средство, обладающее анксиолитическим и антидепрессивным действием, на основе экстракта семян лотоса орехоносного (nelumbo nucifera)

Формула изобретения

Средство, обладающее анксиолитическим и антидепрессивным действием, на основе экстракта семян Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera), характеризующееся тем, что он получен путем водно-спиртового экстрагирования 50%-ным этиловым спиртом в аппарате Сокслета при следующем соотношении компонентов, мас.%:

семена Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera)	75
спирт этиловый	25,

выход активного экстракта - около 7% вязкого смолообразного вещества.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к созданию средства на основе экстракта семян Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera), обладающего анксиолитическим и антидепрессивным действием.

По данным ВОЗ, тревожно-депрессивные состояния, являясь широко распространенным проявлением стресс-обусловленных заболеваний центральной нервной системы, встречаются более чем у 120 млн. человек во всем мире. По данным ряда исследователей, в зависимости от предъявляемых критериев, тревога как патологическое состояние встречается в 5-25%, а смешанные тревожно-депрессивные расстройства встречаются у 13% населения [3]. Рост тревожных и тревожно-депрессивных состояний, связанных с увеличением стрессогенных воздействий в современном обществе угрожает не только психическому здоровью населения, но и провоцирует также развитие психосоматических заболеваний. Хорошо известно, что практически всегда психические эквиваленты этого психического расстройства сочетаются с соматическими жалобами, чаще всего с нарушениями функции сердечно-сосудистой, иммунной и эндокринной систем. Поэтому поиск путей коррекции указанных патологических состояний является одной из важнейших задач современной психофармакологии. Несмотря на то, что современная медицина научилась справляться с состоянием повышенной тревожности и депрессией, существуют проблемы терапевтической резистентности к известным психотропным препаратам и формирования серьезных осложнений психофармакотерапии аффективных расстройств. Средства растительного происхождения могут сыграть существенную роль в решении этих проблем.

В настоящее время известны следующие анксиолитические и антидепрессивные средства природного происхождения: «Деприм» и «Негрустин» (зверобой продырявленный); «Гипер» (зверобой продырявленный, белокудренник, боярышник, витамин С, витамин В, витамин В ₆, витамин В₁₂, магния карбонат); «Пассилат» (страстоцвет, боярышник, валериана, витамин B₁, витамин В₆, витамин B₁₂). Близким к предлагаемому изобретению является средство, обладающее анксиолитическим и антидепрессивным действием из высушенных измельченных надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia) или их водных или водно-этанольных экстрактов (патент РФ № 2354397). Однако, идентичной совокупности признаков нами не обнаружено в патентной и научно-медицинской литературе.

Задачей настоящего изобретения является создание отечественного средства на растительной основе с анксиолитическим и антидепрессивным действием, обладающего широким спектром терапевтической активности. Впервые установлено, что в качестве средства, обладающего анксиолитическим и антидепрессивным действием, можно использовать водно-спиртовой экстракт семян Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera).

Лотос орехоносный применяют в народной медицине с давних времен. Основные биологически активные вещества экстракта семян лотоса - это флавоноиды (кверцетин, изокверцетин, нелумбозид), лейкоантоцианиды (лейкоцианидин, лейкодельфинидин), алкалоиды (нуцефирин). Плоды лотоса входят в состав более чем двухсот препаратов китайской и индийской медицины. Экстракт семян Лотоса орехоносного обладает гепатопротективным и антиоксидантным действием. Лотос орехоносный обладает мочегонным, жаропонижающим, гипогликемическим видами активности. В литературе отсутствуют данные о применении водно-спиртового экстракта семян Лотоса орехоносного в качестве средства, обладающего анксиолитическим действием.

Способ приготовления экстракта семян Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera), полученного путем водно-спиртового экстрагирования 50%-ным этиловым спиртом при соотношении 3:1 в аппарате Сокслета (согласно протоколу WHO CG-04) [4]:

500 г семян высушивали, измельчали до порошкообразного состояния с размером частиц 0,2 мм и подвергали водно-спиртовому экстрагированию 50%-ным этиловым спиртом в аппарате Сокслета, затем отгоняли спирт в ротационном испарителе, при следующем соотношении компонентов: мас.%

семена Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera)	- 75
спирт этиловый	- 25

Выход активного вещества (суммы алкалоидов) экстракта - около 7% вязкого смолообразного вещества.

Решение задачи настоящего изобретения - использование экстракта семян Лотоса орехоносного по предлагаемому назначению - стало возможным благодаря экспериментальному выявлению его новых свойств, а именно способности нормализовать функции ЦНС за счет анксиолитической и антидепрессивной активности.

Пример 1.

Был проведен химический анализ полученного экстракта семян Лотоса орехоносного. Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии изучен состав алкалоидов, содержащихся в экстракте. Согласно проведенному нами химическому анализу основным активными компонентами семян Лотоса орехоносного при используемом способе экстрагирования были следующие алкалоиды (в % соотношении):

Дигидроремерин 27,14

Ремерин 21,87

Нуциферин 14,73

Лиензинин 14,25

Изолиензинин 11,02

Неферин 6,21

Процианидин 4,78

Оценку анксиолитической активности экстракта семян Лотоса орехоносного проводили на 92 белых беспородных половозрелых крысах-самках по изучению особенностей поведения в «Суок-тесте». Животные содержались в виварии при свободном доступе к воде и пищи.

Суок-тест представляет собой «гибрид» нескольких поведенческих моделей, что позволяет вести регистрацию широкого диапазона поведенческих реакций, от локомоции и исследовательской активности до вегетативных маркеров поведения. Как совершенно новая поведенческая модель, Суок-тест рекомендуется в психофармакологии для скрининга психотропных эффектов препаратов [2]. Об анксиолитической активности экстракта судили по следующим показателям: латентному периоду выхода из центра; времени, проведенном в темном и светлом отсеках Суок-теста; количеству и продолжительности грумингов; числу падений вниз; числу соскальзывания задних лап; числу остановок возле границы между черным и белым отсеком. Дополнительными показателями, характеризующими условно-рефлекторную, эмоциональную и смещенную активность, служили число посещенных сегментов; стойки; число и продолжительность остановок; число исследовательских заглядываний вниз; количество направленных в стороны движений головой при вытянутом положении тела.

Раствор экстракта семян Лотоса орехоносного (0,5%-ный), приготовленный на физиологическом растворе, вводили животным внутрижелудочно с помощью зонда в дозе 50 мг/кг массы тела. Животные были разделены на три группы: I - интактный контроль, II - животные, получавшие внутрижелудочно физиологический раствор, III - животные, получавшие внутрижелудочно раствор экстракта семян Лотоса орехоносного. Животные получали раствор экстракта семян Лотоса орехоносного и физиологический раствор ежедневно в одно и то же время с 10 до 12 часов. Экстракт семян Лотоса орехоносного и физиологический раствор вводили животным в течение 1, 2, 3, 4 и 6 недель и соответственно подразделяли животных на 1-, 2-, 3-, 4- и 5-ю группы. Каждую группу животных тестировали в Суок-тесте однократно через 30 минут после последнего введения растворов.

Полученные экспериментальные данные обрабатывали статистически с использованием t критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони. Различия считали достоверными при р 0,05.

Проведенные нами исследования (Табл.1, 2) показали, что экстракт семян Лотоса орехоносного приводит к снижению времени латентности выхода из центра; уменьшению количества соскальзывания лап; уменьшению дефекации, начиная с первой недели внутрижелудочного введения экстракта семян Лотоса орехоносного по сравнению с интактными животными. При этом у животных, получавших физиологический раствор, происходит повышение уровня тревожности в ответ на процедуру внутрижелудочного введения (манипуляции с животными, взятие в руки), особенно на первой и второй неделях введения физиологического раствора. Это проявляется в снижение двигательной и исследовательской активности, повышении времени груминга и длительности остановок, появлении падений и особенно в светлом отсеке.

Таблица 1
Динамика показателей поведенческих реакций в Суок-тесте при введении экстракта семян Лотоса орехоносного
	1 неделя	2 неделя	3 неделя	4 неделя	6 неделя	контроль
Латентность выхода, сек	3,9±0,56 *	2,7±0,47 *	4,0±0,60 *	18,9±11,48	24,5±18,83	11,8±3,05
Длительность остановки, сек, ПО/О	61,2±27,45	34,5±9,81	33,67±11,38	11,5±7,64	62,0±18,94	20,1±10,23
Горизонтальная активность	14,0±5,01	16,5±3,39	16,22±4,99#	10,3±5,66	12,75±4,46	24,3±4,73
	20,6±5,12	26,5±5,83	14,3±3,95 #	40,0±1,17		28,4±7,29
Вертикальная активность	0	0,3±0,15	0,22±0,22	0,1±0,1	0	0,8±0,36
	0,3±0,21	0,3±0,15	0	0		0,6±0,44
Остановки	1,9±0,70	2,4±0,65	1,7±0,48#	0,8±0,61	1,8±0,32	2,8±0,95
	3,0±0,76	2,3±0,68	3,1±0,95	3,2±0,61		2,4±1,00
Заглядывания вниз	3,3±0,99	5,3±1,18	5,4±1,95	3,6±1,38	5,2±1,33	6,9±1,75
	4,5±1,44	4,7±1,22	5,1±1,17	4,4±1,40		6,4±1,55
Ориентация	0,4±0,31 *	3,1±0,71 о	1,22±0,36	0,8±0,42 *	0,6±0,31 **	2,4±0,64
	3,5±1,10	4,04-1,02	1,33±0,47	1,5±0,56		2,2±0,78
Проведенное время в отсеке, сек	64,9±18,76 **	139,3±29,64	117,2±24,41 #	69,6±35,93	117,8±28,52	160,3±28,38
	134,7±31,06	127,9±28,75	147,4±32,76	152,7±40,03		120,2±29,32
Смещенная активность, груминг, сек	12,0±6,41	11,5±4,99	18,56±6,44	3,0±2,79	4,42±4,15	4,3±2,08
	9,8±5,05	7,0±3,81	15,6±6,56	22,4±17,7		5,8±3,88
Дефекация, количество болюсов	0,3±0,21	1,4±0,99	0,44±0,34	0,3±0,21	0,25±0,18	0,6±0,27
	0	0,6±0,34	0,1±0,11	1,3±0,49		0,1±0,10
Продолжительность остановок, сек	21,0±9,9	51,3±7,89	60,6±24,14	34,0±24,65	58,7±24,12	41,8±12,38
	31,8±9,08	32,1±13,93	58,0±21,97	87,4±29,32		26,1±11,47
Падения	0	0	0	0	0	0,1±0,10
	0	0	0	0	0	0
Соскальзывания лап	0,7±0,42	0,6±0,29	1,2±0,32	0,6±0,34	1,6±0,45	1,2±0,36
	1,5±0,56	0,5±0,22	1,0±0,44	1,2±0,39		2,0±0,60

Таблица 2
Динамика показателей поведенческих реакций в Суок-тесте при введении физиологического раствора
	1 неделя	2 неделя	3 неделя	4 неделя	6 неделя	контроль
Латентность выхода, сек	6,0±1,76	3,5±0,67 *	23,0±9,81	5,3±1,36	11,8±4,97	11,8±3,05
Длительность остановки, сек, ПО/О	22,6±1,01	28,1±10,42	27,6±22,26	22,3±8,72	94,4±23,21 *	20,1±10,23
Горизонтальная активность	22,0±10,52	22,3±4,41	4,4±3,97 **	9,5±3,28 *	11,9±5,73 *	24,3±4,73
	22,2±9,64	14,3±3,24	3,8±2,85 **	27,4±5,53		28,4±7,29
Вертикальная активность	0	0,6±0,27	0	0,3±0,21	0,3±0,15	0,8±0,36
	0,8±0,62	0,5±0,30	0	0,3±0,30		0,6±0,44
Остановки	2,66±1,01	2,3±0,62	0,2±0,13 **	0	1,6±0,65	2,8±0,95
	4,2±1,44	1,5±0,82	1,3±0,58	4,4±0,73		2,4±1,00
Заглядывания вниз	2,4±0,87 **	7,6±1,76	2,9±0,95 *	4,3±0,97	7,7±1,32	6,9±1,75
	4,9±2,74	3,6±0,73	0,7±0,37	6,9±1,38		6,4±1,55
Ориентация	1,7±0,69	2,2±0,55	1,1±0,48	1,2±0,42	2,4±0,92	2,4±0,64
	3,4±1,19	4,5±0,56	0,4±0,34	6,3±1,4		2,2±0,78
Проведенное время в отсеке, сек	116,7±37,47	156,2±30,55	38,4±27,36 **	23,2±7,32 **	115,9±26,85	160,3±28,38
	108,1±42,48	116,8±32,83	21,33±21,33	215,7±26,64		120,2±29,32
Смещенная активность, груминг, сек	7,9±7,28	4,51±3,01	3,7±2,56	0	7,0±3,42	4,3±2,08
	4,88,±3,23	4,1±4,10	0	9,6±4,74		5,8±3,88
Дефекация, количество болюсов	0,7±0,37	0,5±0,27	1,6±1,16	0,3±0,28	1,4±0,75 *	0,6±0,27
	0,2±0,16	0,6±0,49	0	0,7±0,42		0,1±0,10
	27,1±16,23	41,4±13,32	29,0±26,85	0	29,2±13,24	41,8±12,38
Продолжительность остановок, сек	22,0±7,76	31,8±19,44	71,0±36,11	47,8±12,47		26,1±11,47
Падения	0	0,2±0,13	0	0	0,2±0,13	0,1±0,10
	0	0	0	0		0
Соскальзывания лап	1,1±0,54	2,3±0,58 #	1,1±0,46	1,4±0,39	3,3±0,75 *	1,2±0,36
	1,5±0,65	0,8±0,33	0	2,7±0,68		2,0±0,60
* - по сравнению с контролем; - между черным и белым отсеком; о - по сравнению с предыдущей группой; # - между лотос и физ. раствор

Тогда как экстракт семян Лотоса орехоносного, проявляет анксиолитическое действие, при этом поведенческие реакции изменяются не только относительно реакций животных, получающих физиологический раствор, но и относительно интактных крыс, что указывает на эффективность экстракта семян Лотоса орехоносного в качестве анксиолитического средства.

Пример 2.

Оценку антидепрессивного действия экстракта семян Лотоса орехоносного проводили на 24 белых беспородных половозрелых крысах-самках в тесте «Порсолт» (плавательный тест «отчаяния»). Животные содержались в виварии при свободном доступе к воде и пищи.

Тест «Порсолт», рекомендуемый при проведении психофармакологических исследований с целью выявления антидепрессивных свойств фармакологических веществ [1]. Установка представляет собой стеклянный цилиндр d=20 см и высотой 40 см, на 2/3 заполненный водой (t=25±1°С). Животное помещаются в цилиндр и регистрируются следующие параметры: время активного и пассивного (дрейф+полная неподвижность) плавания, латентный период (ЛП) до проявления первой иммобильности и первого движения, продолжительность иммобильности. Время наблюдения: 3 мин.

Раствор экстракта семян Лотоса орехоносного (0,5%-ный), приготовленный на физиологическом растворе, вводили животным внутрижелудочно с помощью зонда в дозе 100 мг/кг массы тела. Животные были разделены на три группы: I - интактный контроль, II - животные, получавшие внутрижелудочно физиологический раствор, III - животные, получавшие внутрижелудочно раствор экстракта семян Лотоса орехоносного. Животные получали раствор экстракта семян Лотоса орехоносного и физиологический раствор ежедневно в одно и то же время с 10 до 12 часов. Продолжительность введения экстракта семян Лотоса орехоносного и физиологического раствора составила 8 недель. Каждую группу животных тестировали в тесте «Порсолт» однократно через 30 минут после последнего введения растворов.

Полученные экспериментальные данные обрабатывали статистически с использованием t критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони. Различия считали достоверными при р 0,05.

Проведенные нами исследования (Табл. 3) показали, что экстракт семян Лотоса орехоносного приводит к достоверному снижению латентного периода до первого движения и первой иммобильности, а также изменению соотношения «активное/пассивное плавание» за счет увеличения активного компонента по сравнению с интактными животными, что говорит о повышении на фоне введения экстракта семян Лотоса орехоносного физической выносливости в «аверсивной» водной среде и о проявлении им выраженных антидепрессивных свойств.

Таблица 3
Изучение антидепрессивной активности экстракта семян Лотоса орехоносного в тесте «Порсолт»
Группы	ЛП до 1-го движения, М±m, с	ЛП до 1-ой иммобильности, М±m, с	Время активного плавания, М±m, с	Время пассивного плавания, М±m, с	Иммобильность, М±m, с
Контроль 1	5,2±0,6	59,2±6,2	120,3±3,5	41,3±2,7	16,7±1,3
Контроль 2 (физ. р-р)	16,4±2,1	60,5±5,9	117,4±4,3	60,0±6,4	18,8±1,2
Семена Nelumbo nucifera (100 мг/кг)	7,8±1,5*	87,8±9,4*	131,2±4,3*	27,4±3,5*	21,4±1,9
Обозначения: и * - р<0,05 - достоверность различий по сравнению с контролем 1 и 2 соответственно (t-критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони)

Таким образом, как показывают полученные нами экспериментальные данные, экстракт семян Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera) обладает выраженным анксиолитическим и антидепрессивным действием и может быть рассмотрен как основа для создания нового лекарственного препарата с последующим применением в клинической практике.

Литература

1. Андреева Н.И. Методические указания по изучению антидепрессивной активности фармакологических веществ / Н.И. Андреева // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общей редакцией чл.-корр. РАМН, профессора Р.У. Хабриева. - М.: ОАО «Издательство «Медицина», 2005. - С.244-252.

2. Калуев А.В. Суок-тест - новая поведенческая модель тревоги / А.В. Калуев, П. Туохимаа // Нейронауки. - 2005. - № 1. - С.17-23.

3. Santana L. A review of studies concerning treatment adherence of patients with anxiety disorders / L. Santana, L.F. Fontenelle // Patient Prefer Adherence. - 2011. - № 5. - P.427-439.

4. WHO: protocol CG-04. Preparation of alcoholic extract for bioassay and phytochemical studies (APJF/IP, 1001 A). Geneva, World Health Organization, 1983.