способ получения комбинированного антибактериального препарата для лечения острых кишечных инфекций

Формула изобретения

1. Способ получения комбинированного антибактериального препарата для лечения острых кишечных инфекций, содержащего антибиотик и биологический компонент, представляющий собой комплекс иммуноглобулинов или биомассу бифидобактерий, предусматривающий получение биомассы биологического компонента, смешивание ее с субстанцией антибиотика в заданных соотношениях, отличающийся тем, что перед смешиванием двух компонентов препарата измельчению подвергают только биологический компонент и измельчение осуществляют до наибольших значений максимальной насыпной плотности измельченного материала.

2. Способ по п.1, при котором в качестве биологического компонента используется комплекс иммуноглобулинов или биомасса бифидобактерий с содержанием КОЕ не ниже 2×10⁷ КОЕ/г.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине и биотехнологии и касается способа получения комбинированного антибактериального средства для лечения желудочно-кишечных заболеваний, преимущественно острых кишечных инфекций.

Известно средство, обладающее антибактериальной активностью, содержащее живую культуру ацидофильных лактобактерий в сочетании с комплексом сывороточных иммуноглобулинов, взятых в одинаковых весовых частях, при концентрации жизнеспособных микробных клеток 10⁷-10⁸ на массу 0,1 г и процентном соотношении компонентов в комплексе иммуноглобулина G:M:A, равном (55-60):(20-25):(15-20), для получения которого сухую микробную массу соединяют с сухой биомассой КИП в соотношении 1:1 и используют для приготовления оральной или ректальной формы (RU, патент 1779377 A1, A61K 35/74, 39/395, 07.12.1992).

Недостатком известного способа является то, что он не предусматривает измельчения действующих веществ, обеспечивающего повышение их антибактериальной активности.

Известна фармацевтическая композиция антибиотиков и пребиотиков (варианты) для профилактики и лечения дисбиозов в процессе антибактериальной терапии, приготовление которой предусматривает подготовку заданных количеств порошкообразных антибиотика с размером частиц от 20 до 200 мкм и пребиотика с размером частиц до 0,3 мм с гарантированной поставщиком степенью чистоты не менее 95%, подсушку до 2-3% влажности и смешивание в массовом соотношении от 1:1 до 1:100 соответственно, введение добавок против слеживания, ароматизаторов, вкусовых корректоров и снятие статических электрических зарядов (RU, патент 2325187 C1, A61K 45/06, 27.05.2008).

Недостатком этого способа получения фармацевтической композиции является отсутствие процесса помола действующих веществ с целью повышения их антибактериальной активности после высушивания, так как процесс подсушки композиции до 2-3% влажности обязательно приведет к агрегации частиц антибиотика и олигосахарида с соответствующей потерей их дисперсности, а следовательно, и активности.

Известен комплексный бактериальный препарат энтерацид П, получение которого включает следующие этапы: приготовление питательной среды для раздельного выращивания составляющих его культур, получение инокулята, приготовление посевного материала, накопление бактериальной массы, отделение бактериальной массы от культуральной жидкости, приготовление защитной среды, смешивание бактериальной массы с защитной средой, замораживание, сушка суспензии сублимацией, измельчение сухих порошков биомассы, смешивание культур-компонентов, стандартизация, упаковка, маркировка (RU, патент 2091075 C1, A61K 35/74, 27.09.1997).

Недостатком способа получения комплексного бактериального препарата является то, что измельчение сухих порошков биомассы осуществляют не до наибольших значений максимальной насыпной плотности этих порошков, что существенным образом снижает их активность.

Известен комплексный терапевтический препарат для ветеринарии «Биофеном», способ приготовления которого по одному из вариантов состоит в следующем: все компоненты по отдельности растирают в фарфоровой ступке и вносят в емкость из расчета на 1000 мл - фуракрилина (15-20) г, этакридина лактата (10-15) г, метилурацила (10-20) г, новокаина (5-10) г, куда добавляют до 1000 мл заменитель цельного молока и тщательно перемешивают миксером или шаровой мельницей; затем фасуют по 5 г (одна доза) во флаконы для медицинских препаратов объемом 20,0 мл и хранят его в сухом, закрытом от солнечного света помещении при 8-10°С (RU, патент 2053767 C1, A61K 31/00, 10.02.1996).

Недостатком способа получения комплексного терапевтического препарата «Биофеном», который можно рассматривать как прототип предлагаемого изобретения, является ненормируемая степень измельчения действующих веществ, которая может приводить к их инактивации.

В основу заявляемого изобретения положена задача разработки способа получения комбинированного антибактериального препарата для лечения острых кишечных инфекций, содержащего биологический компонент и антибиотик.

Задача решена тем, что перед смешиванием активных компонентов препарата: антибиотика и биологического компонента, измельчению подвергают только биологический компонент и осуществляют измельчение до наибольших значений максимальной насыпной плотности измельченного материала.

Техническим результатом заявляемого изобретения является повышение антибактериальной активности комбинированного препарата, которая проявляется в сокращении сроков лечения острой кишечной инфекции.

В результате проведенных нами исследований впервые показано, что измельчение биологического компонента при приготовлении комбинированного антибактериального препарата, причем до наибольших значений максимальной насыпной плотности, позволяет не только повысить антибактериальную активность биологического компонента за счет увеличения его контактирующей с патогенным агентом поверхности, но и обеспечивает требуемое содержание в лекарственной форме дозы лекарственного вещества и антибиотика, и биологического компонента, что, в свою очередь, приводит к повышению антибактериальной активности комбинированного препарата в целом и выражается в сокращении сроков лечения подопытных животных от острой кишечной инфекции.

Заявляемый способ получения комбинированного антибактериального препарата является новым и в литературе не описан.

Сущность изобретения поясняется на следующих примерах, показывающих повышение антибактериальной активности комбинированного препарата, которая проявляется в сокращении сроков лечения острой кишечной инфекции при реализации заявляемого способа.

Содержание в препаратах жизнеспособных анаэробных микроорганизмов Bifidobacterium bifidum определяли в жидких питательных средах методом предельных разведении. Биологическую активность препаратов иммуноглобулинов характеризовали антисальмонеллезной активностью (в титрах РПГА) по ФС 42-3347-97. Максимальную насыпную плотность измельченных порошков определяли в соответствии с рекомендациями (Макаров Ю.И. Аппараты для смешения сыпучих материалов. - М.: Машиностроение, 1973. - с.18-20).

Антибактериальную активность комбинированных препаратов, приготовленных по заявленному способу, проверяли при лечении острых кишечных инфекций у обезьян на базе ГУ НИИ медицинской приматологии РАМН (г.Сочи-Адлер).

Испытания разработанных препаратов проведены на обезьянах вида макак резус обоего пола разного возраста (1,3-18,3 лет) весом 2,5-10,0 кг, спонтанно болеющих ОКИ с выраженным диарейным синдромом.

Диарейный синдром - частый жидкий стул со зловонным запахом без патологической примеси от 6 до 8 раз в сутки, умеренная сниженная активность.

Всех животных вылавливали из групповых клеток и вольер и размещали в индивидуальных. Животных сравниваемых групп подбирали методом свободной выборки, которые были репрезентативны по возрасту, весу и полу. Животных содержали на брикетированных кормах, изготовляемых на брикетировочном заводе ГУ НИИ медицинской приматологии РАМН по рецептуре, разработанной фирмой "Альтрогге" для приматов.

Пример 1. Комплекс иммуноглобулинов получали в соответствии с патентом RU 2371200, А61К 39/395, С07К 16/06, 27.10.2009. Сублимированную биомассу иммуноглобулинов измельчали в электромагнитном аппарате до наибольших значений максимальной насыпной плотности измельченной биомассы (0,36 г/см³). Соотношение в ней фракций IgG:IgM:IgA составляло соответственно (56-60):(16-22):(21-24), а специфическая антисальмонеллезная активность - 1:320 в титрах РПГА.

Субстанцию офлоксацина (производитель NANJING FOREIGN ECONOMIC & TRADE DEVELOPMENT CO., LTD, CHINA) измельчению не подвергали. Содержание действующего вещества в субстанции составляло 99,4%.

Измельченную биомассу иммуноглобулинов и субстанцию офлоксацина смешивали в аппарате периодического действия СМ-30 в заданном соотношении и готовую смесь фасовали во флаконы ФО-1-10 таким образом, чтобы каждый флакон содержал 250 мг офлоксацина и 300 мг измельченной биомассы иммуноглобулинов.

В качестве препарата сравнения использовали смесь компонентов в тех же количествах, что и в заявленном препарате, но растертых в фарфоровой ступке в соответствии с прототипом.

Результаты испытаний представлены в таблице.

Пример 2. Комплекс иммуноглобулинов получали в соответствии с патентом RU 2371200, А61К 39/395, С07К 16/06, 27.10.2009. Сублимированную биомассу иммуноглобулинов измельчали в электромагнитном аппарате до наибольших значений максимальной насыпной плотности измельченной биомассы (0,36 г/см³). Соотношение в ней фракций IgG:IgM:IgA составляло соответственно (56-60):(16-22):(21-24), а специфическая антисальмонеллезная активность - 1:320 в титрах РПГА.

Субстанцию хлорамфеникола (производитель Northeast General Pharmaceutical Factory, China) измельчению не подвергали. Содержание действующего вещества в субстанции составляло 99,72%.

Измельченную биомассу иммуноглобулинов и субстанцию хлорамфеникола смешивали в аппарате периодического действия СМ-30 в заданном соотношении и готовую смесь фасовали в твердые желатиновые капсулы таким образом, чтобы каждая капсула содержала 300 мг хлорамфеникола и 120 мг измельченной биомассы иммуноглобулинов.

В качестве препарата сравнения использовали смесь компонентов в тех же количествах, что и в заявленном препарате, но растертых в фарфоровой ступке в соответствии с прототипом.

Результаты испытаний представлены в таблице.

Пример 3. Сухую биомассу Bifldobacterium bifidum 1 получали в соответствии с ВФС 42-3378-99 на бифидумбактерин сухой. Содержание жизнеспособных микроорганизмов в сухой биомассе составляло 2×10⁹ КОЕ/г.Сублимированную биомассу бифидобактерий измельчали в электромагнитном аппарате до наибольших значений максимальной насыпной плотности измельченной биомассы (0,34 г/см³). Содержание жизнеспособных микроорганизмов в измельченной биомассе оставалось тем же, что и в сухой, и составляло 2×10⁹ КОЕ/г.

Субстанцию офлоксацина (производитель NANJING FOREIGN ECONOMIC & TRADE DEVELOPMENT CO., LTD, CHINA) измельчению не подвергали. Содержание действующего вещества в субстанции составляло 99,4%.

Измельченную биомассу бифидобактерий и субстанцию офлоксацина смешивали в аппарате периодического действия СМ-30 в заданном соотношении и готовую смесь фасовали в твердые желатиновые капсулы № 0 таким образом, чтобы каждая капсула содержала 200 мг офлоксацина и 200 мг измельченной биомассы бифидобактерий с содержанием КОЕ не ниже 2×10⁷ КОЕ/г.

В качестве препарата сравнения использовали смесь компонентов в тех же количествах, что и в заявленном препарате, но растертых в фарфоровой ступке в соответствии с прототипом.

Результаты испытаний представлены в таблице.

Комбинированный препарат		Средняя длительность клинических проявлений заболевания (дней)
офлоксацин + смесь иммуноглобулинов	сравнения	6,3
	заявленный	5,1
хлорамфеникол +	сравнения	10,4

смесь иммуноглобулинов	заявленный	9,2
офлоксацин + биомасса бифидобактерий	сравнения	10,1
	заявленный	9,1

Как следует из анализа представленных в таблице результатов исследований, терапевтической эффективности комбинированных антибактериальных препаратов, приготовленных по заявленному способу, измельчение биологических компонентов, входящих в состав этих препаратов, до наибольших значений максимальной насыпной плотности, а также отсутствие помола антибиотиков обеспечивает сокращение сроков лечения острых кишечных инфекций у испытуемых приматов в 1,1 раза по сравнению с препаратами сравнения. Следовательно заявляемый способ позволяет получать препарат с повышенной антибактериальной активностью.