производные тетрагидропирана и фармацевтическая композиция на их основе

Формула изобретения

1. Производные тетрагидропирана общей формулы I



в которой R₁ представляет собой группу формулы



в которых либо R₇ представляет собой необязательно защищенную гидроксигруппу, ацилоксигруппу, галоген, -OR₁₀, где R₁₀ - низший алкил, необязательно защищенный -O(CH₂)_mOH, где m = 2 - 4, или -OCONH₂, и R_7a - водород, либо R₇ и R_7a вместе представляют собой оксогруппу, R₈ представляет собой гидрокси- или метоксигруппу и R₉ представляет собой гидрокси- или ацилоксигруппу;

R₂ представляет собой водород, ацилоксигруппу или необязательно защищенную гидроксигруппу и между двумя атомами углерода, соединенными пунктирной линией, существует простая или двойная связь;

R₃ - метил, этил, н-пропил или аллил;

либо R₄ представляет собой водород или гидроксигруппу, а R_4a - водород, либо R₄ и R_4a вместе представляют собой оксогруппу;

либо R₅ представляет собой гидроксигруппу, а R_5a - водород, либо R₅ и R_5a вместе представляют собой оксогруппу;

A представляет собой группу формулы -CH(OR₆)-CH₂-(CH₂)_n- или -CH=CH-(CH₂)_n-, связанную с атомом углерода через (CH₂)_n-, R₆ - низший алкил и n = 1 или 2;

в свободном виде или в виде соли.

2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что оно представляет собой соединение формулы Ix



в которой заместители имеют значения, указанные в п.1.

3. Соединение по п.1, отличающееся тем, что оно представляет собой соединение формулы Is



в которой заместители имеют значения, указанные в п.1.

4. Соединение по п.1, отличающееся тем, что оно представляет собой соединение формулы Iss



в которой R₁ представляет собой группу формулы



в которой либо R_7s представляет собой гидроксигруппу или 2-гидроксиэтоксигруппу, необязательно защищенную трет-бутилдиметилсилилом, или представляет собой изопропилкарбонилоксигруппу или хлор, а R_7as - водород, либо R_7s и R_7as вместе представляют собой оксогруппу;

R_2s представляет собой водород, изопропилкарбонилоксигруппу или гидроксигруппу и между двумя атомами углерода, соединенными пунктирной линией, существует простая или двойная связь;

R_3s - этил или аллил;

R₄ и R_4a, R₅ и R_5a имеют значения, указанные в п.1,

A_s представляет собой группу формулы -CH(OR₆)-CH₂-(CH₂)_n- или -CH=CH-(CH₂)_n-, которая связана с атомом углерода через CH₂-группу, R₆ - низший алкил, и n имеет значения, указанные в п.1.

5. Соединение по п.1, отличающееся тем, что оно представляет собой соединение I_p1



в которой R_2p и R_7p являются одинаковыми или различными и представляют собой необязательно защищенную гидроксигруппу,

другие заместители имеют значения, указанные в п.1,

или формулы I_p2



в которой заместители имеют значения, указанные в п.1 или в этом пункте,

или формулы I_p3



в которой R"_2p представляет собой водород или необязательно защищенную гидроксигруппу и между двумя атомами углерода, соединенными пунктирной линией, существует простая или двойная связь;

либо R_4p представляет собой гидроксигруппу, а R_4ap - водород, либо R_4p и R_4ap вместе представляют собой оксогруппу;

R"_7p - галоген;

другие заместители имеют значения, установленные в п. 1 или в этом пункте,

или формулы I_p4



в которой заместители имеют значения, указанные в п.1 или в этом пункте,

или формулы I_p5



в которой заместители имеют значения, указанные в п.1 или в этом пункте.

6. Соединение формулы I по п.1, в которой R₁ представляет собой группу формулы B



R₂ представляет собой гидроксигруппу и между двумя атомами углерода, соединенными пунктирной линией, существует простая или двойная связь, R₃ - этил, R₄ представляет собой гидроксигруппу в - или -конфигурации, R₅ представляет собой гидроксигруппу в -конфигурации, R_4a и R_5a - водород и A представляет собой группу -CH(OR₆)-CH₂-(CH₂)₂-, в которой OR₆ представляет собой метоксигруппу в -конфигурации, и стереохимическая конфигурация при различных других асимметрично замещенных атомах углерода является такой, как в ГК 506 формулы IIf



7. Соединение формулы I по п.1, которое представляет собой [1R, 5Z, 9S, 12S-[1E(1R, 3R, 4R)] , 13R, 14S, 17R, 18E, 21S, 23S, 24R, 25S, 27R]-17-этил-1,14-дигидрокси-12-[2-(4-гидрокси-3-метоксициклогексил)-1-метилвинил] -23,25-диметокси-13,19,21,27-тетраметил-11,28-диокса-4-азатрицикло-[22.3.1.0. ^4,9]-октакоза-5,18-диен-2,3,10,16-тетраон.

8. Соединения по любому из пп.1 - 7, обладающие противовоспалительной, иммунодепрессивной и антипролиферативной активностью.

9. Фармацевтическая композиция, обладающая противовоспалительной, иммунодепрессивной и антипролиферативной активностью, включающая активный ингредиент и приемлемые носители и разбавители, отличающаяся тем, что в качестве активного ингредиента она содержит соединение I по п.1 в фармацевтически приемлемой форме в эффективном количестве.

Приоритет по пунктам:

26.05.94 по пп.1 - 4;

23.09.93 по п.5 для соединения формул I_p1, I_p2;

21.12.93 по п.5 для соединения формулы I_p3;

27.05.93 по п.5 для соединения формул I_p4 и I_p5;

27.05.93, 18.06.93 и 01.07.97 по пп.6 и 7;

по пп.8 и 9 - все приоритеты в зависимости от признака.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области макролидов, а именно к новым производным тетрагидропирана. Конкретнее, оно касается производных тетрагидропирана формулы I



в которой R₁ представляет собой группу формулы



в которых либо R₇ представляет собой, необязательно, защищенную гидроксигруппу, ацилоксигруппу, галоген, -OR₁₀, где R₁₀ представляет собой низший алкил, необязательно защищенный -O(CH₂)_mOH, где m 2 - 4, или -OCONH₂, и R_7a - водород, либо R₇ и R_7a вместе представляют собой оксогруппу, R₈ представляет собой гидрокси- или метоксигруппу, и R₉ представляет собой гидрокси- или ацилоксигруппу;

R₂ представляет собой водород, ацилоксигруппу или необязательно защищенную гидроксигруппу, и между двумя атомами углерода существует простая или двойная связь, показанная пунктирной линией;

R₃ - метил, этил, н-пропил или аллил;

R₄ либо представляет собой водород или гидроксигруппу, а R_4a - водород, либо R₄ и R_4a вместе означают оксогруппу;

R₅ либо представляет собой гидроксигруппу, а R_5a - водород, либо R₅ и R_5a вместе представляют собой оксогруппу;

A представляет собой группу формулы -CH(OR₆)-CH₂-(CH₂)_n- или -CH=CH= (CH₂)_n-, которые посредством (CH₂)_n - связываются с атомом углерода, R₆ - низший алкил и n = 1 или 2,

в свободной форме или в форме солей, которые далее здесь для краткости называются "соединения изобретения".

Производные тетрагидропирана вышеприведенной формулы I обладают ценными фармакологическими свойствами.

Под необязательно защищенной гидроксигруппой, о которой говорилось выше при определении R₂ и R₇ в формуле I, понимают группы R₂ или R₇, которые определяются иначе, как, например, ацилоксигруппа или -OCONH₂.

Также следует понимать, что термины "защищенная гидроксигруппа" или "защищенный -O(CH₂)_mOH" относятся к фармакологически активным соединениям, содержащим OH, замещенный группой, обеспечивающей защиту от разрушения в ходе химического синтеза. Защитная группа представляет собой группу, которую обычно используют для защиты гидроксигруппы, такую как трет-бутоксикарбонил или триалкилсилил, в особенности трет- бутилдиметилсилил.

R₁ предпочтительно представляет собой замещенную циклогексильную группу, как определено выше. R₂ и R₇ предпочтительно представляют собой необязательно защищенную гидроксигруппу, особенно гидроксигруппу. R₃ предпочтительно представляет собой этил или аллил, особенно этил. R₄ предпочтительно представляет собой вместе с R_4a оксогруппу. R₅ предпочтительно представляет собой вместе с R_5a оксогруппу. R₆ предпочтительно представляет собой метил или этил. R₈ предпочтительно представляет собой метоксигруппу. R₉ предпочтительно представляет собой гидроксигруппу. R₁₀ предпочтительно представляет собой метил, а m и n предпочтительно равны 2. Предпочтительно A представляет собой группу формулы -CH=CH-(CH₂)_n-.

Низший алкил предпочтительно является линейным или разветвленным алкилом с 1-4, особенно с 1 или 2, в частности, с одним атомом углерода. Галоген проставляет собой фтор, хлор, бром или йод, предпочтительно хлор или бром, особенно хлор. Гидроксигруппа предпочтительно представляет собой свободную гидроксильную группу, то есть незащищенную группу.

Ацилоксигруппа предпочтительно представляет собой формилоксигруппу, бензоилоксигруппу или алкилкарбонилоксигруппу, в алкилкарбонильной части которой содержится 2-5 атомов углерода.

Предпочтительно между двумя атомами углерода, соединенными пунктирной линией, существует простая связь.

Предпочтительная подгруппа соединений формулы 1 состоит из соединений формулы Iх.

в которой заместители имеют указанные выше значения.

Соединения изобретения имеют ряд хиральных центров и, таким образом, могут существовать в виде различных стереоизомеров. Варианты способа получения соединений изобретения дают в результате смесь таких изомеров. В зависимости от условий и типа реакции процессом можно управлять таким образом, чтобы получить преимущественно определенный изомер. Способ согласно изобретению позволяет получить все стереоизомеры и оптические изомеры, а также рацемические смеси. Превращение или разделение изомеров может быть осуществлено обычными техническими приемами. Предпочтительное пространственное строение при различных хиральных атомах углерода показано формулой Is



в которой заместители имеют указанные выше значения.

Когда R₁ является замещенной циклогексильной группой, как определено выше, и при этом R₇ и R_7a иные, чем оксогруппа, и R₇ иной, чем галоген, предпочтительное пространственное строение группы R₁ соответствует формуле B



в которой, когда R₇ является галогеном, он предпочтительно находится в - конфигурации.

Когда R₅ является гидроксигруппой, он предпочтительно находится в - конфигурации.

Заместитель OR₆ в группе A предпочтительно находится в - конфигурации. Этот дополнительный хиральный центр создается при варианте способа а) получения соединений формулы Ia. Изомеры и могут быть разделены обычными способами, например, хроматографически.

Другая предпочтительная подгруппа соединений формулы I состоит из соединений формулы Iss



в которой R_1s представляет собой группу формулы



при этом либо R_7s представляет собой гидроксигруппу или 2-гидроксиэтоксигруппу, необязательно защищенную трет-бутилдиметилсилилом, или представляет собой изопропилкарбонилоксигруппу или хлор, a R_7as представляет собой водород, либо R_7s и R_7as вместе представляют собой оксогруппу;

R_2s представляет собой водород, изопропилкарбонилоксигруппу или гидроксигруппу, и между двумя атомами углерода, соединенными пунктирной линией, существует простая или двойная связь;

R_3s представляет собой этил или аллил;

R₄ и R_4a, и R₅ и R_5a имеют указанные выше значения;

A_s представляет собой группу формулы -CH(OR_6s)-CH₂-(CH₂)_n или -CH=CH-(CH₂)_n-, которая связана с атомом углерода через CH₂-группу, R_6s представляет собой метил или этил, и n имеет указанные выше значения.

Еще одна предпочтительная подгруппа соединений формулы I представляет собой соединения формулы I_p1



в которой R_2p и R_7p являются одинаковыми или различными, и представляют собой необязательно защищенные гидроксигруппы, и другие заместители имеют указанные выше значения.

Еще одна подгруппа соединений формулы I представляет собой соединения формулы I_p2



где заместители имеют указанные выше значения.

Еще одна подгруппа соединений формулы I представляет собой соединения формулы I_p3



в которой R"_2p представляет собой водород или необязательно защищенную гидроксигруппу, и между двумя атомами углерода, соединенными пунктирной линией, существует простая или двойная связь;

либо R_4p представляет собой гидроксигруппу, а R_4ap - водород, либо R_4p и R_4ap вместе образуют оксогруппу;

R"_7p - галоген;

другие заместители имеют указанные выше значения.

Еще одна подгруппа соединений формулы I представляет собой соединения формулы I_p4



в которой заместители имеют указанные выше значения.

И еще одна подгруппа соединений формулы I представляет собой соединения формулы I_p5



в которой заместители имеют указанные выше значения.

В подгруппе соединений формулы I_p5 A представляет собой группу формулы -CH= CH-(CH₂)_n - в соответствии с данным выше определением. В другой подгруппе A представляет собой группу формулы - CH(OR₆)-CH₂-(CH₂)_n-, как определено выше, особенно -CH(OCH₃)-CH₂-(CH₂)_n-, при этом n имеет указанные выше значения.

Соединения изобретения могут быть получены способом, который включает:

а) для получения соединения формулы Ia



в которой заместители имеют указанные выше значения,

облучение в присутствии R₆OH соответствующих соединений формулы II



в которой заместители имеют указанные выше значения; или

b) для получения соединений формулы Ib



в которой заместители имеют указанные выше значения,

окисление соответствующих соединений формулы Ic



в которой заместители имеют указанные выше значения; или

с) для получения соединений формулы Id



в которой заместители имеют указанные выше значения,

элиминирование R₆OH из соответствующих соединений формулы Ie



в которой заместители имеют указанные выше значения; или

d) для получения соединений формулы If



в которой заместители имеют указанные выше значения,

восстановление соответствующих соединений формулы Ib; и

при необходимости, преобразование реакционноспособных групп в полученных соединениях формулы I, имеющих подходящие реакционноспособные группы, например, для получения соединений формулы I, в которых R₇ представляет собой галоген, галогенирование соответствующих соединений формулы I, в которых R₇ представляет собой гидроксигруппу, или для получения соединений формулы I, в которых R₂, R₇ и/или R₉ представляет собой ацилоксигруппу, ацилирование соответствующих соединений формулы I, в которых R₂, R₇ и/или R₉ представляют собой гидроксигруппу;

При необходимости, удаление защитной группы от одной или нескольких защищенных гидроксильных групп в полученных соединениях формулы I, имеющих защищенную (защищенные) гидроксильную группу (гидроксильные группы), или введение защитных групп для одной или нескольких гидроксильных групп в полученные соединения формулы I, имеющие свободную (свободные) гидроксильную группу (гидроксильные группы);

при необходимости, разделение полученных в результате смесей стереоизомеров соединений формулы I на отдельные изомеры; и преобразование соединений формулы I в свободную форму или, когда такие формы существуют, в форму соли.

Способ изобретения может быть осуществлен обычными техническими приемами.

Вариант способа а) (облучение) представляет собой инициированную светом реакцию межмолекулярного окисления-восстановления. Ее осуществляют под воздействием УФ- и/или видимого света, необязательно в атмосфере инертного газа, например, под лампами ультрафиолетового излучения, излучающими монохроматический или немонохроматический УФ- и/или видимый свет, например, при температуре от -78^oC до 100^oC, предпочтительно от 0^o до 30^oC. Используют предпочтительно свет, прошедший через пирексовый или длинноволновый фильтр, например, водный раствор NaBr и Pb(NO₃)₂ в спирте R₆OH или в смеси спирта R₆OH с насыщенным или ненасыщенным углеводородом, простом эфире, кетоне или сложном эфире, или смеси этих растворителей. Указанные растворители или их компоненты могут участвовать в реакции или действовать как, например, сенсибилизаторы, и, необязательно, в присутствии другого соединения, которое может участвовать в реакции, например, в качестве сенсибилизатора или в качестве вещества, способствующего переносу электронов.

Вариант способа b) (окисление) может быть осуществлен обычным способом, например, взаимодействием соединения формулы Ic с окислителем, который может селективно реагировать с гидроксильной группой, превращая ее в оксогруппу, таким как Cu(OAc)₂, в растворителе, например, в спирте, таком как метанол, или в простом циклическом эфире, таком как тетрагидрофуран, или в воде, или в смеси этих растворителей, в атмосфере O₂ или другого окислителя, предпочтительно при температуре от 0^o до 90^oC.

Вариант способа с) (элиминирование) может быть осуществлен взаимодействием соединения формулы Ie, например, с кислотой, такой как HF, HCl, или п-толуолсульфоновая кислота, предпочтительно в растворителе, таком как ацетонитрил, метанол, тетрагидрофуран, дихлорметан или диметилформамид, или вода, или в смеси этих растворителей, предпочтительно при температуре от -30^oC до 100^oC, или путем взаимодействия с солью, такой как NH₄Cl или NH₄Br, предпочтительно в растворителе, таком как диметилформамид, предпочтительно при температуре от -30^oC до 100^oC, предпочтительно при низком давлении. При этом может быть осуществлено отщепление защитной группы от защищенной гидроксильной группы на этой же стадии или на отдельной стадии.

Вариант способа d) (восстановление) может быть осуществлен, например, путем обработки соединения формулы Ib восстановителем, таким как сероводород, предпочтительно в растворителе или в смеси растворителей, такой как смесь пиридина с диметилформамидом, предпочтительно при температуре от -70^oC до 100^oC.

Преобразование реакционноспособных групп может быть осуществлено, например, с целью введения галогена, путем взаимодействия с галогенирующим агентом, таким как дихлортрифенилфосфоран, в присутствии основания в подходящем растворителе, например, в толуоле или в тетрагидрофуране, при температуре от 0^o до 70^oC, а с целью ацилирования - путем взаимодействия, например, в инертном растворителе, таком как ацетонитрил или дихлорметан, с хлорангидридом или ангидридом карбоновой кислоты в присутствии вещества, связывающего кислоту, такого как 4-диметиламинопиридин, или с кислотой в присутствии связывающего кислоту вещества, такого как 4-диметиламинопиридин, или с кислотой в присутствии карбодиимида, такого как дициклогексилкарбодиимид.

Отщепление защитной группы, например, удаление трет-бутилдиметилсилильной группы или трет-бутоксикарбонильной группы, может быть осуществлено, например, обработкой фтористоводородной или хлористоводородной кислотой в растворителе, таком как ацетонитрил, метанол или смесь метанола и эфира. В зависимости от выбранных условий реакции (например, продолжительности или температуры) отщеплением можно управлять таким образом, чтобы либо все, либо только некоторые защитные группы отделились. Частичное отщепление защитных групп особенно требуется тогда, когда в последующей реакции должна реагировать определенная гидроксигруппа.

Для защиты свободной гидроксигруппы (гидроксигрупп), в зависимости от выбранных условий реакции, реакцией можно управлять таким образом, чтобы защитить либо все, либо только некоторые потенциально реакционноспособные гидроксигруппы. Подходящими защитными группами являются группы, которые обычно используют для защиты гидроксигруппы, такие как трет-бутоксикарбонил или триалкилсилил, предпочтителен трет-бутилдиметилсилил.

Разделение полученных в результате смесей стереоизомеров может быть осуществлено, например, хроматографически.

Упомянутые выше варианты способа изобретения, например, а) и b), или а) и с), также могут быть осуществлены в одном реакционном объеме без выделения промежуточных соединений.

Соединение изобретения в свободной форме может быть переведено в соль, если такая форма существует, например, в соль присоединения кислоты, обычными способами, и наоборот.

Соединения изобретения могут быть выделены из реакционной смеси и очищены обычными способами.

Когда получение соединений специально не описано, например, в примерах, такие соединения, используемые в качестве исходных веществ, являются известными или могут быть получены обычными способами из известных соединений, например, исходя из подходящих штаммов Streptomyces, таких как Streptomyces tsukubaensis N 9993, описанном, например, в ЕР 184162, Fujisawa. Образцы могут быть получены от Fermentation Research Institute, Tsukuba, lbaraki 305, Япония, из запасов Budapest Treaty, например, депозит N FERM ВР-927. Штамм вновь депонирован 27 апреля 1989 года Agricultural Research Culture Collection International Depository, Peoria, Иллинойс 61604, США, в хранилище Budapest Treaty, депозит N NRRL 18488.

Соединение формулы IIa



может быть извлечено обычными способами из микроорганизма, способного его продуцировать, например, из мутантного штамма (АТСС 55087) Streptomyces hygroscopicus var. ascomycetus, в соответствии с процедурой, описанной в ЕР 478235. АТСС 55087 снова депонирован 13 апреля 1994 года American Type Culture Collection, Rockville, MD 20852, США, под депозитным номером АТСС 55558, в хранилище Budapest Treaty.

Следующие далее примеры иллюстрируют изобретение. Они не являются ограничивающими. Температура дается в градусах по Цельсию. В спектрах ЯМР все величины химического сдвига даются в ppm; образцы замеряют в CDCl₃, если нет других указаний. Стереохимическая конфигурация при различных атомах углерода такова, как для FK 506, за исключением специально указанных. Все соединения находятся в свободной форме. Используются приведенные далее аббревиатуры.

Ac - ацетил

cf - бесцветная пена

db - двойная связь между двумя атомами углерода, соединенными пунктирной линией

depr. - отщепление защитной группы

iPr - изопропил

m - смесь стереоизомеров по отношению к указанному положению

Т.пл. - температура плавления

O - оксогруппа

OtBDMS - трет-бутилдиметилсилилоксигруппа

Sb - простая связь между двумя атомами углерода, соединенными пунктирной линией

tBDMS - трет-бутилдиметилсилил















FK 506 - соединение формулы IIf,

в которой R₃ означает CH₂CH=CH₂;



FR 520 - соединение формулы IIf,

в котором R₃ означает C₂H₅.

Пример 1. Соединение формулы I [R₁=B; R₂-OH; sb; R₃=C₂H₅; R₄-OH(m); R₅= OH () ; R_4a,R_5a=H; A = -CH(OR₆)-CH₂-(CH₂)₂, где OR₆=OCH₃() ]

[Вариант способа: отщепление защитных групп]

Перемешивают 250 мг соединения примера 1a (см. ниже), 10 мл метанола и 0,15 мл эфира, насыщенного сухим HCl, в течение 2 часов на ледяной бане. Смесь выливают в водный раствор бикарбоната и экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу сушат над MgSO₄ и растворитель выпаривают.

Хроматография остатка на силикагеле дает названное в заголовке соединение (cf).

Пример 1a. Соединение формулы I [R₁=B"; другие заместители - как в примере 1; sb], [Вариант способа а) (облучение)]

Дегазированный аргоном раствор 3,8 г соединения формулы II [R₁=B"; R₂= OH; sb; R₃-C₂H₅; R₅= OH () ; R_5a=H; n=2] в 1200 мл метанола охлаждают на ледяной бане и облучают в реакторе типа отстойника в течение 10 часов, используя лампу Hanau TQ-150 и пирексовый фильтр. Соединяют три таких партии и хроматографируют методом ВЖХ, используя колонку с полигосилом и смесь циклогексана с изопропанолом (9: 1), получают названное в заголовке соединение (cf).

По методике, аналогичной описанной в примере 1a, получают перечисленные далее соединения формулы I (таблица 1).

Пример 8. Соединение формулы I [R₁= B; R₂=OH; sb; R₃=C₂H₅; R₄+R_4a = R₅+R_5a = O; A = -CH-CH-(CH₂)₂-]. [Вариант способа b) (окисление)].

Смесь 5 г соединения примера 9 (см. ниже), 1,9 г Cu(OAc)₂ H₂O и 500 мл тетрагидрофурана перемешивают при температуре кипения с обратным холодильником в атмосфере O₂ в течение 7 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении, остаток обрабатывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и этилацетатом, органическую фазу отделяют, сушат (MgSO₄), фильтруют, растворитель удаляют при пониженном давлении, и остаток хроматографируют на силикагеле (обработанном предварительно водным 2% (вес/вес) NaHCO₃ и высушенным в печи), используя этилацетат, и получают названное в заголовке соединение (пена). Пену кристаллизуют, растворяя в диэтиловом эфире и добавляя небольшими порциями н-пентан, царапая стенки шпателем, чтобы инициировать кристаллизацию (т.пл. 169- 172^oC).

Пример 9. Соединение формулы I [R₁=B; R₂=OH; sb; R₃=C₂H₅; R₄=OH(m); R_4a= H; R₅ + R_5a = O; A = -CH-CH-(CH₂)₂-]. [Вариант способа с) (элиминирование)].

Смесь 50 мг соединения примера 2 и 100 мг хлорида алюминия в 100 мл диметилформамида подвергают взаимодействию в течение 1,5 часов в роторном испарителе при пониженном давлении при 78^oC, при этом растворитель постепенно отгоняют. Оставшийся растворитель удаляют в глубоком вакууме и остаток обрабатывают соляным раствором и этилацетатом. Органическую фазу отделяют, сушат (MgSO₄), фильтруют, растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток подвергают флэш-хроматографии на силикагеле [предварительно обработанном 2% (вес/вес) NaHCO₃ и высушенным в печи], используя этилацетат, и получают названное в заголовке соединение (пена). Эту пену кристаллизуют путем растворения в диэтиловом эфире, добавляя небольшими порциями н-пентан и царапая стенки шпателем, чтобы инициировать кристаллизацию (т.пл. 119-123^o).

Аналогично тому, как описано в примерах 8 и 9, получают перечисленные далее соединения формулы I (таблица 2).

Пример 33. Соединение формулы I [R₁=B; R₂=OH; sb; R₃=C₂H₅; R₄=R_4a=H; R₅+R_5a = O; A = -CH=CH-(CH₂)₂-]. [Вариант способа d) (восстановление)].

Через смесь 200 мг соединения примера 8, 0,3 мл пиридина и 4,8 мл диметилформамида пропускают газообразный H₂S в течение 10 минут. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 часов. Снова пропускают через смесь газообразный H₂S в течение 10 минут. Смесь перемешивают при комнатной температуре еще в течение двух суток. Смесь разбавляют толуолом и растворители удаляют в глубоком вакууме. Остаток обрабатывают этилацетатом и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Органическую фазу отделяют, промывают соляным раствором, сушат над MgSO₄ и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток подвергают флэш-хроматографии на силикагеле (предварительно обработанном 2% водным раствором бикарбоната), используя этилацетат, и получают названное в заголовке соединения (пена). ¹H-ЯМР-спектры приведены в табл. 3.

Соединения формулы I в свободной форме и, если существует в виде солей, в виде фармацевтически приемлемых солей, далее здесь для краткости называемые "средства изобретения", обладают фармакологической активностью. Соединения согласно изобретению показаны для применения в качестве фармацевтических препаратов. В частности, они обладают противовоспалительной, иммунодепрессивной и антипролиферативной активностью.

Противовоспалительная активность может быть определена перечисленными далее методами испытаний.

1. Ингибирование дегрануляции тучных клеток in vltro (метод испытания описан, например, в ЕР 569337)

Средства изобретения в этом испытании ингибируют дегрануляцию тучных клеток (IC₅₀) при таких небольших концентрациях, как 50 нМ.

2. Индуцированный оксазолоном аллергический контактный дерматит у мышей in vivo (метод испытания описан, например, в F.M. Dietrich и R.Hess, Int. Arch. Allergy, 38, (1970), 246-259)

В этом испытании средства изобретения проявляют активность (ингибирование воспалительной припухлости) до 50% при единичном местном применении в виде 0,01% раствора. В таких же условиях на этой модели гидрокортизон (1,2%) является неактивным.

Результаты испытаний приведены в табл. 4.

3. Индуцированный DNFB аллергический контактный дерматит у свиней in vivo (метод испытания описан, например, в ЕР 315978)

Двукратное местное применение 0,13% формации средств изобретения показывает ингибирование воспалительной реакции до 50%.

Иммунодепрессивная и антипролиферативная активность может быть определена перечисленными далее методами испытаний.

4. Ингибирование пролиферативного ответа лимфопитов на аллогенное раздражение в реакции смешанных лимфоцитов (MLR) in vitro (метод испытания описан, например, в T.Mee "The MLR in the Mouse", Immunological Methods, L.Lefkovits и B.Pernis, Eds. Academic Press, N.Y. (1979), 227-239)

В этом испытании средства изобретения подавляют пролиферацию лимфоцитов (IC₅₀) при таких низких концентрациях, как 1 нМ.

5. Ингибированию пролиферации кератиноцитов человека in vitro (метод испытания описан, например, в ЕР 539326)

В этом испытании средства изобретения являются активными при таких небольших концентрациях, как 7 мкМ, давая в результате ингибирование порядка 50%.

6. Определение связывания макрофилина-12 in vitro (метод испытания описан в K.Baumann et al., Tetrahedron Letters 34 (1993), 2295-2298)

Средства изобретения связывают макрофилин подобно (IC₅₀) рапамицину и FK 506.

7. Определение гена репортера IL-2 in vitro (метод испытания описан в G. Baumann et al., Transpl. Proc. 24/Suppl. 2(1993), 43-48)

Результаты исследований по методам испытания 6 и 7 приведены в таблице 5.

В этом испытании средства согласно изобретению показывают IC₅₀ при таких небольших концентрациях, как 0,2 нМ.

Соединение примера 8 (5,6-дегидроаскомицин), полное химическое наименование которого [IR,5Z,9S,12S- [IE(IR,3R,4R)],13R,14S,17R,18E,21S,23S,24R, 25S, 27R]-17-этил-l,14- дигидрокси-12-[2-(4-гидрокси-3-метоксициклогексил)-1-метилвинил] - 23,25-диметокси-13,19,21,27-тетраметил-11,28-диокса-4-азатрицикло [22.3.1.0^4,9] октакоза-5,18-диен-2,3,10,16-тетраон, является предпочтительным средством для упомянутых выше показаний. Установлено, что при упомянутом выше испытании 3 это соединение в форме 0,13% препарата имеет лучшую активность, чем соответствующий 0,13% препарат дексаметазона. Таким образом, это соединение может вводиться более крупным млекопитающим, например, человеку, способами, подобными способам введения, которые обычно используют для дексаметазона, в таких же или меньших дозах.

Средства изобретения, особенно соединение примера 8, показывает меньшую атрофию кожи после местного применения, чем сильнодействующие кортикостероиды для местного применения, а также меньшее число общих побочных эффектов по сравнению с FK 506, как показано при оценке токсичности при подкожном введении крысам.

Таким образом, средства изобретения рекомендуются в качестве противовоспалительных средств и в качестве иммунодепрессивных и антипролиферативных средств для местного и общего применения при профилактике и лечении воспалительных и гиперпролиферативных состояний и состояний, требующих иммунодепрессии, в таких случаях, как

а) лечение воспалительных и гиперпролиферативных заболеваний кожи, таких как псориаз, атопический дерматит, контактный дерматит, а также экзематозные дерматозы, себорейная экзема, красный плоский лишай, пузырчатка, буллезный пемфигоид, врожденный буллезный эпидермолиз, васкулит, эритема, кожная эозинфилия, красная волчанка и акне;

b) профилактика и лечение аллергических заболеваний, таких как приобретенная бронхиальная астма, ринит, конъюктивит, диффузный нейродермит, крапивница и гигантская крапивница, пищевая и лекарственная аллергия и анафилаксия;

с) профилактика и лечение сопротивляемости в случае пересадки органов или ткани, например сердца, почек, печени, костного мозга и кожи, реакций "трансплантат против хозяина", таких как следующих за пересадкой костного мозга, и аутоиммунных болезней, таких как ревматоидный артрит, системная красная волчанка, хронический лимфатозный тиреоидит, рассеянный склероз, тяжелая миастения, диабет по I типу и увеит;

d) очаговая алопеция.

Лекарственные средства могут вводиться систематически или местно. Для применения в случае упомянутых выше показаний соответствующая дозировка будет, конечно, изменяться в зависимости, например, от конкретно применяемого средства, пациента, способа введения, природы и тяжести состояния, которое требует лечения. Однако указывается, что положительные результаты вообще систематически получают при ежедневных дозах от 0,15 мг/кг до 1,5 мг/кг (на кг веса тела животного). Для более крупных млекопитающих ежедневные дозы составляют от 10 мг до 100 мг, которую удобно вводить, например, раздельными дозами до 4 раз в день или в замедленной форме. Для местного применения удовлетворительные результаты получают при местном введении при содержании активного вещества от 0,1% до 3%, несколько раз в день, например, 3 раза. Примерами указанных форм геленовых препаратов являются лосьоны, гели, кремы, аэрозоли и растворы.

Лекарственные средства изобретения могут вводиться любым удобным путем, в частности, энтерально, например, орально, в форме, например, таблеток или капсул, или местно, например, в форме лосьонов, гелей, кремов, аэрозолей, растворов для введения в глаза или в нос, или аэрозолей для местной обработки кожи и слизистых оболочек, например, глаз, дыхательных путей, влагалища, полости рта и носа.

Фармацевтические композиции, например, для местного применения, содержащие средство изобретения в сочетании с, по крайней мере, одним фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем, могут быть изготовлены обычным способом путем смешения с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Формы единичной дозы содержат, например, от 2,5 до 50 мг активного вещества.

Местным введением является, например, нанесение на кожу. Другой формой местного применения является введение в глаза для лечения состояний глаз, связанных с иммунитетом, таких как аутоиммунные заболевания, например, увеит, пересадка роговицы и хронический кератит; аллергические заболевания, например, весенний конъюктивит; воспалительные состояния и корнеальные трансплантаты. Такую обработку осуществляют нанесением на поверхность глаза средства изобретения в фармацевтически приемлемом носителе для глазных препаратов.

Носитель для глазного препарата должен быть таким, чтобы лекарственное средство находилось в контакте с поверхностью глаза в течение времени, достаточного для того, чтобы лекарство проникло в корнеальную и внутренние области глаза, например, в переднюю камеру, заднюю камеру, стекловидное тело, внутриглазную жидкость, роговицу, радужку и реснитчатое тело, хрусталик, собственно сосудистую оболочку глаза и сетчатку, и в склеру. Фармацевтически приемлемый носитель для глазных препаратов может представлять собой, например, мазь, растительное масло или инкапсулирующий материал.

Другой формой местного лечения является применение средств изобретения для обработки бронхиального и альвеолярного эпителия с помощью аэрозоля или порошка, например, у пациентов, страдающих астмой.

Средства по изобретению ингибируют проникновение индуцированных антигеном воспалительных клеток в дыхательные пути после местного введения в дыхательные пути легочным путем. Таким образом, такие препараты показаны для лечения заболеваний дыхательных путей и легочных заболеваний, таких как астма. Такая активность может быть продемонстрирована в ходе стандартных испытаний, например, измерением воздействия на индуцированную аллергеном легочную эозинофилию (in vivo), как описано, например, в ЕР 577544.

Средства изобретения, соответственно, показаны для лечения заболеваний или состояний, реагирующих на или требующих местного лечения дыхательных путей или легких, в частности, воспалительных или обструктивных заболеваний дыхательных путей. Они особенно показаны для применения при лечении заболеваний или состояний дыхательных путей или легких, связанных с или характеризующихся проникновением воспалительных клеток, или других случаев воспаления, сопровождающихся воспалительной клеткой, например, эозинофилом и/или нейтрофилом, и их накоплением, и, особенно, для лечения астмы. Они также показаны для применения при лечении бронхитов или при лечении хронического или острого закупоривания дыхательных путей, связанного с пневмокониозом, и расстройств дыхательных путей, связанных с эозинофилами.

Лекарственные средства изобретения для упомянутых выше целей могут использоваться в любой дозировочной форме, подходящей для местного введения в нужный участок. Например, они могут вводиться через легкие путем ингаляции из подходящего диспергирующего устройства, например, в любой подходящей тонко диспергированной или тонко диспергируемой форме, позволяющей введение в дыхательные пути или легкие, например, в форме тонко измельченных твердых частиц, или в виде дисперсии, или раствора в любой подходящей (то есть которую можно вводить через дыхательные пути) твердой или жидкой среде-носителе. Для введения в форме сухих твердых частиц средства изобретения могут, например, быть использованы как таковые, то есть в измельченной на микронной коллоидной мельнице форме без каких-либо добавок, разбавленные другими подходящими тонко измельченными инертными твердыми носителями или разбавителями, в форме твердых частиц с покрытием или в любой другой подходящей форме, известной в технике для введения через дыхательные пути тонко измельченных твердых веществ.

Введение через дыхательные пути может быть осуществлено с использованием любой подходящей системы, известной в технике для доставки лекарственного препарата в сухой или жидкой форме путем ингаляции, например, с помощью ингалятора, распыляющего жидкость, туман или сухой порошок, или другого прибора. Предпочтительны дозирующие устройства, то есть способные подавать заранее определенное количество лекарственного средства изобретения при каждом действии. Такие устройства известны в технике.

Фармацевтически приемлемые разбавители или носители, приемлемые для введения через дыхательные пути, включают, например, препараты сухого порошка активного ингредиента (то есть средства изобретения) в, по существу, чистой форме, например, как используют в технике для подачи из устройства для ингаляции сухого порошка. Средства или устройства, допускающие или облегчающие местное введение, включают, в частности, устройства для ингаляции, а также упаковки и т. п. , из которых можно подать активный ингредиент в форме, допускающей местное применение. Предпочтительными вариантами будут такие варианты, которые допускают местное введение внутрь дыхательных путей или легких, например, путем ингаляции.

Дозировки средства изобретения, применяемые для лечения заболеваний или состояний дыхательных путей или легких, например, для применения при лечении воспалительных или обструктивных заболеваний дыхательных путей, например, астмы, например, путем ингаляции, составляют порядка от 0,1 мг до 10 мг в день, например, от 0,5 мг до 5 мг, предпочтительно от 1 мг до 3 мг в день. Дозировки можно вводить из дозирующих систем сериями от 1 до 5 вдуваний при каждом введении, выполняя введение 1-4 раза в день. При каждом введении дозировки таковы, чтобы вводить преимущественно порядка 0,0025-10 мг, предпочтительно от 0,125 мг до 5 мг, например, при введении дозирующим устройством, допускающим подачу, например, от 0,25 мг до 3 мг средства за действие.

Хотя основной активностью средств изобретения являются противовоспалительная, иммунодепрессивная и анатипролиферативная активности, лекарственные средства изобретения также до некоторой степени обладают активностью, увеличивающей чувствительность или увеличивающей эффективность лечения химиотерапевтическими препаратами. Эта активность может быть определена в соответствии с методами испытания, описанными в ЕР 360760.

Следовательно, лекарственные средства изобретения также могут применяться для изменения сопротивляемости различного типа, например, приобретенной или врожденной, к химиотерапевтическим лекарственным средствам, или для увеличения чувствительности к лечению вводимыми лекарственными препаратами, например, как средства снижения уровня регулярных доз химиотерапевтических препаратов, например, в случае лечения противоопухолевыми или цитостатическими лекарствами, а также как средства для снижения общей лекарственной токсичности, и в особенности как средства, изменяющие или уменьшающие сопротивляемость, включая как врожденную, так и приобретенную, химиотерапии.

Таким образом, изобретение также касается применения средства изобретения в качестве фармацевтического препарата, в особенности как в качестве противовоспалительного, так и в качестве иммунодепрессивного и антипролиферативного средства. Оно также касается применения средства изобретения для получения фармацевтической композиции, которая включает смесь с, по крайней мере, одним фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем, и способа получения фармацевтической композиции, который заключается в смешении средства изобретения с, по крайней мере, одним фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Оно также предлагает фармацевтическую композицию, содержащую средство изобретения в сочетании с, по крайней мере, одним фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Оно также предлагает способ лечения воспалительных и гиперпролиферативных состояний, требующих иммунодепрессии, который заключается во введении терапевтически эффективного количества средства изобретения пациенту, нуждающемуся в таком лечении.

Ниже приводятся примеры отдельных фармацевтических композиций настоящего изобретения.

Пример I. Суспензия для местного применения. Композицию в виде суспензии для местного применения готовят путем смешения вместе активного ингредиента (соединения изобретения) и других эксципиентов.

Композиция содержит следующие ингредиенты (в мас.частях)

Соединение по примеру 8 - 0,10

Петролейное желе - 99,9

Пример II. Суспензия для местного применения

Композиция в виде суспензии содержит следующие ингредиенты (в 15 мас. частях) как эмульсионный гель масло-в-воде:

Соединение по примеру 8 - 0,3

Парафин, густой - 15

Глицерол моностеарат - 0,3

Пропиленгликоль - 10

Карбопол 974p - 0,5

Карбопол 1342 - 0,5

NaOH 5% - 2,5

Сорбитовая кислота - 0,1

Вода - 70,8

Композицию получают путем смешения соединения и других ингредиентов.

Пример III. Суспензия

Состав - Количество (г/100 г)

Парафин, густой - 30

Цетиловый спирт - 5

Стеариловый спирт - 5

Моностеарат сорбината - 2

Полисорбат 80 (полигидроксиэтиленсорбитанмонолеат) - 4

Моностеарат глицерина - 3

Аскорбил палмитат - 0,05

Соединение примера 8 - 0,1

Сорбитовая кислота - 0,1

Пропиленгликоль - 5

Вода - 45,75

Результаты испытаний на ингибирование воспалительной припухлости, индуцированной оксазолоном по месту испытаний 2, приведены в табл. 4.

Результаты исследования макрофилина-12 и исследования гена-репортера IL-2 по методам испытаний 6 и 7 приведены в табл. 5.