фармацевтическая композиция, содержащая гиалуронидазу и липосомы для наружного применения

Формула изобретения

Фармацевтическая композиция для местного применения, которая может быть использована при воспалительных заболеваниях простаты, в виде суппозиториев, содержащая в качестве активного ингредиента 2,44 мас.% гиалуронидазы, 2,93 мас.% твин-80, 91,69 мас.% ПЭГ-1500, 2,44 мас.% липосомы и носители или эксципиенты, такие как бензидамин 0,5 мас.%.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к фармации, а именно к фармацевтической композиции для местного применения в виде суппозиториев, содержащей фермент гиалуронидазу, которая может быть использована в фармации для лечения и профилактики воспалительных заболеваний, таких как геморрой, простатит и парапроктит.

Известны лекарственные средства для местного применения, используемые для лечения хронического простатита, содержащие противовоспалительные компоненты, не являющиеся ферментами, например, экстракты лекарственных растений (Простанорм ЗАО «ФармВилар» (Россия).

Известно лекарственное средство Тантум Верде в виде раствора для полосканий; таблеток для рассасывания; порошка; аэрозоля; геля, включающее противовоспалительный компонент - бензидамин и не содержащее липосомы и гиалуронидазу (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 15-е изд., перераб, испр. и доп. - М.: Новая Волна, 2006. - с.177).

Известна фармацевтическая фермент-содержащая композиция, включающая гиалуронидазу ковалентно-сшитую с полиоксидонием (ЛОНГИДАЗА, суппозитории для вагинального и ректального введения 3000 ME, ООО «НПО ПЕТРОВАКС ФАРМ»). Описанная композиция не содержит липосомы, обеспечивающие быстрое всасывание, пролонгацию, а также контролируемое высвобождение фермента, и следовательно, не обладает преимуществами заявленной композиции.

Известна иммобилизация различных веществ на липосомах (липосомы и другие наночастицы как средства доставки лекарственных веществ. Вопросы медицинской химии. Каплун А.П. № 1, 1999, доступно он-лайн http://medi.ru/pbmc/8890101.htm - Д1), где предлагаемые традиционные носители обеспечивают главным образом стабилизацию формы, в отличие от вышезаявленной композиции, обеспечивающей не только стабилизацию, но и контролируемое высвобождение гиалуронидазы.

Известны суппозитории, в частности, для лечения и профилактики простатита, в состав которых входит ПЭГ-1500, твин-80, носители и эксципиенты, при этом лекарственная форма сохраняет стабильность в течение 2-х лет хранения (Козлова Ж.М. и др. Создание ректальных суппозиториев с маслом амаранта. Вестник ВГУ, Серия: Химия, Биология, Фармация, 2008, № 1 - Д3.

Фармацевтические композиции, содержащие фермент - гиалуронидазу и липосомы, для местного применения в виде суппозиториев при лечении и профилактике воспалительных заболеваний, таких как геморрой, простатит и парапроктит, не описаны.

Таким образом, задача настоящего изобретения заключается в том, чтобы впервые предложить фармацевтическую композицию для местного применения в виде суппозиториев с контролируемым высвобождением действующего вещества, содержащую фермент - гиалуронидазу и липосомы, которая может быть использована для лечения и профилактики воспалительных заболеваний, таких как геморрой, простатит и парапроктит.

Заявленный технический результат отличает предложенную композицию от лонгидазы тем, что не содержит гиалуронидазу, химически связанную с полимерным носителем - полиоксидонием, и обеспечивает физическую, а не химическую иммобилизацию фермента, приводящую к контролируемому высвобождению действующего вещества с инновационным механизмом действия.

Согласно настоящему изобретению предложена фармацевтическая композиция для местного применения в виде суппозиториев, содержащая в качестве активного ингредиента 2,44 мас.% гиалуронидазы, 2,93 мас.% твин-80, 91,69 мас.% ПЭГ-1500, 2,44 мас.% липосомы и носители или эксципиенты, такие как бензидамин 0,5 мас.%.

В качестве предпочтительного воплощения заявленного изобретения предложена фармацевтическая композиция в виде суппозиториев, указанная выше, дополнительно содержащая один или более противовоспалительный ингредиент.

Наиболее предпочтительной является фармацевтическая композиция в виде суппозиториев, содержащая гиалуронидазу в качестве активного ингредиента, бензидамин в качестве противовоспалительного ингредиента и фармацевтически приемлемые носители и эксципиенты, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Гиалуронидаза	2,00-2,44
Бензидамин	0,5-1,0
Твин-80	2,00-2,93
Липосомы	2,00-2,44
ПЭГ-1500	91,19-93,5

Активным ингредиентом заявленной фармацевтической композиции в виде суппозиториев являются липосомы и фермент - гиалуронидаза. Гиалуронидаза обладает специфической способностью деполимеризовать гиалуроновую кислоту до глюкозамина и глюкуроновой кислоты, увеличивает проницаемость тканей и облегчает движение жидкостей в межтканевых пространствах (Машковский М.Д. Лекарственные средства, Москва, Новая Волна, 2006, стр.660-661). Липосомы в заявленной концентрации могут инкапсулировать все компоненты суппозиториев, концентрация которых соизмерима с концентрацией липосом (в пределах: от 0,5-2,93 мас.%), исключая, таким образом, полиэтиленгликоль, концентрация которого лежит в пределах 91,19-93,50 мас.%. Инкапсулирование в липосомах компонентов суппозиториев обеспечивает стабилизацию и быстрое их проникновение через клеточные мембраны клеток в месте введения суппозиториев, в отличие от ковалентно-сшитой с полиоксидонием гиалуронидазы.

Для приготовления композиции используют лекарственный ферментный препарат «Гиалуронидаза». Препарат получен из семенников крупного рогатого скота путем экстракции из измельченного сырья с последующей очисткой и лиофильной сушкой. Лиофильно высушенный порошок «Лидаза» используется в виде инъекционных препаратов в медицине для лечения контрактуры мышц, в глазной практике для обеспечения более тонкого рубцевания пораженных участков роговицы при лечении кератитов. С целью расширения спектра действия в фармацевтической композиции для местного применения в виде суппозиториев предложен бензидамин, который обеспечивает не только консервирующее действие, но и угнетает синтез простагландинов, эффективный при бактериальных и грибковых инфекциях.

Гиалуронидазу в форме указанных препаратов не применяют для лечения и профилактики воспалительных заболеваний предстательной железы вследствие ее затрудненного всасывания через неповрежденную слизистую и низкого уровня потребительских свойств, а также отсутствия стабильности при содержании влаги свыше 10% и в растворе, с потерей активности ферментов в течение суток.

Неожиданно обнаружено, что гиалуронидаза и липосомы могут быть включены в состав стабильной фармацевтической композиции в виде суппозиториев для местного применения с сохранением активности гиалуронидазы в течение длительного времени.

Фармацевтическую композицию в виде суппозиториев по настоящему изобретению обычно изготавливают общепринятыми способами, используя твердые или жидкие фармацевтически приемлемые носители или эксципиенты, выбранные из эмульгаторов, диспергирующих агентов, консервантов, ароматизаторов, регуляторов рН, полимерных носителей и других эксципиентов, которые целесообразны для приготовления композиций для местного применения.

Дополнительными преимуществами указанной композиции являются введение в состав суппозиториев бензидамина, способность его быстро проникать через слизистую оболочку и, соответственно, удобство применения, а также легкость дозирования.

Быстрое проникновение через слизистую оболочку обусловлено связыванием гиалуронидазы с липосомами, способными инкапсулировать действующее вещество.

Кроме того, активные ингредиенты могут применяться в комбинации бензидамином, обеспечивая дополнительное преимущество заявленной композиции.

Заявленная фармацевтическая композиция в виде суппозиториев обладает стабильностью в отношении активности гиалуронидазы и входящих в ее состав активных компонентов, при длительном хранении, которая достигается путем иммобилизации гиалуронидазы на липосомах, содержащихся в указанной композиции.

Активность заявленной композиции обусловлена активностью входящих в ее состав действующих веществ. Обнаружено, что фармацевтическая композиция для местного применения в виде суппозиториев, содержащая гиалуронидазу 2,44 мас.%, обладает стабильностью в отношении активности фермента при ее длительном хранении, в то время как активность этого фермента, приготовленного в виде раствора, быстро падает. Следовательно, заявленная композиция может быть использована для эффективного лечения и профилактики воспалительных заболеваний.

Настоящее изобретение иллюстрируется следующими примерами.

ПРИМЕР 1

Фармацевтическая композиция в виде суппозиториев на основе гиалуронидазы, бензидамина имеет следующий состав:

Гиалуронидаза	2,44
Бензидамин	0,5
Твин-80	2,93
Липосомы	2,44
ПЭГ-1500	91,69

Указанную композицию готовят по следующей методике. В липосомах растворяют бензидамин и гиалуронидазу, полученный раствор перемешивают. В полученный раствор вносят расплав ПЭГ-1500 и твин-80, имеющий температуру 38°С, перемешивают, отливают в форму и охлаждают.

ПРИМЕР 2

Фармацевтическая композиция в виде суппозиториев на основе гиалуронидазы имеет следующий состав:

Гиалуронидаза	2,44
Твин-80	2,93
Липосомы	2,44
ПЭГ-1500	92,19

Указанную композицию готовят как в ПРИМЕРЕ 1, отличающемся тем, что из состава исключен бензидамин.

Оценка стабильности гиалуронидазы в композициях для местного применения

Поскольку главным недостатком ферментов является их нестабильность при длительном хранении готовых лекарственных форм на их основе в течение срока годности, была проведена сравнительная оценка сохранения активности ферментов при хранении в виде раствора и в виде композиции для местного применения (на примере суппозиториев).

Активность гиалуронидазы определяли по следующей методике.

За единицу ферментативной активности гиалуронидазы принимают такое количество фермента, которое высвобождает 0,001 микроэквивалент глюкозамина за одну минуту в заданных условиях определения. Суппозиторий растворяют в 5 мл ацетатного буферного раствора. В две пробирки (опытные пробы) вносят по 0,1 мл исследуемого раствора и по 0,2 мл ацетатного буферного раствора. В третью пробирку (контрольная проба) вносят 0,3 мл ацетатного буферного раствора. Пробирки помещают в термостат при температуре 37±0,1°С и выдерживают в течение 5 минут, затем во все пробирки последовательно, с интервалом 30 секунд (по секундомеру) прибавляют по 0,2 мл раствора субстрата. Смесь инкубируют в течение 15 минут (по секундомеру) в термостате при температуре 37±0,1°С. После инкубации все пробирки на 5 минут помещают в баню со льдом. В охлажденные пробы последовательно, с интервалом 30 секунд (по секундомеру) прибавляют рассчитанное по титру количество 0,8 М раствора калия тетрабората и на 3 минуты (по секундомеру) помещают в кипящую водяную баню. После чего пробирки на 5 минут помещают в баню со льдом. В охлажденные пробирки приливают по 3 мл разведенного реактива Эрлиха и инкубируют в термостате при температуре 37±0,1°С в течение 20 минут (по секундомеру). После инкубации пробы охлаждают до комнатной температуры и измеряют оптическую плотность растворов (опытные пробы) на спектрофотометре при длине волны 586 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют контрольную пробу. Параллельно измеряют величину оптической плотности раствора N-ацетил-D - глюкозамина, для чего к 0,5 мл раствора N-ацетил-D-глюкозамина прибавляют по титру рассчитанное количество 0,8 М раствора калия тетрабората, помещают в кипящую водяную баню на 3 минуты (по секундомеру) и далее поступают, как описано выше. В качестве раствора сравнения используют контрольную пробу.

Результаты приведены в следующей таблице.

Таблица
Исследуемые образцы	Основные ингредиенты	Стабильность при хранении
1	2	3
Суппозиторий	Согласно Примеру 2	Активность 95% в течение 2 лет наблюдения
Раствор нативного фермента	-	Активность в течение 1 суток

Как видно из представленной таблицы, введение ферментов в композиции для местного применения позволяет получить стабильные фармацевтические композиции для местного применения в виде суппозиториев при лечении и профилактике воспалительных заболеваний предстательной железы. Несмотря на то что при введении ферментов в состав таких композиций происходит незначительная потеря ферментативной активности, при дальнейшем хранении в течение 2 лет ферменты не изменяют своей активности благодаря физической стабилизации лабильной структуры фермента используемым наноносителем.