Ферменты, например лигазы (6.), проферменты, композиции их, способы получения, активирования, ингибирования, разделения или очистки ферментов: ...рибонуклеазы – C12N 9/22

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм бактерий Serratia species является продуцентом внеклеточных рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы, обладающих противовирусной активностью в отношении вирусов птичьего гриппа A/chickenKurgan/05/2005 (H5N1) и вируса гриппа человека A/Aichi/2/68 (H3N2). Предложенный штамм депонирован в коллекции бактерий, бактериофагов и грибов Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» под регистрационным номером В-1287. При использовании культуральной жидкости или экстракта клеток штамма для производства противовирусных препаратов нейтрализация вирусов гриппа A/chickenKurgan/05/2005 и A/Aichi/2/68 составляет 100%. 1 ил., 2 табл., 6 пр.

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Предложен штамм бактерий Aeromonas bestiarum - продуцент щелочной рибонуклеазы, обладающий противовирусной активностью и депонированный в коллекции бактерий, бактериофагов и грибов Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» под регистрационным номером B-1270. Штамм обладает высокой продукцией щелочной рибонуклеазы - 921,8 Е/мл и активностью против вирусов гриппа птиц A/H5N1 и человека А/Аichi/2/68 (H3N2). 2 ил., 7 табл., 8 пр.

Изобретение относится к области нанотехнологии и биотехнологии. Предложен способ создания указанной конструкции, включающий: а) создание, по меньшей мере, двух модулей, где каждый из модулей независимо выполняют в виде ядра, несущего на поверхности молекулы первого белка или второго белка, где в качестве первого белка выбирают барназу, а в качестве второго белка выбирают барстар, причем первый или второй белок для связывания с каждым из модулей выбирают следующим образом: первый модуль выполняют несущим на поверхности молекулы белка, выбранного из первого белка или второго белка; второй модуль выполняют несущим на поверхности молекулы белка, выбранного из первого белка или второго белка и отличного от белка, содержащегося в первом модуле; третий и каждый последующий модуль несет на поверхности молекулы либо первого, либо второго белка; б) комбинирование первого, второго и последующих модулей, в котором модули самособираются в конструкции за счет взаимодействия молекул барназы и барстара, причем ядра, по крайней мере, двух из указанных модулей выполняют частицами надмолекулярной природы. Описана конструкция для диагностики и терапии, полученная указанным способом. Изобретение позволяет получить конструкции, включающие ядра различной природы и размеров, соединенные между собой с помощью функциональной пары барназа-барстар, обеспечивающей прочное соединение указанных ядер. 2 н. и 18 з.п. ф-лы, 5 ил., 8 пр.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и биотехнологии и может быть использовано в препаративной биохимии РНК. Согласно предложенному способу осуществляют деградацию структурированных полирибонуклеотидов путем инкубирования содержащего их образца с термостабильной полинуклеотидфосфорилазой (ПНФазой) Thermus thermophilus в присутствии косубстрата и кофактора. Изобретение позволяет осуществлять ферментативный фосфоролиз РНК при высокой температуре, избегая Mg²⁺-катализируемого гидролиза. 6 з.п. ф-лы, 11 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в химической и микробиологической промышленности. Способ предусматривает измельчение поджелудочной железы. Измельченную поджелудочную железу обрабатывают раствором хлорида натрия 4,5-6 мас.% в объемном соотношении поджелудочная железа:раствор соли 1:(1,5-2,0) при температуре 25-35°С в течение 2,5-3,5 ч. Полученные клетки поджелудочной железы отделяют центрифугированием и обрабатывают 95% этиловым спиртом в течение 15-24 ч в объемном соотношении 1:(0,85-1,3) при температуре 15-25°С. Отделяют клетки поджелудочной железы центрифугированием с последующей обработкой этих клеток водой, подкисленной соляной кислотой до pH 1,0-3,0, в течение 2,5-4,5 ч при температуре 25-35°С в объемном соотношении 1:(0,8:1,2). Полученные клетки поджелудочной железы отделяют центрифугированием с получением супернатанта. Из полученного супернатанта экстрагируют рибонуклеазу растворами серной кислоты с концентрацией 0,15-0,35 н. в течение 3-4 ч при объемном соотношении 1:(0,8-1,2) при температуре 4-6°С. Отделяют взвешенные частицы центрифугированием с получением экстракта, содержащего рибонуклеазу. Полученный экстракт концентрируют ультрафильтрацией на мембране УПМ 10 с последующей диафильтрацией. Полученный концентрат охлаждают до 4-6°С и осаждают рибонуклеазу при pH 8,0-9,0. Полученный осадок промывают этиловым спиртом в объемном соотношении 1:5 и сушат. Изобретение позволяет повысить выход фермента. 1 табл.

Изобретение касается микробиологической промышленности и может быть использовано в биотехнологии, генетической инженерии и медицине. Штамм Bacillus sp. ВКПМ В-9862 - высокостабильный продуцент щелочной внеклеточной рибонуклеазы, обладающий высокой устойчивостью к стрептомицину, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ), ФГУП ГосНИИгенетика под номером В-9862. Изобретение позволяет избежать микробиологического загрязнения в период хранения и подготовки посевного материала для ферментации в условиях производства и повысить выход внеклеточной рибонуклеазы. 1 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и может найти применение в производстве медицинских препаратов - рибонуклеазы панкреатической, дезоксирибонуклеазы панкреатической, трипсина, а также холестеролэстеразы. Способ предусматривает измельчение поджелудочной железы крупного рогатого скота, ее гомогенизацию. Полученный гомогенат экстрагируют охлажденным этиловым спиртом при постоянном перемешивании. Центрифугируют. Проводят повторную экстракцию серной кислотой, содержащей сульфат магния, при постоянном перемешивании. Экстракт, содержащий целевые ферменты, отделяют от осадка центрифугированием. Балластные белки осаждают сульфатом аммония при 30-35%-ном насыщении и удаляют центрифугированием из супернатанта. Холестеролэстеразу осаждают сульфатом аммония при 45-50% насыщении экстракта, трипсин осаждают при 60-65% насыщении, дезоксирибонуклеазу (ДНК-аза) осаждают при 80-85% насыщении. Полученный при осаждении ДНК-азы супернатант, содержащий рибонуклеазу, подвергают ультрафильтрации и осаждению сернокислым аммонием при 95-98% насыщении с последующим диализом и хроматографической очисткой на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой. Изобретение позволяет получать четыре фермента из поджелудочной железы в рамках единой технологической схемы, увеличить выход рибонуклеазы панкреатической, увеличить ее удельную активность. 4 з.п. ф-лы, 8 табл., 6 ил.

Изобретение относится к биоорганической химии. Предложен олигонуклеотид-пептидный конъюгат, имеющий общую формулу: ^3' TTCTCTAGG^5'-dRib-dRib-dRib- ^N-конецLeu-Arg-Leu-Arg-Leu-Arg-Leu-Arg-Gly-NH ₂ ^C-конец (где Т - остаток тимина, С - остаток цитозина, А - остаток аденозина, G - остаток гуанозина, dRib - остаток дезоксирибозы, Leu - остаток лейцина, Arg - остаток аргинина, Gly - остаток глицина). Технический результат - олигонуклеотид-пептидный конъюгат, расщепляющий фосфодиэфирные связи в одноцепочечных участках РНК исключительно в последовательностях ^5'GpN^3' (где G - гуанозин, N - любой рибонуклеотид) и являющийся функциональным аналогом рибонуклеазы Т1. 3 ил.

(56) (продолжение):

CLASS="b560m"10(2):285-97. ПЫШНЫЙ Д.В., РЕПКОВА М.Н., ЛОХОВ С.Г. и др. Искусственные рибонуклеазы I. Направленное расщепление РНК 5'-пептидилолигодезоксирибонуклеотидами, содержащими остатки аргинина и лейцина. Биоорганическая химия. 1997, 23(6):497-504. PYSHNYI D., REPKOVA M., LOKHOV S. et al. Oligonucleotide-peptide conjugates for RNA cleavage. Nucleosides, nucleotides & nucleic acids. 1997, 16(7-9):1571-4. MIRONOVA N., PYSHNYI D., IVANOVA E. et al. Artificial ribonucleases: oligonucleotide-peptide conjugates that cleave RNA at the GpX and PypA phosphodiester bonds. Doklady. Biochemistry and biophysics. 2002, 385:196-200. MIRONOVA N., PYSHNYI D., IVANOVA E. et al. Sequence-specific RNA cleavage by oligonucleotide-peptide conjugates. Russian Chemical Bulletin. International Edition. 2002, 51(7):1177-86. ЖДАН Н.С., КУЗНЕЦОВА И.Л., ВЛАСОВ А.В. и др. Синтетические рибонуклеазы. 1. Синтез и свойства конъюгатов, содержащих РНК-связывающий фрагмент на основе остатков лизина и РНК-гидролизующий фрагмент, несущий остаток имидазола. Биоорганическая химия. 1999, 25(10):723-32.

Изобретение относится к биотехнологии, касается идентификации и характеристики двух компонентов рекомбинантного препарата ДНКазы. Эти компоненты представляют собой очищенную дезамидированную и очищенную недезамидированную человеческую ДНКазу. Способы разделения этих ДНКаз осуществляют с помощью полидентатной катионообменной смолы или с помощью смолы с иммобилизованным на ней гепарином или с помощью смолы с иммобилизованным на ней негидролизуемым аналогом ДНК. Использование недезамидированной ДНКазы в составе фармацевтической композиции эффективно для введения пациентам, страдающим от нарушений легочного характера. 13 н.п. ф-лы, 10 ил., 5 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способу получения инсерционных мутаций в случайных или псевдослучайных положениях в хромосомной или внехромосомной нуклеиновой кислоты клетки-мишени. Проводят стадию объединения в клетке-мишени клеточной нуклеиновой кислоты с синаптическим комплексом, который включает (а) протеин Tn5-транспозазы и (б) полинуклеотид. Последний включает пару нуклеотидных последовательностей, адаптированных к функциональному взаимодействию с Tn5-транспозазой, и мобильную нуклеотидную последовательность между ними в условиях, которые опосредуют транспозиции в клеточной ДНК. Согласно способу синаптический комплекс получают in vitro в условиях, которые являются неблагоприятными или препятствуют тому, чтобы синаптические комплексы подвергались продуктивной транспозиции. Способ позволяет повысить частоту продуктивной транспозиции. 13 з.п. ф-лы, 4 ил., 1 табл.