способ прогнозирования течения урогенитальной гонореи
Классы МПК: | G01N33/571 венерических болезней, например сифилиса, гонореи, лишая |
Автор(ы): | Ахунова Н.Р., Воронина Л.Г., Дерябин Д.Г., Бухарин О.В. |
Патентообладатель(и): | Оренбургская государственная медицинская академия, Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения РАН, Ахунова Наиля Рашитовна, Воронина Людмила Григорьевна, Дерябин Дмитрий Геннадьевич, Бухарин Олег Валерьевич |
Приоритеты: |
подача заявки:
1999-07-19 публикация патента:
27.12.2000 |
Изобретение относится к области медицины, в частности к микробиологии, а именно к способам прогнозирования течения инфекционно-воспалительных заболеваний урогенитального тракта. Способ обеспечивает повышение точности прогнозирования течения урогенитальной гонореи. Оценивают соотношение антикомплементарной активности гонокока, определяемое процентом подавления комплементзависимого гемолиза эритроцитов в присутствии эталонного количества сывороточного комплемента, вызывающего 100% гемолиз, а также активности местной системы комплемента мочеполового тракта, определяемое процентом гемолиза сенсибилизированных эритроцитов. При этом исследуемые штаммы N.gonorrhoeae выращивают в жидкой питательной среде и отделяют супернатант, который вносят в лунки микропанели с добавлением комплемента сыворотки морской свинки, оттитрованного до его минимального разведения, вызывающего 100% гемолиз. В параллельные ряды лунок микропанели вносят оптически прозрачный супернатант отделяемого уретры или цервиковагинального секрета, полученных от тех же пациентов. После заполнения микропанели во все лунки вносят оптимально сенсибилизированные эритроциты барана. На завершающем этапе выполнения способа проводят регистрацию процента подавления активности комплемента (антикомплементарную активность) и процента гемолиза под действием комплемента репродуктивного тракта, после чего вычисляют соотношение полученных величин и при его значении менее 1 ожидают непродолжительное и/или неосложненное течение заболевания, а при значении соотношения, большем или равном 1, прогнозируют затяжное течение заболевания с вероятностью возникновения инфекционно-воспалительных осложнений. 2 табл.
Рисунок 1, Рисунок 2
Формула изобретения
Способ прогнозирования течения урогенитальной гонореи путем исследования взаимодействия возбудителя (гонококка) с системой комплемента, отличающийся тем, что оценивают соотношение антикомплементарной активности гонококка, определяемое процентом подавления комплементзависимого гемолиза эритроцитов в присутствии эталонного количества сывороточного комплемента, вызывающего 100% гемолиз, а также активности местной системы комплемента мочеполового тракта, определяемое процентом гемолиза сенсибилизированных эритроцитов, которое вычисляют по формуле![способ прогнозирования течения урогенитальной гонореи, патент № 2161312](/images/patents/310/2161312/2161312t.gif)
и при значении данного соотношения менее 1 ожидают продолжительное и/или неосложненное течение заболевания, при значениях соотношения, большем или равном 1, прогнозируют затяжное течение заболевания с вероятностью возникновения инфекционно-воспалительных осложнений.
Описание изобретения к патенту
Область техники, к которой относится изобретениеИзобретение относится к области медицинской микробиологии, а именно к способам прогнозирования течения инфекционно-воспалительных заболеваний урогенитального тракта. В частности, способ предназначен для прогнозирования затяжного течения урогенитальной инфекции, зтиологическим агентом которой является гонококк (Neisseria gonorrhoeae), а также направлен на оценку вероятности возникновения инфекционно- воспалительных осложнений при урогенитальной гонорее. Задача прогнозирования течения урогенитальной гонореи определяется необходимостью планирования тактики ее лечения и целесообразностью обоснования своевременных профилактических мероприятий по предупреждению развития разнообразных осложнений. Таким образом, заявляемый способ предназначен для использования в бактериологических лабораториях кожно- венерологических диспансеров, решающих вопросы диагностики и эффективного лечения больных с воспалительными заболеваниями урогенитального тракта гонококковой этиологии. Уровень техники. Первые попытки решения проблемы прогнозирования характера течения гонококковой инфекции были связаны с анализом клинических особенностей данного заболевания при первичном осмотре. Так затяжное течение и хронизация с некоей долей вероятности могут прогнозироваться при изначально минимальной активности процесса, например - при свежей торпидной гонорее (Туранова Е.Н., Частикова A.B., Антонова Л.В. Гонорея женщин. -М.: Медицина, 1983. -144 с.). Очевидными недостатками подобного подхода являются субъективность и малая точность прогноза. В этой связи дальнейшие попытки создания методов прогнозирования были связаны с анализом напряженности системного и местного иммунитета, при этом основное значение уделялось анализу системы комплемента, играющей ключевую роль в санации организма при гонококковой инфекции (Ross S.C., Densen P. Complement deficiency states and infection: epidemiology, pathogenesis and consequenses of neisserial and other infections in an immun deficiency//Medicin (Baltimore).-1984.-V. 63. -P. 243-273). Соответственно, обнаружение дефектов системы комплемента может рассматриваться в качестве прогностически неблагоприятного признака, коррелирующего с хронизацией инфекционного процесса и развитием разнообразных осложнений (способ - прототип 1). Использование данного метода, наряду с его высокой эффективностью в случае обнаружения генетически обусловленных дефектов системы комплемента, в значительном проценте случаев позволил констатировать вторичный характер подавления его активности, зависимый от биологических характеристик возбудителя. В этой связи следует указать, что ранее на примере гнойно- воспалительных заболеваний микробной этиологии (преимущественно хирургических инфекций) нами была продемонстрирована роль способности патогенов к инактивации комплемента - "антикомплементарной активности" - как патогенетически значимого фактора, определяющего неблагоприятное и затяжное течение патологического процесса (Патент РФ N 2111493 "Способ прогнозирования неблагоприятного течения гнойно-воспалительных заболеваний микробной этиологии"). Подобный способ по совокупности признаков может быть признан наиболее близким к заявляемому (способ - прототип 2). Очевидно, что тестирование антикомплементарной активности и у N.gonorrhoeae при установлении соответствующих количественных критериев также может в некоторой степени решить проблему прогнозирования течения гонококковой инфекции. Однако, в этом случае неизбежно появление ошибочных прогностических заключений, обусловленных "просмотром" первичных врожденных или приобретенных дефектов системы комплемента. Таким образом, основной причиной, препятствующей получению требуемого результата, является невысокая информативность раздельного тестирования активности системы комплемента и противостоящей ей антикомплементарной активности Neisseria gonorrhoeae. Соответственно, отсутствие комплексного подхода к анализу взаимоотношений в системе "комплемент - антикомплементарная активность" при гонококковой инфекции ведет к формированию значительного процента прогностических ошибок (до 15-30%). Подводя итог данному разделу описания изобретения, следует указать, что заявляемый способ не известен из уровня техники, т.е. является новым. Сущность изобретения. Основной задачей, на решение которой направлен заявляемый способ, является повышение точности прогнозирования течения урогенитальной гонореи. Сущностью заявляемого способа, сформулированной на уровне функционального обобщения и лежащей в его основе, является следующее:
- взаимоотношения, складывающиеся при урогенитальной гонорее в системе "комплемент репродуктивного тракта - антикомплементарная активность N.gonorrhoeae", являются наиболее информативным параметром, позволяющим осуществлять прогнозирование особенностей дальнейшего течения инфекционно-воспалительного процесса. Соответственно, при реализации заявляемого способа прогнозирования неблагоприятного течения урогенитальной гонореи характеристика действий, порядка их выполнения и условий осуществления представляется следующим образом:
На первом этапе ложкой Фолькмана, вмещающей 0,1 мл жидкости, осуществляют забор отделяемого уретры (у мужчин) или цервиковагинального секрета (у женщин); полученный материал помещают в герметическую посуду и хранят не более 3 суток при температуре от -5oC до -10oC. Параллельно из патологического материала (отделяемое уретры, цервикального канала) одним из общепринятых методов выделяют чистую культуру возбудителя, которую по совокупности культуральных, тинкториальных и биохимических признаков идентифицируют до вида - N.gonorrhoeae. После положительного результата идентификации выделенную культуру выращивают в 2-3 мл жидкой питательной среды при 37oC в течение 24 часов. Содержание этапа - получение материала для исследования. Общая продолжительность этапа - 2-3 суток. На втором этапе к отделяемому уретры или цервиковагинальному секрету (каждый в объеме 0,1 мл) добавляют равный объем изотонического раствора хлорида натрия, полученную смесь гомогенизируют интенсивным пипетированием и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин для получения оптически прозрачного супернатанта, содержащего компоненты системы комплемента. Параллельно проводится центрифугирование выращенных на жидкой питательное среде исследуемых культур N.gonorrhoeae (3000 об/мин, 15 минут) для получения супернатантов, содержащих антикомплементарный фактор гонококков. Содержание этапа - подготовка материала к исследованию. Продолжительность этапа - 30 мин. На третьем этапе в лунки микропанели (используются планшеты с плоским дном, что необходимо для последующей аппаратной регистрации результата исследования) вносят:
1) по 20 мкл супернатанта уретрального или цервиковагинального секрета (серия А - тестирование активности местной системы комплемента репродуктивного тракта при урогенитальной гонорее);
2) в соседние лунки вносят по 10 мкл супернатанта выделенной от того же пациента культуры N.gonorrhoeae + 10 мкл комплемента сыворотки морской свинки, предварительно оттитрованного таким образом, что его активность соответствует минимальному содержанию комплемента, достаточному для достижения 100% гемолиза (серия Б - тестирование антикомплементарной активности возбудителя урогенитальной гонореи);
3) после заполнения микропанели во все лунки вносят по 20 мкл оптимально сенсибилизированных эритроцитов барана в концентрации 1,5
![способ прогнозирования течения урогенитальной гонореи, патент № 2161312](/images/patents/310/2161034/183.gif)
На четвертом этапе с использованием фотометра с вертикальным ходом лучей и светофильтра 600-640 нм, исключающего погрешность измерения, связанную с поглощением гемоглобина, проводят замер оптической плотности остаточных (нелизированных с участием комплемента) эритроцитов. Учет результатов проводят по проценту гемолиза, рассчитанного относительно контролей 0% и 100% гемолиза:
1) активность системы комплемента репродуктивного тракта при урогенитальной гонорее оценивают величиной, соответствующей проценту гемолиза по отношению к контролю - 0% гемолиза;
2) антикомплементарную активность возбудителя урогенитальной гонореи (N. gonorrhoeae) оценивают величиной, соответствующей разности между 100% гемолизом и процентом гемолиза, сформировавшимся в присутствии внеклеточных продуктов гонококков с антикомплементарными свойствами. Содержание этапа - регистрация значений активности компонентов "комплемент-антикомплемент". Продолжительность этапа - 2 мин. На пятом этапе проводится вычисление соотношения активности местной системы комплемента репродуктивного тракта и антикомплементарной активности возбудителя - N.gonorrhoeae по формуле: антикомплементарная активность/активность комплемента (АКА/Компл. ), при этом прогностическая интерпретация результата в случае получения значений данного соотношения <1 заключается в ожидании непродолжительного неосложненного течения заболевания, а при значениях соотношения
![способ прогнозирования течения урогенитальной гонореи, патент № 2161312](/images/patents/310/2161065/8805.gif)
1) Бактерии выращиваются в 2-3 мл жидкой питательной среды при 37oC в течение 24 часов. 2) Выращенные культуры подвергаются центрифугированию (3000 об/мин, 15 минут), супернатанты культур отделяются. 3) Параллельно проводится центрифугирование при 3000 об/мин в течение 15 мин гомогенизированной смеси отделяемого уретры или цервиковагинального секрета с изотоническим раствором хлорида натрия (1:1) для получения оптически прозрачного супернатанта. 4) В лунки микропанели вносят по 20 мкл супернатанта уретрального или цервиковагинального секрета, в соседние лунки вносят по 10 мкл супернатанта, выделенной от того же пациента культуры N.gonorrhoeae с добавлением 10 мкл комплемента сыворотки морской свинки, оттитрованного до его минимального разведения, вызывающего 100% гемолиз в используемых экспериментальных условиях. 5) После заполнения микропанели во все лунки вносят по 20 мкл оптимально сенсибилизированных эритроцитов барана в концентрации 1,5
![способ прогнозирования течения урогенитальной гонореи, патент № 2161312](/images/patents/310/2161034/183.gif)
Класс G01N33/571 венерических болезней, например сифилиса, гонореи, лишая