штамм бактерий brucella melitensis биовара i, используемый для получения поливалентной гипериммунной сыворотки к бруцеллам

Формула изобретения

Штамм бактерий Brucella melitensis биовара I N И-297 ГИСК N 791, используемый для получения поливалентной гипериммунной сыворотки к бруцеллам.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к микробиологии и может найти применение при получении иммуноглобулина с диагностического бруцеллезного пероксидазного сухого, используемого при проведении иммуноферментного анализа.

Известен референтный штамм Brucella melitensis 16M, обладающий характерными для данного рода культурально-морфологическими и биологическими свойствами.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является штамм Brucella melitensis 565, ранее используемый в сочетании со штаммом Brucella abortus 146 для получения поливалентной сыворотки.

Недостатком вышеназванных штаммов является содержание в них шероховатых колоний более 8% , что не позволяет использовать их для получения сыворотки к S-антигенам.

Целью изобретения является изыскание штамма, находящегося в стойкой S-форме с устойчивой вирулентностью для замены штамма Brucella melitensis 565.

Штамм Brucella melitensis N И-297 выделен от больного, депонирован в коллекции живых культур лаборатории бруцеллеза научно-иссследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи АМН СССР (НИИЭМ) под N 791 и характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками.

Культурально-морфологические признаки. Мелкие полиморфные коккобациллы размером 0,4-0,8х0,4-2,2 мкм, встречаются по одной, реже в коротких цепочках. Спор и капсул не образуют. Неподвижные. Грамотрицательные. На бульоне Мартена рН 6,8 при 37^оС через 48 ч дают стойкое равномерное помутнение. На агаре Мартена с добавлением 1% глюкозы и 1,5% глицерина рН 6,8 образуют выпуклые колонии правильной округлой формы с равными краями, гладкой поверхностью, влажные, маслянистые, белесоватые при падающем и янтарно-желтые в проходящем свете, диаметром 2-3 мм.

Физиолого-биохимические признаки. Аэроб. Температурный диапазон роста 20-40^оС. Оптимальная температура роста 37^оС. Оптимум рН 6,6-7,4. Каталозоположительный. Индол не образует. Нитраты восстанавливает до нитритов. Обладает высокой уреазной активностью (возникает покраснение среды Кристенсена через 5 мин), не продуцирует сероводород, не лизируется фагом "Тб" (RTД10⁴RTД), не диссоциирует, находится в стойкой S-форме, резистентен к разведениям тиотина 1: 25, 1: 50, 1: 100 тысяч) и фуксина (1: 50 и 1: 100 тысяч). Не требует для культивирования повышенного содержания СО₂. Агглютинабелен - агглютинируется поливалентной сывороткой до титра 1: 3200 (с. 33; 1267, годн. 06.91 г. ) и моносывороткой антимелитензис; моносывороткой антиабортус не агглютинируется.

Хранение штамма осуществляют в лиофильно-высушенном состоянии в ампулах. После лиофилизации все свойства штамма сохраняются. Многократные пересевы и лиофилизация не влияют на антигенные свойства штамма (срок наблюдения семь лет).

Антигенные свойства. При иммунизации кроликов вызывает образование специфических антител.

Штамм Brucellа melitensis N И-297 отличается от штамма прототипа (Brucella melitensis N 565) отсутствием в суспензии шероховатых колоний и устойчивой вирулентностью.

Сущность изобретения поясняется следующим конкретным примером использования штамма Brucellа melitensis N И-297.

Кроликов породы Шиншилла массой 2,5-3 кг иммунизируют взвесью живых клеток в 0,85% -ном растворе натрия хлорида 48-часовой агаровой культуры бруцелл штаммов Brucella melitensis N И-297 и Brucella abortus 146. Животным вводят подкожно трехкратно в четыре точки спины вдоль позвоночника 0,5 мл (2 10⁹ микробов), 0,75 мл (3 10⁹ микробов), 1,0 мл (4 10⁹ микробов) смеси в равных количествах культур с равным объемом полного адъюванта Фрейнда с недельным интервалом. Через две недели после последней инъекции вводится подкожно в область внутренней верхней трети поверхности бедра 1,0 мл (4 10⁹ микробов) смеси культур в 0,85% растворе натрия хлорида. Через 14 дней после окончания иммунизации кроликов обескровливают. Сыворотку инактивируют прогреванием при 56^оС в течение 30 мин и добавлением мертиолата натрия 1: 10000. Агглютинирующая сыворотка бесцветная, слегка опалесцирующая, обладает высокой активностью и специфичностью. Хранится при 4^оС в лиофилизированном виде в запаянных ампулах. Специфический титр сыворотки при ИФА составляет 1: 1827889 155817.

Штамм Brucella melitensis N И-297 и Brucella abortus 146 использовались для получения двадцати серий кроличьей поливалентной гипериммунной сыворотки к бруцеллам.

Сыворотку используют для получения иммуноглобулина с диагностического бруцеллезного пероксидазного сухого. (56) Joint FAO/WHO Expert Committee on Brucellosis. - Sixth Report World Health Organization. Technical Serlеs 740, World Health Organization, Geneva, 1986. - 133 p.

Методические рекомендации по обнаружению возбудителя бруцеллеза иммуноферментным методом (С. П. Меринов, Т. Ю. Загоскина, Е. П. Голубинский, О. Д. Захлебная и др. - Иркутск. - 1984. - 7 с.