способ получения свободного от белка биологически активного препарата высокополимерной рнк из сухих пекарских дрожжей saccharomyces cerevisiae

Формула изобретения

Способ получения свободного от белка биологически активного препарата высокополимерной РНК из сухих пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae, включающий суспендирование дрожжей в течение 3 мин в водном растворе олеиновой кислоты, с концентрацией олеиновой кислоты 15 г/л, оттитрованном 2,5 М NaOH, при температуре суспензии не ниже 98°C, кипячение суспензии в течение 40 мин при 98-100°C при периодическом перемешивании, добавление через 10, 20 и 30 мин после суспендирования последней порции дрожжей в кипящую суспензию 2,5 М NaOH, добавление по окончании экстракции в суспензию кипяченой воды, перемешивание, отстаивание суспензии при комнатной температуре в течение 22 ч, розлив слитого с помощью сифона супернатанта в виалы с последующим замораживанием и лиофилизацией.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины и может быть использовано для лечения кожных заболеваний вирусной этиологии и ОРВИ, в том числе гриппа.

Наиболее близким к предлагаемому является раствор высокополимерной РНК, полученный из дрожжей путем суспендирования их в водном 1-2%-ном растворе олеиновой кислоты, оттитрованной щелочью до pH 7-8, суспензию выдерживают при 98-102°C в течение 40-60 мин, отстаивают экстракт в течение 20-24 ч при комнатной температуре, к слитой с помощью сифона надосадочной жидкости добавляют NaCl до концентрации 2-3 M, суспензию выдерживают 20-96 ч при комнатной температуре, центрифугируют (2500-3500 g, 5-15 мин, без охлаждения), осадок-шрот промывают 2-мя порциями 2-3 М раствора NaCl и 5-ю порциями 92-96%-ного этанола путем последовательного его ресуспендирования при комнатной температуре и центрифугирования (2500-3500 g, 5-15 мин, без охлаждения), из промытого шрота высокополимерную РНК экстрагируют дистиллированной водой [1].

Данным способом может быть получен раствор биологически активной высокополимерной РНК. Однако этот способ многостадиен и трудоемок.

Предлагаемый способ получения дрожжевого экстракта, не уступающего по лечебным свойствам прототипу, прост и полностью безотходен.

Цель достигается тем, что сухие дрожжи суспендируют порциями в течение 3-5 мин в водном 1-2%-ном растворе олеиновой кислоты, оттитрованной щелочью до pH 7-8, суспензию выдерживают при 98-100°C в течение 40-45 мин, отстаивают экстракт в течение 20-24 ч при комнатной температуре и супернатант, содержащий в качестве основных компонентов, кроме воды, - высокополимерную РНК, низкополимерную РНК и олеат натрия, используют в лечебных целях. Выпавший же в осадок денатурированный белок может быть использован для приготовления белковых коктейлей для спортсменов.

Пример осуществления предлагаемого способа

300 г свежих сухих пекарских дрожжей (Saccharomyces cerevisiae, Новосибирский дрожжевой завод, ГОСТ 28483-90) суспендировали порциями (первые порции по щепотке) в течение 3 мин в 3 л кипящей воды, содержащей 45 г олеиновой кислоты, оттитрованной 20 мл 2,5 М NaOH таким образом, чтобы температура суспензии не опускалась ниже 98°C. Суспензию кипятили 40 мин при 98-100°C, периодически перемешивая. Через 10, 20 и 30 мин после суспендирования последней порции дрожжей в кипящую суспензию добавляли по 10 мл 2,5 М NaOH. По окончании экстракции суспензию доводили кипяченой водой до 4,5 л, перемешивали, переносили в высокий узкий стеклянный сосуд и отстаивали при комнатной температуре в течение 22 ч. Отстоявшийся супернатант (~2,9 л) сливали с помощью сифона в стеклянную емкость, после чего добавляли его в мазь или разливали в виалы по 2-4 мл, замораживали и лиофилизовали. Киселеобразный дрожжевой шлам, собирающийся на дне сосуда и содержащий до 70% денатурированного белка, сушили при 58-62°C обычным способом.

Полученный предлагаемым способом дрожжевой экстракт, содержащий высокополимерную РНК (предполагаемое рыночное название - Виталанг-2и), обладает такими же биологическими и лечебными свойствами, как и полученный по способу - прототипу [1]. Как видно из приведенной ниже таблицы его спектральные характеристики практически не отличаются от таковых для очищенной высокополимерной РНК. По крайней мере белка, способного вызвать аллергию, в препарате Виталанг-2и нет (см. соотношения D₂₈₀/D₂₆₀ ).

Источник информации

1. Патент РФ № 2392329.

Спектральные характеристики экстракта высокополимерной (ВП) дрожжевой РНК, полученного нами с помощью олеиновой кислоты, и очищенной по способу-прототипу [1] высокополимерной РНК
Препарат ВП РНК	Спектральные отношения
	D230/D 260	D250/D260	D280/D260
Экстракт	0,60	0,91	0,53
Очищенный препарат	0,45	0,92	0,56