способ иммунодиагностики хламидийной инфекции человека

Формула изобретения

Способ иммунодиагностики хламидийной инфекции человека путем исследования крови с применением эритроцитарного хламидийного диагностикума, отличающийся тем, что эритроцитарный хламидийный диагностикум используют в качестве объекта фагоцитоза нейтрофилами периферической крови, определяют фагоцитарный индекс в опытной и контрольной пробах, вычисляют показатель специфического торможения фагоцитоза, выражающийся отношением индекса фагоцитоза контрольного эритроцитарного диагностикума к индексу фагоцитоза хламидийного, и при значениях его более 1,2 делают заключение о наличии хламидийной инфекции.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, конкретно к венерологии и иммунологии, и может быть использовано для иммунодиагностики хламидийной инфекции человека.

Известны следующие методы, применяемые для иммунодиагностики хламидийной инфекции:

- реакции торможения миграции лейкоцитов и бласттрансформации лимфоцитов, направленные на выявление лимфоцитов, сенсибилизированных к хламидийному антигену;

- реакции связывания комплемента, торможения гемагглютинации, микропреципитации; непрямой вариант иммунофлюоресцентного метода, выявляющие наличие противохламидийных антител различных классов.

Однако техническая сложность, недостаточная воспроизводимость и сопоставимость одних методов и низкая диагностическая значимость других препятствует широкому использованию их в практических целях.

Наиболее близким к заявленному является способ иммунодиагностики хламидийной инфекции человека при помощи реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), (Мальберг К. Реакция гемагглютинации // Иммунологические методы, М., Медицина, 1987, С. 211-218), осуществляемой с применением эритроцитарного хламидийного диагностикума (НПО "Биомед", г. Пермь).

Сущность данного метода заключается в выявлении в сыворотке крови антител к родоспецифическому хламидийному антигену и осуществляется путем определения наибольшего разведения сыворотки еще вызывающего значительную агглютинацию эритроцитарного хламидийного диагностикума. Диагностическим титром при однократном исследовании считают разведение 1:80 и выше.

Однако слабая иммуногенность возбудителя и особенный внутриклеточный тип паразитирования обуславливает неотчетливость гуморальной реакции, что ограничивает область применения данного метода в связи с небольшими титрами выявляемых антител и сохранением их в крови длительное время уже после элиминации возбудителя. Диагностически значимые титры выявляются только при свежих и тяжелых формах хламидийной инфекции, а определение динамики сероконверсии затруднено из-за первично-хронического течения заболевания.

Целью изобретения является повышение точности и информативности иммунодиагностики хламидийной инфекции.

Указанная цель достигается тем, что эритроцитарный хламидийный диагностикум используют в качестве объекта фагоцитоза нейтрофилами периферической крови пациента и по отношению индекса фагоцитоза контрольного диагностикума к индексу фагоцитоза хламидийного определяют величину специфического торможения фагоцитоза, которое служит диагностическим критерием для установки наличия хламидийной инфекции.

Способ осуществляется следующим образом.

Эритроцитарные диагностикумы для реакции непрямой гемагглютинации (хламидийный и контрольный) разводят стерильным физраствором и доводят до концентрации 6 10¹²/ мл и используют в тот же день. Кровь для исследования берут из пальца или вены в силиконированную пробирку с гепарином (из расчета 20 ЕД на 1 мл крови) в день постановки реакции 0,1 мл гепаринизированной периферической крови помещают в ячейки 72-луночного планшета для иммунологических исследований и туда же вносят 0,1 мл приготовленной суспензии хламидийного (опытная проба) и контрольного (контрольная проба) диагностикума. Смесь инкубируют в термостате при 37^oС в течение 30 минут. После окончания инкубации содержимое лунки тщательно перемешивают и делают мазок. Мазки сушат, фиксируют в спирт-формалиновой смеси 30 сек и окрашивают по Романовскому-Гимзе. Проводят подсчет 100 нейтрофилов в световом микроскопе при увеличении 10 х 90. Для учета реакции подсчитывают количество нейтрофилов с фагоцитированными эритроцитами на 100 просмотренных нейтрофилов (фагоцитарный индекс, ФИ) в опытной и контрольной пробе и высчитывают индекс торможения фагоцитоза, который выражается отношением ФИ контрольной пробы к ФИ опытной.

У здоровых лиц и лиц контрольной группы эта величина не превышает 1,2. Значения данного показателя выше 1,2 свидетельствуют о наличии специфической реакции нейтрофилов на хламидийный антиген, выражающийся в торможении фагоцитоза хламидийного эритроцитарного диагностикума.

Пример 1. Больная Б. обратилась по поводу хронического болевого синдрома в области таза, нарушений менструального цикла. При бактериологическом обследовании хламидии методом прямой иммунофлюоресценции (ПИФ) обнаружены однократно, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) не обнаружены, патогенная флора не выявлена. Титр противохламидийных антител в РНГА диагностически не значим (1:40). Индекс торможения фагоцитоза 1,6. Проведен курс специфической терапии. Через два месяца на контроле излеченности хламидии методом ПИФ не определялись, титр антител сохранялся 1:40, индекс торможения фагоцитоза снизился до 1,2. Клинически наблюдалось значительное улучшение: исчезновение болевого синдрома, нормализация полового цикла.

Пример 2. Больная Р. обследовалась по поводу хронического неспецифического уретрита. При исследовании: патогенная флора не выявлена, хламидии методом ПИФ не обнаружены. В результате иммунологических исследований выявлено увеличение индекса торможения фагоцитоза до 1,4. Произведено повторное исследование на хламидии методом ПЦР. Хламидии обнаружены, специфическое лечение дало положительный результат.

Проведенный анализ результатов обследования 40 больных в сопоставлении с данными бактериологических методов показал преимущество предлагаемого способа в сравнении с РНГА. Среди лиц, имеющих положительные результаты исследования на хламидии методами ПИФ или ПЦР диагностически значимые титры противохламидийных антител выявлялись в 11% случаев, в то время как существенное повышение индекса торможения фагоцитоза наблюдалось у 45% больных.

Таким образом, применение заявленного метода в комплексе с бактериологическими исследованиями может существенно повысить точность и информативность лабораторной диагностики хламидийной инфекции человека.