо уже применялся для лечения диабета.

Известны применения даларгина, связанные, в основном, с протекторным эффектом даларгина, что не порочит новизну и изобретательский уровень настоящего изобретения.

Патент RU 2266130 раскрывает применение даларгина для лечения аритмического синдрома при прогрессирующей стенокардии. Патент RU 2261713 раскрывает применение даларгина для лечения тяжелой формы острого оптического неврита у пациента с рассеянным склерозом. Патент RU 2261722 раскрывает применение даларгина для лечения скрытой формы генитального герпеса у женщины с синдромом потери плода. Патент RU 2254890 раскрывает применение даларгина для стимуляции моторной активности кишечника у пациентов с травмами позвоночника. Патент RU 2261721 раскрывает применение даларгина для внутриоперационной нейропротекции у пациентов с церебральными артериальными аневризмами. Патент RU 2258529 раскрывает применение даларгина для раннего лечения геморрагического шока II, III степеней. Заявка RU 2004100992 раскрывает применение даларгина для эндоскопического гемостаза при осложненных кровотечением хронических гастродуоденалных язвах. Патент UA 7497U раскрывает применение даларгина для лечения первично диагностированной язвы двенадцатиперстной кишки у пациентов возбудимого типа личности. Патент UA 6829U раскрывает применение даларгина для лечения острого экспериментального панкреатита. Патент UA 6826U раскрывает применение даларгина для лечения острого экспериментального панкреатита. Патент UA 6823U раскрывает применение даларгина для лечения острого экспериментального панкреатита. Патент UA 6576U раскрывает применение даларгина для стабилизации ремиссии у пациентов с опийной наркоманией. Патент UA 67632 раскрывает применение даларгина для коррекции стресса экспериментальной модели хронического панкреатита. Патент UA 67631 раскрывает применение даларгина для коррекции стресса экспериментальной модели острого панкреатита, вызываемого L-аргинином. Патент UA 67630 раскрывает применение даларгина для коррекции стресса экспериментальной модели острого аднексита. Патент UA 67629 раскрывает применение даларгина для коррекции стресса экспериментальной модели перитонита. Патент UA 67626 раскрывает применение даларгина для коррекции экспериментального хронического стресса. Патент RU 2241488 раскрывает применение даларгина для приготовления раствора для инъекций. Патент UA 67601 раскрывает применение даларгина для стимулирования сращения переломов кости. Патент RU 2228762 раскрывает применение даларгина для ранней терапии желудочно-кишечных кровотечений. Патент UA 61455 раскрывает применение даларгина для профилактики раннего образования послеоперационных спаек брюшной полости. Патент UA 61449 раскрывает применение даларгина для профилактики образования послеоперационных спаек брюшной полости. Патент RU 2228148 раскрывает применение даларгина для послеоперационного обезболивания пациентов с некрозом поджелудочной железы после оментобурсостомии с многократными программированными санационными релапаротомиями. Патент RU 2218896 раскрывает применение даларгина для лечения пост воспалительной буллезной кератопатии. Патент RU 2217139 раскрывает применение даларгина для стимулирования моторной активности кишечника. Патент RU 2217186 раскрывает применение даларгина для лечения доброкачественных заболеваний шейки матки. Патент RU 2230549 раскрывает применение даларгина для лечения аллергических дерматозов. Публикация MD 1963F раскрывает применение даларгина для лечения хронического повторяющегося афтозного стоматита. Патент RU 2200026 раскрывает применение даларгина как антиангинального средства. Патент RU 2180598 раскрывает применение даларгина для лечения токсического гепатита у пациентов с хронической наркоманией. Патент RU 2185176 раскрывает применение даларгина для лечения дистрофических заболеваний роговицы и болезни трансплантата роговицы. Публикация MD 1610F раскрывает применение даларгина для лечения рецидивирующего хронического афтозного стоматита. Патент RU 2164153 раскрывает применение даларгина для лечения демпинг-синдрома. Патент RU 2196603 раскрывает применение даларгина для лечения ожоговой болезни. Патент RU 2188675 раскрывает применение даларгина для лечения пациентов с аменореей центрального генеза. Патент RU 2185849 раскрывает применение даларгина для лечения опийного абстинентного синдрома. Патент RU 2180591 раскрывает применение даларгина для лечения сексуальных дисфункций у мужчин. Патент RU 2167671 раскрывает применение даларгина для лечения пациентов с клещевым энцефалитом. Публикация MD 1413F раскрывает применение даларгина для лечения слизистой оболочки полости рта и красного плоского лишая. Патент RU 2198641 раскрывает применение даларгина для лечения глазных болезней. Патент MD 1296F раскрывает применение даларгина для лечения плоского лишая. Патент RU 2181564 раскрывает применение даларгина для метаболической коррекции в комплексе интенсивной терапии гиповолемического шока. Патент RU 2146530 раскрывает применение даларгина для анестезии при операциях на головном мозге. Публикации CZ 9602751, CZ 9602627 раскрывают применение гликозированных аналогов даларгина. Патент RU 2142736 раскрывает применение даларгина для премедикации. Патент RU 2142814 раскрывает применение даларгина как средства, обладающего холелитолитическим действием. Патент RU 2122415 раскрывает применение даларгина для интенсивной терапии пациентов с травматическим шоком. Патент RU 2104717 раскрывает применение даларгина для анестезии при операциях пациентов с синдромом Лериша. Публикация CZ 9301718 раскрывает аналоги даларгина с N-метилированной пептидной связью. Патент RU 2113856 раскрывает применение даларгина для профилактики рецидивов ангинозной боли при инфаркте миокарда.

Настоящее изобретение предлагает способ потенциирования терапевтического эффекта экзенатида, характеризующийся тем, что млекопитающему, нуждающемуся в этом, вводят эффективное количество экзенатида в комбинации с эффективным количеством даларгина.

Термин «потенциирование терапевтического эффекта» означает, что лечебный эффект, достигаемый введением экзенатида в млекопитающего в комбинации с эффективным количеством даларгина, больше, чем лечебный эффект, достигаемый введением эквивалентного количества экзенатида, но без даларгина, и при прочих равных условиях.

Положительный эффект комбинации экзенатида с даларгином связан с улучшением функционирования поджелудочной железы вследствие протекторного действия даларгина, что экспериментально доказано нами. Вследствие лучшего функционирования поджелудочной железы, эффективный контроль глюкозы в крови достигается при меньших дозах экзенатида, когда экзенатид используется в комбинации с даларгином.

Ближайшим аналогом настоящего изобретения является комбинация, описанная в международной публикации WO 2004050115, где улучшенный контроль уровня глюкозы в крови больных сахарным диабетом достигался с использованием комбинации двух активных веществ, экзенатида и вещества из класса тиазолидиндионов. Оба действующих вещества известны, как средства снижающие патологически повышенные уровни глюкозы в крови у больных диабетом, но комбинация этих веществ позволяет достичь лучшего контроля глюкозы, чем каждый из компонентов комбинации по отдельности. Однако протекторный эффект этой комбинации в отношении клеток поджелудочной железы не известен.

Вследствие потенциирования терапевтического эффекта экзенатида терапевтический эффект экзенатида в комбинации с даларгином может быть достигнут с меньшим количеством экзенатида, чем обычные лечебные дозы. Поэтому, использование настоящего изобретения предоставляет возможность минимизировать потенциальные побочные эффекты, связанные с применением больших терапевтических доз экзенатида и, тем не менее, достичь терапевтического эффекта и при этом снизить стоимость лечения. Примеры терапевтических эффектов экзенатида хорошо известны из уровня техники и включают, в том числе, снижение патологически повышенных уровней глюкозы в крови больных сахарным диабетом, снижение веса, снижение моторики и замедление опорожнения желудка в терапевтических и диагностических целях, инотропное и диуретическое действие экзенатида, улучшение дифференцировки клеток костного мозга, модуляцию уровней триглицеридов и лечение дисплипидемии, подавление глюкагона, дифференциацию не инсулинопроизводящих клеток в инсулинопроизводящие, воздействие на центральную нервную систему, и снижение всасывания пищи.

Предпочтительными терапевтическими эффектами экзенатида согласно настоящему изобретению являются снижение патологически повышенных уровней глюкозы и холестерина в крови больных диабетом.

Далее, настоящее изобретение предлагает способ лечения сахарного диабета, характеризующийся тем, что млекопитающему, нуждающемуся в этом, вводят эффективное количество экзенатида в комбинации с эффективным количеством даларгина. Предпочтительно, млекопитающий - это человек.

Термин «эффективное количество» означает количество экзенатида или даларгина, достаточное для того, чтобы достичь желаемого лечебного эффекта, но недостаточное для того, чтобы вызвать нежелательные побочные эффекты у млекопитающего, предпочтительно человека, нуждающегося в таком лечении. Очевидно, что «эффективное количество» может варьироваться в зависимости от таких факторов, как состояние млекопитающего, продолжительность лечения, конкретная используемая дозированная лекарственная форма. Предпочтительно, эффективное количество экзенатида составляет от 0,03 до 7,5 мкг/кг массы тела млекопитающего, более предпочтительно, от 0,07 до 0,36 мкг/кг массы тела млекопитающего. Предпочтительно, эффективное количество даларгина в единичной дозированной форме лекарственного препарата составляет от 0,14 до 14,3 мкг/кг массы тела млекопитающего, более предпочтительно, от 0,14 до 0,71 мкг/кг массы тела млекопитающего.

Согласно настоящему изобретению эффективное количество экзенатида в комбинации с эффективным количеством даларгина может вводиться млекопитающему разными способами, например подкожными инъекциями, внутримышечными инъекциями, легочным путем, назально, и подъязычно. Предпочтительно, эффективное количество экзенатида в комбинации с эффективным количеством даларгина вводится парентерально, например подкожно.

Далее, настоящее изобретение предлагает применять комбинацию, содержащую экзенатид и даларгин для производства лекарственного средства для лечения сахарного диабета у млекопитающего, нуждающегося в этом.

Далее, настоящее изобретение предлагает лекарственное средство на основе комбинации экзенатида и даларгина для лечения сахарного диабета у млекопитающего, нуждающегося в этом.

Далее, настоящее изобретение предлагает лекарственный препарат в дозированной форме для лечения сахарного диабета, содержащий эффективное количество экзенатида и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель, отличающийся тем, что дополнительно содержит эффективное количество даларгина.

Согласно настоящему изобретению лекарственный препарат изготавливается в дозированной лекарственной форме. Предпочтительно, эффективное количество экзенатида в однократной дозе составляет от 2 до 100 мкг, более предпочтительно, от 5 до 25 мкг. Предпочтительно, эффективное количество даларгина в однократной дозе составляет от 10 до 1000 мкг, более предпочтительно, от 10 до 50 мкг. Предпочтительно, дозированная форма содержит 60 однократных доз.

Термин «однократная доза» означает количество лекарственного препарата, вводимого млекопитающему, нуждающемуся в этом, за один прием.

Согласно настоящему изобретению лекарственный препарат содержит фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Термин «фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель» означает один или несколько совместимых жидких или твердых наполнителей или разбавителей, которые подходят для введения млекопитающему, предпочтительно человеку. Термин «совместимый» означает, что носитель или разбавитель можно смешивать с экзенатидом, даларгином и вспомогательными компонентами лекарственного препарата таким образом, что не происходит взаимодействия, уменьшающего терапевтическую эффективность лекарственного препарата. Примерами веществ, которые могут служить в качестве фармацевтически приемлемых носителей или разбавителей, являются вода для инъекций, изотоничный раствор соли, растворы фосфатных буферов, лактоза, пропиленгликоль, глицерин, сорбит, манит, красители, эмульгаторы, консерванты, стабилизаторы, и антиоксиданты. Предпочтительным носителем или разбавителем настоящего изобретения является вода для инъекций.

Согласно настоящему изобретению лекарственный препарат может быть приготовлен в различных лекарственных формах, например жидких, твердых, или газообразных, пригодных, например, для парентерального, назального, орального, оромукозального, или легочного введения. Примеры жидких лекарственных форм включают растворы, суспензии, эмульсии, и капли. Примеры твердых лекарственных форм включают таблетки, порошки, и капсулы. Примеры газообразных лекарственных форм включают аэрозоли. Предпочтительной лекарственной формой настоящего изобретения является раствор для инъекций.

Настоящее изобретение предлагает способ приготовления лекарственного препарата для лечения сахарного диабета, характеризующийся тем, что экзенатид и даларгин смешивают с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем и эту смесь помещают в пригодную для применения форму. Предпочтительно, экзенатид и даларгин вместе с вспомогательными ингредиентами, например буферами, стабилизаторами, регуляторами осмоляльности, и консервантами, растворяются в воде для инъекций и разливаются по ампулам в стерильных условиях, при этом, каждая ампула содержит терапевтически эффективное количество экзенатида и даларгина для однократного введения млекопитающему, нуждающемуся в этом.

Согласно настоящему изобретению лекарственный препарат можно вводить различными способами. Некоторые примеры таких способов введения включают внутримышечные, подкожные или внутривенные инъекции, а также назальное, трансдермальное, легочное, подъязычное, ректальное, или пероральное введение. Предпочтительным способом введения лекарственный препарата млекопитающему, нуждающемуся в этом, является подкожное инъекционное введение.

Далее, настоящее изобретение предлагает лекарственный препарат, представляющий собой набор для лечения сахарного диабета и характеризующийся тем, что содержит: (а) первый лекарственный препарат в дозированной форме, содержащий эффективное количество лиофилизированного порошка экзенатида и фармацевтически приемлемый твердый носитель или разбавитель; и (б) второй лекарственный препарат в дозированной форме, содержащий эффективное количество раствора даларгина для инъекций.

Предпочтительно, эффективное количество экзенатида в однократной дозе первого лекарственного препарата составляет от 2 до 100 мкг, более предпочтительно, от 5 до 25 мкг. Предпочтительно, эффективное количество даларгина в однократной дозе второго лекарственного препарата составляет от 10 до 1000 мкг, более предпочтительно, от 10 до 50 мкг. Предпочтительно, дозированные формы первого и второго лекарственного препарата содержат 60 однократных доз.

Настоящее изобретение предлагает способ применения лекарственного препарата, представляющего собой набор для лечения сахарного диабета и характеризующегося тем, что содержит: (а) первый лекарственный препарат в дозированной форме, содержащий эффективное количество лиофилизированного порошка экзенатида и фармацевтически приемлемый твердый носитель или разбавитель; и (б) второй лекарственный препарат в дозированной форме, содержащий эффективное количество раствора даларгина для инъекций. Предпочтительно, второй лекарственный препарат содержит фармацевтически приемлемый антисептик, это - мета-крезол. Указанный способ применения характеризуется тем, что однократная доза первого лекарственного препарата смешивается с однократной дозой второго лекарственного препарата до образования гомогенного раствора, и полученный раствор вводится подкожно млекопитающему, нуждающемуся в этом.

Настоящее изобретение предлагает еще один способ применения лекарственного препарата, представляющего собой набор для лечения сахарного диабета. Указанный способ применения характеризуется тем, что 60 однократных доз первого лекарственного препарата смешиваются с 60 однократными дозами второго лекарственного препарата до образования гомогенного раствора, и 1/60 часть полученного раствора вводится дважды в день в течение 30 дней подкожно млекопитающему, нуждающемуся в этом.

Предпочтительно, млекопитающий - это человек.

Следующие примеры демонстрируют изобретение. Примеры представлены только для иллюстрации, и ни коим образом не ограничивают пределы притязания изобретения.

Пример 1.

Пример демонстрирует способ потенциирования терапевтических эффектов экзенатида и способ лечения сахарного диабета.

Диабет был индуцирован у белых мышей однократным внутрибрюшинным введением аллоксана в дозе 135 мг/кг. Мышам дважды в сутки в течение 30 дней вводили подкожно экзенатид в дозе 7.5 мкг/кг, даларгин в дозе 8.8 мкг/кг, или комбинацию - экзенатид в дозе 7.5 мкг/кг плюс даларгин в дозе 8.8 мкг/кг. Контрольные животные получали инъекции физ. раствора. На 31 сутки опыта, измеряли уровни глюкозы и холестерина в крови натощак. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение (n=5) измеряемых уровней глюкозы или холестерина. Величину терапевтического эффекта Д оценивали как разность между наблюдаемым средним значением наблюдаемого параметра у опытных животных и средним значением того же параметра у контрольных животных. Для определения терапевтического эффекта снижения уровня глюкозы использовали следующую формулу:

Глюкоза = Глюкоза_{препарат}-Глюкоза_{контроль} .

Для определения терапевтического эффекта снижения уровня холестерина использовали следующую формулу:

Холестерин = Холестерин_{препарат}-Холестерин _{контроль}.

Статистические различия полученных результатов оценивали с использованием t-критерия Стьюдента. Данные представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1
Уровень глюкозы в крови мышей с аллоксановым диабетом
Препарат	Глюкоза, ммоль/л	Глюкоза, ммоль/л
Контроль	11.5±0.9	0
Экзенатид	7.5±0.4*	-4.0
Даларгин	10.6±1.3	-0.9
Экзенатид + Даларгин	4.2±0.9*	-7.3
* Статистически достоверное отличие от контроля (р<0.05)

Мыши с аллоксановым диабетом имели достоверно повышенные уровни глюкозы натощак в крови по сравнению с интактными мышами (11.5±0.9 vs. 5.3±0.3 ммоль/л, р0.05). Экзенатид и комбинация «экзенатид + даларгин» достоверно снижали уровень глюкозы натощак в крови мышей с аллоксановым диабетом. Однако эффект комбинации был существенно больше (снижение 7.3 ммоль/л), чем эффект экзенатида (снижение 4.0 ммоль/л), взятого в количестве, эквивалентном использованному в комбинации «экзенатид + даларгин», но без даларгина и при прочих равных условиях. Даларгин, взятый отдельно в количестве, эквивалентном использованному в комбинации «экзенатид + даларгин», был неэффективен для снижения уровней глюкозы в крови мышей с аллоксановым диабетом. Таким образом, даларгин потенциирует терапевтический эффект экзенатида, связанный со снижением патологически повышенных уровней глюкозы в крови. Соответственно, лечение сахарного диабета совместным введением эффективных количеств экзенатида и даларгина имеет преимущество перед лечением сахарного диабета введением только экзенатида.

Таблица 2
Уровень холестерина в крови мышей с аллоксановым диабетом
Препарат	Холестерин, ммоль/л	Холестерин, ммоль/л
Контроль	2.61±0.25	0
Экзенатид	2.15±0.22*	-0.46
Даларгин	2.34±0.16	-0.27
Экзенатид + Даларгин	1.46±0.12*	-1.15
* Статистически достоверное отличие от контроля (р<0.05)

Мыши с аллоксановым диабетом имели достоверно повышенные уровни холестерина в крови натощак по сравнению с интактными мышами (2.61±0.25 vs. 1.02±0.37 ммоль/л, р<0.05). Экзенатид и комбинация «экзенатид + даларгин» достоверно снижали уровень холестерина натощак в крови мышей с аллоксановым диабетом. Однако эффект комбинации был существенно больше (снижение 1.15 ммоль/л), чем эффект экзенатида (снижение 0.46 ммоль/л), взятого в количестве, эквивалентном использованному в комбинации «экзенатид + даларгин», но без даларгина и при прочих равных условиях. Даларгин, взятый отдельно в количестве, эквивалентном использованному в комбинации «экзенатид + даларгин», был неэффективен для снижения уровней холестерина в крови мышей с аллоксановым диабетом. Таким образом, даларгин потенциирует терапевтический эффект экзенатида, связанный со снижением патологически повышенных уровней холестерина в крови.

Повреждения и гибель бета-клеток поджелудочной железы мышей из опыта были оценены морфометрически. Доля нормальных неповрежденных клеток у мышей в контрольной группе, мышей леченных экзенатидом, и мышей леченных комбинацией экзенатида с даларгином составляла примерно 8, 40, и 60% соответственно. Таким образом, комбинация экзенатида с даларгином существенно улучшает выживаемость и функционирование клеток поджелудочной железы по сравнению с экзенатидом, примененным отдельно в той же дозе, что и в комбинации, и при прочих равных условиях.

Пример 2

Пример демонстрирует способ лечения сахарного диабета.

Диабет был индуцирован у мышей как в опыте 1. Мышам дважды в сутки в течение 30 дней вводили подкожно экзенатид в разных дозах, даларгин в разных дозах, или комбинацию экзенатида с даларгином. Контрольные животные получали инъекции физ. раствора. На 31 сутки опыта, измеряли уровни глюкозы в крови натощак. Данные представлены в таблице 3 как среднее снижение уровня глюкозы натощак ( Глюкоза) на 31 сутки опыта у мышей (n=5) с аллоксановым диабетом, леченных комбинацией экзенатида и даларгина, по сравнению с животными, леченными только экзенатидом, взятым в эквивалентной дозе и при прочих равных условиях. Для определения среднего снижения уровня глюкозы использовали следующую формулу:

Глюкоза = Глюкоза_{экзенатид}-Глюкоза_{экзенатид+даларгин} .

Таблица 3
Среднее снижение уровня глюкозы ( Глюкоза) в крови мышей с аллоксановым диабетом леченых комбинацией эффективных количеств экзенатида и даларгина
Состав комбинации «экзенатид + даларгин»	Глюкоза, ммоль/л
Экзенатид, мкг/кг	Даларгин, мкг/кг
0,03	14,3	-5,3
1,4	0,14	-2,8
7.5	8,8	-3,3

Из таблицы видно, что уровень глюкозы натощак в крови мышей с аллоксановым диабетом леченных в течение 30 суток комбинацией 0,03 мкг/кг экзенатида и 14,3 мкг/кг даларгина на 5,3 ммоль/л ниже ( Глюкоза = -5,3 ммоль/л), чем в крови мышей, леченных только 0,03 мкг/кг экзенатида. Уровень глюкозы натощак в крови мышей с аллоксановым диабетом леченных в течение 30 суток комбинацией 1,4 мкг/кг экзенатида и 0,14 мкг/кг даларгина на 2,8 ммоль/л ниже, чем в крови мышей, леченных только 1,4 мкг/кг экзенатида. Уровень глюкозы натощак в крови мышей с аллоксановым диабетом леченных в течение 30 суток комбинацией 7,5 мкг/кг экзенатида и 8,8 мкг/кг даларгина на 3,3 ммоль/л ниже, чем в крови мышей, леченных только 7,5 мкг/кг экзенатида. Таким образом, комбинация экзенатида с даларгином существенно более эффективна для лечения сахарного диабета по сравнению с равной дозой экзенатида, что и в указанной комбинации, если экзенатид применяется отдельно без даларгина.

Пример 3

Пример демонстрирует применение комбинации, содержащей экзенатид и даларгин для приготовления лекарственного средства и лекарственного препарата для лечения сахарного диабета.

В колбу с мешалкой загружают 750 мл воды для инъекций, 40,15 г маннита, 3,3 г мета-крезола, массу перемешивают, добавляют 10 мл буфера с рН 4,7-7,0, и добавляют комбинацию, содержащую 2-100 мг экзенатида и 10-1000 мг даларгина. Раствор перемешивают, добавляют воду для инъекций до 1 л, раствор подвергают стерилизующей фильтрации, последовательно через фильтры 0,45 мкм и 0,22 мкм. Полученный раствор для инъекций разливают в стерильных условиях в ампулы по 1 мл, получают 950 ампул. Раствор соответствует требованиям ГФ XI и НД на лекарственный препарат для инъекций. Состав препарата указан в таблице 4.

Таблица 4
Компонент	Количество в одной ампуле
Экзенатид	2-100 мкг
Даларгин	10-1000 мкг
Маннит	40 мг
Консервант	33 мг
Буферная смесь	0,15 мг
Вода для инъекций	1 мл

Ампулы с препаратом для инъекций упаковываются в пригодную упаковку. Каждая упаковка содержит 10 ампул и инструкцию по применению лекарственного препарата для лечения сахарного диабета.

Способ применения: содержимое ампулы (однократная доза препарата для лечения сахарного диабета) вводится подкожно человеку, нуждающемуся в таком лечении. Введение может быть повторено в течение суток. Курс лечения может быть один день или дольше.

Пример 4

Пример демонстрирует лекарственный препарат для лечения сахарного диабета.

Раствор для инъекций, содержащий экзенатид и даларгин приготавливается, как указано в примере 3. Раствор для инъекций, содержащий 60 однократных доз, помещается во флакон, пригодный для многократного отбора доз.

Пример 5

Пример демонстрирует лекарственный препарат в форме набора для лечения сахарного диабета и способ его применения.

Приготовление первого лекарственного препарата. В колбу помещают 1000 мл воды для инъекций, 40 г маннита, 2-100 мг экзенатида, массу перемешивают до образования гомогенного раствора. Раствор подвергают стерилизующей фильтрации, последовательно через фильтры 0,45 мкм и 0,22 мкм. Полученный раствор для инъекций разливают в стерильных условиях во флаконы и лиофилизируют, получают 950 флаконов. Один флакон содержит 2-100 мкг лиофилизированного порошка экзенатида и 20 мг маннита в качестве фармацевтически приемлемого твердого носителя или разбавителя.

Приготовление второго лекарственного препарата. В колбу загружают 1000 мл воды для инъекций, 10-1000 мг даларгина, 150 мг мета-крезола, 830 мг янтарной кислоты, доводят рН до 4,9-5,3 гидроокисью натрия, массу перемешивают до образования гомогенного раствора. Раствор подвергают стерилизующей фильтрации, последовательно через фильтры 0,45 мкм и 0,22 мкм. Полученный раствор для инъекций разливают в стерильных условиях во флаконы, получают 950 флаконов. Один флакон содержит раствор для инъекций, содержащий 10-1000 мкг даларгина.

Первый и второй лекарственный препараты упаковываются в пригодную упаковку. Каждая упаковка содержит по 10 флаконов каждого препарата и инструкцию по применению лекарственного препарата для лечения сахарного диабета.

Способ применения: содержимое первого флакона растворяется в содержимом второго флакона, и полученный гомогенный раствор вводится однократно подкожно человеку, страдающему сахарным диабетом.

Пример 6

Пример демонстрирует лекарственный препарат в форме набора для лечения сахарного диабета и способ его применения.

Приготовление первого лекарственного препарата. В колбу помещают 10 мл воды для инъекций, 50 мг маннита, 0,12-6,0 мг экзенатида, массу перемешивают до образования гомогенного раствора. Раствор подвергают стерилизующей фильтрации, последовательно через фильтры 0,45 мкм и 0,22 мкм. Полученный раствор заливают в стерильных условиях во флакон и лиофилизируют. Один флакон содержит 0,12-6,0 мг лиофилизированного порошка экзенатида и 50 мг маннита в качестве фармацевтически приемлемого твердого носителя или разбавителя.

Приготовление второго лекарственного препарата. В колбу загружают 3 мл воды для инъекций, 0,6-60 мг даларгина, 9 мг мета-крезола, 50 мг янтарной кислоты, доводят рН до 4,9-5,3 гидроокисью натрия, массу перемешивают до образования гомогенного раствора. Раствор подвергают стерилизующей фильтрации, последовательно через фильтры 0,45 мкм и 0,22 мкм. Полученный раствор для инъекций заливают в стерильных условиях во флакон. Один флакон содержит раствор даларгина для инъекций, содержащий 0,6-60 мг даларгина.

Первый и второй лекарственный препараты упаковываются в пригодную упаковку. Каждая упаковка содержит по одному флакону каждого препарата и инструкцию по применению лекарственного препарата для лечения сахарного диабета.

Способ применения: содержимое первого флакона растворяется в содержимом второго флакона, и 1/60 полученного гомогенного раствора вводится дважды в день в течение 30 дней подкожно человеку, страдающему сахарным диабетом.