ненасыщенные 14,15-циклопропаноандростаны, способ их получения, соединения, фармацевтическая композиция

Формула изобретения

1. Ненасыщенные 14,15-циклопропаноандростаны общей формулы (I)

где

R₁ обозначает атом водорода, гидроксильную группу,

R₂ обозначает атом водорода, гидроксильную группу,

R₃ обозначает атом водорода или С _1-10алкильную группу в - или -положении,

R₄ обозначает атом галогена, прежде всего атом фтора, хлора или брома либо псевдогалоген, прежде всего роданидную или азидную группу, либо гидроксильную или перфторалкильную группу,

R₅ обозначает С_1-4алкильную группу, при этом, если в положении 1, 2 находится двойная связь, R ₄ дополнительно к вышеуказанным значениям может представлять собой атом водорода, а также их фармацевтически приемлемые соли.

2. Соединения по п.1, где R₁ представляет собой гидроксильную группу.

3. Соединения по п.1 или 2, где R ₂ представляет собой атом водорода.

4. Соединение по любому из пп.1-3, где R₃ представляет собой метильную группу.

5. Соединения по любому из пп.1-4, где R₄ представляет собой атом фтора, хлора или брома либо трифторметильную или гидроксильную группу.

6. Соединения по любому из пп.1-5, где R₅ представляет собой метильную или этильную группу.

7. Соединения по п.1 из группы, включающей

1) 4-хлор-17-гидрокси-14, 15-метиленандрост-4-ен-3-он,

2) 4-хлор-17-гидрокси-14, 15-метиленандрост-4-ен-3-он,

3) 4-бром-17-гидрокси-14, 15-метиленандрост-4-ен-3-он,

4) 4,17-дигидрокси-14, 15-метиленандрост-4-ен-3-он,

5) 4-трифторметил-17-гидрокси-14, 15-метиленандрост-4-ен-3-он,

6) 17-гидрокси- 14, 15-метиленандроста-1,4-диен-3-он,

7) 4-хлор-17-гидрокси-14,15-метиленандроста-1,4-диен-3-он.

8. Способ получения соединений по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что соединения общей формулы (II)

где R₁, R₂ и R₅ имеют указанные в п.1 значения и между С-14 и С-15 находится - или -циклопропановая группа, двойную связь в положении 4, 5 эпоксидируют пероксидом водорода в щелочных условиях, полученную эпоксидную смесь обрабатывают в соответствующем растворителе кислотами общей формулы HR ₈, в которой R₈ может представлять собой атом галогена, прежде всего атом фтора, хлора или брома, либо псевдогалоген, прежде всего роданидную или азидную группу, или подвергают взаимодействию с каталитическими количествами минеральной кислоты и при необходимости полученные 4-бромзамещенные соединения общей формулы (I) подвергают взаимодействию с метиловым эфиром 2,2-дифтор-2-(фторсульфонил)уксусной кислоты в диметилформамиде в присутствии Сul в присутствии СuI и/или при необходимости полученное соединение формулы (I) подвергают дегидрированию с помощью 2,3-дихлор-5,6-дицианбензохинона в соответствующем растворителе.

9. Фармацевтические композиции, обладающие гестагенным и/или андрогенным действием, содержащие по меньшей мере одно соединение общей формулы (I) по любому из пп.1-7, необязательно вместе с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами и носителями.

10. Соединения общей формулы (I) по любому из пп.1-7 для контроля фертильности у мужчин, при проведении гормонозаместительной терапии у мужчин и женщин или для лечения обусловленных действием гормонов заболеваний у мужчин и женщин, таких как эндометриоз, рак молочной железы или гипогонадизм.

11. Соединения общей формулы (I) по любому из пп.1-7 для применения в качестве терапевтических активных веществ.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к новым ненасыщенным 14,15-циклопропаноандростанам, способу их получения и содержащим эти соединения фармацевтическим композициям.

Ненасыщенные 14,15-циклопропаноандростаны следующей формулы

известны из заявки DE 19827523.4 (PCT/DE99/01794), которая имеет более ранний приоритет по сравнению с настоящей заявкой, но которая опубликована после подачи настоящей заявки.

В приведенной выше формуле

R₁ обозначает атом водорода, гидроксильную группу, алкилокси-, ацилокси-, арилокси-, аралкилокси- или алкиларилоксигруппу, остаток -OCONHR₉ или -OCOOR₉, где R₉ представляет собой атом водорода, алкильный, арильный, аралкильный или алкиларильный остаток в каждом случае с 1-10 атомами углерода,

R ₂ обозначает

- атом водорода, гидроксильную группу, алкильную, ацильную, арильную, аралкильную, алкиларильную группу в каждом случае с 1-10 атомами углерода,

- остаток -(СН ₂)_nСН₂Y, где n обозначает 0, 1 или 2, a Y представляет собой атом фтора, хлора, брома или йода, циано-, азидную или роданидную группу, остаток –OR ₁₀ или –SR₁₀, где R₁₀ представляет собой атом водорода, алкильный, арильный, аралкильный или алкиларильный остаток с 1-10 атомами углерода либо ацильный остаток COR ₉, где R₉ представляет собой алкильный, арильный, аралкильный или алкиларильный остаток в каждом случае с 1-10 атомами углерода, остаток -OR₉, где R₉ представляет собой атом водорода, алкильный, арильный, аралкильный или алкиларильный остаток в каждом случае с 1-10 атомами углерода,

- остаток -(CH₂)_m-CH=CH(CH₂ )_n-R₈, где m обозначает 0, 1, 2 или 3 и n обозначает 0, 1 или 2, a R₈ представляет собой атом водорода, алкильный, арильный, аралкильный или алкиларильный остаток в каждом случае с 1-10 атомами углерода либо гидроксильную группу, алкоксигруппу или ацилоксигруппу в каждом случае с 1-10 атомами углерода,

- остаток -(СН₂)_O ССR ₁₁, где о обозначает 0, 1 или 2, а R₁₁ представляет собой атом водорода, атом фтора, хлора, брома или йода, алкильный, арильный, аралкильный, алкиларильный или ацильный остаток в каждом случае с 1-10 атомами углерода, или

R ₁ и R₂ обозначают независимо друг от друга кето-, метиленовую, дифторметиленовую группу,

между С-6 и С-7 может находиться двойная связь,

между С-14 и С-15 находится - или -циклопропановая группа X, где Х представляет собой CZ2-группу, где Z обозначает атом водорода, фтора, хлора, брома или йода,

R₃ и R₄ обозначают независимо друг от друга атом водорода, алкильную группу в - или -положении с 1-10 атомами углерода и

R₅ обозначает алкильную группу с 1-3 атомами углерода.

Из заявки ЕР 0768316 А1 известны стероиды с 14,15-метиленовой группой, которые обладают прогестеронным действием и тем самым могут применяться в комбинации по меньшей мере с одним пригодным для этой цели эстрогеном для гормональной контрацепции и климактерической гормонозаместительной терапии (ГЗТ), а также для лечения эндометриоза или гестогензависимых опухолей.

В отличие от этого уровня техники в основу настоящего изобретения была положена задача получить новые ненасыщенные 14,15-циклопропаноандростаны.

Эта задача решается с помощью ненасыщенных 14,15-циклопропаноандростанов общей формулы (I)

где

R₁ обозначает атом водорода, гидроксильную группу, С_1-10алкильную,

С_1-10алкилокси-, С_1-15ацилокси-, С_4-15арилокси-, С_7-15 аралкилокси- или С_7-15алкиларилоксигруппу,

R₂ обозначает

- атом водорода, гидроксильную группу, С_1-10алкильную, С_1-10ацильную, С_1-10ацилокси-, С_6-15арильную, С_7-15 аралкильную или С_7-15алкиларильную группу,

- остаток -(СН₂)_nСН₂Y, где n обозначает 0, 1 или 2, a Y представляет собой атом галогена, прежде всего атом фтора, хлора, брома или йода, псевдогалоген, прежде всего циано-, азидную или роданидную группу,

- остаток -(СН₂)_m-СН=СН(СН₂)_p -R₆, где m обозначает 0, 1, 2 или 3, p обозначает 0, 1 или 2, а R₆ представляет собой атом водорода, С_1-10алкильный, С_6-15арильный, С_7-15 аралкильный или С_7-15алкиларильный остаток либо гидроксильную группу, C_1-10алкилоксигруппу или С _1-10ацилоксигруппу,

- остаток -(CH₂) _oCCR ₇, где о обозначает 0, 1 или 2, a R₇ представляет собой атом водорода, атом галогена, прежде всего атом фтора, хлора, брома или йода, С_1-10алкильный, С_6-15 арильный, С_7-15аралкильный, С_7-15алкиларильный или С_1-10ацильный остаток, или

R₁ и R₂ совместно обозначают кето-, метиленовую, дифторметиленовую группу или, включая С-17, образуют спирооксиран либо 2,2-диметил-1,3-диоксолан,

между С-1 и С-2 может находиться двойная связь,

между С-14 и С-15 находится - или -циклопропановая группа,

R₃ обозначает атом водорода или С _1-10алкильную группу в - или -положении,

R₄ обозначает атом галогена, прежде всего атом фтора, хлора или брома, либо псевдогалоген, прежде всего роданидную или азидную группу, либо гидроксильную или перфторалкильную группу,

R₅ обозначает С_1-4алкильную группу,

при этом, если в положении 1,2 находится двойная связь, R₄ дополнительно к вышеуказанным значениям может представлять собой атом водорода, а также их фармацевтически приемлемых солей.

Неожиданно было установлено, что предлагаемые в изобретении ненасыщенные 14,15-циклопропаноандростаны общей формулы (1) представляют собой соединения с гестагенным и/или андрогенным действием.

В контексте настоящего изобретения фармацевтически приемлемыми солями являются соли щелочных или щелочноземельных металлов, прежде всего соли натрия, калия или аммония. Эти соли можно получать по хорошо известным из уровня техники стандартным технологиям и способам.

Под понятием "С_1-4-, соответственно С_1-10алкильная группа" в контексте настоящего изобретения имеется в виду алкильный остаток с разветвленной или неразветвленной цепью с 1-4, соответственно 1-10 атомами углерода. В качестве примеров таковых можно назвать метильную, этильную, н-пропильную, изопропильную, н-бутильную, изобутильную или трет-бутильную, н-пентильную, изопентильную, н-гексильную, 2-метилпентильную, 3-метилпентильную, 2,2-диметилбутильную или 2,3-диметилбутильную группу.

Под понятием "С_1-10 алкоксигруппа" в контексте настоящего изобретения имеется в виду циклическая или ациклическая группа, алкильный остаток которой содержит от 1 до 10 атомов углерода, при этом под понятием "циклическая группа" также имеется в виду гетероциклическая группа, которая может содержать в кольце один или два атома гетероатома, которые могут быть выбраны из группы, включающей атом азота, атом кислорода и атом серы. Примерами таких групп являются метоксигруппа, этоксигруппа или н- либо изопропоксигруппа, изо- либо трет-бутоксигруппа, (1’-метокси)циклопентокси-, соответственно тетрагидропиранилоксигруппа.

Под понятием "С_1-10-, соответственно С_1-15ацильная, соответственно ацилоксигруппа" в контекстве настоящего изобретения имеется в виду остаток с 1-10, соответственно 1-15 атомами углерода алканкарбоновых кислот с неразветвленной или разветвленной цепью, таких, например, как муравьиная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, бутановая кислота, изобутановая кислота, гептановая кислота или ундекановая кислота.

Под понятием "С _6-15арильная группа" в контексте настоящего изобретения имеется в виду замещенный или незамещенный арильный остаток с 6-15 атомами углерода, например фенильная группа, замещенная фенильная группа, такая как галофенильная группа либо нитрофенильная группа, или нафтильная группа.

Под понятием "C _4-l5apилoкcигpyппa" в контексте настоящего изобретения имеется в виду карбоциклический или гетероциклический остаток с 4-15 атомами углерода. Примерами таковых являются бензоилоксигруппа, 1- или 2-нафтинилоксигруппа, 2- или 3-фуранилоксигруппа группа, 2- или 3-тиенилоксигруппа, 2-, 3- или 4-пиридинилоксигруппа.

Под понятием "С_7-15алкиларильная группа" в контексте настоящего изобретения имеется в виду арильный остаток, замещенный алкильным остатком, которые вместе содержат от 7 до 15 атомов углерода, при этом арильный остаток может нести другие заместители, такие, например, как атом галогена. Примерами таких групп являются толуенильная группа (метилфенильная группа), галотолуенильная группа, этилфенильная группа, диметилфенильная группа или триметилфенильная группа.

Под понятием "С_7-15алкиларилоксигруппа" в контексте настоящего изобретения имеется в виду удлиненная на один атом кислорода "С_7-15аралкильная группа", такая, например, как 3-, соответственно 4-метилфенилоксигруппа.

Под понятием "С_7-15аралкильная группа" в контексте настоящего изобретения имеется в виду алкильный остаток, замещенный арильным остатком, которые вместе содержат от 7 до 15 атомов углерода, при этом арильный остаток может нести другие заместители, такие как атом галогена. Примерами таких групп являются свободная или замещенная ароматическим остатком бензильная группа, такая как бензильная группа или галобензильная группа.

Под понятием "С_7-15аралкилоксигруппа" в контексте настоящего изобретения имеется в виду удлиненная на один атом кислорода "С_7-15аралкильная группа, такая как бензилоксигруппа.

Под понятием "галоген" в контексте настоящего изобретения имеется в виду атом фтора, хлора, брома или йода.

Под понятием "псевдогалоген" в контексте настоящего изобретения имеется в виду цианатная, роданидная, циано- или азидная группа.

Под понятием "перфторалкильный остаток" в контексте настоящего изобретения имеется в виду фторалкильный остаток с разветвленной или неразветвленной цепью с 1-3 атомами углерода, в качестве примеров при этом можно назвать трифторметильную, пентафторэтильную, гептафтор-н-пропильную или гептафторизопропильную группу.

R₁ обозначает предпочтительно гидроксильную или ацилоксигруппу, прежде всего гидроксильную группу, формилоксигруппу, ацетилоксигруппу, пропионилоксигруппу, н-бутирилоксигруппу, изобутирилоксигруппу, гептанилоксигруппу или ундеканилоксигруппу.

Если R₂ обозначает остаток -(СН₂)_nСН₂Y, то n предпочтительно обозначает 1, a Y предпочтительно обозначает атом фтора, циано- или роданидную группу.

Если R₂ обозначает остаток -(СН₂)_mСН=СН(СН₂)p-R₆ , то m предпочтительно обозначает 1, а R₆ предпочтительно представляет собой метильную или этильную группу либо метокси- или этоксигруппу.

Если R₂ обозначает остаток -(СН₂)_oС=СR₇, то о предпочтительно обозначает 1, a R₇ предпочтительно представляет собой атом фтора либо метильную или этильную группу.

R₂ особенно предпочтительно обозначает атом водорода или С _1-6алкильную группу, прежде всего метильную или этильную группу.

R₃ предпочтительно обозначает С _1-4алкильный остаток, особенно предпочтительно метильную группу.

R₄ предпочтительно обозначает атом фтора, хлора или брома либо трифторметильную или гидроксильную группу.

R₅ предпочтительно обозначает метильную или этильную группу.

Наиболее предпочтительны следующие соединения:

1) 4-хлор-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он,

2) 4-хлор-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он,

3) 4-хлор-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он,

4) 4-хлор-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он,

5) 4-бром-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он,

6) 4-бром-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он,

7) 4-бром-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3 -он,

8) 4-бром-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он,

9) 4-фтор-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он,

10) 4-фтор-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он,

11) 4-фтор-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он,

12) 4-фтор-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3 -он,

13) 4,17-дигидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он,

14) 4,17-дигидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он,

15) 4,17-дигидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он,

16) 4,17-дигидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он,

17) 4-трифторметил-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он,

18) 4-трифторметил-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он,

19) 4-трифторметил-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он,

20) 4-трифторметил-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он,

21) 17-гидрокси-14,15-метиленандроста-1,4-диен-3-он,

22) 17-гидрокси-14,15-метиленандроста-1,4-диен-3-он,

23) 17-гидрокси-14,15-метиленандроста-1,4-диен-3-он,

24) 17-гидрокси-14,15-метиленандроста-1,4-диен-3-он,

25) 17-гидрокси-14,15-метиленандроста-1,4-диен-З-он,

26) 4-хлор-17-гидрокси-14,15-метиленандроста-1,4-диен-3-он,

27) 4-хлор-17-гидрокси-14,15-метиленандроста-1,4-диен-3-он,

28) 4-хлор-17-гидрокси-14,15-метиленандроста-1,4-диен-3-он и

29) 4-хлор-17-гидрокси-14,15-метиленандроста-1,4-диен-3-он.

Предлагаемые в изобретении соединения и их фармацевтически приемлемые соли можно получать следующим способом, который заключается в том, что в соединениях общей формулы (II)

где R₁, R₂, R₃ и R ₅ имеют вышеуказанные значения, а между С-14 и С-15 находится - или -циклопропановая группа, двойную связь в положении 4,5 эпоксидируют пероксидом водорода в щелочных условиях и полученную эпоксидную смесь обрабатывают в пригодном для этой цели растворителе кислотами общей формулы HR₈, где R₈ может представлять собой атом галогена или псевдогалоген.

Другая возможность получения 4-бромзамещенных соединений заключается в присоединении брома к соединениям общей формулы (II) при использовании брома, N-бромсукцинимида или N-бромацетамида в смеси уксусная кислота/простой эфир в присутствии акцептора протонов, такого как коллидин (X.S. Fei и др. J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1: 1139-1142 (1998)).

4-гидроксизамещенные можно получать взаимодействием вышеуказанной эпоксидной смеси с каталитическими количествами минеральной кислоты, такой как серная кислота (P.S. Furth и др. J. Enzyme Inhibition, 1990, т. 4, 131-135).

Соединения общей формулы (I) с дополнительной двойной связью в положении 1,2 можно легко получать по известным специалистам методам, таким как дегидрирование 4-ен-3-он-системы с помощью 2,3-дихлор-5,6-дицианбензохинона в соответствующем растворителе, например в диоксане, толуоле или трет-бутаноле.

4-трифторметилзамещенные соединения общей формулы (I) можно получать взаимодействием вышеуказанных 4-бромзамещенных соединений общей формулы (I) с метиловым эфиром 2,2-дифтор-2-(фторсульфонил)уксусной кислоты в диметилформамиде в присутствии Cul (X.S. Fei и др. J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1: 1139-1142(1998)).

Исходные соединения формулы (II) можно получать по известным методам или по способу, описанному в заявке DE 19827523.4 (PCT/DE99/01794). В указанной заявке описано также введение остатков, являющихся аналогами представленных в настоящем описании остатков R ₁, R₂, R₃ и R₅.

Объектом настоящего изобретения являются также фармацевтические композиции для перорального, ректального, подкожного, внутривенного или внутримышечного применения, которые вместе с обычными носителями и разбавителями содержат по меньшей мере одно соединение общей формулы (I) и/или его кислотно-аддитивные соли в качестве активного вещества.

Предлагаемые в изобретении фармацевтические препараты вместе с используемыми для их получения обычными твердыми или жидкими носителями и/или разбавителями и общепринятыми в таких случаях вспомогательными веществами согласно предусматриваемой методике введения выпускают в соответствующей дозировке. Для получения предпочтительной пероральной лекарственной формы изготавливают предпочтительно таблетки, таблетки с пленочным покрытием, драже, капсулы, пилюли, порошки, растворы или суспензии, а также препараты в форме депо, т.е. продленного действия.

Наряду с этим могут применяться парентеральные лекарственные формы, такие как растворы для инъекций или же суппозитории.

Лекарственные формы в виде таблеток можно получать, например, путем смешения активного вещества с известными вспомогательными веществами, такими как декстроза, сахар, сорбит, маннит, поливинилпирролидон, разрыхлителями, такими как кукурузный крахмал либо альгиновая кислота, связующими, такими как крахмал либо желатин, смазывающими веществами, такими как стеарат магния либо тальк, и/или ретардирующими средствами (агенты, обеспечивающие получение депо-форм), такими как карбоксилполиметилен, карбоксиметилцеллюлоза, ацетофталат целлюлозы или поливинилацетат. Таблетки могут состоять также из нескольких слоев.

Драже можно изготавливать путем нанесения на ядра, получаемые аналогично таблеткам, средств, обычно используемых в оболочках для драже, например поливинилпирролидона или шеллака, гуммиарабика, талька, диоксида титана или сахара. При этом оболочка драже также может состоять из нескольких слоев, для формирования которых могут использоваться, например, вышеуказанные вспомогательные вещества.

Для улучшения вкусовых качеств растворов и суспензий, содержащих предлагаемое в изобретении активное вещество, их можно смешивать с такими веществами, как сахарин, цикламат либо сахар, и/или с ароматизаторами, такими как ванилин или апельсиновый экстракт. Кроме того, их можно смешивать со вспомогательными суспенидирующими агентами, такими как натрийкарбоксиметилцеллюлоза, или консервантами, такими как n-гидроксибензойная кислота.

Капсулы можно изготавливать путем смешения лекарственного средства с носителями, такими как лактоза или сорбит, и расфасовкой полученной смеси в капсулы.

Суппозитории изготавливают предпочтительно путем смешения активного вещества с пригодными для этих целей носителями, такими как нейтральные жиры или полиэтиленгликоли, либо их производными.

Фармацевтические композиции могут далее представлять собой предназначенные для чрескожного введения композиции, например трансдермальные терапевтические системы (ТДС) либо гели, аэрозоли или мази, или назальные композиции, такие как назальные аэрозоли или капли для носа.

Предлагаемые в изобретении ненасыщенные 14,15-циклопропаноандростаны общей формулы (I) представляют собой соединения с гормональным (гестагенным и/или андрогенным) действием.

Так, например, соединение общей формулы (I), где R₁ обозначает гидроксильную группу, R₂ и R₃ обозначают атом водорода, R₅ обозначает метильную группу, Х обозначает СН ₃-группу, а 14,15-циклопропановое кольцо находится в -положении, а именно 4-хлор-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он представляет собой андроген.

Было установлено, что вещество 4-хлор-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он на 42±3% связывается с рецептором андрогена в предстательной железе крыс (сравнительное вещество: 17-гидрокси-17-метилэстра-4,9,11-триен-3-он; R 1881), тогда как связь с рецептором прогестерона в матке крольчих практически не имеет места. В тесте по Гершбергеру удалось выявить заметную андрогенную активность, тогда как гестагенное действие в тесте на сохранение беременности практически не наблюдалось.

Полученные в опытах результаты открывают многосторонние возможности использования предлагаемых в изобретении соединений общей формулы (I) для контроля фертильности у мужчин, при проведении гормонозаместительной терапии (ГЗТ) у женщин и мужчин или для лечения обусловленных действием гормонов заболеваний у мужчин и женщин, таких как эндометриоз, рак молочной железы или гипогонадизм.

Примеры

Пример 1

17-гидрокси-4,5-эпокси-14,15-метиленандростан-3-он

Получение 4,5-эпоксидов

2 г 17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-она растворяют в 80 мл метанола и при 0°С смешивают с 26 мл раствора пероксида водорода (35%-ного). Затем при перемешивании добавляют 5,2 мл 10%-ного раствора гидроксида натрия и перемешивают при 0°С в течение 30 ч. Реакционный раствор смешивают с 50 мл дихлорметана и 25 мл воды и отделяют органическую фазу. Далее промывают полуконцентрированным раствором тиосульфата, сушат и концентрируют досуха. Полученный остаток представляет собой смесь 4,5-, соответственно 4,5-эпоксидов, и его используют на последующей стадии без дальнейшей очистки.

Пример 2

17-гидрокси-4,5-эпокси-14,15-метиленандростан-3-он

Вышеуказанное соединение можно получить из 17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-она аналогично примеру 1.

Пример 3

4-хлор-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он

1,5 г 17-гидрокси-4,5-эпокси-14,15-метиленандростан-3-она растворяют в 150 мл ацетона и при 0°С смешивают с 5,5 мл концентрированной соляной кислоты. Через 24 ч при 0°С смесь нейтрализуют раствором соды и ацетон отгоняют. Остаток экстрагируют дихлорметаном. Органические экстракты сушат и концентрируют. После кристаллизации из этанола получают 4-хлор-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он.

¹Н-ЯМР: 0,12 (1Н, dd, J=5,5, 3,3 Гц, СН ₂-мостик), 0,22 (1Н, dd, J=8,2, 5,5 Гц, СН₂-мостик), 0,99 (3Н, s, H-18), 1,30 (3Н, s, H-19), 3,49 (1Н, dd, J-9,3, 7,1 Гц, Н-17).

Пример 4

4-хлор-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он

17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он подвергают превращению аналогично примеру 3.

¹ Н-ЯМР: 0,32 (1Н, dd, J=7,7, 4,9 Гц, СН₂-мостик), 0,72 (1H, dd, J=4,4, 3,3 Гц, СН₂-мостик), 0,99 (3Н, s, H-18), 1,29 (3Н, s, H 19), 3,80 (1H, d, J=6,0 Гц, Н-17).

Пример 5

4,17-дигидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он

3,5 г эпоксидной смеси, 17-гидрокси-4,5-эпокси-14,15-метиленандростан-3-она (стадия 1) растворяют в 50 мл уксусной кислоты, содержащей 2 об. % концентрированной серной кислоты. Раствор в течение 3 дней выдерживают при 10°С. После этого раствор смешивают с 200 мл этилового эфира уксусной кислоты и нейтрализуют раствором соды. Затем органическую фазу сушат и концентрируют. Остаток растворяют в 100 мл метанола, смешивают с 4 г гидроксида калия и в течение 1 ч нагревают с обратным холодильником. Затем раствору дают остыть, нейтрализуют 50%-ной уксусной кислотой, сливают в 1 л воды и кристаллы отделяют с помощью нутч-фильтра. Таким путем получают 4,17-дигидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он.

¹Н-ЯМР: 0,13 (1H, dd, J=5,6, 3,2 Гц, CH ₂-мостик), 0,24 (1H, dd, J=8,3, 5,6 Гц, СН₂-мостик), 0,99 (3Н, s, H-18), 1,30 (3Н, s, H-19), 3,50 (1H, dd, J=9,4, 6,8 Гц, Н-17), 6,10 (1H, s, 4-OH).

Пример 6

4-бром-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он

Целевое соединение получают аналогично получению 4-хлор-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-она, при этом вместо соляной кислоты применяют 48%-ную бромистоводородную кислоту.

¹Н-ЯМР: 0,12 (1H, dd, J-5,5, 3,3 Гц, СН₂-мостик), 0,21 (1H, dd, J-8,4, 5,4 Гц, СН₂ -мостик), 1,00 (3Н, s, H-18), 1,33 (3Н, s, H-19), 3,49 (1H, dd, J=9,3, 7,1 Гц, Н-17).

Пример 7

4-трифторметил-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он

1,5 г 4-бром-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-она растворяют в 180 мл диметилформамида и перемешивают с 1 г Cul и 2,8 мл метилового эфира 2,2-дифтор-2-(фторсульфонил)уксусной кислоты при 75°С в течение 12 ч.

После переработки смеси и хроматографической очистки получают 4-трифторметил-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он.

¹Н-ЯМР: 0,14 (1Н, dd, J=5,5, 3,0 Гц, СН ₂-мостик), 0,25 (1Н, dd, J=8,2, 5,8 Гц, СН₂-мостик), 1,00 (3Н, s, H-18), 1,32 (3Н, s, H-19), 3,51 (1Н, m, H-17).

¹⁹F-ЯМР: -55,3 (3F, s, 4-F₃С).

Пример 8

17-гидрокси-14,15-метиленандроста-1,4-диен-3-он

4 г 17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-она в течение 6 дней перемешивают в 160 мл толуола с 3,2 г 2,3-дихлор-5,6-дицианбензохинона при 85°С. Затем с помощью нутч-фильтра отфильтровывают осадок, промывают небольшим количеством толуола и фильтрат концентрируют досуха. Остаток очищают с помощью хроматографии и таким путем получают 17-гидрокси-14,15-метиленандроста-1,4-диен-3-он.

¹Н-ЯМР: 0,13 (1Н, dd, J=5,6, 3,2 Гц, СН ₂-мостик), 0,24 (1Н, dd, J=8,3, 5,6 Гц, СН₂-мостик), 0,98 (3Н, s, H-18), 1,35 (3Н, s, H-19), 3,50 (1Н, m, H-17), 6,06 (1H, m, H-4), 6,22 (1H, dd J=12,09, 1,65 Гц, Н{2}), 7,04 (1H, d, J=9,9 Гц, Н-1).

Пример 9

4-хлор-17-гидрокси-14,15-метиленандроста-1,4-диен-3-он

Данное соединение получают из 4-хлор-17-гидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-она аналогично примеру 6.

¹Н-ЯМР: 0,13 (1H, dd, J=5,6, 3,2 Гц, СН₂-мостик), 0,24 (1H, dd, J=8,3, 5,6 Гц, СН₂-мостик), 0,98 (3Н, s, H-18), 1,35 (3Н, s, H-19), 3,50 (1H, m, H-17), 6,22 (1H, dd J=12,09, 1,65 Гц, Н{2}), 7,04 (1H, d, J=9,9 Гц, Н-1).

Относительно токсичности заявитель сообщает следующее. Для определения токсилогических свойств заявленных соединений использовалась программа DЕRЕК, которая использует результаты всемирной экспертизы о структурных элементах химических веществ, которые могут оказаться токсичными для человека, и анализирует вещества на наличие так называемых "структурных тревожных сигналов". В результате использования данной программы не было обнаружено никаких признаков токсичности для соединений формулы I. Краткое описание программы DERЕК смотри в приложении.

В отношении биологических свойств заявитель сообщает, что на основании результатов испытаний на животных можно подтвердить андрогенное действие двух соединений, а именно соединение №1 (пример 3) и соединение №13 (пример 5), которые испытывались в тесте Хершбергера (Неrshberger) на недоразвитых орхиэктомированных крысах при дозах от 1 мг/животное/сут подкожно в течение 7 дней. В качестве контрольной группы использовали ложнооперированных и орхиэктомированных животных. Тест Хершбергера (анализ) является общепризнанным методом анализа (рекомендован OЕСD-организацией экономической кооперации и развития) и благодаря росту андрогензависимых тканей позволяет подтвердить андрогенное и, соответственно, антиандрогенное действие химических веществ. Он признан в качестве метода поиска in vivo (скрининга) андрогенных агонистов или, соответственно, антагонистов посредством измерения изменений соответствующих органов или тканей, таких как предстательная железа, семенные пузырьки и мышца, поднимающая анус, у кастрированных (орхиэктомированных) самцов крыс.

Сущность метода заключается в следующем. Функции и размеры добавочных половых желез (семенных пузырьков и предстательной железы) и мышцы, поднимающей анус, зависит от присутствия андрогенов. Соответственно, кастрация приводит к атрофии этих органов. Если после кастрации вводят андрогены, по увеличению массы добавочных желез можно сделать вывод о наличии андрогенной активности соединений. Неполовозрелых самцов (линия WIST, Tierzucht GmBH Schonwalde, Германия) массой 40-50 г орхиэктомировали (ОРХ). Контрольная группа включала некастрированных животных, однако они были ложнооперированны (ЛО). Контрольной группе, ОРХ группе и ЛО группе (n=5) вводили полученные соединения. Анализируемые соединения вводили в дозе 1,0 мг/особь/день подкожно. Объем образца составлял 0,2 мл/особь/день. Через 24 ч после 7 инъекций животных забивали.

Как видно из следующей таблицы 1 оба анализируемых соединения на основании роста предстательной железы, семенных пузырьков и мышцы, поднимающей анус, обладают неожиданно высоким андрогенным действием по сравнению с нелеченными кастрированными животными (ОРХ) и, соответственно, ложнооперированными животными. Тест Хершбергера на неполовозрелых орхиэктомированных самцах крыс, доза 1,0 мг/особь/день, подкожно, 7 инъекций (6 животных)

Таблица 1
	Предстательная железа (мг)	Семенные пузырьки (мг)-	Lev. Ani (мг)
4-хлор-17-гидрокси-14, 15-метиленандрост-4-ен-3-он	60	78	75
Группа ЛО	52	21	32
Группа ОРХ	8	7	31

	Предстательная железа (мг)	Семенные пузырьки (мг)	Lev. ani (мг)
4,17 -дигидрокси-14, 15-метиленандрост-4-ен-3он	62	94	80
Группа ЛО	48	20	40
Группа ОРХ	9	6	40

На основании этих данных у соединения 13 (4,17-дигидрокси-14,15-метиленандрост-4-ен-3-он) сродство к андрогенному рецептору составляет АR=32%. Связывание с рецептором определяли методом конкурентного связывания специфического радиоактивномеченного (³H) гормона (метки) и анализируемого соединения с рецептором в цитозоле клеток из органов-мишеней. При этом достигалось насыщение рецептора и равновесие реакции. Метку и анализируемое соединение (конкурентно) в возрастающей концентрации инкубировали при 0-4°С в течение 18 ч с фракциями цитозоля, содержащими рецептор. После отделения несвязанной метки на суспензии уголь-декстран для каждой концентрации измеряли долю метки, связанной с рецептором, и по кривой концентрационной зависимости определяли IC₅₀. Относительное молярное сродство связывания (RВА контрольного соединения=100%) определяли как частное от деления IС₅₀ контрольного и анализируемого соединения (х100%). Для андрогенного рецептора использовали следующие условия инкубации: цитозоль предстательной железы кастрированного животного; предстательную железу хранили при -30°С; буферный раствор: ТЕD, содержащий 10% глицерина и 2 мкМ триамцинолонацетонида; метка: ³H-метриболон, 4 нМ; контрольное вещество: метриболон (100%).